微生物培养、筛选与保存
微生物菌种的选育和保藏--诱变育种
四、诱变育种
2 诱变育种基本过程 ➢诱变处理： ➢诱变剂的处理方式： ✔单因子处理：采用单一诱变剂处理出发菌株； ✔复合因子处理：两种以上诱变因子共同诱发菌体突变，包括①两种或多种 诱变剂先后使用；②同一种诱变剂的重复使用；③两种或多种诱变剂的同时使用。 ➢诱变剂的处理方法： ✔直接处理方法：将菌悬液用物理、化学因子处理，然后涂平板分离突变株； ✔生长过程处理法：适用于诱变作用强而杀菌率较低的诱变剂，或在分裂过 程中只对DNA起作用的诱变剂，如NTG、LiCl、 秋水仙碱等；方法：可将诱变剂 加入培养基后涂平板；或先把培养基制成平板，将一定浓度的诱变剂和菌体加入平 板； 或摇瓶振荡培养处理；
四、诱变育种
2 诱变育种基本过程 ➢ 制备单孢子(或单细胞)悬液： ➢ 目的：获得单孢子(或单细胞)均匀的悬液；
➢ 原因: 分散状态的细胞可以均匀地接触诱变剂，又可避免长出不纯菌落；
➢ 方法:✔菌龄:对数期细胞、刚成熟的孢子母菌细胞悬浮液的浓度为106个/mL、
四、诱变育种
2 诱变育种基本过程 ➢ 突变株的分离与筛选： ➢ 筛选方案:
➢ 筛选方法： ✔初筛：a.随机筛选：也称摇瓶筛选；随机挑选的平板菌落进行摇瓶筛选； b.平板菌落预筛：在培养皿上诱变后从试样检出突变体的一种
琼脂平板筛选法,有纸片培养显色法、透明圈法、琼脂块培养法等; ✔复筛:对突变株的生产性能作比较精确的定量测定工作，代表方法：琼脂
放线 菌或细菌的浓度为108个/ mL左右;
✔菌悬液配制方法:离心洗涤前培养物，用冷生理盐水或缓冲液制备菌悬 液，放在盛有玻璃珠的三角瓶内振荡10min,令其分散，用无菌脱脂棉或滤纸过滤。 通过菌体计数，调整菌悬液的浓度供诱变处理。
四、诱变育种
2 诱变育种基本过程 ➢ 诱变处理： ➢ 诱变剂种类的选择：物理诱变剂和化学诱变剂 ✔物理诱变剂：紫外线、χ射线、γ射线、等离子、快中子、ɑ射线、β射线、 超声波等； ✔化学诱变剂: 碱基类似物、烷化剂、羟胺、吖定类化合物等； ➢ 最适诱变剂量选择： ✔诱变剂剂量表示方式：a.UV的剂量指强度与作用时间的乘积； b.化学诱变剂剂量：诱变剂的浓度和作用 时间的乘 积来表示； c.在育种实践中，常以杀菌率来作诱变剂 的相对剂量； ✔最适诱变剂量确定：a.依据：最适剂量应该使所希望得到的突变株在存活 群体中占有最大的比例； b.方法：通过比较剂量--存活率曲线和剂量-
第二章 菌种的筛选、选育和保藏
菌种的筛选、选育和保藏
造成变异的原因是有： 长期保藏，频繁的传代，菌体在代谢过程中产生具有诱变 作用的物质，诱发DNA结构的改变。DNA中存在的增变基因 也可能诱发自然突变等。 由于引起变异的因素一般不很剧烈，而且变异了的基因要 通过繁殖时DNA复制传给子代，使突变基因在数量上增加 到占优势时，才能使群体表现出性状的变异来，可以看出 这是一个缓慢渐变的过程。
发酵工业菌种的分离、筛选 二、菌种获得的途径
1、从菌种保存机构直接购买 2、从自然界中筛选 3、在生产过程中发酵分离筛选的步骤
定方案--样品采集--样品预处理--目的菌富集培养-菌种分离--菌种初筛--菌种复筛--菌种发酵性能鉴定
菌种的筛选、选育和保藏
发酵工业菌种的分离、筛选 定方案
菌种的筛选、选育和保藏
菌种的选育 （一）、诱变剂和诱变处理（见书P38） 物理诱变剂：射线如紫外线、X—射线、γ—射线，
快中子； 物理因素中目前使用得最方便而且十分有效的是紫外线。 许多高产菌株的选育都用过紫外线，对于一般实验室、 中小型工厂都适用，也很安全。 其他的几种射线都是电离性质的，有一定的穿透力，一 般都由专业人员在专门的设备中使用，否则有一定危险 性。
目的:经过富集的微生物虽然在数量上占优势,但是得到的 培养物还是多种微生物的混合物,所以需要进行菌种的分 离。 常用的分离方法有： 1、平板划线分离法 2、稀释分离法 3、简单平板分离法 4、涂布分离法 5、毛细管分离法 6、小滴分离法
微生物的分离培养和菌种保藏
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菌种保藏技术的改进
现有的菌种保藏技术存在一些局限性， 如长期保藏过程中菌种活力的下降等， 如何改进这些技术以提高菌种的保藏 效果是另一个挑战。
