分子克隆技术试卷
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分子克隆技术
一、填空题
1.PCR反应中加入矿物油的作用是___________________________。
2.分子克隆实验中外源DNA和载体片段连接之前,要对载体进行去磷酸化处理,我
们在本次试验中去磷酸化使用的碱性磷酸酶是___________________________。它
的目的是___________________________。
3.用α互补筛选转化子是,带有外源片段的菌落显___________________________色。
4.Southern杂交中进行与杂交的目的是___________________________。
5.凝胶糖凝胶电泳时加入loading buffer作用是___________________________和
___________________________。
6.影响琼脂糖凝胶电泳的因素主要有___________________________、
___________________________、___________________________、
___________________________、___________________________。
二、简答题
1.简述PCR反应体系中都有哪些成分及各成分的作用。
2.为得到质量较好的水稻RNA,抽提前应做如何准备?RNA抽提过程中、RNA的
保存及以后对RNA的操作过程中应特别注意什么?
3.简述为防止放射性同位素外照射及内照射对人体造成伤害,在操作放射性同位素
时,我们可以采取哪些措施进行防护?
4.简述影响电转化感受态细胞转化效率的因素有哪些?
5.质粒抽提时用到的SolutionI,SolutionII,SolutionIII及异丙醇分别起什么作用?操
作时应注意什么?
三、分析问答题
1.描述并图示pUC19载体DNA及其在HindIII位点克隆了外源DNA片段的质粒DNA
和水稻总DNA及它们的HindIII和BamH1酶切产物在琼脂糖凝胶电泳时的带型。
2.利用质粒载体克隆外源DNA片段主要包括哪些步骤?涉及到哪些工具酶?要获得
理想的结果,各步骤操作中应主要注意哪些事项?
3.在Southern杂交实验中,同一根杂交管内的膜曝光的····(原卷此处不清晰)冲
洗后,有些组X光片信号很强,有些组信号很弱,有的样品点样孔附近有较强的
信号,但是有的地方信号较弱,请分析造成这种结果的可能原因。
4.下面是本次课生物技术班某组β-active基因RT-PCR(反转录前没有对总RNA进
行去除DNA 的处理)试验的琼脂糖凝胶电泳图,凝胶上共点了6个样,PCR使用
的模板从左至右分别是:该组提取的水稻总DNA,该组提取的水稻总RNA,该组
的4个反转录产物。(原卷本题图不清晰)
请问:
提取的RNA的质量如何?
RT-PCR是否成功?为什么会出现这样的结果?
有哪些地方需要改进?