菌落总数测定结果不确定度评估报告
食品中菌落总数的测定和不确定度分析
食品中菌落总数的测定和不确定度分析一、实验目的1.了解细菌在食品中的分布情况，掌握食品中菌落总数的测定方法；2.学习不确定度分析的基本原理和计算方法。
二、实验原理菌落总数是一个评估食品卫生状况的指标，可通过细菌在富养基上形成的可见菌落数来间接反映食品中细菌的总数。
菌落总数的测定方法主要包括表面菌落数和悬浮菌落数两种。
1.表面菌落数测定将待测食品取适量均匀涂布在含有富养基的琼脂平板上，经过一段时间后，培养基上出现的可见菌落即为表面菌落，通过计算菌落的数量可以得到菌落总数的测定结果。
2.悬浮菌落数测定将待测食品样品进行均质化处理，然后以一定比例取样，将取样液经过一系列稀释操作后，滴加在琼脂平板上，在适宜条件下进行培养，计算悬浮液中的菌落数量，以此推算原液中的菌落总数。
实验中使用的琼脂平板是一种可与菌落直接接触的透明胶状物质，其中含有滋养菌繁殖所需的成分，利于菌落的生长。
三、实验步骤1.取适量待测食品样品，进行均质化处理。
2.取一定量的琼脂平板，倒置于平顶培养皿中。
3.将待测食品样品均匀涂布在琼脂平板上，覆盖培养皿。
4.将培养皿以适当角度倒置，放入恒温箱中，在适宜温度下进行培养。
5.培养一段时间后，取出培养皿，观察并计算菌落总数。
四、实验注意事项1.操作过程中要注意最小化空气扰动和污染，避免细菌交叉感染。
2.在涂布琼脂平板时要注意均匀性，以避免过度或不足的涂布导致结果偏差。
3.培养过程中要控制好温度和时间，以保证菌落生长的适宜条件。
五、不确定度分析不确定度是指测量结果与所测量值的真实值之间的差异。
在菌落总数的测定中，存在多种不确定因素，如操作误差、环境条件、样品质量等。
进行不确定度分析是保证实验结果准确性的重要步骤。
不确定度的计算可以采用均匀型高斯不确定度扩展法。
首先根据实验数据计算菌落总数的平均值和标准偏差，然后根据高斯分布的原理，计算95%的置信区间。
通过比较置信区间和数据范围，评估实验结果的可信度。
食品中菌落总数的测定和不确定度分析
食品中菌落总数的测定和不确定度分析一、引言食品中的微生物数量是评定其卫生质量的重要指标，菌落总数是评价食品卫生质量的关键参数之一。
食品中的微生物数量不仅影响着食品的保存期限和口感，更重要的是与食品的安全有着密切的关系。
对食品中的菌落总数进行测定和分析具有非常重要的意义。
本文将围绕食品中菌落总数的测定和不确定度分析展开讨论，旨在帮助读者更好地了解食品卫生质量评价的相关知识，并指导实际操作中的方法和技巧。
二、菌落总数的测定方法菌落总数是指在一定条件下，通过培养基将微生物落在培养皿上，并在合适的条件下培养菌落，利用目镜计数菌落的数量，并由此计算出单位体积或单位重量的食品中的微生物数量。
常用的测定方法主要包括平板计数法、膜过滤法和MPN法。
1. 平板计数法平板计数法是最常用的菌落总数测定方法之一。
具体操作步骤如下：（1）准备培养基：选取适当的培养基，如总菌平板计数培养基、大肠菌群平板计数培养基等。
（2）取样品：取一定量的样品，将其均匀涂抹在培养基平板上。
（3）培养：将培养皿倒置，于37℃下孵育24-48小时。
（4）计数：使用目镜逐个计数每个培养皿上的菌落，计算菌落总数。
2. 膜过滤法膜过滤法适用于含有大量杂质的样品。
具体操作步骤如下：（1）准备滤膜：将具有一定孔径的滤膜放置在过滤器上。
（2）过滤样品：将样品通过过滤器，将微生物过滤在滤膜上。
（3）培养：将滤膜放置在培养基平板上，进行培养。
3. MPN法（1）稀释样品：将样品进行一系列的稀释处理，然后分别取少量稀释液进行培养。
（2）培养：将稀释液分别装入培养器中进行培养。
（3）观察结果：观察培养液中是否有菌落形成，以确定MPN值。
三、不确定度的概念和分析不确定度是指测量结果与被测量真实值之间的差异的度量，是衡量测量结果准确程度的重要指标。
在菌落总数的测定中，不确定度的分析尤为重要，因为它关系到食品卫生质量的评价结果的可信度。
1. 不确定度的来源（1）实验误差：包括仪器的测量误差、操作误差等。
食品中菌落总数的测定和不确定度分析
食品中菌落总数的测定和不确定度分析一、引言食品中的微生物污染是影响食品安全的重要因素之一。
为了保障食品的质量和安全，需要对食品进行微生物指标的测定。
食品中菌落总数的测定是最常见的指标之一。
本文将介绍食品中菌落总数的测定和不确定度分析。
二、方法1. 实验材料和仪器（1）实验材料：待测食品样品、平板计数培养基、无菌培养皿、无菌移液器、无菌培养基平板。
（2）实验仪器：恒温培养箱、计数板。
2. 测定步骤（1）将待测食品样品进行消毒处理，常用的消毒方法有热处理、酸碱处理等。
（2）准备培养基：将平板计数培养基加热至溶解，然后冷却至约45℃。
（3）将样品取约1g加入到无菌培养皿中。
（4）将培养基翻匀到无菌培养皿中，使其覆盖整个培养皿。
（5）将培养皿倒置放入恒温培养箱中，以适当的温度和时间进行培养。
（6）取出培养皿，使用计数板进行菌落计数。
三、结果与讨论1. 结果分析通过菌落计数，可以得到食品中菌落总数的数值。
通常情况下，食品中菌落总数应该符合国家标准或行业标准的规定。
2. 不确定度分析（1）实验误差：实验操作中的误差包括称量误差、计数误差等。
（2）装载量误差：由于不同的操作人员在装载培养皿过程中的个体差异，导致结果的误差。
（3）样品取样误差：由于样品取样的位置不同，导致结果的误差。
（4）环境误差：实验环境的温度、湿度等因素对结果会产生一定影响。
根据以上误差来源，可以进行不确定度的计算和分析。
常用的不确定度计算方法有合成不确定度法和扩展不确定度法。
四、结论通过菌落计数技术，可以对食品中的菌落总数进行测定。
在测定过程中，需要注意控制实验误差，并分析不确定度以评估结果的可靠性。
五、参考文献。
菌落总数测定结果不确定度 评估报告
5 1100 1400 3.0414 3.1461 3.09376 0.00548
