分子生物组性能验证报告

分子生物组检测系统/方法分析性能验证评估报告检验科分子生物组检测依据CNAS-CL02：《医学实验室质量和能力认可准则》（ISO 15189：2007）对医学实验室检测系统性能评价的相关要求，对2台ABI 7300 Real Time PCR System 荧光定量仪进行性能评价，主要从以下几个方面进行：正确度、精密度、临床可报告范围、线性范围等。具体实施方案如下：

1 目的：

对2台ABI 7300 Real Time PCR System 荧光定量仪的性能进行评价，结果与生产厂家给出的性能指标进行比较，来验证生产厂家给出的性能指标是否能满足检验科的要求。若无厂家性能指标则与卫生部室间质评计划表提供的标准比较，判断仪器的性能是否符合要求。

2 原理：

2.1 正确度评价

评价仪器测量结果与真值的一致程度。本组参加室间质评的项目一律用卫生部临检中心的室间质评回报结果作为评价标准。

2.2 精密度评价

采用EP15-A《用户对精密度和准确性能的核实实验-批准指南》的性能要求，通过检测每个项目低浓度混合血清和高浓度混合血清，计算项目的批内精密度和批间（日间）精密度。并与厂家声明的批内精密度及批间（日间）精密度进行比较，核实是否与厂家声明的一致。

2.3 临床可报告范围评价

临床可报告范围上限为分析测量范围上限乘以最大稀释度。结合最大稀释度以及分析测量范围确定临床可报告范围。

2.4 线性范围评价

因为每次实验都做标准曲线，并要求其R值在0.98以上。因此，本项目不需要进行线性验证。

3 检测方法：

检测方法为实时荧光定量PCR法。

4 方案：

4.1正确度评价方案（卫生部室间质评样品）

采用卫生部临检中心2011年第二次室间质评和2012年第一次室间质评回报结果作为评价标准。

判定标准：绝对偏倚≤±0.4

4.2精密度评价方案

根据NCCLS EP15-A文件，每个项目使用2个浓度（高值和低值）的病人混合血清进行测定。

采用2个浓度的样本（已分析过的病人混合血清标本），每天分析4批，每批间隔两个小时，连续测定5天。所检测所有数据超出3SD的数据不能超过2个，否则应分析失控原因纠正后重新进行试验，统计数据，计算批内精密度和批间（日间）精密度，进一步计算批内CV(%)、批间（日间）CV(%)，与允许范围或厂家声明的批内精密度及批间（日间）精密度比较，判断验证是否通过。

判定标准：

●批内精密度：厂家声明值低值CV≤10.0%，高值CV≤10.0%；

●批间（日间）精密度：厂家声明值低值CV≤10.0%，高值CV≤10.0%；

●将批内CV(%)、批间（日间）CV(%)与厂商声称精密度值比较，若试验的精密度小于等于厂

商声称精密度值，则验证通过。

●如果试验的精密度大于厂商声称精密度值，需要进一步计算该项的验证值，如果批内、批

间（日间）小于验证值，说明差异无统计学意义，同样核实了与允许范围的一致性，验证通过。如二者数值很接近，为可靠起见，可以添加2个批次测量，将所得数据与以前数据合并再计算，可能得到更可靠的结果。

●如批内、批间（日间）大于验证值，精密度验证未通过，应与厂家联系并取得帮助。

4.3临床可报告范围评价方案

依照NCCLS的EP6一A[s]文件的要求，取评价项目的高、低值病人标本各一份，（高值标本为接近线性范围上限或高于线性上限 10%~15%的标本，低值标本为接近线性范围下限的标本）。低值标本为1 号，高值标本为6 号，低高值标本4：1 混和为2 号，3：2 混和为3 号，2：3 混和为4 号，1：4混和为5号。每个编号标本重复测定2次，记录结果。所有样品应在一次运行中或几次间隔很短的运行中随机测定，最好在一天之内完成。统计数据，剔除离群值，单个离群值可直接由数据组中剔除并进行重测，全部样本无需重新测定。如发现多个离群值或数据点过于分散，需检查造成此误差的可能原因，对可能原因进行纠正后，对全部样本进行重新测定。求出2次测定结果的平均值和每一稀释度的预期值。

采用线性回归分析，以预期值为X，以按比例稀释的实测均值为Y，得线性方程Y=bX+a，得到a、b及R2值。X和Y分别为自变量和应变量，b为斜率，a为Y轴截距，R2为相关系数的平方，判断其是否线性。制作线性差异图：计算出每一稀释度测定均值和预期值的差值。以预期值为横轴，差值为纵轴，做图。

判断标准：

●若b在0.97-1.03范围内，R2>0.95，作a与0有无显著性差异的t检验，若P 值>0.05，

直线回归方程可接受，可直接判断线性范围在实验已涉及浓度；

●若b 不在0.97-1.03 范围内，a 较大，舍去高值或低值组数据，另作回归统计。直至缩小

的分析范围其回归方程中a 和b 的判断符合要求，该范围为线性范围。

●线性差异图：如果在每一浓度处的实测均值与预期值的差异值都在厂家声明的允许差异限

之内，可进一步确认厂家声称可测量范围是可接受的。

4.4 线性范围评价

因为每次实验都做标准曲线，并要求其R值在0.98以上。因此，本组项目不需要进行线性

验证。

5 器材

2台ABI 7300 Real Time PCR System 荧光定量仪，详见附表一。

6 结果：验证结果符合相关规定，详见附表一。

7 结论：

2台ABI 7300 Real Time PCR System 荧光定量仪定量项目在正确度、精密度、临床可报告范围、线性范围等方面符合要求。

报告人：刘波

2012年6月8日

湖南省肿瘤医院分子生物组检测性能验证评估报告附表一检测系统/方法的分析性能验证评估表