实验一 淀粉酸水解制糖与还原糖的测定

实验一淀粉酸水解制糖与还原糖的测定

一、试验目的

①掌握酸法制糖的工艺与方法；

②掌握还原糖的测定方法。

二、酸水解制糖原理

在淀粉酸水解过程中，有如下三种反应：

在水解过程中，淀粉的颗粒结构被破坏，α－(1, 4)－糖苷键及α－(1, 6)－糖苷键在酸的催化下被切断，示踪同位素原子O18研究证明，H＋先与H2O结合生成H3O＋，H3O＋能与糖苷键的氧原子结合生成不稳定化合物Ⅰ，随后C1－O键断裂生成C1正碳离子Ⅱ，H2O与具有正电荷的C1结合，再使C1失去H＋，完成糖苷键的水解过程。

三、实验仪器

7230型分光光度计、水浴锅或电炉、100mL量筒、100mL或50mL容量瓶9个、10mL与2mL移液管各1支、250mL烧杯、250mL锥形瓶2个、布氏漏斗、真空泵、牛皮纸。

四、实验试剂

淀粉（化学纯）、3, 5-二硝基水杨酸（化学纯）、1%硫酸、氢氧化钠（分析纯）、酒石酸钾钠、苯酚（化学纯）、亚硫酸钠（Na2SO3）、葡萄糖（分析纯）、无水酒精、粉末CaCO3。

①配制DNS（3,5－二硝基水杨酸）试剂：取7.5克3,5－二硝基水杨酸，14.0 g氢氧化钠，充分溶解于1000mL蒸馏水中。再加入酒石酸钾钠216.0克，苯酚（在50℃水浴中融化）5mL，亚硫酸钠6.0克，完全溶解后盛于棕色瓶中。

②葡萄糖标准溶液(1g/L)：准确称取干燥衡重的葡萄糖1g，加1mL 1%硫酸(防止微生物生长)，以蒸馏水定容至1000mL。

③1%硫酸；④碘-碘化钾溶液

四、实验步骤

(一)葡萄糖标准曲线的制定

管号0 1 2 3 4 5 6

葡萄糖标准液(mL) 0 0.5 1.0 2.0 3.0 5.0 10.0

②将各溶量瓶溶液混匀，在水浴锅或电炉上沸水浴5分钟，取出后立即用冷水冷却至室温，并加水定容，摇匀。

③于550nm 处用分光光计测定吸光度A 值，以葡萄糖浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制葡萄糖标准曲线。

(二)还原糖的制备与测定 ①淀粉酸水解工艺

取淀粉5~10g ，加入250mL 锥形瓶，按照固液比1∶10加入1%硫酸，用牛皮纸封好口，在121~125℃水解30min ，取出1、2滴置于白瓷板上，加1滴碘-碘化钾溶液直到不呈蓝色，即为水解终点。冷却，然后用粉末CaCO 3中和至pH 值4.5~5.0，减压过滤，得到含葡萄糖的样品溶液，测定其体积V 0。

②还原糖的测定

平行取2.0mL 待测样品2份（含糖量为0.2~2.0g/L ），加入100mL 或50mL 容量瓶中，再加入3mL DNS 试剂，沸水浴5min ，冷却至室温后，加水定容摇匀，于550nm 处用分光光计测量吸光度A ，根据标准葡萄糖液所得数据建立的标准曲线，测算待测试样的平均还原糖浓度，计算淀粉的转化率。

③淀粉的转化率计算

0V (L)(mg/L)

=

100%(g)100086% 1.11

⨯⨯⨯⨯⨯原糖液体积原糖液葡萄糖含量淀粉转化率投入淀粉量

注：使用此公式时，应注意测定过程中的稀释倍数