6 900
1000 2.9542 3.0000 2.97712 0.00105
7 1600 1600 3.2041 3.2041 3.20412 0.00000
8 1200 1400 3.0792 3.1461 3.11265 0.00224
检测步骤主要包括样品的吸取、稀释（移液器）、培养、计数、及
结果修约等，由于结果发散性较大的特点，在本次实验中，我们只对样
品吸取、重复测定结果的不确定度进行量化分析。
.1 样品吸取过程中使用刻度吸管体积的相对标准不确定度urel（V） 3.1.1 吸管体积校准引入的标准不确定度u（V）
在吸取样品的过程中均使用经检定合格的10ml刻度吸管，其允许误
该样品菌落总数测试结果可估算为（1100～1500）cfu/ml
废水菌落总数测定结果不确定度评估
1. 实验前准备 1.1 设备：恒温培养箱、无菌吸管10ml（具0.1ml刻度）、微量移液 器、无菌锥形瓶、无菌培养皿 1.2 培养基及试剂：平板计数琼脂、无菌生理盐水 1.3 因浓缩苹果清汁中一般菌落不容易生长，故用废水作为样品检测。 2. 检测依据及步骤
.1 依据：GB4789.2—2010《食品卫生微生物学检验 菌落总数测 定》
10倍系列稀释选择23个适宜稀释度的样品匀液用移液器各取1ml别加入无菌培养皿内每皿中加入15ml20ml平板计数琼脂培养基混匀361培养482h计数报告31样品吸取过程中使用刻度吸管体积的相对标准不确定度urelv311吸管体积校准引入的标准不确定度uv在吸取样品的过程中均使用经检定合格的10ml刻度吸管其允许误差为005ml故10ml吸管体积校准引起的不确定度按矩形分布k0029ml则样品吸取过程中使用刻度吸管体积的相对标准不确定度
食品中菌落总数的测定和不确定度分析
食品中菌落总数的测定和不确定度分析一、引言食品中菌落总数是指在特定条件下，通过培养基培养和统计法，对食品中细菌和真菌等微生物菌落数的测定。
食品中菌落总数是评价食品卫生质量的重要指标之一，可以反映食品是否受到污染、保存条件是否良好等情况。
对食品中菌落总数进行准确测定和不确定度分析，对于食品卫生和质量控制至关重要。
二、食品中菌落总数的测定方法食品中菌落总数的测定方法通常采用菲尔氏杯平板法和薄膜法。
菲尔氏杯平板法是将食品样品稀释后均匀铺在富含寒天的琼脂培养基上，培养并统计菌落数；薄膜法是将食品样品均匀涂抹在琼脂培养基上，培养并统计菌落数。
三、食品中菌落总数的不确定度分析1. 采样不确定度：食品中菌落总数的测定首先要进行食品样品的采样和样品的制备，采样过程中可能会存在采样不均匀、采样器具的精密度等因素，引入采样不确定度。
2. 复现性不确定度：食品中菌落总数的测定通常需要进行多次重复测定，由于操作者、环境等因素的影响，可能会出现不一致的结果，引入复现性不确定度。
3. 实验条件不确定度：食品中菌落总数的测定受到实验条件的影响，如温度、湿度等条件会对微生物生长产生影响，引入实验条件不确定度。
4. 测量设备不确定度：食品中菌落总数的测定需要借助于培养箱、平板计数器等设备，设备的准确度和精度会影响测定结果，引入设备不确定度。
四、食品中菌落总数的不确定度评定食品中菌落总数的不确定度评定需要考虑上述不确定度因素的影响，并采用合适的方法进行计算评定。
不确定度评定的目的是为了确定测定结果的可靠性和准确性，提高测定结果的可信度。
1. 不确定度计算方法食品中菌落总数的不确定度可以采用GUM不确定度评定方法，通过不确定度传递法和不确定度组分法计算总的不确定度。
在实际计算中，需要考虑到各种不确定度来源的具体数值和权重，综合计算得出总的不确定度值。
2. 不确定度控制方法为了减小不确定度的影响，可以采取以下控制方法：（1）采样不确定度的控制：采用合适的采样方法和器具，确保样品的均匀性和代表性；（2）复现性不确定度的控制：严格控制实验条件和培养操作流程，尽量减小操作者和环境的影响；（3）实验条件不确定度的控制：控制实验条件的稳定性和准确性，进行实验前后的环境监测和校准；（4）测量设备不确定度的控制：对测量设备进行定期维护和校准，确保设备的准确度和精度。
食品中菌落总数的测定和不确定度分析
食品中菌落总数的测定和不确定度分析一、引言食品安全是人们关注的重点问题之一，而食品中的微生物污染更是引起广泛关注的话题。
菌落总数是一种常见的微生物指标，用于反映食品中细菌、酵母菌和霉菌的数量和品质，是评价食品卫生质量的重要指标之一。
食品中菌落总数的测定和不确定度分析显得格外重要。
二、菌落总数的测定方法菌落总数的测定方法一般采用霉菌总数计数法或者菌落总数计数法。
下面以菌落总数计数法为例，介绍菌落总数的测定方法。
1. 样品制备首先需要准备好待测样品，这里以蔬菜为例。
将蔬菜样品洗净并切碎，然后取适量样品加入适量生理盐水中，进行样品的制备。
2. 稀释根据样品的预期菌落总数选择适宜的稀释倍数，将样品进行适当的稀释，以便于后续操作。
3. 菌落计数培养基将稀释后的样品平铺在含有琼脂的培养基上，然后放置在适宜的温度和湿度条件下进行培养，产生菌落。
4. 菌落总数的计数培养一定时间后，观察菌落的形态，进行计数并计算出样品的菌落总数。
三、菌落总数的不确定度分析不确定度是指在一定测量条件下，由于一系列测量误差和环境条件等因素引起的测量结果的不确定性。
菌落总数的测定同样受到不确定度的影响，因此需要进行不确定度分析。
1. 实验误差在菌落总数的测定中，包括样品制备、稀释、计数等环节都存在测量误差。
样品制备过程中的称量误差，培养基制备过程中的体积误差等都会引起测定结果的不确定性。
2. 环境条件菌落总数的测定过程中，温度、湿度、光照等环境条件的变化都会对测定结果产生影响，因此需要对这些因素进行控制和修正。
四、不确定度的计算菌落总数的不确定度可以通过以下步骤进行计算：1. 确定测定方法的不确定度根据实验数据和测定方法的特点，确定测定方法的不确定度。
