方法验证 (SOP, 适用于色谱类)
高效液相色谱仪验证
中心化验室型高效液相色谱仪验证（一）验证方案（二）验证报告药业有限公司中心化验室型高效液相色谱仪验证方案（SOP-YZ-???）方案制定人：制定日期：方案审查人：审查日期：方案审核人：审核日期：方案批准人：批准日期：药业有限公司目录1、概述2、验证目的3、验证实施小组成员及有关责任4、验证文件5、合格标准6、验证方法和步骤7、验证结果分析和综合评价8、最终评价9、验证周期10、验证记录1、概述高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种现代液相色谱法，其基本方法是用高压输液泵将流动相泵入到装有填充剂的色谱柱，注入的供试品被流动相带入柱内进行分离后，各成分先后进入检测器，用记录仪或数据处理装置记录色谱图并进行数据处理，得到测定结果。
由于应用了各种特性的微粒填料和加压的液体流动相，本法具有分离性能高、分析速度快的特点。
高效液相色谱仪由输液泵、进样器、色谱柱、检测器和色谱数据处理系统组成。
其中LC-2010和Agilent1100型为单泵型，LC-20AB型为双泵型高效液相色谱仪。
2、验证目的检查并确认高效液相色谱仪运行性能符合要求。
3、验证实施小组成员及有关责任验证实施小组组长???负责协调及异常情况的处理；操作员??????负责验证的具体操作工作；QA???负责监督实施本方案。
4、主要验证文件高效液相色谱法（SOP-ZL-???）、中华人民共和国国家计量检定规程液相色谱仪（JJG705-2002）、UV-VIS检测器SPD-20A/SPD-20AV说明书、溶液传输单元LC-20AB说明书、中华人民共和国药典2005年版二部、LC-2010A/2010C操作说明书安装手册和维修手册。
5、合格标准6、验证方法和步骤6.1验证方法整个验证过程分为单个部件的验证和整机验证。
验证时一般先验证泵、柱温箱、自动进样器的性能，接着是检测器的性能，最后是整机的性能验证。
分析方法验证管理程序SOP QC-008(最终2)
实用文档1.目的PURPOSE建立分析方法验证的程序要求、文件和步骤，确保分析方法有效。
2.范围SCOPE2.1 实验室涉及定性或定量的分析方法，包括含量、有关物质（限度或定量）、鉴别和性能测试等相关分析方法。
2.2 颗粒度与原子吸收在此文件中单独列出，微生物见SOP C-2007。
2.3 不适用于毒性、临床前和临床研究的生物分析方法。
2.4 本SOP为验证的通用要求。
产品的具体分析方法验证应有相应验证文件，可根据实际情况对验证过程进行调整。
3.定义DEFINITION3.1 分析方法的分类3.1.1按照检测目的的不同有如下表3-1所述表3-1：分析方法的分类3.1.2按照来源不同又分为法定分析方法和非法定分析方法3.1.2.1法定分析方法-包括各药典收载的或已经验证并在法规部门注册得到批准的分析方法。
3.1.2.2非法定分析方法-除上述分析方法外自主开发或者是经过修订的法定分析方法。
实用文档3.2分析方法验证/确认一般来说，无论是应用于生产过程、放行、接收还是稳定性试验，所用的方法必须是经过验证或确认且有文件支持的分析方法。
3.2.1分析方法验证-证明分析方法符合其应用目的的过程。
对于自主开发分析方法，须经过全面的验证，详见表3-2。
对于经过修订的法定方法，视修改的条件，必须进行部分或全面的方法验证。
表3-2：分析方法的验证要求注：（1）- 正常情况下不需包含在验证方案中；（2）+ 正常情况下须包含在验证方案中；（3）# 根据实际需求而定；（4）※溶液的稳定性至少应包括实际应用条件下的稳定性；（5）▲不能完全代表物质专属性的分析方法，应有其它分析方法补充；（6）* 当分析方法用于稳定性样品的检测时，专属性必须做稳定性指示特性；（7）只有当方法转移到不同地点的另一个实验室或收录在药典中时才需要做重现性，如果已经做了重现性，中间精密度可不做；（8）滤膜影响试验：根据实际需求而定，对于定量分析中使用到滤膜的一般要求做。
SOP高效液相色谱法检验操作规程
SOP高效液相色谱法检验操作规程SOP(S tandard O perating P rocedure)高效液相色谱法检验操作规程应包括以下内容，长度不少于1200字：一、目的和适用范围说明制定此操作规程的目的和适用范围，例如适用于其中一种特定的样品检验。
二、相关参考文件列举与此操作规程相关的参考文件，例如国家标准、行业标准、公司内部文件等。
三、术语和定义定义操作中可能出现的术语和缩写词的含义，以确保操作规程的清晰和一致性。
四、仪器设备确定用于该检验的高效液相色谱仪及其相关设备的说明和规格。
五、试剂和材料列出用于检验的试剂和材料，并提供其质量标准、存储要求和有效期等信息。
六、工作环境和安全要求确定进行检验时所需的工作环境和安全要求，包括所需的实验室设施、通风要求、个人防护措施等。
七、样品准备详细描述样品的获取、保存、处理和制备方法，确保样品的准备符合标准要求。
八、标准曲线制备说明制备标准曲线所需的试剂和材料、操作步骤和相关参数设置，以确保准确测量样品。
九、仪器校准和验证指导操作员如何校准和验证高效液相色谱仪以确保仪器的准确性和可靠性。
十、方法操作步骤详细描述高效液相色谱检验的操作步骤，包括进样器设定、流速设定、柱温设定、检测波长设定等，确保操作的标准化和一致性。
