分子克隆技术试卷

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分子克隆技术

一、填空题

1.PCR反应中加入矿物油的作用是___________________________。

2.分子克隆实验中外源DNA和载体片段连接之前,要对载体进行去磷酸化处理,我

们在本次试验中去磷酸化使用的碱性磷酸酶是___________________________。它

的目的是___________________________。

3.用α互补筛选转化子是,带有外源片段的菌落显___________________________色。

4.Southern杂交中进行与杂交的目的是___________________________。

5.凝胶糖凝胶电泳时加入loading buffer作用是___________________________和

___________________________。

6.影响琼脂糖凝胶电泳的因素主要有___________________________、

___________________________、___________________________、

___________________________、___________________________。

二、简答题

1.简述PCR反应体系中都有哪些成分及各成分的作用。

2.为得到质量较好的水稻RNA,抽提前应做如何准备?RNA抽提过程中、RNA的

保存及以后对RNA的操作过程中应特别注意什么?

3.简述为防止放射性同位素外照射及内照射对人体造成伤害,在操作放射性同位素

时,我们可以采取哪些措施进行防护?

4.简述影响电转化感受态细胞转化效率的因素有哪些?

5.质粒抽提时用到的SolutionI,SolutionII,SolutionIII及异丙醇分别起什么作用?操

作时应注意什么?

三、分析问答题

1.描述并图示pUC19载体DNA及其在HindIII位点克隆了外源DNA片段的质粒DNA

和水稻总DNA及它们的HindIII和BamH1酶切产物在琼脂糖凝胶电泳时的带型。

2.利用质粒载体克隆外源DNA片段主要包括哪些步骤?涉及到哪些工具酶?要获得

理想的结果,各步骤操作中应主要注意哪些事项?

3.在Southern杂交实验中,同一根杂交管内的膜曝光的····(原卷此处不清晰)冲

洗后,有些组X光片信号很强,有些组信号很弱,有的样品点样孔附近有较强的

信号,但是有的地方信号较弱,请分析造成这种结果的可能原因。

4.下面是本次课生物技术班某组β-active基因RT-PCR(反转录前没有对总RNA进

行去除DNA 的处理)试验的琼脂糖凝胶电泳图,凝胶上共点了6个样,PCR使用

的模板从左至右分别是:该组提取的水稻总DNA,该组提取的水稻总RNA,该组

的4个反转录产物。(原卷本题图不清晰)

请问:

提取的RNA的质量如何?

RT-PCR是否成功?为什么会出现这样的结果?

有哪些地方需要改进?

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