这个过程需要考虑到实际测定过程中的各种误差和环境因素对测定结果的影响。
2. 计算出测定结果的标准偏差根据测定方法的不确定度和实验数据，可以计算出测定结果的标准偏差，从而确定实验数据的不确定度。
食品中菌落总数的测定和不确定度分析
食品中菌落总数的测定和不确定度分析一、引言食品中菌落总数的测定和不确定度分析是食品卫生检测中的重要一环。
菌落总数是指食品样品中各类菌落的总数，反映了食品样品的卫生质量和微生物状态。
通过对食品中菌落总数的测定和不确定度分析，可以评估食品样品中微生物的数量，并确定分析结果的准确度和可靠性。
二、测定方法食品中菌落总数的测定通常使用平皿计数法。
具体步骤如下：1. 准备样品：取食品样品适量，保持其完整性和天然状态。
2. 消毒处理：将样品进行消毒处理，通常采用酒精灼烧或辐射灭菌等方法，以确保样品中的微生物数量符合测定要求。
3. 取样：采用无菌技术，将样品取适量均匀地涂于含有营养物质的琼脂平板上。
4. 培养：将平板培养基斜放于培养箱中，控制培养环境的温度和湿度，使菌落得以生长。
5. 记录和计数：在培养一定时间后，观察平板上菌落的生长情况，并且根据菌落的形状、颜色、大小等特征进行记录和计数。
6. 计算菌落总数：统计记录的菌落数量，并根据实验过程中相应的计算公式计算出食品中菌落总数。
三、不确定度分析不确定度是对测量结果的可靠性和准确度的度量。
在食品中菌落总数的测定过程中，存在多个可能影响结果的因素，如样品的不均匀性、菌落的形状和大小的主观判断等。
通过不确定度的分析，可以评估测定结果的可靠性，并确保实验数据的准确度。
不确定度的分析可以通过以下步骤进行：1. 确定测定结果的标准偏差：通过进行多次实验测定，计算出测定结果的标准偏差。
标准偏差可以反映出数据的离散程度和测定的精确性。
2. 估计不确定度的类型：根据测定过程中存在的因素和误差来源，估计可能的不确定度类型，如随机误差和系统误差等。
3. 计算不确定度的组成：根据不确定度类型，分别计算出每个不确定度源的贡献度，并进行数值上的组合和求和。
4. 定量表示不确定度：通过数值表示不确定度的大小，常用表示形式包括标准不确定度和扩展不确定度。
5. 不确定度扩展：在测定过程中，不确定度可能会随着操作过程的复杂性而增加。
食品中菌落总数的测定和不确定度分析
食品中菌落总数的测定和不确定度分析食品中细菌总数的测定和不确定度分析是食品科学与技术领域中的重要研究内容之一。
细菌总数的测定可以帮助我们了解食品的卫生状况，评估食品质量，保障公众的食品安全。
不确定度分析则是用来评估测定结果的可靠性和准确性，帮助我们判断测定结果的可信度。
食品中的细菌是以菌落的形式存在的，所以细菌总数的测定方法一般采用菌落计数的方法。
具体的步骤如下：1. 取样：从食品样品中取出适量的物质，一般是取适量食品，加入适量的生理盐水，通过均匀悬浮。
2. 稀释：将取样得到的悬浮液进行适当的稀释，以保证每个培养皿上的菌落数在可计数的范围内。
一般采用十倍的稀释系列进行稀释。
3. 接种：将稀释好的样品取适量，在无菌条件下倒入培养皿中，均匀涂布在培养基上。
4. 培养：将培养皿放入恒温箱温育，通常为30°C，培养时间一般为24-48小时。
5. 计数：培养完成后，通过裸眼或显微镜观察，根据菌落的形态、大小、颜色等特征进行计数，并将计数结果记录下来。
细菌总数的测定结果一般以CFU/g（菌落形成单位/克）为单位表示。
不确定度分析是对测定结果的评估，主要从随机误差和系统误差两方面进行分析。
随机误差是由于测定过程中的种种因素引起的结果的波动性。
在细菌总数的测定中，随机误差可能包括取样不均匀、稀释误差、接种误差等。
通过重复测定可以减小随机误差，并通过统计方法计算出标准偏差来表示测量结果的稳定性。
系统误差是由于测定方法的固有缺陷引起的结果的偏差。
在细菌总数的测定中，系统误差可能包括培养基的选择和准备、温度和湿度的控制、观察的主观判断等。
通过合理选择和优化测定条件，可以减小系统误差。
能力验证菌落总数测定结果不确定度的评定
０ ０５ ７ ７４ ／ １ ＝０ ． ０ ０５ ７ ７４。
合成相对标准不确定度为： １ ． ２ ． １ 检 测依据 。食 品中微生 物学能力 验证计 划参 试指 导书 ， ４ ｕ Ｊ ． ｔ （ ｒ ） ＂ ＋ ＂ ｉ ｒ ｍ ａ （ Ｄ ） ＂ ＋ ｔ ｑ ｔ ｒ ｔ ｌ （ Ｋ ） ＂ ＋ ｔ ｑ ｔ ｔ ￣ （ Ｖ Ｇ Ｂ ４ ７ ８ ９ ．２ —２ ０ ｌ Ｏ《 食品安全国家标准食品微生物学检验 菌落总数 ｌ ＿ ｏ ０ Ｏ ９ ６ Ｏ ６ 测定》 。 实验测得菌落总数对数平均值为 ｌ ｇ ｘ＝ ５ ． ２ ４ ８ ８ ， 则检测结果的合成 １ ． ２ ． ２实验过程。 在无菌的环境下打开西林瓶 ， 将３ ｍ Ｌ 的稀释溶液 加人到西林瓶中溶解 ， 稀释 溶液一共有 ４ ０ ｍ Ｌ 。 等待溶解完成后 ， 将溶解 不确 定度 为： 鞠 ｉ — 吣 ０ ５ ０ ４ ２
２ 结 果 ３讨 论
一
般测量不确定度的地点为理化性的实验室 ，虽然相关专家已经 提出了测量不确定度的实验要求， 但是在具体的实验 以及检测工作 中， 并没有落实下来 。 通过本次实验可以有效地对自 邑 力验证进行检测 ， 本次 其 中， 样品菌落的总数 为 Ｙ ， 稀释倍数记为 Ｋ ， 在检测稀释度的平 的实验中，为了避免实验样品中的琼脂的表面有 以弥漫的生长方式生 板上检测的聚落数量记为 ｘ ， 在—定的稀释度下的样品的体积记为 Ｖ 。 长出的 菌落 ， 因此在琼脂的表面覆盖了一层培养基 ， 另外还进行了直接 ２ ． ３判定。由于重复 １ ０次检测的菌落总数结果相差较大 ， 因此对 倾注法作为对比陛的实验。 在琼脂的外部的培养基呈固体状时， 对平板 根据—定的培养条件进行培养。结合实验结果来观测这两种 检测结果取对数后， 再计算检测结果对数值的样本标准偏差。 按 Ａ类 进行翻转 ， 评定 ， 根据贝塞尔公式 ， 得到检测结果对数值的样本标准偏差。 对 比实验可以发现， 两种实验的实验结果相差不多 ， 因此本次的实验效