培养基和培养条件的优化
不同微生物对培养基和生长条件的需 求各异，如何优化这些条件以适应各 种微生物的生长是一个重要问题。
伦理和法规问题
在微生物分离培养和菌种保藏过程中， 可能涉及到伦理和法规问题，如人类 微生物、病原体和转基因微生物的管 理等。
未来的发展方向
开发新的培养方法和技术
随着技术的发展，未来将开发出更多新的培养方法和技术，以满足各 种微生物的培养需求。
提高菌种保藏效果
未来将致力于改进菌种保藏技术，提高菌种保藏效果，延长菌种寿命。
加强微生物多样性保护
未来将更加重视微生物多样性保护，采取有效措施保护珍贵的微生物 资源。
加强伦理和法规建设
选择性分离法
利用培养基或试剂的选择性抑 制某些微生物的生长，从而分 离出所需的特定微生物。
温度、酸碱度分离法
通过调节培养基的温度、酸碱 度等条件，使适应特定条件的
微生物得到分离。
微生物分离的步骤
1 2
采集样品
根据需要选择合适的微生物样品，如土壤、水、 空气等。
样品处理
将采集的样品进行适当的处理，如稀释、研磨等。
在医学和药学中的应用
抗生素耐药性研究
分离培养耐药性微生物，研究其耐药机制，有助于开发新的抗生 素药物。
疫苗制备
通过分离培养病原微生物，制备疫苗，预防和控制传染病。
药物筛选
培育技术中微生物菌种筛选的方法与技巧
培育技术中微生物菌种筛选的方法与技巧微生物菌种在许多领域具有广泛的应用，如农业、环境、医药等。
为了获得具有所需特性的微生物菌种，科研人员需要进行有效的筛选和培育。
下面将介绍一些常用的微生物菌种筛选的方法与技巧。
一、菌种来源的选择菌种来源的选择是微生物筛选的第一步。
科研人员可以选择从自然环境中采集的样品，如土壤、水体等，并进行初步的分离和纯化。
此外，还可以从已有的菌种库中选择具有潜在特性的菌种。
菌种库是一个宝贵的资源，可以提供各种类型的微生物菌种，有助于筛选工作的展开。
二、菌株的鉴定与鉴定方法在菌种筛选的过程中，菌株的鉴定是必不可少的。
菌株的鉴定可以通过形态特征观察、生理生化特性测定和分子生物学方法进行。
形态特征观察包括菌落形态的观察和细胞形态的观察。
生理生化特性测定可以通过菌株对不同的碳源、氮源和温度等条件的利用能力来进行。
分子生物学方法常用的有16S rDNA序列分析和PCR技术等。
三、菌株的筛选技术与技巧1. 直接筛选法直接筛选法是针对目标特性直接进行的方法。
比如，如果我们需要筛选具有产酶能力的菌株，可以通过培养基添加对应底物，观察菌株的酶活性来筛选合适的菌株。
此外，还可以利用抗生素敏感性、产生特定颜色或气味等特性进行直接筛选。
2. 间接筛选法间接筛选法是通过菌株与其他生物或物质之间的相互作用来筛选菌株。
其中一种常用的方法是菌株之间的拮抗作用。
比如，我们可以将目标病原菌与已知拥有抑制病原菌能力的菌株进行共培养，观察是否存在抑制圈。
另外，还可以利用菌株对有毒物质的耐受性进行筛选。
3. 特定培养条件的筛选不同的微生物在不同的培养条件下表现出不同的特性。
通过调节培养条件，可以筛选得到具有特定特性的菌株。
例如，根据菌株的嗜温、嗜酸碱、盐耐受能力等特点，可以调整培养基的温度、pH值和含盐量等条件，以筛选得到适应特殊环境的菌株。
四、菌种筛选的评价与鉴定在菌种筛选的过程中，鉴定和评价菌株的有效性和稳定性是必要的。
微生物菌群的分离纯化、培养、鉴定及保藏
微生物菌群的分离纯化、培养、鉴定及保藏微生物纯培育分别技术菌种的分别纯化平板涂布法由于将微生物悬液先加到较烫的培育基中再倒平板易造成某些热敏感菌的死亡，且采纳稀释倒平板法也会使一些严格好氧菌因被固定在琼脂中间缺乏氧气而影响其生长，因此在微生物学讨论中常用的纯种分别方法是涂布平板法。
用途：一般多用于从菌种的纯化；优点：可以观看菌落特征，对混合菌进行分别；缺点：不能计数；平板划线法最简洁的分别微生物的方法是平板划线法，其原理是将微生物样品在固体培育基表面多次作"由点到线'稀释而达到分别目的的。
划线的方法许多，常见的比较简单消失单个菌落的划线方法有斜线法、曲线法、方格法、放射法、四格法等。
用途：一般多用于筛选菌株。
一般用于平板培育基的回收率计数。
优点：可以计数，可以观看菌落特征。
缺点：汲取量较少，较麻烦，平板不干燥效果不好，简单扩散。
假如菌液密度大的话，长不出单菌落。