十一、结果记录和数据处理提供一个记录表格，规定操作员如何记录检验结果，包括峰面积、保留时间等数据，并说明如何进行数据处理和解读。
十二、异常处理列举可能出现的异常情况，如仪器故障、色谱图异常等，并给出相应的处理措施和纠正措施。
十三、参考范例和质量控制提供一些操作示例或参考范例，以及质量控制的要求和方法，以确保结果的准确性和可靠性。
十四、操作员培训和授权确定操作员接受培训的要求和方法，表明完成培训后的操作员可以独立进行该检验，并进行检验授权和审批的规定。
十五、附录列举相关的附录，如计算公式、样品制备方法详解、有关仪器的文章等。
以上是SOP高效液相色谱法检验操作规程的基本内容，操作规程的编写应根据具体情况进行调整和修改。
SOP-液相色谱岗位分析方法性能标准、其他要求和步骤
中华人民共和国安徽出入境检验检疫局The Chemical Laboratory of AHCIQ标准操作程序Standard Operation Procedure液相色谱岗位分析方法性能标准、其他要求和步骤Concerning the Performance of Analytical Methods and the Interpretation of Results at LC Post安徽出入境检验检疫局化学技术中心液相色谱岗位分析方法性能标准、其他要求和步骤1．定义1.1 准确度检测结果与可接受参考值之间的符合度。
通过测定真实性和精密度来确定。
1.2 α误差指测试样品符合规定的概率，尽管获得的是不符合规定的测定(是一个假的不符合规定的决定)。
1.3 分析物将要检测、鉴别和/或定量的物质以及分析过程中产生的衍生物。
1.4 β误差测试样品确实不符合规定的概率，尽管获得的是符合规定的测定(是一个假的符合规定的决定)。
1.5 偏差指检测结果与可接受参考值之间的差异。
1.6 标准校准用参考基准值的测量值来代表所测物质量的测量手段。
1.7 认证过的基准物质(CRM)CRM指一种有特定分析物含量赋值的物质材料。
1.8 共色谱法指一个将提取物在进行色谱分离之前分成两个部分的过程。
第一部分进行色谱分离。
第二部分与要测定的标准分析物混合。
然后将该混合物也进行色谱分离。
所加标准分析物的量必须与提取物中分析物的估计值相差不大。
设计此方法是要提高采用色谱法时分析物的鉴别，特别是在没有适宜的内标物可用时。
1.9 协同试验用相同的方法对相同的样品进行分析以确定该方法的性能特性。
该试验包括随机测定误差和实验室偏差。
1.10 确认方法能提供全面或补充信息使物质得到明确地鉴定，并且能在感兴趣的水平进行定量的方法。
1.11 决定限度(CCα)CCα指等于和高于此值时，可以用α误差概率得出认为样品不符合规定的结论的限度。
1.12 检测容量(CCβ)CCβ指可以用β误差概率检测、鉴别和／或定量样品中物质的最小含量。
高效液相色谱测定法标准操作规程
标准操作规程1目的：建立高效液相色谱测定法操作规程，以使检验操作规化。
2适用围：适用于高效液相色谱测定法检验操作全过程。
3责任：QC人员对本SOP实施负责。
4容高效液相色谱法系采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱，对供试品进行分离测定的色谱方法。
注入的供试品，由流动相带入色谱柱，各组分在柱被分离，并进入检测器检测，由积分仪或数据处理系统记录和处理色谱信号。
4.1.对仪器的一般要求和色谱条件高效液相色谱仪由高压输液泵、进样器、色谱柱、检测器、积分仪或数据处理系统组成。
色谱柱径一般为3.9~4.6mm，填充剂粒径为3~10μm。
超高效液相色谱仪是适应小粒径（约2μm）填充剂的耐超高压、小进样量、低死体积、高灵敏度检测的高效液相色谱仪。
4.1.1.色谱柱反相色谱柱：以键合非极性基团的载体为填充剂填充而成的色谱柱。
常见的载体有硅胶、聚合物复合硅胶和聚合物等；常用的填充剂有十八烷基硅烷键合硅胶、辛基硅烷键合硅胶和苯基键合硅胶等。
正相色谱柱：用硅胶填充剂，或键合极性基团的硅胶填充而成的色谱柱。
常用的填充剂有硅胶、氨基键合硅胶和氰基键合硅胶等。
氨基键合硅胶和氰基键合硅胶也可用作反相色谱。
离子交换色谱柱：用离子交换填充剂填充而成的色谱柱。
有阳离子交换色谱柱和阴离子交换色谱柱。
手性分离色谱柱：用手性填充剂填充而成的色谱柱。
色谱柱的径与长度，填充剂的形状、粒径与粒径分布、孔径、表面积、键合基团的表面覆盖度、载体表面基团残留量，填充的致密与均匀程度等均影响色谱柱的性能，应根据被分离物质的性质来选择合适的色谱柱。
温度会影响分离效果，品种正文中未指明色谱柱温度时系指室温，应注意室温变化的影响。
为改善分离效果可适当提高色谱柱的温度，但一般不宜超过60℃。
残余硅羟基未封闭的硅胶色谱柱，流动相pH值一般应在 2〜8之间。
残余硅羟基已封闭的硅胶、聚合物复合硅胶或聚合物色谱柱可耐受更广泛pH值的流动相，适合于pH 值小于2或大于8 的流动相。
GMP认证全套文件资料37-高效液相色谱法标准操作规程
高效液相色谱法标准操作规程目的：建立高效液相色谱法标准操作规程。
适用范围：高效液相色谱法。
责任：质检员实施本操作规程，检验室主任负责监督本规程正确执行。
