氰化高铁法

原理:血红蛋白在高铁氰化钾和氰化钾的作用下,生成极为稳定的氰化高铁血红蛋白(红色) ,其颜色深浅与血红蛋白的含量成正比。氰化高铁血红蛋白在540 nm 波长下,毫克分子消光系数为44 ,据此,用分光光度法测其吸光度,运用消光系数作血红蛋白的定量测定,其化学反应式如下:

血红蛋白——铁氰化钾——高铁血红蛋白——氰化钾——氰化高铁血红蛋白(红色)

试剂: 碳酸氢钠(NaHCO3 ) 140 mg ,铁氰化钾[ K3 Fe(CN) 6 ]200 mg ,氰化钾( KCN) 50 mg ,均为分析纯。

用水溶解并稀释到1 000 mg ,贮存于棕色试剂瓶内,在暗处或冰箱(4 ℃) 保存,至少可稳定数月到1 年。

操作步骤: ①取试剂2.5 mL 于5 mL 带盖试管中加入10μL 血液,混匀后,放置15 min。②选用0.5 cm 光径比色杯,于540 mm 波长下,以试剂调零点,将所得样品管之吸光度乘以73.6 ,即为血红蛋白之浓度。计算公式如下:

Ct = (D540HiCN ×251/ 44 ×0.5) ×64 458/ 10 000 = 73.6 ×吸光度。

Ct 为待测的血红蛋白浓度。D540HiCN为氰化高铁血红蛋白在540 mm 波长下测出的吸光度。251 为测定时血液的稀释倍数(10μL 血加入215 mL 试剂中) 。44 为氰化高铁血红蛋白的毫克分子消光系数。0.5 为比色杯的光径。64 458 为血红蛋白的相对分子质量。