大肠菌种的培育鉴定菌种保藏试验材料和器材1.乳糖胆盐液体培育基：由蛋白胨、乳糖、溴甲酚紫和胆盐组成，属液态、鉴别、增值、半合成培育液，试验中用于废水中菌群的培育；2.伊红美蓝琼脂：含蛋白胨、乳糖、磷酸氢二钾、伊红-美蓝和琼脂。
琼脂平板用于分别纯化肠道致病菌，特殊是大肠菌群和粪大肠菌群；3.养分琼脂培育基：含牛肉膏、蛋白胨、氯化钠和琼脂。
用于分别纯化后的菌体培育。
试验方法和步骤1.试验支配试验预备；采样、恒温培育富集及初筛；观看产气状况及稀释、倒培育基、划线、涂布、倒置培育；鉴定、接种；菌种保藏。
2.详细操作步骤试验预备①配置培育基(伊红美兰琼脂培育基：7.4g+200mL无菌水、调pH7.2～7.4，养分琼脂培育基：6.6g+200mL无菌水、调pH7.40.2,0.85%生理盐水、乳糖胆盐液体培育基2.6g+100mL无菌水，调pH7.40.2),，装瓶，高压蒸汽灭菌。
②包扎好培育皿，移液管，试管，进行干热灭菌。
③将配好的乳糖胆盐液体培育基分装入三个试管中，每个大约十毫升，包扎，灭菌。
微生物培养的筛选原理是
微生物培养的筛选原理是微生物培养的筛选原理是通过一系列的选择性、指示性和增殖性培养基和条件，选择和鉴定特定的微生物种类或特性。
微生物培养的筛选过程是基于以下几个基本原理：1.选择性原理，2.指示性原理，3.增殖性原理。
首先是选择性原理。
选择性培养基是含有特定抑制剂以限制或阻止特定微生物生长的培养基。
这些抑制剂可以抑制一些微生物的生长，同时对目标微生物具有较小的或无抑制作用。
选择性培养基可以分离和筛选出特定微生物。
例如，MacConkey培养基中含有碱性乳元素和胆盐，能够抑制革兰阳性细菌的生长，而对大肠杆菌等革兰阴性细菌则具有较小的抑制作用。
所以MacConkey培养基被广泛用于分离和筛选革兰阴性肠道细菌。
其次是指示性原理。
指示性培养基通过某种物质的变化或表现来指示特定微生物的存在。
常用的指示性培养基有MR-VP培养基和青霉素-钾盐葡萄糖琼脂培养基。
MR-VP培养基中，利用MR试剂和VP试剂对特定代谢产物进行指示性反应，能区分大肠杆菌和亚克力杆菌；青霉素-钾盐葡萄糖琼脂培养基则通过对抗生素的抑菌作用来筛选青霉素产生菌株。
最后是增殖性原理。
增殖性培养基提供了适宜的环境条件，促进目标微生物的增殖。
增殖性的培养基可以包括特定的营养成分、温度、pH值和气氛等，以满足微生物的生长和繁殖需求。
例如，营养琼脂培养基提供了特定的氮源、碳源和无机盐等营养物质，为微生物的增殖提供了条件。
在实际微生物培养中，常常需要将选择性、指示性和增殖性原理结合使用。
例如，通过将MacConkey培养基与MR-VP培养基的特性结合，可以筛选出同时为革兰阴性菌和大肠杆菌的菌株，并在此基础上鉴定它们是否具有代谢产物MR和VP的能力。
此外，还可以利用分子生物学的技术来辅助微生物筛选。
例如，通过引入含有特定基因序列的报告基因，如荧光蛋白基因，可以利用靛酮酸琼脂来筛选出表达该基因的微生物。
综上所述，微生物培养的筛选原理是通过选择性、指示性和增殖性培养基和条件，选择和鉴定特定的微生物种类或特性。
生产中常用菌种的分离、选育和保藏
生产中常用菌种的分离、选育和保藏在生产中，分离、选育和保藏常用菌种是非常重要的步骤，这些菌种可以用于各种不同的应用，如发酵过程中的生物转化、抗生素的生产以及食品工业中的乳酸发酵等。
以下是常用菌种的分离、选育和保藏的基本步骤：1. 分离：分离菌种是指从自然环境中分离出纯种菌株的过程。
首先，需要选择合适的样品来源，如土壤、水样或食品样品等。
然后，将样品进行稀释、接种到固体培养基上，培养出菌落。
最后，从菌落中挑选单一菌株，并进行纯化培养，得到纯种菌株。
2. 选育：选育是指对已有菌种进行进一步培养和筛选，选出优良品系。
在选育过程中，可以根据所需特性进行筛选，如产量高、抗性强或代谢产物优良等。
通过连续传代培养和筛选，可以逐步培育出符合要求的优良品系。
3. 保藏：保藏是为了长期储存和保存已经分离和选育得到的菌种。
常用的保藏方法包括冷冻保存和冷冻干燥等。
冷冻保存是将菌种保存在低温 (-80℃或液氮温度下)，可以长期保存并保持菌株的生物学性状。
而冷冻干燥则是在低温下将菌种先冷冻，然后通过真空蒸发使其脱水，最后用密封容器保存。
冷冻干燥具有长期保存时间和较小的储存体积的优点。