程序：高效液相色谱法是用高压输液泵将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，经进样阀注入供试品，由流动相带入柱内，在柱内各成分被分离后，依次进入检测器，色谱信号由记录仪或积分仪记录。
1.对仪器的一般要求所用的仪器为高效液相色谱仪。
色谱柱的填充剂和流动相的组分应按各品种项下的规定。
常用的色谱柱填充剂有硅胶和化学键合硅胶，后者以十八烷基硅烷键合硅胶最为常用，辛基硅烷键合硅胶次之，氰基或氨基键合硅胶也有使用。
离子交换填充剂用于离子交换色谱；凝胶或玻璃微球等填充剂用于分子排阻色谱等。
除另有规定外，柱温为室温，检测器为紫外吸收检测器。
在用紫外吸收检测器时，所用流动相应符合紫外分光光度法（附录ⅣA）项下对溶剂的要求。
正文中各品种项下规定的条件除固定相种类、流动相组分、检测器类型不得任意改变外，其余如色谱柱内径、长度、固定相牌号、载体粒度、流动相流速、混合流动相各组分的比例、柱温、进样量、检测器的灵敏度等，均可适当改变，以适应具体品种并达到系统适用性试验的要求。
一般色谱图约于20分钟内记录完毕。
2.系统适用性试验按各品种项下要求对仪器进行适用性试验，即用规定的对照品对仪器进行试验和调整。
应达到规定的要求；或规定分析状态下色谱柱的最小理论板数、分离度、重复性和拖尾因子。
(1) 色谱柱的理论板数（n ） 在选定的条件下；注入供试品对仪器或各品种项下规定的内标物质溶液，记录色谱图，量出供试品主成分或内标物质峰的保留时间t R （以分钟或长度计，下同，但应取相同单位）和半峰高宽（W h/2），按n=5.54(t R /（W h/2）计算色谱柱的理论板数。
如果测得理论板数低于各品种项下规定的最小理论板数，应改普通色谱柱的某些条件（如柱长、载体性能、色谱柱充填的优劣等），使理论板数达到要求。
液相色谱质谱联用仪校验SOP
液相色谱质谱联用仪检验作业指导书1.适用范围适用于液相色谱质谱联用仪（LCMS-2020）的期间核查2.校验方法准备1.0ng/μL和100pg/μL的利血平在甲醇中的标准溶液，按液相色谱流动相流速0.8mL/min，ESI+与APCI+模式下流动相：甲醇：水（80:20，体积分数），加入0.1%（体积分数）甲酸；ESI-模式下流动相：甲醇：水（80:20，体积分数），加入0.1%（体积分数）氨水，设置仪器参数，使用全扫描模式（Scan）校准分辨力与质量准确性，使用选择离子模式（SIM）校准信噪比、峰面积重复性、保留时间重复性。
3.计量性能指标校验项目仪器类型电离模式要求分辨力单四级杆ESI+≤1u信噪比单四级杆ESI+≥10:1 ESI-APCI+质量准确性单四级杆ESI+≤0.5u峰面积重复性单四级杆ESI+≤10%保留时间重复性单四级杆ESI+≤1.5%4.校验周期校验项目周期分辨力1年信噪比1年质量准确性1年峰面积重复性1年保留时间重复性1年5.校验项目5.1分辨力待仪器运行稳定后，根据校验方法中推荐条件，在ESI+模式下，选择全扫描模式（Scan），将扫描范围设为m/z=606~612，注入1ng/μL的利血平溶液5μL。
观察质谱图，记录m/z=609质谱峰，并计算其50%峰高处的峰宽，得到W1/2，作为分辨力的结果。
5.2质量准确性在ESI+模式下，选择全扫描模式（Scan ），将扫描范围设为604~614，注入1ng/μL 的利血平标准溶液10μL ，观察质谱图，记录特征离子的实测质量数（有效数字取小数点后两位）。
根据公式（1）计算△M ，以△M 的最大值作为质量准确性的结果。
i 理i 测M -M △M =（1）式中：M i 测——第i 个离子的测量值，u M i 理——第i 个离子的理论值，u ；5.3信噪比根据检验方法中条件设置仪器参数，使用选择离子模式（SIM ），分别在ESI+和APCI+模式下：将检测离子m/z 设为609；在ESI-模式下：将检测离子设为607。
薄层色谱法标准操作规程(SOP)
名称：薄层色谱法标准操作规程(SOP)关键词：薄层色谱；操作目的：进行药品的鉴别，杂质检查或含量测定背景知识：选填项目原理：薄层色谱法，是将适宜的固定相涂布于玻璃板上，成一均匀薄层。
等点样、展开后，与适宜的对照物按同法所得的色谱图作对比，用以进行药品的鉴别，杂质检查或含量测定的方法。
主体内容：1 仪器与材料1.1 玻板：除另有规定外，用5cm×20cm，10cm×20cm或20cm×20cm的规格，要求光滑，平整、洗净后的不附水珠，晾干。
1.2 固定相或载体：最常用的有硅胶G、硅胶GF、硅胶H、硅胶HF254，其次有硅藻土、硅藻土G、氧化铝、氧化铝G、微晶纤维素、微晶纤维素F254等。
其颗粒大小，一般要求直径为10—40µm。
薄层涂布，一般可分无粘合剂和含粘合剂两种；前者系将固定相直接涂布于玻璃板上，后者系在固定相中加入一定量的粘合剂，一般常用10—15%煅石膏（CaSO4·2H2O在140℃烘4小时），混匀后加水适量使用，或用羧甲基纤维素钠水溶液（0.5—0.7%）适量调成糊状，均匀涂布于玻璃板上。
也有含一定展开液或缓冲液的薄层。
1.3 涂布器：应能使固定相或载体在玻璃板上涂成一层符合厚度要求的均匀薄层。
1.4 点样器：常用具支架的微量注射器或定时毛细管，应能使点样位置正确集中。
1.5 展开室：应使用适合薄层板大小的玻璃制薄层色谱展开缸，并有严密盖子，除另有规定外，底部应平整光滑，应便于观察。
