药典方法验证要求 1200
Agilent1200高效液相色谱仪性能再确认方案
1 概述 (3)2目的 (3)3范围 (3)4职责 (3)5参考依据 (3)6 性能确认执行前检查 (3)7.性能确认 (4)7.1输液泵性能确认 (4)7.1.1流量准确度确认 (4)7.1.2流量精密度确认 (7)7.1.3梯度准确度确认 (8)7.2柱温箱性能确认 (10)7.2.1控温速率确认 (10)7.3自动进样器性能确认 (11)7.3.1进样重复性确认 (11)7.4紫外检测器性能确认 (11)7.4.1灯能量测试确认 (11)7.4.2基线漂移与基线噪声测试确认 (12)7.5蒸发光散射检测器性能确认 (13)7.5.1基线漂移与基线噪声测试确认 (13)7.6确认偏差记录 (13)7.7验证周期 (13)8修订记录 (14)9相关附件 (14)1概述高效液相色谱仪作为现代制药企业最常用的分析仪器，在我公司主要用来分析药品的含量和有关物质，为保证药品的分析质量，我们特制定本文件来对高效液相色谱仪可能影响分析结果准确性的因素进行全面的确认。
本次验证的Agilent 1200高效液相色谱仪55012007010100是由在线脱气机、四元泵、自动进样器、柱温箱、紫外检测器、蒸发光散射检测器以及相关管路等组成，该仪器为2007年购买，主要用于小儿清热止咳口服液盐酸麻黄碱含量测定及中药材及原辅料含量测定。
该仪器前一次性能确认为2012 年7月26日完成，验证周期内为正常使用状态，并按照经批准预防性维护计划执行日常维护和备品备件的跟换；除日常使用中出现的微小故障及时排除外，无明显影响仪器性能的故障维修记录和部件更换记录, 此次性能确认为正常周期确认。
2目的此确认方案的目的是对国药控股深圳中药有限公司安装在检验室仪器室IV的Agilent 1200型高效液相色谱仪55012007010100进行性能再确认并文件记录。
3范围本方案适用于国药控股深圳中药有限公司检验室使用的Agilent 1200型高效液相色谱仪55012007010100的性能确认。
药典方法学验证指导原则
药典方法学验证指导原则药典方法学验证指导原则是指用于确认药品分析方法准确性、可靠性和适用性的规范化指南。
这些原则旨在确保药品分析方法在生产和质量控制中的可靠性，保证药品质量的稳定和一致性。
以下是一般性的药典方法学验证指导原则：1.准确性（Accuracy）：方法应能够提供与真实值或已知标准接近的结果。
验证过程通常涉及对已知浓度样品的测试，以评估方法的测量准确度。
2.精密度（Precision）：方法应在重复测试中产生一致的结果。
通过进行重复性测试来评估方法的精密度，这有助于确定方法在变异性方面的表现。
3.线性度（Linearity）：方法应能够准确测量不同浓度范围内的样品，并且结果应该与样品的浓度成正比。
验证线性通常通过测试不同浓度水平的样品来进行。
4.灵敏度（Sensitivity）：方法应能够检测到样品中非常小的变化，并产生可靠的测量结果。
灵敏度验证包括检测限（LOD）和定量限（LOQ）的评估。
5.特异性（Specificity）：方法应能够准确地识别和量化目标化合物，而不受其他可能存在的干扰物质的影响。
这通常通过特异性测试来确认。
6.稳定性（Stability）：方法在一定时间内应保持稳定，不会因为时间、环境变化或存储条件的变化而失效。
验证方法的稳定性可以确保其长期可靠性。
7.重复性（Repeatability）和再现性（Reproducibility）：重复性指同一实验室、同一操作者、同一设备和条件下重复测试的结果一致性；再现性指不同实验室、不同操作者、不同设备和条件下重复测试的结果一致性。
这些是验证方法可靠性和可复制性的重要指标。
8.系统性误差（Systematic Errors）和随机误差（Random Errors）：确保方法验证过程中能够识别和控制可能出现的系统性和随机误差，以确保结果的准确性和精确性。
这些原则构成了验证药品分析方法的基本指导，有助于确保分析方法的可靠性、精确性和适用性，并且是保障药品质量和安全的重要步骤。
中国药典 方法验证
中国药典方法验证
中国药典是由中国药学会编写和发行的一本权威药学参考书，用于指导药品研发、生产和质量控制等工作。
方法验证是药典中的一项重要内容，它是用来确保药品质量和安全性的方法。
方法验证是指通过实验和分析，验证一个测试方法的适用性、可靠性和准确性。
药典中的方法验证主要包括以下几个方面：
1. 精确度验证：确定方法的准确性和重复性，包括同一实验室和不同实验室的重复性。
2. 线性范围验证：确保方法在一定浓度范围内的分析结果与样品浓度成正比关系。
3. 灵敏度验证：确定方法对待测物质的最低检测限和最低定量限。
