葡聚糖凝胶G系列使用说明手册
葡聚糖凝胶 Sephadex LH20 使用说明及使用心得
问：分得效果不是很好，上了有 8 毫升的样，我用甲醇洗脱，结果用 约一个保留体积就洗完了，东西不仅越分越少，而且仍然和没上柱之前差 不多，很让人困惑，郁闷。
了 1g 干态的,Sephadex LH20 对不同溶剂中的保留体积： water 2.1ml MeOH 1.9ml EtOH 1.8ml CHCl3 1.6ml n-BuOH 1.6ml 丙酮 0.8ml 乙酸乙酯 0.4ml 甲苯 0.2ml
2 "还有是不是样品的溶解是不是要与洗脱的起使浓度相同?如何确定样品 在最佳配比的容液中溶呢?"
不要着急,实验是一点一点做出来的,刚开始总是困难的.首先我要说 的是 Sephadex LH20 不是万能的,你的样品不一定适于用它分离,
1 "结果用约一个保留体积就洗完了",这很正常,这也是 Sephadex LH20 这种填料的特点:"洗脱体积一般为 2-3 个保留体积，对特殊保留强的化合 物，可洗脱 5 个保留体积",
3. 样品的处理和洗脱溶剂的选择。
如果样品极性大，选用反相溶剂洗脱（甲醇－－水），样品用最少体积 的甲醇－－水（尽可能甲醇少一些）溶解，过滤后，湿法上样（必须要进 行过滤！否则把 Sephadex LH-20 堵塞，就必须将 Sephadex LH-20 的柱头 部分弃去，造成不必要的浪费）。
如果样品极性小，这选用正相溶剂洗脱（氯仿－－甲醇），样品用最少 体积的氯仿－－甲醇溶解，过滤后，湿法上样。
当然有影响,Sephadex LH20 在不同的溶剂中的吸涨程度是不同的(任何 填料都是这样,只是 Sephadex LH20 很明显),一般在丙酮，乙酸乙酯 中收 缩很厉害,所以一般不用丙酮，乙酸乙酯 作溶剂,如果前后使用的两种洗脱 溶剂对 Sephadex LH20 的吸涨程度相差很大,还会产生大量气泡.以下列举
葡聚糖凝胶柱使用及注意事项
葡聚糖凝胶柱使用及注意事项1 Sephadex G型葡聚糖凝胶只适合在水中使用，Sephadex G-25羟丙化后就是Sephadex LH-20。
其既有分子筛作用，在由极性与非极性溶剂组成的溶剂中还有反相层析效果。
虽然价位很高，但由于性能颇佳，可再生利用，所以倍受亲睐。
此外上柱样品损失很少，对处理小样品较好，这也是我们实验室常用的原因之一。
2 Sephadex LH20 的原理。
Sephadex LH20的分离原理主要有两方面：以凝胶过滤作用为主，兼具反相分配的作用（在反相溶剂中）。
因为凝胶过滤作用，所以大分子的化合物保留弱，先被洗脱下来，小分子的化合物保留强，最后出柱。
如果使用反相溶剂洗脱，Sephadex LH20对化合物还起反相分配的作用，所以极性大的化合物保留弱，先被洗脱下来，极性小的化合物保留强，后出柱。
如果使用正相溶剂洗脱，这主要靠凝胶过滤作用来分离。
3 Sephadex LH20 洗脱溶剂。
看完第2点后，就应该清楚Sephadex LH20 洗脱溶剂因分为两类：反相和正相两种。
用得最多的是反相溶剂洗脱，以甲醇－－水系统最为常见，先用水，逐渐增加甲醇比例，最后用100％甲醇冲柱。
正相系统以氯仿－－甲醇最为常见，先用50％氯仿－－甲醇，逐渐增加甲醇比例，最后用100％甲醇冲柱。
4 Sephadex LH20 样品的处理和洗脱溶剂的选择。