2 操作方法2.1 薄层板制备：除另有规定外，将1份固定相和3份水在研钵中向一方向研磨混合，去除表面的泡后，倒入涂布器中，在玻璃板上平稳地移动涂布器进行涂布（厚度为0.2—0.3mm），取下涂好薄层的玻璃板，置水平台上于室温下晾干，后在110℃烘30分钟。
即置有干燥剂的干燥箱中备用。
使用前检查其均匀度（可通过透射光和反射光检视）。
2.2 点样：除另有规定外，用点样器点样于薄层板上，一般为圆点，点样基线距底边2.0cm，点样直径为2——4mm，点间距离约为1.5—2.0cm，点间距离可视斑点扩散情况以不影响检出为宜。
WHO发布《良好色谱规范》—中英文对照版
WHO发布《良好⾊谱规范》—中英⽂对照版近⽇，WHO发布了《 GOOD CHROMOTOGRAPHY PRACTICES优良⾊谱规范》，该⽂件对⾊谱系统、验证确认、访问与权限、审计追踪、时间⽇期功能、电⼦系统、溶剂、缓冲液、流动相、⾊谱柱、样品的管理、⾊谱⽅法、⾊谱峰和峰积分、数据管理等作了较为系统的要求，此外，还专门清洁验证的分析⽅法、数据管理作出规定。
该⽂件全⽂翻译如下：1. INTRODUCTION AND SCOPE介绍与范围The use of chromatography methods (such as High Pressure Liquid Chromatography (HPLC) and Gas Chromatography (GC)) in quality control laboratory analysis has increased significantly in recent years.近年来⾊谱⽅法（如⾼压液相⾊谱（HPLC）和⽓相⾊谱（GC））的使⽤在QC实验室分析中已有显著增加。
HPLC and GC methods are used in, for example, the identification of materials and products, for determination of assay and related substances in materials and products, as well as in validation such as process validation and cleaning validation.HPLC和GC⽅法被⽤于，例如，物料和产品鉴别、物料和产品中含量和有关物质检测，以及验证如⼯艺验证和清洁验证。
Due to the criticality of the results obtained through chromatography, manufacturers should ensure that the data acquired is accurate and reliable. Results should meet ALCOA+ principles (i.e. attributable, legible, contemporaneous, original and accurate).由于通过⾊谱获得的结果⾮常关键，⽣产商应确保所获取的数据的准确性和可靠性。
SOP-VC-001.00 理化检验方法学验证与确认SOP
四川禾亿制药有限公司Sichuan Herbease Pharmaceutical Co, Ltd第 1 页/共 19 页文件名称 理化检验方法学验证与确认SOP文件编码 SOP-VC-001.00 版 本 号 QB-2019文件类型 操作标准拷 贝 号项 目 职 务 签 名日 期起 草验证专员 审 核质量保证部负责人质量控制部负责人 研发部负责人批 准 验证部负责人颁发部门 质量保证部 生效日期 年 月 日分发部门 分发份数分发部门 分发份数质量保证部 验证部 质量控制部 研发部 生产部 行政部 物资管理部 人力资源部 设备部 财务部 工程部拷贝号1.目的规范并指导理化检验方法学验证或确认的实施操作及其方案、报告编制、检验数据的合规性。
2.适用范围适用于已有国家标准的质量标准研究即仿制药质量标准理化检验方法确认或方法转移确认、国内无上市品种的质量标准研究即创新药质量标准理化检验方法验证，包括法定标准提升即版本更换需要理化检验方法学确认。
3.引用文献、资料中国药典2015版四部9101药品质量标准分析方法验证指导原则制药工艺验证实施手册（化学工业出版社出版，何国强主编）4.职责人员职责验证部负责验证资料管理、验证或确认方案及其报告的合规审核。
质量保证部负责审核本文件内容、验证或确认方案及其报告的合规审核。
研发部负责研发品种的质量标准即理化检验方法的验证或确认的起草、实施质量控制部负责实施方法学验证或确认。
5.定义5.1.标准分析方法：指法定分析方法，如药典（如USP、EP等）或部颁标准方法。
5.2.非标准分析方法：指新建立的分析方法或变更后的分析方法。
5.3.方法验证：指实验室通过实验设计和测试，证明被验证的方法（未被收载法定标准）适用于该方法拟定的检测用途。
5.4.方法确认：指实验室对法定分析方法或药典分析方法进行确认，证明该方法适用于被测样品的分析。
5.5.方法转移：指分析方法建立机构建立分析方法并经过验证后，转移到其他检测机构（分析方法接收机构），方法接收机构为了成功的运行该分析方法而进行的分析方法转移确认，如国家检测机构进行的进口药品标准复核工作。