4. 特异性验证：确定方法是否只对待测物质有反应，而不与其他物质产生干扰。
5. 稳定性验证：验证方法在不同条件下，如温度、湿度等变化时的稳定性。
6. 系统适用性验证：验证方法在不同样品基质和样品预处理方法下的适用性。
方法验证的目的是确保药品质量控制方法的准确性和可靠性，为药品研发和生产提供科学依据和技术支持。
在药品注册和监管过程中，方法验证的数据和结果是评估药品质量的重要依据之一。
（完整版）检验方法验证和确认管理规程
（完整版）检验方法验证和确认管理规程页次：共11 页第1 页文件名称：检验方法验证和确认管理规程编码：03SMP01200起草审核批准颁发部门质量保证部日期日期日期实施日期分发部门及份数：质量管理部1份目的：明确检验方法的验证和确认的管理规程，确保所采用的检验方法科学、合理，符合检验要求并能有效控制药品的内在质量。
范围：仅适用于本公司对物料、产品的理化检验方法的验证和确认；清洁验证方法的验证。
职责：质量管理部QC、QA人员、质量管理部负责人对本规程的实施负责。
内容：1. 方法验证及确认工作职责分工1.1 质量控制部QC负责验证或确认方案的起草、验证或确认工作具体实施以及报告的填写。
1.2质量控制部负责人或其指定人员负责验证或确认方案、报告的审核，组织验证或确认工作的实施，对验证或确认工作中出现的问题及时纠正。
1.3 质量保证部QA负责验证或确认方案、报告的审核，监督确认工作实施，对确认工作中出现的问题提出改进意见并监督落实。
确保检验方法验证或确认程序达到符合性要求，程序被遵照执行，并且方法的预定用途被有效的且以文件记录的数据所支持。
1.4 质量管理部负责人负责验证或确认方案及报告的审核批准。
2 方法验证2.1定义：方法验证就是根据检验项目的要求，预先设置一定的验证内容和验证标准要求，并通过设计合理的实验来验证所采用的分析方法是否符合检验项目的要求。
2.2 目的：方法验证是证明采用的方法适合于相应检测要求。
2.3 适用范围：符合下列情形之一的，应当对检验方法进行验证：（1）采用新的检验方法；（2）检验方法需变更的；（3）采用《中华人民共和国药典》及其他法定标准未收载的检验方法；（4）法规规定的其他需要验证的检验方法。
文件名称：检验方法验证和确认管理规程编码：03SMP012002.3.1 在建立药品质量标准时，应对分析方法中的各检验项目进行完整的验证。
2.3.2 当药品生产工艺变更时，制剂的组分变更、原分析方法修订时，可根据变更的内容决定对分析方法进行部分验证还是完全验证。
2024年版《中国药典》通则调整—9101药品质量标准分析方法验证指导原则
随着药物研究的发展，中国药典也需要不断进行更新和调整，以保证药品质量的安全和有效。
近日，2024年版《中国药典》通则调整发布，并对药品质量标准分析方法验证指导原则做出了一系列的调整。
2024年版《中国药典》通则调整的目的是为了进一步提高药品质量标准分析方法的准确性和可靠性，以确保药品的质量符合要求。
具体来说，对于药品质量标准的分析方法验证指导原则做出了以下调整。
首先，2024年版《中国药典》通则明确了分析方法验证指导原则的基本要求，包括准确性、精密度、线性范围、灵敏度、特异性、系统适用性等方面。
而2024年版则进一步细化了这些要求，对各个要素提出了更加具体和严格的规定，以更好地保证分析方法的准确性和可靠性。
其次，2024年版将分析方法验证分为全面验证和局部验证两个级别。
全面验证适用于所有分析方法，其目的是对方法的准确性和可靠性进行全面的评价。
而局部验证则是根据具体的情况对一些特殊分析方法进行验证，以确保其准确性和可靠性。
此外，2024年版还对分析方法验证的具体步骤和操作进行了规范，包括实验设计、样品处理、数据分析等方面。
同时，在验证过程中要求采用合适的参考品和对照品，以增加验证结果的可靠性。
另外，2024年版还对分析方法验证的报告内容和格式进行了统一规定。
验证报告应包括验证目的、验证方法、实验设计、数据分析、验证结果等内容，并且要求按照规定的格式进行撰写和填报。
这样可以更方便地进行结果评价和审核，并确保验证结果的可靠性和可靠性。
总之，2024年版《中国药典》通则调整中对药品质量标准分析方法验证指导原则做出了一系列的调整，旨在提高分析方法的准确性和可靠性。
这些调整将有助于加强药品质量监管，确保药品的质量和安全性。
同时，这也为我国药物研发和生产提供了更好的参考依据，推动我国药物行业的健康发展。
第七课药典方法验证要求
Accuracy
Y
1
Y
3
?
N
Precision
Y
1
Y
4
N
4
Specificity
Y
2
Y
2
Y
2
Detection Limit
N
N
N
N
Y
5
Quantification Limit N
N
Y
3
N
N
N
Range
Y
1
Y
3
?