乳粉中菌落总数的测量不确定度评定
乳粉中菌落总数的测量不确定度评定摘要：目的菌落总数是重要的卫生质量指标之一, 建立乳粉中菌落总数的测量不确定度评定方法具有非常重要的意义,可以有效客观判定产品卫生质量指标是否真正符合标准。
根据RB/T 151-2016 《食品微生物定量检测的测量不确定度评估指南》、GB 4789.2-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定》和JJF 1059.1-2012《测量不确定度评定与表示》作为依据，对乳粉中菌落总数的不确定度来源进行分析, 保证测试样品均匀，每个样品都含可计数的微生物。
[1]每个样品均做平行样，由同一操作员进行操作，测试完成后得到的测试结果取对数。
结果乳粉中菌落总数的扩展不确定度为 0.040(以对数计)。
关键词：乳粉；菌落总数；测量不确定度实验部分1.实验原理[2]食品检样经过处理,在一定条件下(如培养基、培养温度和培养时间等)培养后,所得每g检样中形成的微生物菌落总数。
2.样品市售奶粉3.仪器设备恒温培养箱SPX-250，YXQ-LS-70A型高温蒸汽灭菌锅，生物安全柜BSC-1000IIA2，无菌均质器SCIENT-11L，电子天平YP120N4.培养基PCA，北京陆桥，2002245.方法与结果分析5.1菌落总数检验过程图，见图1。
图1 菌落总数检验过程图5.2不确定度来源分析不确定度的来源包括重复性(测试环境、培养时间、培养温度、修约、样品的均匀性、取样的重复性、人员的计数)、培养条件(培养时间允差、培养适度的允差)、取样(稀释体积、取样体积)等，根据RB/T 151-2016 《食品微生物定量检测的测量不确定度评估指南》不考虑偏倚，采用统计学的方法评定测量不确定度。
5.3重复测量结果将10个样品的平行检验结果取对数后进行分析，结果见表1。
表1 检验结果及分析[3]5.4再现性标准差为：5.5扩展不确定度5.6报告结果当检测结果的扩展不确定度为 0.040，其样品菌落总数测试结果报告见表2。
食品中菌落总数的测定和不确定度分析
食品中菌落总数的测定和不确定度分析一、引言食品是人们日常生活中必不可少的营养来源，食品中的菌落总数是衡量食品安全和卫生质量的重要指标之一。
菌落总数是指在一定温度下，某一食品中可增殖的微生物数量。
准确地测定食品中的菌落总数对于评估食品的卫生安全性具有重要意义。
二、菌落总数的测定方法测定食品中的菌落总数通常采用菌落计数法。
菌落计数法是将一定体积的食品样品悬浮液平铺在含有富养分的琼脂培养基上，经过一定时间的培养，计算营养基上的菌落总数。
该方法的优点是操作简单、准确度高，能够鉴定不同菌种的存在以及确定其数量。
具体操作步骤如下：1. 准备琼脂平板培养基和试样。
2. 将试样加入适量的生理盐水中，均匀悬浮后称取一定体积的悬浮液。
3. 将悬浮液倒入琼脂平板上，快速回旋使样品均匀分布。
4. 等待琼脂培养基凝固后，将琼脂平板倒置在合适的温度下培养一定时间。
5. 将培养好的琼脂平板取出，利用菌落计数器计数。
三、不确定度的分析不确定度是对测量结果表示确定性程度的度量。
菌落总数的测定结果可能会受到多种因素的影响，如操作误差、样品不均匀性、环境条件等。
在进行菌落总数测定时需要对不确定度进行分析，以评估测定结果的可靠性。
菌落总数测定中的主要误差来源包括：1. 体积取样误差：由于液体量取操作的不准确性，导致取样体积与实际需要的体积有偏差。
2. 稀释误差：菌液的稀释过程中，由于混匀不均，导致样品中菌落总数的测定值与真实值存在一定误差。
3. 环境条件误差：培养环境的温度、湿度等因素可能会对微生物的生长产生影响，从而影响菌落总数的测定结果。
在测定菌落总数时，需要进行一系列的质量控制措施，如需要使用标准菌株进行培养，以评估菌落计数法的准确性和可重复性。
菌落总数测定的不确定度可以通过重复测定同一样品来评估。
在进行菌落计数时，可以选取多个琼脂平板进行测定，然后计算平均值和标准偏差。
标准偏差可以作为不确定度的一个估计值，表示测定值的离散程度，其数值越小说明数据的分散性越小，表示测定结果的可靠性越高。
菌落总数测量不确定度报告
菌落总数测量结果的不确定度评定报告一、概述按照国家标准GB 4789.2-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定》规定的检测程序进行。
检测过程为：1）以无菌操作将检样25g（mL）放于含有225mL灭菌生理盐水的玻璃瓶内，经充分振摇制得1：10的均匀稀释液。
2）用1mL灭菌吸管吸取1：10稀释液1mL，沿管壁徐徐注入含有9mL灭菌生理盐水或其它稀释液的试管内（注意吸管尖端不要触及管内稀释液），振摇试管，混合均匀，做出1：100的稀释液。
3）另取1mL灭菌吸管，按上条操作方法，做10倍递增稀释，如此每递增稀释一次，即换用1支1mL灭菌吸管。
4）根据食品卫生标准要求或对标本污染情况的估计，选择2个～3个适宜稀释度，分别在做10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度的吸管移1mL稀释液于灭菌培养皿内，每个稀释度做两个培养皿。
5）稀释液移入培养皿后，应及时将凉至46℃营养琼脂培养基（可放置于46℃±1℃水浴保温）注入培养皿约15mL，并转动培养皿使混合均匀。
同时将营养琼脂培养基倾入加有1mL稀释液灭菌培养皿内作空白对照。
6）待琼脂凝固后，翻转平板，置36℃±1℃温箱内培养48h±2h。
7）作平板菌落计数时，可用肉眼观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏。
在记下各平板的菌落数后，求出同稀释度的各平板平均菌落总数。