液相色谱仪SOP
待压力线平稳30min后，单击批处理开始，批处理表 开始运行。
a.在LC再解析中，点击LC数据分析。挨个进行数据 处理。在最大浓度数据文件中，点击向导，弹出对 话框，点下一步，标准级别数填入5，再点下一步， 输入标准品名称，标准级别浓度，最后点完成。
b.在文件中点击文件另存为，编辑文件名称，连点 两个确定。新的方法文件就建好了。
2.开机 （打开LC-30A和计算机） 3. 打开方法文件 4.排气 5.编辑批处理并运行 6.数据处理 7.系统清洗 8.关机
a、首先打开UPS，然后依次打开DGU-20ASR真空脱气机、 LC-30AD溶液传输单元（泵）、SPD-M20A系统控制器、 所选用的检测器、自动进样器SIL-30AC，CTO-20AC柱 温箱电源打开。（HPLC组件的电源开关大都在仪器的右 下角）
b、双击Lc solution图标。输入用户名Admin，点击OK。 然后点击启动按钮，听到两声蜂鸣声，说明Lc solution 工作站与仪器联机正常。
在文件中调出已有的方法文件，在仪器参数视图里
面，简单设置里面，模式选择，总流速，泵B浓度，
时间，柱温箱温度，时间程序自动弹出。然后选择 下载，看压力线。单击绘图，可以查看基线。
c.在批处理表中选择新的方法文件，输入级别号， 保存。运行批处理文件。
d.打印数据报告
数据采集完毕后，关闭检测器，将流动相 换成水+甲醇（95+5），冲洗20min，后换 成100%甲醇，冲洗20min。
a、冲洗结束后，关闭泵，待压力降为 0.0MPa，关闭工作站，听到蜂鸣声后，关 闭仪器各部分电源按钮。
2.氨水溶液:量取氨水2mL,加水至100mL,混匀。
生物样品分析方法确证的SOP
生物样品分析方法确证的SOP1.专属性：应着重考察药物的代谢物、内源性物质和同时服用药物的干扰。
取6个个体空白样品，采用拟定的方法测定，所得结果与接近于定量限的被测物浓度的纯溶剂溶液所得的结果进行比较。
在药物、代谢物、内标物的保留时间处不应有大的干扰，任何有大干扰的样品应舍去，如果大于10%的空白样品有干扰，应另取一组空白样品重试，如果仍有大于10%的空白样品有干扰，则应改变拟定方法。
2.质控样品（QC样品）：系将已知量得待测药物加入到生物介质中配制的样品，用于质量控制。
3.线性范围：标准曲线由5 ～ 8个系列浓度标准溶液组成，包括LOQ，线性程度用加权最小二乘法处理，相关系数r不应低于0.99，同时必须符合一定的精密度和准确度。
线性范围浓度上限为实际样品最高浓度的120%，下限为实际样品最低浓度的80%。
要求LOQ偏离标准浓度（RSD）应小于等于20%，其他各点应小于等于15%。
截距与C max响应值之比应≤5.0%。
4.准确度：测得的样品浓度与真实浓度的接近程度，常用回收率表示。
a．绝对回收率（萃取回收率、提取回收率）萃取回收率(%)＝A测/A真×100%A测:取一定量的被测物标准品,加到空白血浆样品中,按方法处理,使最后溶液中药物标准品浓度为1μg·mL-1 ,测定峰面积,记为A测。
A真:取1μg·mL-1的药物标准品的纯溶剂溶液直接进样,测定峰面积,记为A。
真考察高、中、低三个浓度，低浓度选在定量限（LOQ）附近，高浓度在标准曲线上限的附近（上限的80%），中间选一个浓度。
每个浓度各3份样品，加入量一般在10-6～10-9g, 绝对回收率50%～80%。
（注：内标法中，药物与内标各自用外标法测得的绝对回收率应相近，两者相差应小于10%。
）b．方法回收率建立标准曲线后，取高、中、低药物标准品溶液加到空白血浆中，每个浓度至少平行测定5份，按标准曲线制备法同法制备，将所得值代入回归方程，求得测定值C测。
气相色谱仪验证方案
气相色谱仪的确认方案仪器名称：气相色谱仪型号：制造厂商：仪器编号：西安瑞丰制药有限公司目录一. 确认目的二. 确认小组人员职责三. 仪器介绍四. 确认内容及可接受标准五.仪器校验要求六.确认过程中的培训七.相关SOP 的制定和完善八.异常与偏差处理九.确认的结果及分析十.确认报告的编写十一.附录一. 确认目的该方案用于确认质量部的气相色谱仪的测定数据是准确可靠，性能稳定。
二. 确认小组人员职责三. 仪器介绍仪器型号：仪器编号：四. 确认内容及可接受标准（一）设备安装运行状态评估确认方式：采用问答形式进行，通过从以下几方面来确保运行状态处于可控状态：1. 设备安装环境是否发生改变2. 设备公用系统配置是否发生改变3. 设备的连接线缆是否发生老化或松动等现象4. 设备的相关程序是否齐备5. 设备是否依据校验程序进行定期校准6. 设备是否已建立年度预防维修计划7. 设备日常故障是否均得到有效维修8. 回顾设备日志和维修记录，确认设备是否有关键部件重复维修或重大维修记录9. 确认设备当前的使用功能是否都得到了验证10.确认设备当前的关键参数设置是否都得到了验证11.确认由于设备原因引起的验证偏差均得到有效处理12..确认是否有因设备原因引起的不符合事件13.确认是否有因设备原因引起的变更控制14.确认是否有因设备原因引起的客户投诉15.检查设备及其部件外观磨损情况，是否影响设备运行性能16.确认设备关键部件是否进行更换17.设备安全联锁功能，急停按钮功能是否可以正常使用18.确认设备是否存在除项目17 以外的其他安全隐患19.本次设备再验证范围内，相关法规或程序的设备验证要求是否变化20.对设备进行功能测试，测试结果是否符合要求（二）性能确认和可接受标准1.FID检测器的性能确认检测方法《中国药典》2010版二部乙醇挥发性杂质性统适用性试验色谱条件与系统适用性试验以6%氰丙基苯基-94%二甲基聚硅氧烷为固定液，起始温度40℃，维持12分钟，以每分钟10℃的速率升温至24℃，维持10分钟；进样口温度为200℃；检测器温度为280℃。