在菌种的分离、选育和保藏过程中，需要注意的是严格遵守无菌操作规范，以防止杂菌污染。
另外，应该建立相应的菌种信息管理系统，记录并标注每个菌株的来源、特性以及保藏条件等重要信息，以便日后使用和查询。
菌种的分离、选育和保藏在生产中扮演着极其重要的角色。
下面将进一步探讨这些过程，并介绍一些常用的菌种及其应用领域。
在分离菌种的过程中，重要的是选择适当的样品来源。
不同的环境中存在着各种微生物，如土壤、水体、植物、动物及其制品等。
通过采集不同来源的样品，可以获得不同类型和特性的微生物，从而得到多样性的菌株资源。
在接种前，样品经过稀释，使微生物适当分散。
然后将稀释液均匀接种于固体培养基上，并进行孵育。
在培养过程中，微生物通过分裂繁殖形成菌落，而每个菌落代表一个菌株。
简述菌种的培养和保存方法
简述菌种的培养和保存方法引言菌种的培养和保存是微生物学研究中极为重要的一环，它不仅有助于保持菌种的纯度和活力，还能为科学研究和实际应用提供稳定可靠的菌种资源。
本文将从菌种的培养基选择、培养条件控制、菌种的传代和菌种的保存等方面简述菌种的培养和保存方法。
菌种的培养基选择不同的菌株对培养基的要求不尽相同，因此在培养菌种时需根据不同菌株的营养需求合理选择培养基。
常见的培养基可分为复合培养基和化学定义培养基两类。
复合培养基通常由不同来源的天然成分组成，如牛肉膏、酵母浸出物等，适用于绝大多数菌株的培养。
化学定义培养基则由精确的化学成分配比组成，适用于特定菌株的培养和研究。
选择培养基的关键是保证菌株的生长和繁殖，以及适当提供菌株所需的营养物质。
培养条件控制菌种的培养需要控制一系列生理和环境因素，以维持菌株的生长和活力。
以下是几个常见的培养条件控制方法：1. 温度控制：菌株的生长温度因菌株的生长特性而异。
一般来说，大多数菌株的生长温度在20-40摄氏度之间。
因此，必须根据菌株的需求，在培养箱或培养室中设定适当的温度。
2. pH值控制：不同菌株对酸碱环境的适应性不同。
对于大多数微生物而言，适宜生长的pH范围为6.5-7.5。
因此，菌种的培养应根据菌株的需求，在培养基中添加适量的缓冲剂来控制培养基的pH值。
3. 溶氧控制：菌株的生长需要充足的氧气供应。
通常采用搅拌培养、增大容器表面积暴露于空气以及配制含氧气饱和的培养基等方法来增加溶解氧的供应。
菌种的传代菌种的传代是指将菌株从一个培养基转移到另一个新培养基的过程。
合理的传代方法能够保持菌种的稳定性和活性。
常见的菌种传代方法有以下几种：1. 接种法：将菌株从一种液体培养基接种到另一种新鲜的液体培养基中。
这种方法适用于生长快速的菌株，能够快速传代并扩大菌量。
2. 斜面法：将菌株从一种固体培养基上划线接种到另一种新培养基的斜面上。
这种方法适用于较为敏感的菌株和对氧气需求较高的微生物。
微生物纯培养 方法
微生物纯培养方法微生物纯培养是一种将微生物从混合群体中分离出来并在无害的实验室条件下进行单一菌种的培养和研究的方法。
纯培养对于研究微生物的形态、生理、代谢、遗传等方面具有重要意义。
下面将详细介绍微生物纯培养的方法及步骤。
1. 选择合适的培养基和条件选择合适的培养基和条件对微生物的纯培养非常重要。
培养基的选择应根据微生物的特性、需求和研究目的来确定。
常用的培养基包括富含养分的肉汤、琼脂等。
另外，培养基的pH、温度、氧气和二氧化碳含量等条件也需要注意调节。
2. 样品的采集和消毒样品的采集应注意卫生消毒，避免外界微生物的污染。
常用的消毒方法包括用酒精或火焰对工具进行灭菌处理。
样品采集完毕后应立即送至实验室进行处理。
3. 稀释培养和平板分离将样品进行逐级稀释，然后通过平板分离的方法将微生物分离出来。
首先将样品加入适量的稀释液中，进行混合均匀。
然后取出一部分稀释液进行再次稀释，直到得到适宜的微生物数量。
接着，将适量的稀释液均匀涂布在培养基平板上，用细菌铲将液体均匀平铺开来。
待液体固化后，将平板倒置放在培养箱中，进行培养。
4. 单菌种的选择和分离通过观察，可以选择出与其他菌落不同的单个菌落，将其重新接种到培养基上进行培养。
取一根消过毒的铂丝球，沾取单个菌落然后在培养基上划线。
5. 温度调控和培养根据微生物的特性和生长条件，调整培养箱的温度和湿度。
不同的微生物对温度要求不同。
将培养好的微生物放入恒温培养箱中，进行培养。