如果样品极性大，这选用反相溶剂洗脱（甲醇－－水），样品用最少体积的甲醇－－水（尽可能甲醇少一些）溶解，过滤后，湿法上样（一定要滤喔！要是把Sephadex LH20 堵啦，就得将Sephadex LH20 的柱头部分弃去，很心痛呀）。
如果样品极性小，这选用正相溶剂洗脱（氯仿－－甲醇），样品用最少体积的氯仿－－甲醇溶解，过滤后，湿法上样。
5 Sephadex LH-20的步骤。
(1) 选择条件：梯度洗脱在Sephadex使用中并不象在正相柱层析中那么重要。
葡聚糖凝胶 Sephade LH 使用说明及使用心得
葡聚糖凝胶 Sephadex LH-20使用说明Sephadex G型葡聚糖凝胶只适合在水中使用，Sephadex G-25羟丙化后就是Sephadex LH-20。
此君既有分子筛作用，在由极性与非极性溶剂组成的溶剂中还有反相层析效果。
虽然价位很高，但由性能颇佳，可再生利用，所以倍受钦睐。
此外上柱样品损失很少，对处理小样品较好，这也是我们实验室常用的原因之一。
Sephadex LH-20适合用于有机溶剂分离嗜脂性分子，天然产物在有机溶剂中的纯化。
可以非常经济的大规模制备各种天然产物，尤其在中药有效成分提取中作为大孔吸附树脂解析物的纯化。
结合凝胶过滤﹑分配色谱及吸附层析于一身，能分离结构相近的分子。
因此使用中要考略几种色谱的作用机制。
最高载量可达250mg样品/ml凝胶﹑极少需要再生﹑使用得当，分离效果可保持不变。
上样量视被分离物的结构性能的差异而定：差异大，则大；差异小，则小。
凝胶过滤的上样量一般为5－7％的床体积，我们建议初次上样量控制在1－2％的床体积，视分离情况可以逐步增加；柱高的选择也与分离要求相关――难分物质要有一定柱高和流速控制；流动相可参考TLC 的条件，正确的流动相可以提高分离度并缩短分离时间。
流动相的常用溶剂为：水 甲醇 丙酮 乙酸乙酯 二氯甲烷上述溶剂的极性依次降低，对带有极性的被分离物而言，保留值和分离度依次递增；同理选用的凝胶柱高可依次降低，流速可以增大（或上样量可以增加，树脂体积在低极性溶剂中明显收缩）。
溶剂的溶解性，极性，沸点，毒性都是要考虑到的。
二氯甲烷通常对被分离物质间的极性和碱性差异比较小时采用。
甲醇通常对带环状（包括苯环）物质分离采用，葡聚糖凝胶对环状物质有强烈吸附。
LH-20同时具备亲水和亲脂双重性质，且被分离物质的极性在分离过程中起着重要作用。
使用方法：将干粉浸泡于60—70％乙醇中过夜（充分搅拌），洗去可能存在的残留物，抽干然后湿态不间隙装柱，绝对不能出现凝胶断层（否则要重新装柱），动态用一倍柱体积的60—70％乙醇淋洗，再用水洗净乙醇即根据自己选用洗脱液平衡层析柱至少两个柱体积直到基线变得平稳为止，如改变溶剂应该注意凝胶在新溶剂中的溶胀性质，并根据性质确定柱高.如使用相同的溶剂，在以后的层析中柱平衡可以省略。
g-10葡聚糖凝胶色谱柱使用
g-10葡聚糖凝胶色谱柱使用
G-10葡聚糖凝胶色谱柱是一种常用的分离和纯化生物大分子
的柱子，特别适用于分离寡聚糖和多糖混合物。
该柱子采用葡聚糖作为固定相，具有一定的孔隙大小和分子筛效果。
G-10葡聚糖凝胶色谱柱通常用于分离多糖、寡糖和其他大分
子化合物。
在使用之前，需要将柱子进行激活和平衡，具体步骤如下：
1. 将G-10葡聚糖凝胶色谱柱放入柱子支撑架上，并连接到色
谱系统上。
2. 将适当的缓冲液（如适应于样品的缓冲液）通过柱子进行激活，以去除可能存在的杂质和污染物。
3. 进行柱子平衡：将适当的缓冲液通过柱子流经，直到柱子和系统达到平衡状态。