N
专属性研究
专属性是准确度的特殊情况 考察干扰 色谱方法
类别2研究: 专属性
Category I
Category II (Quantitative)
Category II (Semiquantitative)
Analytical Performance Characteristics
<1225> <1200> <1225> <1200> <1225> <1200>
药典方法验证要求 <1200>
方法验证
分析方法验证中包含的验证项目 (<1225>)
– 准确度 – 精密度 – 专属性 – 检测限 – 定量限 – 线性范围 – 耐用性
药典方法有关的文章
近期出版的文章
– USP “Performance-Based Monographs”: PF 35(3) – USP “Acceptable, Equivalent, or Better: Approaches
通则<1200>
中国药典对于方法学验证的定义
中国药典对于方法学验证的定义我国药典对于方法学验证的定义一、引言我国药典，是指我国卫生部以及国家食品药品监督管理局编撰的、国家法定的药品标准。
它是规范我国药品生产、经营及使用的基本依据。
其中，对于药品质量控制中的方法学验证有着非常重要的定义和要求。
二、方法学验证的基本概念方法学验证，是指为了确定某个测定方法所能满足其预期用途的实验验证过程。
它是保证药品质量分析结果准确、可靠的基础，也是保证药品符合标准并且能够给患者带来预期疗效的重要环节。
三、我国药典对方法学验证的定义我国药典对方法学验证的定义是非常严格和详细的。
根据《中华人民共和国药典》的相关规定，方法学验证应包括以下内容：1. 准确性：包括精密度、准确度和线性。
2. 灵敏度：指测定方法的最小检测浓度。
3. 特异性：测定方法能否准确地区分并测定所测样品中所含的目标成分。
4. 稳定性：指测定方法在一定条件下的结果稳定性。
5. 可靠性：指在实验条件相同的情况下，测定结果是否具有重复性。
6. 实用性：指测定方法是否便于使用和操作。
7. 方法的界限：即测定方法的适用范围和限制条件。
四、方法学验证技术的重要性方法学验证技术对于药品质量控制至关重要。
只有通过严格的方法学验证，才能保证所采用的分析方法能够准确、可靠地反映出样品的真实成分，并且能够有力地支持药品的质量控制工作。
五、个人观点和理解在我看来，我国药典对于方法学验证的定义是非常严谨和全面的。
它不仅包括了方法学验证的基本要求，而且还对方法学验证的各个方面进行了详细的规定。
通过对这些规定的理解和学习，我们可以更加深入地认识药品质量控制的要求，也能更好地指导药品生产和质量控制工作的开展。
六、总结我国药典对于方法学验证的定义是确保药品质量控制的基础。
严格遵循我国药典的方法学验证要求，对于药品生产企业和药品检验机构来说是非常重要的。
只有通过深入理解和严格执行这些规定，才能够保证药品质量的可靠性和稳定性，进而保障患者的用药安全和疗效。
无菌检查方法验证
无菌检查方法验证：取本品，分别加灭菌注射用水 1ml 溶解，采用薄膜过滤法依法检查(中国药典 2022 年版二部附录Ⅺ H )，应符合规定。
菌液制备： 10 倍稀释法培养基 营养琼脂培养基营养琼脂培养基营养琼脂培养基硫乙醇酸盐培养基改良马丁培养基改良马丁琼脂斜面 培养基菌悬液制备计数结果菌种 代数 稀释级 菌落数(cfu/ml )枯草芽孢杆菌 4 10-6 61金黄色葡萄球菌 4 10-7 89大肠埃希菌 4 10-6 78生孢梭菌 4 10-6 67白色念珠菌 4 10-7 83黑曲霉菌 4 10-4 401、供试品处理将供试品去掉铝塑盖，外表面用75%酒精全面消毒，然后向每支样品中注 入 1.0ml0.1%的蛋白胨灭菌溶液，备用。
2、检查阳性对照： 将等量的试验菌直接加入到液体硫乙醇酸盐培养基或者改良马丁液 体培养基管中，在相应的温度下培养。
液体硫乙醇酸盐培养基管在 30-35℃下培菌种枯草芽孢杆菌 CMCC(B)63501 金黄色葡萄球菌 CMCC(B)26003 大肠埃希菌 CMCC(B)44102生孢梭菌 CMCC(B)64941白色念珠菌 CMCC(F)98001黑曲霉菌 CMCC(F)98003菌悬液制备用 0.9% 无菌氯化钠溶液制成每 1ml 含菌少于 100cfu (菌落行程单 位)的菌悬液加入 5ml0.9%无菌氯化钠溶液，将 孢子洗脱，再同上制成每 ml 含菌 小于 100cfu 的菌悬液养；改良马丁液体培养基管在23-28℃下培养3-5 天。
观察记录。
阴性对照：将灭菌的液体硫乙醇酸盐培养基或者改良马丁液体培养基管直接放在相应的温度下培养。
液体硫乙醇酸盐培养基管在30-35℃下培养；改良马丁液体培养基管在23-28℃下培养3-5 天。
观察记录。
样品 (薄膜过滤法)：每种实验菌取10 支处理好的供试品溶液，将溶液合并后加入制备好的菌悬液1ml，用0.1%的蛋白胨灭菌溶液稀释至100ml，按薄膜过滤法过滤，取出滤膜，将其分为3 等份，分别置于含硫乙醇酸盐流体培养基及改良马丁培养基的容器中，其中一份作为阳性对照用。
药典无菌检查方法验证及操作要点
2. 培养基
2.1 培养基的灭菌 配制后应采用验证合格的灭菌程序灭菌。
2.2 培养基的保存 制备好的培养基应保存在2～25℃、避光的
环境。培养基若保存于非密闭容器中，一般在三 周内使用；若保存于密闭容器中一般可在一年内 使用。
•
2.3 培养温度 硫乙醇酸盐流体培养基置30～35℃培养
。改良马丁培养基置23～28℃培养。 2.4 培养基的适用性检查