6. 微生物纯种的筛选和保存通过观察微生物在培养基上的生长情况和形态特征，可以初步筛选出纯种菌株。
然后，将纯种菌株进行存储和保存。
常见的保存方法包括冷冻保存、冷冻干燥以及酒精保存等。
7. 纯种菌株的鉴定和性质研究通过生理生化和遗传学等方法，对纯种菌株进行鉴定和性质研究。
这些研究可以揭示微生物的生态学行为、生产能力以及其与环境的相互关系。
微生物纯培养的关键是选择合适的培养基和培养条件，并保持无菌操作。
菌种选育保存和复苏
目录
初筛菌种
定义：从自然 界或实验室保 存的菌种中筛 选出具有优良
性状的菌株
方法：采用各 种分离、培养、 筛选技术，获
得纯培养物
目的：选出具 有优良性状的 菌株，为后续 发酵提供优良
菌种
应用：广泛应 用于医药、食 品、农业等领
和产品质量
医疗领域：发 现新药和治疗 方法，推动医
学进步
环保领域：处 理废弃物和污 染，保护环境
健康
科研领域：推 动菌种选育与 保存技术的研
究与发展
在生物安全和生物防御等方面的战略意义
防止病原体扩 散和传播
保障人类健康 和生态平衡来自应对新发、再 发传染病威胁
提升国家战略 储备水平
未来发展方向和挑战
原理：通过基因工程 技术将菌种保存于非 生长状态，使其在较 长时间内不会死亡或 变质
方法：将菌种基因组 DNA片段导入微生物 细胞内，使其在适宜 条件下生长繁殖并保 持原有遗传性状不变
优点：可以避免传统 保存方法中菌种变异、 污染等问题，提高保 存效率和稳定性
应用：适用于医药、 农业、工业等领域的 菌种保存，具有良好 的应用前景
纯种分离
定义：将混合微生物分离为单一菌种的过程 方法：划线分离法、涂布分离法、平板划线分离法等 目的：获得纯培养物，避免污染和交叉感染 应用：菌种选育、保藏和复苏
性能测试
菌种选育性能指标：生长速度、 产量、稳定性等
测试方法：对比实验、数据分 析等
测试目的：选育优良菌种，提 高生产效率和产品质量
测试结果：选育出性能优良的 菌种，为后续生产提供保障
资源共享：为科 研人员提供共享 资源，促进科研 合作
微生物培养技术
微生物培养技术微生物培养技术微生物培养技术是指将微生物置于适宜的培养基中，利用适当的条件创造合适的生长环境，促进微生物繁殖和生长的一种方法。
微生物分为细菌、真菌、病毒、放线菌等等，细菌和真菌是常见的微生物，广泛存在于自然中，有益于人类，也有害于人类。
对于细菌和真菌进行培养，可以让人们更全面地了解微生物的生物学特性和生长规律，为科学研究、医学诊断、工业生产等方面提供重要的基础。
下面将从微生物的培养介绍、培养基的种类及制备方法的讲解、培养条件的重要性和细菌与真菌的常见培养方法四个方面进行阐述。
一、微生物的培养介绍微生物的培养可分为液体培养和固体培养两个方式，其中固体培养使用更广泛，主要包括两种：琼脂平板和斜面培养。
琼脂平板培养是将琼脂培养基倒入平板容器中，凉透凝固后，将微生物接种于琼脂之上，使之均匀分布。
将琼脂平板倒置放在温度适宜的培养箱内，使其在适宜的温度下生长。
可通过观察、计数、分离、纯化、鉴定、筛选等方法来进行实验研究。
斜面培养也是使用琼脂培养基，将其胶化后倒在倾斜的试管中，待凝固后接种微生物于斜面之上。
该方法可以使微生物的营养分布相对均衡，而不受重力影响，有利于细菌的生长。
这种方法更适用于保存微生物菌种。
二、培养基的种类及制备方法不同的微生物需要对应不同的培养基，细菌的培养基中的不同成分需要设置不同的比例，以满足细菌的需要。
常用培养基有气体培养基、富含营养物质的培养基、复合培养基、不同菌群特异培养基等，这些培养基各自的成分配比不同，具有各自的特殊功能。
滴定法、蒸馏法、电解法及化学分析法等是一些制备方法，各种物质的加入比例应该根据培养基的类型、微生物的特点、培养的目的和需要来合理选择。
三、培养条件的重要性常见的培养条件包括温度、pH值、营养成分、氧气和湿度。
不同的细菌和真菌适合不同的生长条件，温度是微生物生长的主要限制因素，大部分细菌和真菌的最适生长温度为30°C~37°C；pH值也是影响微生物生长的重要因素之一，不同的微生物在不同的条件下生长所用的pH值也不同；营养成分是培养基必不可少的成分之一，细菌和真菌吸收的营养有所不同，根据微生物的要求调整培养基的营养成分比例，可以最大化地提高培养效果。
微生物菌群的分离纯化、培养、鉴定及保藏
菌种保藏