8）选取菌落数在30～300之间的平板作为菌落总数测定标准。
一个稀释度使用两个平板，应采用两个平板平均数，其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数，若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘2以代表全皿菌落数。
平板内如有链状菌落生长时（菌落之间无明显界线），若仅有一条链，可视为一个菌落；如果有不同来源的几条链，则应将每条链作为一个菌落计。
同一样品重复测量10次,每次做两个平皿，取其平均值作为测量结果。
食品微生物学菌落总数检验中不确定度的评定
52·FOOD INDUSTRY调查 研究 田霞 重庆市黔江食品药品检验所食品微生物学菌落总数检验中不确定度的评定将采用无菌操作进行称量２５ｇ的样本，取含量为２２５ｍｌ的灭菌生理盐水三角瓶，将样本放入瓶内，随即进行振摇，当振摇充分后，将其制作成为均匀的稀释液，为１∶１０。
（２）将样品进行稀释在稀释的过程中，将采用１ｍｌ的灭菌吸管吸取１：１０的稀释液１ｍｌ，沿着管壁注入含量为９ｍｌ的灭菌生理盐水试管内，随即进行振摇，当振摇充分后，将其制作成１：１００均匀的稀释液；取另外一根１ｍｌ的灭菌吸管，按照同样的操作顺序，以十倍的递增顺序进行稀释液的制作，在制作稀释液中，每一次稀释，将换一根灭菌吸管。
（３）稀释倍数的选择依照样品卫生的情况在１∶１０００以及１∶１００的稀释程度中选取，在做十倍递增的稀释同时，采取灭菌的平皿将经灭菌吸管吸取的稀释液进行注入，其稀释液的含量为１ｍｌ，每个稀释将做二个平皿，取４５℃的平板计数琼脂培养基注入到含有稀释液平皿当中，其平板计数琼脂培养基含量为１５ｍｌ，随即对其进行转动，将其混匀，于此同时进行空白对照的制作，琼脂凝固之后，将其放在孵箱内进行培养，其孵箱温度为３６℃±１℃，培养时间为４８ｈ±２ｈ。
（４）对菌落进行技术计数将每个平皿中菌落数进行计数，其计数方式为采用菌落计数器进行记录，菌落数则在３０～３００ＣＦＵ之间稀释度中进行选择，乘以稀释倍数为报告菌落的总数。
评定奶粉菌落总数测定中的不确定度在本次实验中，由实验人员取２０个奶粉的小样，在时间间隔较短的时间内，依照ＧＢ／４７８９．２－２０１０的方法进行重复的测试，将２０个样品的总菌落数测试的结果进行得出，在本次实验的过程，在取样时依照ＧＢ／４７８９．２－２０１０的规定中严格的执行，可确保样品时稳定、均匀的。
以下为不确定度的因素来源分析，如下。
（１）在称量中，使用天平进行检定合格，基本没有影响；（２）样品的均匀性，对样本稀释后，为稀释液，大致均匀，基本没有影响；（３）在样品培养时的温度，经过校对以后，其波幅是处于正常的范围，没有影响；（４）其样品培养的时间，均在正常的范围，没有影响；（５）人员的不同，在这的：食品微生物学菌落总数检验中不确定度的评定。
食品中菌落总数测定不确定度的评定的研究报告
食品中菌落总数测定不确定度的评定的研究报告食品中菌落总数测定不确定度的评定的研究报告摘要：随着食品安全的日益受到重视，对于食品中微生物的检测也变得越来越重要。
菌落总数是评价食品卫生鲜度和微生物质量的重要标准之一。
本文以食品中菌落总数的检测为研究对象，通过实验分析和计算，评估了测定菌落总数的不确定度。
关键词：食品安全、微生物检测、菌落总数、不确定度、实验分析一、背景食品中的微生物污染对人们的健康造成了严重的威胁，因此对于食品中微生物的检测变得越来越重要。
而菌落总数是评价食品卫生鲜度和微生物质量的重要标准之一。
测定菌落总数的精度直接影响到食品的质量评价和微生物污染风险的评估，因此评估测定菌落总数的不确定度非常重要。
二、实验目的本实验的主要目的是通过实验分析和计算，评估测定菌落总数的不确定度。
三、实验材料和仪器材料：牛奶、基因长育菌平板、搅拌器、无菌吸管、无菌滤纸。
仪器：无菌操作台、培养箱、显微镜、平行移液器。
四、实验方法1.制备样品取一份新鲜牛奶，搅拌均匀；取1ml牛奶，加入99ml蒸馏水，进行10倍稀释；将1ml的稀释液取出放入96孔板中，并在每一列的第一列做出1:10的稀释液。
2.菌落计数①取两个26号的无菌吸管，在火焰中灭菌后，取过量的1:10稀释液，将一支吸管从96孔格板中垂直地放入样品中，吸取适量的细菌。
②将吸管平均地横过去，对样品进行均匀充实，避免产生气泡和空白等。
③将吸管放到第一列中，将其沿对角线轻轻地划分成两半，分别用一支吸管为对应涂抹在两个均匀浓度的分光平板上。
④在室温下，将平板颠倒放置，约15分钟之后，在 36±1℃下孵育48h。
3.菌落总数统计采用不止一个培养皿生长的部分，并选出两个数量最接近并且范围尽可能为50～250的标准板的菌落总数，计算样品中的菌落总数。
五、实验结果在实验过程中，样品经过去除浮游菌、试管振荡和菌落的计数及统计后，得到菌落总数统计结果。
在样品采用上述方法测定得出的菌落总数为12，因此在该结果的基础上，通过不确定度的计算，对结果进行评估。
菌落总数测定的不确定度评定
菌落总数测定的不确定度评定摘要目的:是为了评定食品中菌落总数测定的不确定度,确定细菌菌落数置信区间。
方法根据GB4789.2-2016对待检食品样品中菌落总数进行计算,计算检验结果的不确定度与样品菌落总数置信空间。
结果测定:结果显示1号样品菌落置信区间为4500～6900CFU/g,2号为3300～5100CFU/g,3号为3700～5700CFU/g,4号为4000～6100CFU/g,5号为3200～4900CFU/g。
所取样品各种不确定度为1.1547 、0.0049、0.0046、0.0089。
结论:检验样本中菌落总数测定的不确定度的评定是一种比较科学的方法,在同类样品菌落总数的检验中进行不确定度评定尤为适合。
关健词:菌落总数;不确定度;评定前言菌落总数即菌落形成单位数。
其检测结果通常以单位重量的菌落数(CFU/g)表示。