•
黑曲霉
改良马丁琼脂斜面培养基上， 23～28℃培养5～7天，
加入3～5ml 0.9％无菌氯化钠溶液，将孢子洗
脱
吸出孢子悬液(用管口带有薄的无菌
棉花或纱布能过滤菌丝的无菌毛细吸管)至无菌
试管内
用0.9％无菌氯化钠溶液制成每lml含孢
子数小于l00cfu的孢子悬液。 •
4.3 薄膜过滤法 将规定量的供试品按薄膜过滤法过滤，冲
药典无菌检查方法验证 及操作要点
2020年4月29日星期三
1 前言 1.1 定义
无菌检查法系用于检查药典要求无菌的药
品、原料、辅料及其他品种是否无菌的一种方
法。若供试品符合无菌检查法的规定，仅表明
了供试品在该检验条件下未发现微生物污染。
•
1.2 实验环境条件要求
无菌检查应在环境洁净度10 000级下的 局部洁净度100级的单向流空气区域内或隔 离系统中进行，其全过程必须严格遵守无 菌操作，防止微生物污染。单向流空气区、 工作台面及环境应定期按《医药工业洁净 室(区)悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方 法》的现行国家标准进行洁净度验证。隔 离系统按相关的要求进行验证，其内部环 境的洁净度须符合无菌检查的要求。
3）枯草芽孢杆菌
(Bacillussubtilis)[CMCC(B)63 501]
中国药典微生物限度检查方法验证方案
中国药典微生物限度检查方法验证方案一、引言药品的质量与安全性是保障患者用药安全的重要方面。
微生物限度检查是药品质量控制的重要环节，用于评价药品中微生物的污染情况。
为确保检测结果的准确性和可靠性，本文旨在制定中国药典微生物限度检查方法验证方案。
二、背景微生物限度检查方法验证是指确定某一方法在特定条件下的适用性，方法验证的结果直接影响到药品生产和品质控制。
为了保证方法验证的可靠性，必须按照一定的规范和要求进行操作。
三、验证目的验证中国药典中所规定的微生物限度检查方法在实际应用中的准确性和可靠性，以确保药品的微生物限度符合国家及相关法规的要求。
四、验证程序1. 确定验证方法：根据中国药典中规定的微生物限度检查方法，选择合适的验证样品和验证条件。
2. 准备验证样品：从实际生产过程中随机选取药品样品，确保样品的代表性。
3. 执行验证实验：按照中国药典中的方法操作，对验证样品进行微生物限度检查。
4. 数据分析和评估：根据验证实验的结果，进行数据分析和评估，评估方法的准确性和可靠性。
5. 结果判定：根据数据评估结果，对微生物限度检查方法进行判定，判断方法是否适用于实际生产中的微生物限度检查。
6. 验证报告编制：根据验证实验的结果和结论，编制验证报告。
五、验证内容本次验证主要包括如下内容：1. 对选择的验证样品进行微生物限度检查。
2. 对验证样品进行菌落计数。
3. 对验证样品进行培养方法的验证。
4. 对不同微生物种类的检查方法进行验证。
5. 对不同微生物菌株的适应性进行验证。
六、风险评估在验证过程中，存在一定的风险因素，需进行风险评估，确保验证结果的可靠性和准确性。
风险评估主要包括验证样品来源的可靠性、实验操作的准确性、验证条件的合理性等。
七、验证结果与讨论根据验证实验的结果和数据分析，可以得出下列结论：1. 所验证的微生物限度检查方法在实际应用中的准确性和可靠性较高。
2. 所验证的微生物限度检查方法适用于不同药品制剂类型的微生物限度检查。
药典方法验证要求
药典方法验证要求药典方法验证是指通过一系列针对药物质量的测试方法来验证该方法的准确性、精确性和可靠性的过程。
药典方法验证是保障药物质量控制的重要环节，其目的是确保药物品质的一致性和稳定性，提供准确的分析结果以指导药物质量的评价和监控。
1.准确性验证：准确性验证是指衡量药典方法测量结果与真实值或已知值之间的一致性。
通常采用加标回收率、对照品和配伍光度法等方法来验证准确性。
药典方法应准确测定成分的含量，验证过程中需要检测样品的加标回收率。
2.精确度验证：精确度验证是指同一实验室或不同实验室中进行重复测定的一致性。
通过重复测定同一样品，计算出的测定结果应在一定的限度范围内波动，以验证方法的精确度。
一般采用同一实验室内反复测定，或者多个实验室间的比对来验证精确度。
3.可靠性验证：可靠性验证是指方法在不同的操作条件下的一致性和稳定性。
通过验证方法在不同仪器、不同实验室、不同分析人员、不同时间和不同试剂的情况下的结果是否一致来验证方法的可靠性。
4.灵敏度验证：灵敏度验证是指方法能够正确测定样品中含量的变化范围。
通过系列浓度的标准品或样品，判断方法对含量变化的敏感程度，以验证方法的灵敏度。
5.特异性验证：特异性验证是指方法能够准确测定所感兴趣的成分而不受其他干扰物质的影响。
通过对感兴趣的成分、干扰物质以及可能存在的结构类似物的测定，并对比结果进行分析，以验证方法的特异性。
6.系统适应性验证：系统适应性验证是指方法能适应特定药物样品的特性和特殊要求。
通过验证方法在具有不同特性的药物样品上的适用性和可靠性，以验证方法的系统适应性。
以上是药典方法验证的主要要求，为了保证药物质量的可控性和稳定性，验证过程应遵循一系列标准操作程序（SOP），确保测试结果的可靠性和准确性。
验证过程应详细记录并进行数据分析，以得出验证结果，并提供相应的验证报告，为药物质量的评价和监控提供依据。
药典技术要求
附件：《中国药典》中药质量标准研究制定技术要求国家药典委员会为编制好《中国药典》等国家药品标准，体现中药质量标准的制定符合中药的特点，保证中药质量标准所设定的方法与指标基本能控制中药质量，规范标准起草工作，特制定本技术要求。