菌种保藏是将微生物的 菌种经长时间的保存， 不污染其它杂菌，及可 保持其形态特征和生理 性状，减少变异，防止 衰老，以便于将来使用。 保藏菌种一般是选用它 的休眠休，如孢子；芽 孢等等，并且要创造一 个低温；干燥；缺氧； 避光和缺少营养的环境 条件，以利于休眠体能 长期地处于休眠状态。 对于不产孢子的微生物， 应使其新陈代谢处于最 低状态，又不会死亡， 从而达到长期保存的目 的。
谢谢！
优点：可以计数，可以观察菌落特 征。 缺点：吸收量较少，较麻烦，平板 不干燥效果不好，容易蔓延。如果 菌液密度大的话，长不出单菌落。
大肠菌种的培养鉴定
大肠菌群能在乳糖胆盐液 体培养液中生长，并且产 气产酸，使培养液变色。 还能在伊红美兰固体培养 上生长，形成黑紫色的菌 落，有的还有金属光泽。 其他病原菌的菌落呈粉红 色。再做镜检观察是无芽 孢的革兰氏阴性杆菌（呈 红色）。即可鉴定是有大 肠菌群的菌存在。
实验材料和器材
注： 1.乳糖胆盐液体培养基： 由蛋白胨、乳糖、溴甲 酚紫和胆盐组成，属液 态、鉴别、增值、半合 成培养液，实验中用于 废水中菌群的培养；
2.伊红美蓝琼脂：含蛋 白胨、乳糖、磷酸氢二 钾、伊红-美蓝和琼脂。 琼脂平板用于分离纯化 肠道致病菌，特别是大 肠菌群和粪大肠菌群；
3.营养琼脂培养基：含 牛肉膏、蛋白胨、氯化 钠和琼脂。用于分离纯 化后的菌体培养。
微生物纯培养分离技术 获得纯培养物对微物学研究至关重要。 纯培养物是指来源于同一单细胞的细胞群体。
菌种的分离纯化
平板涂布法
平板划线法
平板涂布法 因为将微生物悬液先加到较烫 的培养基中再倒平板易造成某 些热敏感菌的死亡，且采用稀 释倒平板法也会使一些严格好 氧菌因被固定在琼脂中间缺乏 氧气而影响其生长，因此在微 生物学研究中常用的纯种分离 方法是涂布平板法。
微生物菌种选育技术和保藏
矿物盐、丙酸钠、硫胺素（M3 琼脂）
链霉菌，微单孢菌 马杜拉放线菌、小双孢菌、
链孢囊菌 诺卡氏菌
红球菌、小单孢菌
广泛应用的选择培养基。
①、几丁质培养基： 分离土壤和水中放线菌。 但测试过的500株链霉菌和其他放线菌中，只有
25％的菌种具有强的水解几丁质的能力。 许多放线菌生长在能利用几丁质的可作为放线菌
接种已富集的培养物到固体培养基，可将优势微生物分离 出来。
方法的原理是给混合菌群提供一些有利于所需菌株生 长或不利于其他菌型生长的条件。
移种时间是关键，应在所需菌占优势时移种。
例如，供给特殊的基质或加入某些抑制剂。 但应注意的是，所需类型的菌种生长的结果有时 会改变培养基的性质，从而改变选择压力，使其 他微生物也能生长。通过把富集培养物接种到新 鲜的同一培养基可以重新建立选择压力。
菌种选育是一门应用科学技术，其理论基础是微生物遗 传学、生物化学等，而其研究目的是微生物产品的高产优质 和发展新品种，为生产不断地提供优良菌种，从而促进生产 发展。所以，育种工作者要充分掌握微生物学、生物化学、 遗传学的基本原理和国内外有关的先进科学技术，灵活而巧 妙地将其运用到育种中去，使菌种选育技术不断更新和发展。
用涂石蜡的棒置于碳源 培养基中 花粉 蛇皮 人的头发
水、土壤、粪 肥
土壤、根土
水
海水、污泥 发霉的稻草
土壤 土壤
土壤 土壤 土壤 土壤
分离出的菌体
嗜粪红球、小单孢菌 属等
链霉菌属、马拉杜菌 属、小双孢菌属
小Байду номын сангаас孢菌属、内孢高 温放线菌 链霉菌属 嗜热放线菌
链霉菌属 链霉菌属
诺卡氏菌 游动放线菌属
食品发酵工程-2(微生物菌种的选育及保藏)
02
微生物菌种保藏
低温保藏法
总结词
通过降低温度来抑制微生物的生长和代谢，从而延长菌种保 藏时间。
详细描述
将微生物菌种保存在低温环境下，通常为-18℃至-70℃，可以 显著减缓菌种的生长和代谢速度，从而延长菌种保藏时间。低 温保藏法适用于大多数微生物菌种的长期保存。
干燥保藏法
总结词
通过去除水分来降低微生物的生存能 力，从而延长菌种保藏时间。
详细描述
将微生物菌种干燥至一定含水量，通常 为5%-10%，以降低菌种的生存能力。 干燥保藏法适用于耐干燥的微生物菌种， 如霉菌和酵母菌等。
冷冻真空干燥干燥保藏法
总结词
结合低温、干燥和真空条件来更有效地延长菌种保藏时间。
详细描述