测量不确定度是评定测量水平的指标,是判定测量结果的依据,因此,正确评定测量不确定度对客观分析测量结果具有重要意义。
食品中菌落总数含量是衡量食品质量好坏的重要指标之一,因此对其进行测量不确定度的评定也是很重要的。
本文依据GB4789.2-2016《食品微生物学检验菌落总数测定》和JJF1059-1999《测定不确定度评定与表示》[1]来建立该不确定度评定方法,还探讨了其各种不确定度的分量来源。
1材料与方法1.1材料取5份样品，在实验室条件下制备食品样品的均匀液样,采用平板计数琼脂进行培养。
1.2检测方法每份样品分别25g+225mL高温灭菌过的生理盐水中，制成0.1稀释液，吸取1mL该稀释液,然后加入9mL高温灭菌过的生理盐水中,混匀制成0.01的稀释样,以此类推进行10倍递增的稀释。
分别吸取1mL上述制备好的稀释液于无菌培养皿中,倾入15mL降温至46℃的平板计数（PCA）琼脂,混匀，同时制备空白对照样。
待培养基凝固后将培养皿翻转放入36℃的恒温培养箱中培养48小时。
1.3菌落计算与不确定度评定选择稀释度为30～300的平皿菌落，按照GB4789.2-2016操作要求记录下每个平皿的菌落数[2]。
牛乳菌落总数测定的不确定度评定
牛乳菌落总数测定的不确定度评定井丽娟，王云霞，李翠枝，吕志勇，刘丽君*（内蒙古伊利实业集团股份有限公司质量管理部，内蒙古 呼和浩特 010110）摘 要：对牛乳样品菌落总数的测定结果进行不确定度评定，为检测过程的质量控制提供科学依据。
依据GB 4789.2—2016《食品安全国家标准 食品微生物学检验 菌落总数测定》检测牛乳样品的菌落总数，按照 JJF 1059.1—2012《测量不确定度评定与表示》分析该检测结果不确定度的来源并建立数学模型，然后分别对引入的不确定度分量进行评定，最终合成菌落总数测定的不确定度。
结果表明：牛乳样品菌落总数测定结果的扩展不确定度为0.043 4，结果对数值取值区间为[3.924，4.010]，该样品的菌落总数为8 395～10 233 CFU /mL 。
本方法能够有效评定牛乳菌落总数的不确定度。
关键词：牛乳；菌落总数；不确定度；微生物；食品安全Uncertainty Evaluation for the Determination of Aerobic Plate Count in MilkJING Lijuan, WANG Yunxia, LI Cuizhi, LÜ Zhiyong, LIU Lijun *(Quality Management Department, Inner Mongolia Yili Industrial Group Co. Ltd., Hohhot010110, China)Abstract: In order to provide a scientific rationale for the quality control in the determination of aerobic plate count (APC) in milk, the measurement uncertainty was estimated. According to the national standard of China (GB 4789.2—2016), APC in samples was detected. The sources of uncertainty were analyzed according to Evaluation and Expression of Uncertainty in Measurement (JJF 1059.1—2012) and a mathematical model for uncertainty evaluation was established. The introduced uncertainty components were evaluated and finally the total combined uncertainty was established by combination of individual components. The results showed that the extended uncertainty for APC quantification in milk samples was 0.043 4. The logarithm of APC was [3.924, 4.010], and from this, APC was calculated to be 8 395–10 233 CFU /mL. In conclusion, this procedure can effectively assess the measurement uncertainty in the determination of APC in milk.Keywords: milk; aerobic plate count; uncertainty; microbiology; food safety DOI:10.15922/ki.jdst.2021.02.005中图分类号：TS252.7 文献标志码：A 文章编号：1671-5187（2021）02-0021-05引文格式：井丽娟, 王云霞, 李翠枝, 等. 牛乳菌落总数测定的不确定度评定[J]. 乳业科学与技术, 2021, 44(2): 21-25. DOI:10.15922/ki.jdst.2021.02.005. JING Lijuan, WANG Yunxia, LI Cuizhi, et al. Uncertainty evaluation for the determination of aerobic plate count in milk[J]. Journal of Dairy Science and Technology, 2021, 44(2): 21-25. DOI:10.15922/ki.jdst.2021.02.005. 收稿日期：2020-11-29基金项目：“十三五”国家重点研发计划重点专项（2017YFE0110800）第一作者简介：井丽娟（1986—）（ORCID: 0000-0001-9659-5309），女，工程师，硕士，研究方向为生物化学与分子生物学。