本技术要求由总则和各论二部分组成，各论又分为中药材及饮片、植物油脂和提取物、中药成方制剂三部分。
总则一、基本原则1、坚持提高药品质量、维护公众健康的原则药品标准应贯彻落实科学监管理念，支持国家药品监督管理发展的需要，保障药品质量与用药安全，维护人民健康，促进我国医药事业的健康发展。
2、坚持继承、发展、创新的原则坚持继承与发展相结合，鼓励自主创新，加大自主知识产权的标准研究力度，促进科学研究与标准化工作的有效结合，提高我国药品标准中自主创新技术含量，使我国医药领域的自主创新技术通过标准快速转化为生产力，提高我国药品的国际竞争力。
3、坚持科学、实用、规范的原则制定、修订药品标准时，应充分考虑来源、生产、流通及使用等各个环节影响药品质量的因素，设臵科学的检测项目、建立可靠的检测方法、规定合理的判断标准；在确保能准确控制质量的前提下，应倡导简单实用；药品标准的体例格式、文字术语、计量单位、数字符号以及通用检测方法等应统一规范。
4、坚持质量可控性原则国家药品标准适用于对合法生产的药品质量进行控制。
所建立的检测方法应专属、准确、精密。
5、坚持标准先进性原则《中国药典》所载药品的质量标准，应充分反映现阶段国内外药品质量控制的先进水平，对于多企业生产的同一品种，其标准的制定应在科学合理的基础上坚持就高不就低的标准先进性原则。
6、坚持标准发展的国际化原则注重新技术和新方法的应用，积极采用国际药品标准的先进方法，加快与国际接轨的步伐。
促进我国药品标准特别是中药标准的国际化。
二、实验室条件及人员的要求承担《中国药典》等国家药品标准起草任务的单位应具有通过计量认证并能满足起草任务要求的实验室，具有相应技术人员，具备中药研究、检验常用仪器和设备，能确保实验用试剂、试药及对照物质符合规定。
中国药典2024年版生物样品定量分析方法验证指导原则
一、验证目的：
生物样品定量分析方法验证旨在评价一种分析方法在特定条件下，确
定适用对象范围，确定方法的准确性，检测灵敏度和其他相关性能指标的
有效性。
验证的结果可以为方法的合理性提供数据支持，并为方法适用性
评价提供依据。
二、验证的步骤：
三、验证的内容：
生物样品定量分析方法验证的主要内容包括精密度、选定性、准确度、线性范围和检测限等指标的验证。
精密度是指在一定条件下，同一样品的
多次测定结果之间的变异程度，它可以衡量方法的稳定性和重复性；选定
性是指方法能够正确识别和定量分析目标物质，并能排除其他干扰成分的
能力；准确度是指方法能够恢复目标物质真实含量的能力；线性范围是指
方法能够在一定浓度范围内，准确地测定目标物质的含量；检测限是指方
法可以可靠地识别和量化目标物质的最低浓度。
这些指标的验证可以全面
评价生物样品定量分析方法的可靠性和适用性。
四、验证的评价：
对于生物样品定量分析方法验证的评价，应根据验证的目的和内容来
进行判断。
一般来说，验证结果应该符合国际和国家药品标准规定的要求，并能够在实际应用中稳定的使用。
验证结果应该包括实验数据、统计分析
和验证报告等多个方面，并且要进行全面系统的评价，最终确定方法的适
用性。
综上所述，中国药典2024年版生物样品定量分析方法验证指导原则（草案）对于药品质量控制起到了重要的指导作用。
正确的应用和执行该
指导原则，可以有效保证药品的质量和治疗效果，并为药物研发和生产提供科学可靠的方法支持。
方法验证指导原则《中国药典》版第四部.pdf
采 用 IR 法可以对晶型原料药或固体制剂进行定量分析， 常用的方法为相对峰强度法。
晶型特征峰选取原则：① 分 别 选 取 2 种 晶 型 特 有 的 红外 光 谱吸收峰作为特征峰。② 2 种 晶 型的 特征 峰 应 独 立 而 不 受 对方 干 扰 。③特征峰强度应与晶型成分含量呈对应线性关系。
表 1 检验项目和验证指标
内容
(b )混 晶原料药分析：当不同晶型含量与热焓呈正比关 系 ，采 用 精 密 称 量 配 制 不 同 晶 型 含 量 的 混 晶 样 品 ，建立 晶 型 含 量 与 热 焓 值 的 线 性 关 系 ，绘 制 标 准 曲 线 ，定 量 测 定 混 晶 样 品中的晶型含量。
( c ) 方 法 说 明 ：① 仅 适 用 于 晶 型 原 料 药 定 量 分 析 。②对 熔 融 吸 热 峰 值 相 差 大 的 混 晶 原 料 供 试 品 ，建 立 标 准 曲 线 时 线 性 范 围 较 宽 ；熔 融 吸 热 峰 值 相 差 小 的 混 晶 样 品 ，建 立 标 准 曲 线 时 线 性 范 围 较 窄 。③ 有 时 DSC法 仅 能 作 为 限 量 检 测 方 法 。
(b )制 剂 中 晶 型 原 料 药 成 分 分 析 ：采 用 相 对 峰 强 度 法 时 分别选择晶型原料药特征吸收峰位置h 与空白辅料的特征 吸 收 峰 位 置 b2，在 同 一 红 外 光 谱 图 上 读 取 2 种 晶 型 成 分 的 特 征 吸 收 峰 的 吸 光 度 值 八 1与 A 2，计 算 二 者 特 征 吸 收 峰 的 吸 光度比值~通过配 制一 系列含有 不同 质量晶型原料 与空白 辅 料 比 例 混 合 样 品 ，建 立 特 征 吸 收 峰 的 吸 光 度 比 值 的 对 数 值 与 晶 型 原 料 药 含 量 间 的 线 性 关 型原料药含量进行定量分析。
中国药典对于方法学验证的定义
中国药典对于方法学验证的定义中国药典（Chinese Pharmacopoeia，以下简称“药典”）是中国药物监管部门发布的国家标准，用于指导药物生产、质量控制和药物监管等方面的工作。