在冷冻真空干燥机中，将微生物菌种在低温、真空条件下进行干燥处理，去除 水分，从而延长菌种保藏时间。冷冻真空干燥保藏法适用于对湿度敏感的微生 物菌种，如病毒和细菌等。
03
微生物菌种鉴定
形态学鉴定
总结词
通过观察微生物的形态、大小、颜色、生长速度等特征，初步判断微生物的种类。
详细描述
形态学鉴定是微生物鉴定的基础方法，通过显微观察，可以了解微生物的形态、大小、排列、运动性等特征，从 而判断其大致的分类。
生理生化鉴定
总结词
通过测定微生物对不同碳源、氮源、能源的利用以及产生的代谢产物，进一步确定微生物的种类。
详细描述
根据产物的性质选择合适的分离纯化方法，如离心、 过滤、萃取、沉淀等。通过实验确定最佳的工艺参数 和操作条件，以提高产物的纯度和收率。同时，可以 探索联合使用多种分离方法，以达到更好的分离效果 。
THANKS
感谢观看
的时间和较大的培养规模。
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2.取样的方法
3.霉菌数测定的方法
61
汇报实验方案
62
作业要求：
提交一篇小论文：XX食品中霉菌数的检测报告 前言：介绍实验背景 一、材料与方法
2、菌种的复壮
狭义的复壮－－消极的措施 指在菌种已经发生衰退的情况下，通过纯种 分离和测定典型性状、生产性能等指标，从已衰 退的群体中筛选出少数尚未退化的个体，以达到 恢复原菌株固有性状的相应措施。
广义的复壮－－积极的措施
指在菌种的典型特征或生产性状尚未衰退前，
就经常有意识地采取纯种分离和生产性状测定工 作，以期从中选择到自发的正突变个体。
样品的种类
1. 大样，就是一整批； 2. 中样，是从样品中各部分取得的混合样品，
一般每批抽样数量不少于5件，一般为200g； 3. 小样，也称检样，直接进行分析用的，一般 为25g。
食品微生物检验的采样方案
① ② ③ ④
ICMSF取样方案；
美国FDA的取样方案；
世界粮农组织（FAO）取样方案；
我国的食品取样方案。
充分混匀后，无菌操作打开包装， 用100mL无菌注射器抽取,注入无菌盛 样容器.
2、半固体样品采样方法
无菌操作打开包装，用无菌勺子从几 个部位挖取样品，放入无菌容器。
3、固体样品采样方法
大块整体食品用无菌刀具和镊子从不同的部位割 取，并注意其代表性； 小块大包装食品应从不同部位的小块上切取样品， 放入无菌容器。 若为检验食品的污染情况，可取表层样品；若为 检验食品品质的情况，应从深部取样。
幅要大于40cm。
3.研磨法
将中样(≥100g)剪碎 或搅拌混匀，从中取25g 检样放入无菌乳钵中充分 研磨后，再放入带有 225mL无菌稀释液的稀释 瓶中，盖紧盖后充分摇匀。
4.整粒振摇法
直接称取25g整粒样品置于带有225mL稀释液和 直径5mm左右玻璃珠的稀释瓶中，盖紧瓶盖， 用力快速振摇50次，振幅要大于40cm。
一、复习 二、微生物的生长曲线 三、微生物的生长曲线的测定--方案汇报 四、食品微生物检测
1
1.微生物菌种的保藏
为什么要进行菌种保藏 菌种保藏的目的 菌种保藏的原理
菌种保藏的方法
2
斜面低温保藏法 石蜡油封藏法 砂土管保藏法 麸皮保藏法 甘油悬液保藏法 冷冻真空干燥保藏法 液氮超低温保藏法 宿主保藏法
菌种复壮的主要方法
1、纯种分离法
通过纯种分离,可将衰退菌种细胞群体中一部分仍保持原有典 型性状的单细胞分离出来,经扩大培养,就可恢复原菌株的典型
性状。
平板表面涂布法
菌落纯（“菌种纯”）
平板划线分离法 琼脂培养基浇注法 用分离小室进行单细胞分离
细胞纯（“菌株纯”）
用显微操作器进行单细胞分离 菌丝尖端切割进行单细胞分离
2.食品中霉菌和酵母菌检测 四、制定实验方案
19
食品检验的目的
1.便于食品卫生质量监督管理； 2.鉴别食品中是否存在有毒有害物质 3.为新产品、新资源利用、新食品等进行卫生鉴
定
一.食品微生物检验的一般步骤
样 品 保 样 存 品 采 集 选 择 参 考 菌 群
样 品 处 理
菌落总数
结果报告
大肠菌群
ICMSF(The Intermational Committee on Microbiological Specification for Food)
国际食品微生物标准委员会
食品微生物检验采样方法
采样原则： 能采取完整包装的样品就不拆开 取样，必须拆开包装取样的应按无菌 操作进行取样.