液相色谱仪(HPLC)校验SOP
液相色谱仪检验作业指导书1.适用范围适用于液相色谱谱仪的期间核查2.校验方法配制100ng/mL 的萘-甲醇的标准溶液，按仪器操作规程进行重复测量6次，用来验证仪器最小检测浓度、定性及定量准确性，配制0.1%~1.0%的丙酮-异丙醇溶液验证仪器线性范围。
3.校验项目及性能要求校验项目要求定量准确性≤3%定性准确性≤1%线性范围优于103最小检测浓度≤5×10-8g/mL4.校验周期校验项目周期定量准确性1年定性准确性1年线性范围两年最小检测浓度1年5.校验项目5.1最小检测浓度使用100%甲醇作为流动相，流速调为1mL/min ，检测波长设定为254nm ，仪器稳定后，使用自动进样器进样20μL 的100ng/mL 的萘-甲醇溶液，连续进样6次。
计算萘出峰保留时间和峰面积算数平均值。
5.1.1最小检测浓度计算公式H20cV N 2C d L（1）式中：C L ——最小检测浓度，g/mL N d ——基线噪声峰高；c——标准溶液浓度，g/mL V——进样体积，μL ；H——标准物质的峰高。
5.1.2定性准确性计算公式定性准确性以萘出峰保留时间测量的相对标准偏差TV 表示，依下式计算：t11-n /t -t TV n1i 2i ⨯=∑=）（）（（2）式中：TV——相对标准偏差n——测量次数t i ——第i 次测量的峰面积t ——n 次进样的峰面积算术平均值i——进样序号5.1.3定量准确性计算公式定量重复性以萘峰面积测量的相对标准偏差CV 表示，依下式计算：x11-n /x -x CV n1i 2i ⨯=∑=）（）（（3）式中CV——相对标准偏差n——测量次数x i ——第i 次测量的峰面积x ——n 次进样的峰面积算术平均值i——进样序号5.2线性范围操作使用100%甲醇作为流动相，流速调为1mL/min ，检测波长设定为254nm ，仪器稳定后，使用自动进样器分别进样20μL 的0.1%，0.2%，0.3%，0.4%，0.5%，0.6%，0.7%，0.8%，0.9%，1.0%丙酮-异丙醇溶液，每个浓度重复测量三次，取算数平均值。
高效液相色谱仪校验规程完整
标准文件1、目的Objective：建立高效液相色谱仪内部校验规程，确保校验工作规范、顺利进行。
2、范围Scope ：本规程适用于本公司使用的高效液相色谱仪（紫外-可见光检测器/二极管阵列检测器）的校验。
3、职责Responsibilities：3.1 培训职责：本文件起草人或审核人或批准人负责对质量管理部全体人员培训。
3.2 QC：负责制定本规程，并对本规程的实施负责。
3.3 QA：负责监督和检查本规程的实施。
4、定义Definition：无。
5、程序Procedures：5.1 依据国家计量校验规程JJG 705-2002液相色谱仪，安捷伦液相说明书，岛津液相说明书。
5.2 备件及材料5.2.1水：HPLC级水。
5.2.2化学试剂：乙腈（HPLC）、丙酮（分析纯）。
5.2.3咖啡因标准品。
5.2.4咖啡因标样。
0.005 mg/ml, 0.010 mg/ml, 0.025 mg/ml,0.050 mg/ml,0.125 mg/ml和0.250 mg/ml 咖啡因水溶液。
5.2.5色谱柱：4.6mm×250mm，C18，5µm。
5.2.6 容量瓶：10ml。
5.2.7玻璃注射器。
5.2.8 限流阻尼管。
5.2.9 分析天平。
5.2.10 秒表。
5.2.11 热电偶5.3 校验项目及技术指标5.3.1泵性能的测试5.3.2柱温箱温度稳定性测试*备注：如药典专论规定的特定柱温，不在以上温度范围之内，则对分析该品种的仪器增加该温度点校验，校验项目和可接受指标相同。
5.3.3 检测器性能测试5.3.4进样器性能测试5.3.5梯度组成的测试*注：*表示该项目的内部校验取决于仪器的配置，有该配置则为必检项目。
5.4 校验方法5.4.1校验通则5.4.1.1 HPLC的内部校验由仪器所属部门经培训的使用者按本规程进行校验，其校验项目依仪器配置和使用范围而定。
5.4.1.2 政府部门每一年对HPLC进行校验，每六个月内部对HPLC进行一次校验；仪器配置的关键部件大修或更换后，可参考本规程对该部件相关的项目进行校验，以对仪器的性能进行确认。
分析方法验证程序
SOP审核和批准 SOP Review and Approval职责Responsibility签名Signature日期Date打印名Printed Name职位Title起草人Created by 分析副主任Analytical Associate Director复核Reviewed by 分析主任Analytical Director批准人Approved by副总经理Vice President批准人Approved byQA经理QA Manager1.0目的Purpose本规程的目的是为在XXX有限公司进行的验证研究制定一个程序，包括分析方法验证过程，分析方法的确认，文件记录，审计，原始数据归档以及验证/确认文件放行。