药典对方法学验证（Method Validation）的定义是指对一种方法进行的系统评价，以确定该方法在一定条件下的适用性和可靠性。
下面我将详细介绍药典对于方法学验证的要求和内容。
药典对于方法学验证的要求包括以下几点：1. 准确性（Accuracy）：验证方法的准确性是指该方法得出的结果与参考标准值之间的接近程度。
药典要求在方法验证过程中，应使用适当的参考标准或已被赋值的样品，以确保方法的准确性。
2. 精密度（Precision）：精密度是指对相同样品连续重复测试的结果之间的相似度。
药典要求进行重复测试，并表达测试结果的变异程度。
精密度可以通过计算均值、标准偏差和变异系数来评估。
3. 线性（Linearity）：线性是指方法在一定范围内对样品浓度的响应与样品浓度之间存在直线关系。
药典要求通过构建标准曲线来验证方法的线性，标明曲线的方程和相关系数。
4. 灵敏度（Sensitivity）：灵敏度是指方法能够检测到分析物的最低含量或浓度。
药典要求通过测定检出限（Limit of Detection，LOD）和定量限（Limit of Quantitation，LOQ）来评估方法的灵敏度。
5. 特异性（Specificity）：特异性是指方法能够准确地确定目标分析物，而不受其他杂质或类似物的干扰。
药典要求验证方法的特异性，包括检测目标物的纯度、杂质和成分的干扰测试等。
以上要求是药典对方法学验证的基本要求，不同的测试项目可能会有其他具体要求。
在方法学验证过程中，药典还要求记录所有验证活动的详细信息，包括验证目的、验证方法、实验设计、测试结果和分析报告等。
为了确保方法学验证的可靠性，药典建议进行多次独立测试，使用多个样品批次和不同的分析仪器进行验证。
中国药典 方法学验证
中国药典方法学验证
方法学验证是指对药物质量控制方法的适用性、准确性、可靠性和可重复性进行评价的一种验证方法。
在中国药典中，药物质量控制方法的开发和验证都必须按照一定的程序进行，该程序包括方法的开发、预实验、正式实验、验证、稳定性研究等环节。
其中，方法学验证是整个过程中的关键环节之一。
方法学验证的步骤包括：
1. 准备样品和样品溶液。
2. 准备试剂和标准品。
3. 进行预实验，对方法的特异性、精密度和线性范围等进行初步探索。
4. 进行正式实验，对样品进行分析，并计算出分析结果。
5. 对结果进行统计分析，检验方法的准确性、精密度和可重复性。
如果结果符合要求，则进行下一步。
6. 进行验证，包括特异性验证、准确性验证、精密度验证、线性范围验证和重复性验证等。
7. 进行稳定性研究，评估方法的稳定性，并确定最佳的样品储存条件。
8. 撰写方法学验证报告，包括方法的开发步骤、预实验、正式实验、验证结果、稳定性研究等。
方法学验证的目的是保证药物质量控制方法的科学性和可信度，使其可以准确地评价药物的质量，为制定和实施规范的药物生产管理提供了重要的技术支撑。
药典 方法学验证
药典方法学验证
药典是一种标准参考书，用于确定药物质量和标准化生产。
药典中的验证方法是用来确定药物的有效成分、纯度、稳定性和其他质量参数的方法。
方法学验证是对药物分析方法进行验证以确保其准确性、精确性、可靠性和适用性的过程。
方法学验证需要根据国际药典委员会（Pharmacopoeial Discussion Group, PDG）、美国药典（United States Pharmacopeia, USP）、欧洲药典（European Pharmacopoeia, EP）和其他相关法规的要求进行。
方法学验证通常包括以下几个方面的验证：
1. 特异性验证：确保分析方法只检测所需的目标成分，而不受其他物质的干扰。
2. 精密度和恢复率验证：确定方法的精密度，即方法在相同条件下的重复性和中间精密度；以及恢复率，即方法对已知添加的目标成分的准确度。
3. 线性和范围验证：确定方法的线性范围，即方法在一定浓度范围内对目标成分浓度的响应是否呈线性关系。
4. 灵敏度验证：确定方法的灵敏度，即方法能否检测到低浓度的目标成分。
5. 精确度和准确度验证：确定方法的精确度，即方法的重复性和中间精确度；
以及准确度，即方法对标准样品的准确程度。
6. 稳定性验证：确定方法在不同温度、湿度等条件下的稳定性，以确保方法在一定时间内保持准确和可靠。
方法学验证的目的是为了确保药物质量控制方法的有效性，保证药物的质量和安全性。
通过验证过程，可以确定适用于生产过程中的分析方法，并为药物批准、注册和质量控制提供技术支持。
药典方法确认规程
目的建立药典方法确认规范，确保药典方法适用于本实验室的实验条件。
定义药典方法的确认：收载于CP、USP、BP、EP等药典的产品分析方法，使用前证明该验证过的产品测试方法、条件确实适用于本实验室的实际使用环境。
职责质量控制室所有人员负责按照本规程执行药典分析方法的确认。
程序药典方法确认需要做的项目原料药：制剂：被检测项目类型的说明：系统适用性实验按药典正文要求的内容进行；正文没有要求的内容，如RSD%，按药典附录的要求进行。
专属性系指在其他成分（如杂质、降解物、辅料等）可能存在下，采用的分析方法能够正确鉴定、检出被分析物质的特性。
通常，鉴别、杂质检查、含量测定方法中均应考察其专属性。
如采用的方法不够专属，应采用多个方法予以补充。
鉴别反应专属性鉴别试验应确证被分析物符合其特征。
专属性试验要求证明能与可能共存的物质或结构相似化合物区分，需确证含被分析物的供试品呈正反应，而不含被测成分的阴性对照呈负反应，结构相似或组分中的有关化合物也应呈负反应。