米粉中菌落总数的不确定度评估报告
关于编号为2011-QW504米粉中菌落总数不确定度评估报告1 目的评估编号为2011-QW504米粉中菌落总数的不确定度。
2 依据GB 4789.2-2010 食品微生物学检验菌落总数的测定3 适用范围食品中菌落总数的测定4 方法概要4.1样品制备在无菌环境下称取25g样品，加入225mL生理盐水（0.85%）无菌稀释液，8000r/min均质1~2min，制成1：10样品匀液。
4.2 样品稀释用无菌移液管吸取1mL上述稀释液于事先加有9mL无菌生理盐水的无菌试管中，摇匀，制成1：100的样品匀液。
按同样的方法制成1：1000的样品匀液，每个稀释度各取1mL稀释液加入无菌空培养皿中，并作两个平行。
4.3 培养及时将15~20 mL46℃琼脂倒入培养皿中，旋转摇匀。
琼脂凝固后放于36±1℃培养箱中培养48±2h。
4.4 菌落计数手工计数培养所得菌落数或菌落计数器记录菌落数量。
5 数学模型Y=x6 不确定度识别及计算6.1 不确定度来源分析按照上述数学模型及方法概要，其不确定度主要来源有以下3方面：①稀释过程引入的标准不确定度u1；②加样体积的标准不确定度u2；③测量结果重复性的标准不确定度u3。
6.2 稀释过程引入的标准不确定度u11 mL移液管（A级）最大允许误差MPE=±0.008 mL，按矩形分布，k=31/2，其标准不确定度u1v=0.008/31/2=0.0046mL；无菌室温度控制在20±5℃，查相关手册得知水的体积膨胀系数为2.1×10-4/℃，按矩形分布，k＝31/2，则温度对移液管的不确定度分量u1t＝1×5×2.1×10－4/31/2＝0.00061mL。
一次稀释过程引入的不确定度u1＝（u1v2＋u1t2）1/2＝0.0046mL，本实验最多有3次稀释过程，则u1rel＝31/2×u 1/1=0.0080。
黄酒中菌落总数测定不确定度评定
分析检测黄酒中菌落总数测定不确定度评定相露婷，傅华靖，王佳丽，刘 镇（绍兴市食品药品检验研究院，浙江绍兴 312000）摘 要：目的：评估黄酒中菌落总数检测结果的不确定度。
方法：按照《食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定》（GB 4789.2—2016）方法，测定11份同一批次的黄酒样品中菌落总数，依据《测量不确定度评定与表示》（JJF 1059.1—2012）评定检测结果的不确定度。
结果：依据所采取的方法，在置信概率为95%时，11份黄酒样品的菌落总数对数值因重复测量产生的扩展不确定度为0.130，置信区间为1.269～1.529。
结论：本研究建立的方法同样适合类似检测条件下菌落总数不确定的评定。
关键词：黄酒；菌落总数；不确定度Evaluation of Uncertainty in the Determination of AerobicPlate Count in HuangjiuXIANG Luting, FU Huajing, WANG Jiali, LIU Zhen(Shaoxing Institute for Food and Drug Control, Shaoxing 312000, China) Abstract: Objective: To evaluate the uncertainty of aerobic plate count in Huangjiu. Method: According to the GB 4789.2—2016, aerobic plate count in 11 samples of Huangjiu in the same batch was detected. The uncertainty of detection results was evaluated according to JJF 1059.1—2012. Result: When the confidence probability was 95%, the expanded uncertainty of the logarithm of the aerobic plate count in 11 Huangjiu samples was 0.130, and the confidence interval was 1.269～1.529. Conclusion: The method in this study is also suitable for the evaluation of the uncertainty of aerobic plate count under similar detection conditions.Keyword: Huangjiu; aerobic plate count; uncertainty菌落总数是食品检验较为常见的检测项目。
菌落总数不确定度
菌落总数不确定度菌落总数不确定度评定食品的质量直接关系到消费者的身体健康,食品中微生物的测量是食品质量优劣的重要卫生指标之一，因此对食品中菌落总数进行测量不确定度的评定非常有必要。
目前《GB 4789.2-2010 食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定》是食品中菌落总数测定的标准方法。
我们对食品样品营养包进行卫生微生物菌落总数检测后进行不确定度的评定。