2.0范围Scope2.1本标准操作程序适用于XXX有限公司产品研发部门GMP分析实验室，采用色谱技术对最终成品和API（如适用）进行的所有分析方法的验证/确认。
2.2本标准操作程序也可作为XXX有限公司产品研发部门分析研发实验室，采用其他分析技术进行其他任何方法验证/确认的参考。
c.3.0职责Responsibility3.1分析员Analyst3.1.1负责准备验证方案Responsible for preparation of validation protocol3.1.2负责进行方法验证/确认Responsible for execution of method validation / methodverification3.1.3负责准备验证报告/确认报告Responsible for preparation of method validation report / methodverification report。
中检院送检细胞治疗制剂检定项目SOP
中检院送检细胞治疗制剂检定项目SOP目的本文档的目的是为中检院（中华人民共和国国家医学检验中心）送检的细胞治疗制剂制定一份检定项目的标准操作规程（SOP）。
背景中检院负责对细胞治疗制剂进行检定，以验证其质量和安全性。
检定项目的SOP是为了规范细胞治疗制剂的检定过程，确保结果准确可靠。
适用范围本SOP适用于中检院收到的细胞治疗制剂，包括但不限于干细胞治疗制剂、基因治疗制剂和免疫治疗制剂等。
检定项目1. 细胞活力检定：通过细胞活力试验检测细胞治疗制剂中的活细胞的比例。
2. 毒性检定：通过毒性检测方法评估细胞治疗制剂对宿主细胞的毒性。
3. 纯度检定：通过纯度分析确定细胞治疗制剂中的杂质和污染物含量。
4. 标识鉴定：确认细胞治疗制剂中的标识信息与实际情况是否一致。
检定方法1. 细胞活力检定方法：使用细胞活性试剂盒进行细胞活力试验，按照试剂盒说明书进行操作，记录结果。
2. 毒性检定方法：使用宿主细胞系进行细胞毒性实验，根据细胞存活率评估细胞治疗制剂对宿主细胞的毒性。
3. 纯度检定方法：采用高效液相色谱法（HPLC）或质谱分析法（MS）对细胞治疗制剂进行纯度分析，记录杂质和污染物含量。
4. 标识鉴定方法：通过基因测序或其他适当的分子生物学方法对细胞治疗制剂中的标识信息进行验证。
结论和报告对于每个检定项目，综合所有结果得出结论，并将结果整理成检定报告。
报告应包括细胞治疗制剂样品信息、检定项目名称和结果、检定方法和操作记录等详细信息。
备注本SOP应根据具体的检定要求进行修改和补充，并在实施前经过验证。
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1.适用范围
本SOP适用于色谱类方法验证
2.参考标准/资料
3.检测方法的适用性验证内容
3.1专属性
a. 试剂空白实验：考察实验过程中所用试剂对目标物的干扰情况。
b. 干扰实验：当空白样品（样品不含目标物，其它基质一致）可获得时，直接进行空白实验（使用空白样品经过完整的样品前处理及分析过程），考察在目标物出峰时间有无干扰峰。
当没有空白样品情况下，对于液相色谱，目标物有紫外吸收时可采用DAD检测器验证峰的光谱特征是否与标准品一致；另可采用不同填料色谱柱、选择不同流动相、改变梯度洗脱等方法考察目标物的出峰变化情况；对于气相色谱，可采用不同填料色谱柱、选择不同载气、改变程序升温等方法考察目标物的出峰变化情况。
注：1. 专属性：是指在样品介质中有其它组份共存时，检测方法对目标物准确而专属的测定能力。
2. 如以上方法不能确定其专属性，可由其它分析方法予以补充，例如：质谱、旋光仪、核磁共振等方法。
3. 应附代表性图谱，以说明方法的专属性，并应标明目标物在图中的位置，色谱法中的分离度应符合R s≧1.0要求（一般来说R s<1.0，两峰总有部分重叠；当R s=1.0，两峰能明显分离；当R s=1.5，两峰已完全分离；摘自《仪器分析》武汉大学化学系编，高等教育出版社2001版）。
R s=2(t2-t1)/(Y1+Y2)；t：色谱峰保留时间；Y：峰底宽。
3.2校准曲线
a. 对于含量<0.01%的痕量成分分析，样品中目标物含量一般比较低，标曲浓度范围应包含检测限及尽可能覆盖一个数量级，但不宜过宽，一般为1-2个数量级，至少作5个点（不包括空白）。
b. 对于含量>0.01%的常量与微量成分分析，可根据方法定量限和实际样品含量选择标曲浓度范围，标曲浓度范围尽可能覆盖一个数量级，但不宜过宽，一般为1-2个数量级，至少作5个点（不包括空白）。
c. 应描述校准曲线的数学方程，相关系数不应低于0.99。
注：1. 在分析化学中，根据分析试样中待测成分的含量多少，分析化学可以分为：
常量成分分析（质量分数>1%）、微量成分（0.01%~1%）分析和痕量成分分析（<0.01%）；摘自《分析化学》武汉大学主编，高等教育出版社2000年第四版）。
2. 确定测试样品中被测成分浓度应在校准曲线的线性范围内。