杂质检测专属性在杂质可获得的情况下，可向供试品中加入一定量的杂质，证明杂质与共存物质能得到分离和检出，并具适当的准确度与精密度。
在杂质或降解产物不能获得的情况下，专属性可通过与另一种已证明合理但分离或检测原理不同、或具较强分辨能力的方法进行结果比较来确定。
或将供试品用强光照射，高温，高湿，酸、碱水解及氧化的方法进行破坏（制剂应考虑辅料的影响），比较破坏前后检出的杂质个数和量。
必要时可采用二极管阵列检测和质谱检测，进行色谱峰纯度检查。
含量检测专属性➢对于API主成分含量测定可在供试品中加入杂质，考察测定结果是否受干扰，并与未加杂质的供试品比较测定结果；在杂质或降解产物不能获得的情况下，可采用另一个经验证了的或药典方法进行比较，对比两种方法测定的结果。
也可采用破坏性试验（强光照射，高温，高湿，酸、碱水解及氧化），得到含有杂质或降解产物的试样，用两种方法进行含量测定，比较测定结果。
药典生物样品定量分析方法验证指导原则
（二)分析批的接受标准
应在分析试验计划或标准操作规程中,规定接受或拒绝一个分析批的标准。在整个分析批包含多个部分批次的情况，应该针对整个分析批,也应该针对分析批中每一部分批次样品定义接受标准。应该使用下列接受标准:
校正标样测定回算浓度一般应在标示值的±15%范围内,定量下限应在±２0％范围内。不少于6个校正标样,至少75%标样应符合这些标准。如果校正标样中有一个不符合标准，则应该拒绝这个标样，重新计算不含该标样的标准曲线，并进行回归分析。
此外，如果适用，也应该进行下列考察:
·处理过的样品在室温下或在试验过程储存条件下的稳定性;
·处理过的样品在自动进样器温度下的稳定性。
在多个分析物试验中，特别是对于生物等效性试验,应该关注每个分析物在含所有分析物基质中的稳定性。
应特别关注受试者采血时,以及在储存前预处理的基质中分析物的稳定性，以确保由分析方法获得的浓度反映受试者采样时刻的分析物浓度。可能需要根据分析物的结构，按具体情况证明其稳定性。
3.定量下限
定量下限是能够被可靠定量的样品中分析物的最低浓度，具有可接受的准确度和精密度。定量下限是标准曲线的最低点,应适用于预期的浓度和试验目的。
4.标准曲线
应该在指定的浓度范围内评价仪器对分析物的响应,获得标准曲线。通过加入已知浓度的分析物（和内标)到空白基质中,制备各浓度的校正标样,其基质应该与目标试验样品基质相同。方法验证中研究的每种分析物和每一分析批,都应该有一条标准曲线。
最好使用新鲜配制的样品建立标准曲线，但如果有稳定性数据支持，也可以使用预先配制并储存的校正标样。
5．准确度
分析方法的准确度描述该方法测得值与分析物标示浓度的接近程度,表示为：(测得值/真实值）xl00%。应采用加入已知量分析物的样品来评估准确度,即质控样品。质控样品的配制应该与校正标样分开进行,使用另行配制的储备液。
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Prep. 1 2 3 4 5 6
Result = t(qU,df)-t(qL,df)
qU = (Upper-Mean)/(SD√(1 + 1/n)) qL = (Lower-Mean))/(SD√(1 + 1/n)) df = n-1
范围
计算值和已知浓度之间比较
准确度评估 取决于所采用的分析技术 样品: 在范围内每个浓度水平上采用不少于6个标准溶液。 评估的浓度需至少包括一个高于个论规定的上限的浓度和 一个低于个论规定的下限的浓度。以下浓度至少应被包括 在内： 80%, 90%, 100%, 110%, 和 120%.
验证参数
验证参数（续）
类别1研究: 精密度-准确度和范围
Category I Analytical Performance Characteristics Accuracy Precision Specificity Detection Limit Quantification Limit Linearity Range <1225> Y Y Y N N Y Y <1200> 1 1 2 N N 1 1 Category II (Quantitative) <1225> Y Y Y N Y Y Y <1200> 3 4 2 N 3 3 3 Category II (Semiquantitative) <1225> ? N Y Y N N ? <1200> N 4 2 5 N N N
精密度和准确度研究
精密度
– 6个独立制备的样品在100%浓度水平进行的含量测量值 之间的% RSD
准确度
– 测量值和标准物质标注量之间的差异（100%浓度水平） – 对准确度的计算需要用到精密度数据 结合验收标准，运用T-分布计算得出概率
限定: 概率不小于 0.95
精密度和准确度研究
精密度和准确度的恰当的结合产生的概率用来评估验证是
通则<1200>
适用范围
– <1200> 注重于在USP-NF决定是否收载与某项测试 相关的分析方法及其验收标准前，USP期望看到的数 据类型。 – <1200> 提供了一套系统的验证方法和标准用以评估 验证数据。能够提供满足本通则要求的验证数据的分 析方法适用于药典，也可适用于监管的考量。 – <1200> 不是为了满足公司对于应用于生产基地的分 析方法的验证的需求。
<1225> Y Y Y N N Y Y
<1200> 1 1 2 N N 1 1
精密度
样品:
– 6个待测样品，每个定量添加规定限度的指定杂质对照 品.