1、液体样品采样方法
（1）实验原理
（2）材料与方法 （3）预期结果
15
接下来请大家汇报实验方案
本次的作业：请大家设计实验方案，要求包括： （1）实验原理 （2）材料与方法
（3）预期结果
A4纸打印上交
四、食品微生物检测
一、食品微生物的检验流程 二、食品微生物样品采集与制备 三、食品微生物检验
1.食品中菌落总数检测
9
10
将一定量的细菌转入新鲜液体培养基中，在适宜的条 件下培养细胞要经历延迟期、对数期、稳定期和衰亡 期四个阶段。以培养时间为横坐标，以细菌数目的对
数或生长速率为纵坐标作图所绘制的曲线称为该细菌
的生长曲线。
不同的细菌在相同的培养条件下其生长曲线不同，同
样的细菌在不同的培养条件下所绘制的生长曲线也不 相同。
采样时间、采样人姓名，现场情况。
×××××采样单
样品编号：━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━ 产品名称（商品名）______规格型号__________注册商标_____________ 生产厂家_______________通讯地址__________邮政编码□ □ □ □ □ □ 受检地点_______________通讯地址__________邮政编码 □ □ □ □ □ □ 采样地点_______________采样日期__________采样基数______________ 生产日期_______________批 号__________产品依据标准__________ 有效成分及含量 ____________________________________________________________ 检验目地________________检测项目_____________________________
用5cm2孔无菌采样板和5支无菌棉签擦拭25cm2面
积，擦拭后立即用无菌剪刀将棉签头剪入无菌容
器中。
③ 车间空气采样：将5个直径90mm的普通琼脂平板分别
置于车间的四角和中部，打开平皿盖5min，然后盖盖 送检。
平皿
（七）采样标签的填写
标签内容主要：
编号、样品名称、生产单位、生产日
期、产品批号、产品数量、存放条件、
二、生长曲线的测定
任务一：认识生长曲线的概念 任务二：为生长曲线的绘制设计实验方案
7
任务一：什么是生长曲线
什么是微生物的生长曲线
生长曲线的制作： 接种 适温培养 定时取样测 定生长量
将少量单细胞的纯培养，接种到一恒定容积 的新鲜液体培养基中，在适宜条件下培养， 每隔一定时间取样，测菌细胞数目。以培养 时间为横坐标，以细菌增长数目的对数为纵 坐标，绘制所得的曲线。
4、冷冻食品采样方法
大包装小块冷冻食品按小块个体采取； 大块冷冻食品可用无菌刀从不同部位削取或用无 菌手锯从冻块上锯取样品，放入无菌容器。 若为检验食品污染情况，可取表层样品；若为检 验食品品质情况，应从深部取样。
5、生产工序监测采样
① 车间用水：从车间各龙头采样； ② 车间台面、用具、及加工售货员手的卫生监测：
等。
5、样品采集和现场测定必须有二人以上参加 。
食品微生物检验的采样方案
微生物检验的特点是一个以小份样品的检测结果来说明一大批 食品卫生质量，因此，用于分析的样品的代表性至关重要，也 即样品的数量、大小和性质对结果判定产生重大影响。 要保证样品的代表性首先要有一套科学的抽样方案，其次使用 正确的抽样技术，并在样品的保存和运输过程中保持样品的原 有状态。 目前最为流行的抽样方案为ICMSF推荐的抽样方案和随机抽样方 案。无论采取何种方法抽样，每批货物的抽样数量不得少于5件。 对于需要检验沙门氏菌的食品，抽样数量应适当增加，最低不 少于8件。
1.捣碎均质法
将中样(≥100g)剪碎或搅拌混匀，从 中取25g放入带225mL稀释液的无菌 均质杯中，8000~10000r/min均质
1~2min即可。
视频：无菌均质器
2.剪碎振摇法
将中样(≥100g)剪碎或搅拌混匀，从中取25g检样进
一步剪碎，放入带225mL稀释液和直径5mm左右玻璃
珠的稀释瓶中，盖紧瓶盖，用力快速振摇50次，振
菌落计数以菌落形成单位（cfu）表示
国标规定：在需氧情况下，37℃培养48h，能在 普通琼脂平板上生长的细菌菌落总数 不能生长的细菌：厌氧菌，微需氧菌，有特殊营 养要求的，非嗜中温的细菌
菌落总数主要用作判定食品被污染程度的标志
55
食品中菌落检测方法P116
56
2.食品中大肠菌群检测
大肠菌群：一群在一定培养条件下能发酵乳糖、 产酸产气的需氧和兼性厌氧革兰阴性无芽胞杆菌。 多存在于温血动物粪便。
检 分离培养 染色镜检 验 致 纯 生化试验 前 病 化 的 菌 增 分离 血清学试验 准 菌 培养 备 动物试验
二、食品微生物样品采集与制备
取样：代表性 微生物检验的取样过程中，避免操作引起污染。
一个无菌样品的采集，应该通过这样一种方式，
即：在收集过程中，本身应避免污染，然后放
入消毒容器中。
22
大肠菌群数的高低表明了粪便污染程度
57
食品中大肠菌群检测P119
58
3.食品中霉菌和酵母菌检测
食品检样经过处理，在一定条件下培养后，所得 1g或1mL检样中所含霉菌和酵母菌菌落数。
59
食品中霉菌和酵母菌检测P122
60
四、制定实验方案
请大家参考课本，并查找国标法，制定XX食品 中霉菌数的检测方案，包括： 1.实验所需仪器与材料
作业要求：
提交一篇小论文：XX菌落总数的检测报告 前言：介绍实验背景 一、材料与方法
二、检测结果
三、结果分析
52
参考论文
三、食品微生物检验
54
1.食品中菌落总数检测
菌落总数：食品检样经过一定处理，在一定条件 下（如培养基、培养温度和培养时间等）培养后， 所得1g（1mL）检样中形成的微生物菌落总数。
采样人仔细阅读以下句子，然后签字 我认真负责地填写了该样品采样单，承认以上填 写的合法性，被该采亲单位所证实的样品系按照采样方法取得的，该样品具有代表性、真实性和 公正性。