3. 标曲中每个浓度水平分置在3个进样瓶中，分别进样，结果取平均值。
4. 应附相关图谱。
3.3 检出限与定量限
a.（首选）信噪比法：把已知低浓度试样测出的信号与空白样品测出的信号进行比较，计算出能被可靠地检测出的最低浓度或量。
一般以信噪比为2:1/3:1时相应浓度确定检测限，信噪比为10:1时相应浓度确定量限。
b.（可选）空白值标准偏差法：
C L=（2或3）S b/b
式中：C L-方法的检出限
S b-空白值标准偏差（一般平行测定20次得到）
b-方法校准曲线的斜率
对于定量限一般为检出限的3倍。
注：1. 检出限:被测物能被检测出的最小值。
2. 定量限:被测物能被准确测定的最小量，其测定结果应具有一定准确度和精密度。
3. 无论用哪种方法，均需制备相应检出限浓度的样品，反复测试进行确定。
4. 检测方法SOP编写时应将仪器检出限和定量限换算为方法检出限和定量限。
5.应附相关图谱。
3.4 准确度（回收率）
a. 对于含量<0.01%的痕量成分分析，样品中目标物含量一般比较低，回收率应在方法检出限、三倍方法检出限、十倍方法检出限进行三个水平实验，每个水平测定次数至少为3次。
回收率要求参考范围见表1。
b. 对于含量>0.01%的常量与微量成分分析，可在定量限附近和根据实际样品含量选择合适点进行三水平（高、中、低）实验，每个水平测定次数至少为3次。
回收率要求参考范围见表2。
注：1. 准确度是指用该方法测定的结果与真实值或参考值的接近程度，一般以回收率（%）表示。
2. 对于样品基质或前处理特别复杂的实验，回收率要求可根据条件适当放宽。
3. 标准品与样品应混合均匀，所有加标样品必须经过完整的前处理过程。
4. 回收率实验一般有两种方式。
在空白样品可获得的情况下，通过在空白样品中加入已知量A的标准对照品，进行回收试验，其回收率可表示为：
R=(M-空白)/A*100%
式中：R：回收率（%）
M：试验测定值
A：加入已知标准品的量
在空白样品不可获得，但可以得到已知量的真实样品时（样品含量应尽量接近或小于检出限，否则会影响加标实验），可通过在真实样品中加入已知量A的标准对照品，进行回收试验，其回收率可表示为：
R=(M-P)/A*100%
式中：R：回收率（%）
M：真实样品中加入标准对照品后试验测定值
P：真实样品的试验测定值
A：加入已知标准品的量
5. 标准品与样品充分混合均匀时，可配制不同水平（高、中、低）加标样品各一个。
针对同一个加标样，重复取样检测6次，可同时考察本浓度水平的回收率与精密度情况。
6. 应附相关图谱。
3.5 精确度（重复性）
a. 根据实际样品含量选择一合适点（一般取实际样品含量范围的中间值）进行考察，重复测定次数至少为6次。
实验室内部重复性考察的相对标准偏差参考范围见表3。
b．（根据实际情况选作）重复性限r：根据实际样品检测需求选择一（一般取含量范围的中间值附近）或多个浓度水平进行考察，每个浓度水平重复测定次数建议为20次，对应的重复性限r=2.8σ, σ为标准差。
c.（根据实际情况选作）中间精密度：根据实际样品检测需求选择一（一般取含量范围的中间值附近）或多个浓度水平进行考察。
要求不同的分析人员采用相同的分析方法、在不同的时间、使用不同的仪器进行测试，以确认方法的适用性。
注：1. 精密度是指在规定的测试条件下，同一个均匀的样品，经过多次取样测定所得结果之间的接近程度，即一组测量值彼此符合的程度，一般用相对标准偏差表示。
2. 重复性限是一个数值，在重复性条件下，两个测试结果的绝对差小于或等于此数的概率为95%。
3.中间精密度：在一定测量条件下的测量精密度，这些条件包括相同的测量程序、相同地点并且对相同的样品在一长时间段内重复测量，但可包含其它相关条件的改变（如设备系统、操作者和环境条件等变量）。
4. 有的样品含量范围比较宽，考察一个浓度点的重复性代表性不够，可选择在方法检出限和常见样品浓度之间选择高、中、低三水平进行重复性考察，每个水平重复测定次数至少为6次。
5. 本SOP对重现性及重现性限等暂不作要求。
6. 应附相关图谱。
3.6系统适用性
系统适用性试验主要是考察试验系统的可行性，对于色谱类，一般为柱效、重复性、专属性。
即包含塔板数、分离度、拖尾因子、RSD等。
注：1. 应附相关图谱。
3.7耐用性
a. 典型影响耐用性的变动因素包括：被测溶液的稳定性、样品的提取次数、时间等。
液相色谱法(HPLC)中的典型的变动因素包括：流动相的组成和pH值、不同品牌或不同批号的同类型色谱柱、柱温、流速等。
b. 溶液的稳定性考察：用来证明根据相应方法制备的样品溶液和标准品溶液在规定的储存条件下在一定时间内保持稳定。
例如：依据方法配制样品溶液和标准品溶液，在室温或其他条件下（如冰箱2-8℃）条件下储存适当的时间。
每个间隔点，用新鲜配制的标准品溶液做对照，测定储存的样品溶液和标准品溶液。
测定结果与初始结果进行比较，结果接近一致时便可确认样品溶液和标准品溶液在规定的储存条件下在规定储存时间是稳定的。
注：1. 耐用性：测定条件有小的变动时，测定结果不受影响的承受程度。
2. 经试验，应说明小的变动能否符合系统适用性试验要求，以确保方法有效。
如果通过耐用性研究发现分析方法对某个或某些测试条件敏感或要求苛刻，应在方法中予以写明。
3. 可根据实验具体情况选择考察耐用性的内容。
4. 应附相关图谱。