精密度 (重复性):
– RSD% NMT C -0.1505% (Horwitz–Massart equation)
粗放性和中间精密度: – RSD% NMT 2C -0.1505% (Horwitz–Thompson equation)
可接受的分析方法
哪些参数描述了一个可接受的分析方法?
– <1225> 规定
• 准确度– 一个已知标准物质的回收率或平均值和接受的真实 值之间差异，并给出置信区间 • 精密度 – 对一个均质样品取6-9等份检测的相对标准偏差 %RSD • 专属性 – 检测结果不受辅料或杂质的影响 • 线性 –作区间内，证实使用该方法进行检测具有适当 水平的精密度、准确度、和线性。
类别3研究： 准确度
Category I Analytical Performance Characteristics Accuracy Precision Specificity Detection Limit Quantification Limit Linearity Range <1225> Y Y Y N N Y Y <1200> 1 1 2 N N 1 1 Category II (Quantitative) <1225> Y Y Y N Y Y Y <1200> 3 4 2 N 3 3 3 Category II (Semiquantitative) <1225> ? N Y Y N N ? <1200> N 4 2 5 N N N
<1225> Y Y Y N N Y Y
<1200> 1 1 2 N N 1 1
可检测性
<1200>中的新术语 取代检测限 3个步骤
LOD
– 1: 配置一个在限度浓度的杂质标准品溶液 – 2: 配置一个添加了在限度浓度的杂质标准品的样品标准品溶液 – 3:配置一个添加了（限度100%-%RSD*浓度）的杂质标准品的样品 标准品溶液
方法性能验收标准: 在每一个浓度水平上计算得出的概 率都需不小于 0.95
类别2研究: 专属性
Category I Analytical Performance Characteristics Accuracy Precision Specificity Detection Limit Quantification Limit Linearity Range Category II (Quantitative) <1225> Y Y Y N Y Y Y <1200> 3 4 2 N 3 3 3 Category II (Semiquantitative) <1225> ? N Y Y N N ? <1200> N 4 2 5 N N N
准确度研究
准确度
– 对杂质的准确度测量是在可能的分析物的线性范围内采用 加样回收率的研究 – 评估需在一个较大的范围内进行 (如某个特定杂质限度的 50% - 150%) – 分析: 加样浓度和测量浓度之间的差异
–
验收标准:
在每个浓度水平上平行配置的样品的均值： 加样回收率 = 100% ± 2C -0.1505%
什么是Horwitz?
RSD=C−0.1505% RSD=2C−0.1505%
类别4研究： 精密度
Category I Analytical Performance Characteristics Accuracy Precision Specificity Detection Limit Quantification Limit Linearity Range Category II (Quantitative) <1225> Y Y Y N Y Y Y <1200> 3 4 2 N 3 3 3 Category II (Semiquantitative) <1225> ? N Y Y N N ? <1200> N 4 2 5 N N N
<1225> Y Y Y N N Y Y
<1200> 1 1 2 N N 1 1
专属性研究
专属性是准确度的特殊情况 考察干扰 色谱方法 – 分离度不小于1.5
专属性研究
非色谱方法比较困难 在样品中添加干扰物质 测量由干扰物质引起的误差 限度与被分析物的验收标准有关: – 使用校准曲线，对含量测试的浓度误差应不大于1% – 当应用于杂质检测，偏差水平应不大于精密度值的 1/3。 (例如, 对于一个限度为0.1%的杂质，偏差应不 大于1%）
类别5研究：可检测性
Category I Analytical Performance Characteristics Accuracy Precision Specificity Detection Limit Quantification Limit Linearity Range Category II (Quantitative) <1225> Y Y Y N Y Y Y <1200> 3 4 2 N 3 3 3 Category II (Semiquantitative) <1225> ? N Y Y N N ? <1200> N 4 2 5 N N N
药典方法验证要求 <1200>
方法验证
分析方法验证中包含的验证项目 (<1225>)
– – – – – – – 准确度 精密度 专属性 检测限 定量限 线性范围 耐用性
药典方法有关的文章
近期出版的文章
– USP “Performance-Based Monographs”: PF 35(3) – USP “Acceptable, Equivalent, or Better: Approaches for Alternatives to Official Compendial Procedures”: PF 35(3) – USP Medicines Compendium “Assessing Validation Parameters for Reference and Acceptable Procedures - Guideline for Donors - Instructions for Staff” <10>: https:/// – USP “Requirements for Compendial Validation <1200>”: PF 39(6)
*从Horwitz方程估算得出
如果1≤2 否则,
且 3<2, 则差异可被检测出
该方法不能胜任限度检测
小结
USP对现有的验证观念提出质疑 把可测量的参数和明确的标准列入方法验证 专注于精密度和准确度的结果 用专属性来帮助理解准确度 提出可检测性 淘汰检测限、定量限和线性