1.材料与方法 1.1材料1.1.1 样品：婴幼儿辅食营养包。
1.1.2 培养基：平板计数琼脂培养基。
1．1.3 主要仪器设备：立式高压蒸汽灭菌锅、鼓风电热恒温干燥器、电热恒温培养箱、超净工作台、恒温水浴锅。
1.2.检验方法1.2.1依据《 GB 4789.2-2010 食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定》进行测定。
1.2.2检验过程：25g 样品+225mL 稀释液，均质→ 10倍系列稀释→选择2-3个适宜的样品匀液，各取1mL 分别加入无菌培养皿内→ 每皿加入15-20mL 平板计数琼脂培养基，混匀→ 培养→ 计数各平板菌落数→ 计算菌落总数1.2.3 建立数学模型：设菌落总数为A ，试验结果为X ，则A=Xcfu/g ，最佳∑===nii x n X A 111.2.4 不确定度来源及分析，见图1：不确定度的因果关系图2.结果与分析2.1试样在称重时天平带来的不确定度本实验中称取样品25.0g ，0.1g 天平的最大允许误差为±0.1g ，可认为服从均匀分布，则其导致的不确定度：u rel （m ）=0.1／﹙25×3﹚=0.002309 2.2 稀释和取样过程中导致的不确定度本实验中计数的稀释度为2个梯度，因此不确定度主要是由250mL 量筒、10mL 和1mL 刻度吸管的容量允许误差，容器和溶液温度与校准时温度不同引起的。
根据JJG196-1990《常用玻璃量器》检定规程规定，20℃时250mL 量筒的允许误差为±2.0mL ，10mL 刻度吸管的允许误差为±0.05mL ，1mL 刻度吸管的允许误差为±0.008mL ，取均匀分布，由容量允许差引入测定温度培养时间培养温度重复性样品均匀性取样重复性V 样品修约V 稀释培养时间允差时间培养温度允差培养条件样品保存条件温度ΔV 稀释稀释体积温度取样体积取样ΔV 样品温度菌落总数的不确定度：①由250mL量筒引入的不确定度：u rel（V1）=2／（225×3）=0.005132②由10mL刻度吸管引入的不确定度：u rel（V2）=0.05／（9×3）=0.003208③由1mL刻度吸管引入的不确定度：u rel（V3）=0.008／（1×3）=0.0046192.3 样品的均匀性引入的不确定度本实验将样品充分混合后随机取样，可认为样品是均匀的，具代表性，由此所致的不确定度可忽略不计。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
废水菌落总数测定结果不确定度评估
1. 实验前准备
1.1 设备：恒温培养箱、无菌吸管10ml（具0.1ml刻度）、微量移液器、无菌锥形瓶、无菌培养皿
1.2 培养基及试剂：平板计数琼脂、无菌生理盐水
1.3 因浓缩苹果清汁中一般菌落不容易生长，故用废水作为样品检测。
2. 检测依据及步骤
2.1依据：GB4789.2—2010《食品卫生微生物学检验菌落总数测定》
2.2步骤：定量吸取废水，制备成15份均匀的检测样品，每份样品做两个平行样。
↓
↓
↓
↓
3. 不确定度来源分析
检测步骤主要包括样品的吸取、稀释（移液器）、培养、计数、及结果修约等，由于结果发散性较大的特点，在本次实验中，我们只对样品吸取、重复测定结果的不确定度进行量化分析。
3.1 样品吸取过程中使用刻度吸管体积的相对标准不确定度u rel （V ） 3.1.1 吸管体积校准引入的标准不确定度u （V ）
在吸取样品的过程中均使用经检定合格的10ml 刻度吸管，其允许误差为±0.05ml ，故10ml 吸管体积校准引起的不确定度按矩形分布（k=3）为： u 1（V ）=
3
05.0=0.029ml
则样品吸取过程中使用刻度吸管体积的相对标准不确定度： u rel （V ）=
()V V u =10
029
.0=0.0029ml 3.2 重复测定结果的标准不确定度
菌落总数测定结果不确定度评定
3.2.1 对测定结果X 1、X 2分别取对数，得到lg X 1和lg X 2
3.2.2 每一个样品的残差(在重复性条件下得出n 个观测结果X k 与n 次独立观测结果的算术平均值X 的差)平方和：
()
2
2
1
lg lg ∑=-i i
X X
式中：i X lg —每一个样品测定结果的对数值；
X lg —每一个样品测定结果对数的平均值。
3.2.3 根据《JJF —1999测量不确定度评定》中
4.3,计算15个样品的合并标准偏差： ()=
X S lg ()()
()X u X
X n m m j n
i i lg lg lg 11
11
2
=--∑∑==
式中：m —测定样品总个数，本次实验共15个；
n —对每个样品的独立测定次数，本次实验每个样品平行测定两次。
将残差平方和、m 、n 的值代入上式得15个样品的合并标准偏差： ()X u lg =()=
X S lg ()()
∑∑==--m j n
i i X
X n m 11
2
lg lg 11
=0.04461
每个样品测定两次，则两次重复测定平均值的标准不确定度为：
()()n
X u X u lg lg =
式中：n —重复测定次数
(
)
2
04461
.0lg =
X u =0.03154
4. 合成标准不确定度 U （X ）=()()
=+=+222
2
03154.00029.0lg X
u V u rel 0.0317
5. 扩展不确定度U
根据置信区间p=95％，自由度v=14，由t 分布表得k ≈2.13，则扩展不确定度为： U=2.13×0.0317=0.0675
以区间形式表示15组样品所有结果的lg 平均值为：lgX=3.1242，所以该样品菌落总数的lg 值为3.1242±0.0675，即3.0567～3.1917之间，取反对数得样品稀释液中菌落总数分布于1100～1500之间。
5. 结果报告
该样品菌落总数测试结果可估算为（1100～1500）cfu/ml。