4. 加载样品：将待分离的样品按照柱子载样方法加载到柱子上。
5. 进行色谱分离：根据需要，控制缓冲液的流速和浓度梯度，使待分离的目标化合物在柱子上进行分离。
6. 收集分离物：根据其他方法（如按时间段收集、检测波长等）进行分离物收集和检测。
值得注意的是，G-10葡聚糖凝胶色谱柱通常用于相对较小的
生物大分子分离，如寡聚糖和多糖，对于更大分子的分离可能需要使用其他类型的色谱柱。
此外，在操作过程中需要根据具体样品的特性和需要进行柱子条件的调整。
葡聚糖凝胶 Sephadex LH20 使用说明及使用心得
Sephadex G 型葡聚糖凝胶只适合在水中使用，Sephadex G-25 羟丙化 后就是 Sephadex LH-20。此君既有分子筛作用，在由极性与非极性溶剂组 成的溶剂中还有反相层析效果。虽然价位很高，但由性能颇佳，可再生利 用，所以倍受钦睐。此外上柱样品损失很少，对处理小样品较好，这也是 我们实验室常用的原因之一。
sephadexlh20柱子被弄脏了大多数情况下是由于样品没滤将柱头堵住或由于样品的死吸附一般很少发生使柱子的柱头部分污染一般的处理是将被污染的柱头部分的填料弃去具体做法很简单只将被污染的柱头部分的填料用玻棒轻轻搅起倒掉即可如果柱子整个被污染如果是将sephadexlh20用反相被污染办法如下依次用水naohnacl水溶液水甲醇洗涤被污染的柱子
不要着急,实验是一点一点做出来的,刚开始总是困难的.首先我要说 的是 Sephadex LH20 不是万能的,你的样品不一定适于用它分离,
1 "结果用约一个保留体积就洗完了",这很正常,这也是 Sephadex LH20 这种填料的特点:"洗脱体积一般为 2-3 个保留体积，对特殊保留强的化合 物，可洗脱 5 个保留体积",
3 "还有分到什么程度是用 Sephadex LH20 比较好?"
如果实验室 Sephadex LH20 很珍贵，分道较纯再用， 如果实验室 Sephadex LH20 很普及，只要满足使用的注意事项，较粗的样品可直接使用 Sephadex LH20 分离。日本的师兄都是用 Sephadex LH20 粗分，人家有钱， 所以不在乎。如果硅胶比 Sephadex LH20 还贵，你一定先用 Sephadex LH20 粗分，再用硅胶吧。有很多问题根本不是学术本身的问题，人也不可能在 真空中搞科研。哈哈，跑题了。
葡聚糖凝胶G系列使用说明手册
葡聚糖凝胶使用说明Sephadex Gel Manuals1化学和物理性质葡聚糖凝胶是一种珠状的凝胶，含有大量的羟基，很容易在水中和电解质溶液中溶胀。
G型的葡聚糖凝胶有各种不同的交联度，因此它们的溶胀度和分级分离范围也有所不同。
葡聚糖凝胶的溶胀度基本上不因盐和洗涤剂的存在而受影响。
葡聚糖凝胶有不同的粒度。
超细级的葡聚糖凝胶是用于需要极高分辨率的柱色谱和薄层色谱。
粗级和中级的凝胶用于制备性色谱过程，可在较低的压力下获得较高的流速。
另外，粗级也可用于批量工艺。
1.1化学稳定性葡聚糖凝胶不溶于一切溶剂（除非它被化学降解）。
它在水、盐溶液、碱和弱酸性溶液中都是稳定的，在强酸中凝胶骨架的糖苷键被水解。
长期接触氧化剂将破坏凝胶，因而应避免使用。
1.2物理稳定性葡聚糖凝胶并不熔融，可以在湿态、中性PH进行灭菌。
干态的凝胶加热至120℃以上将开始焦糖化。
葡聚糖凝胶的机械强度取决于交联度。
2产品说明名称分离范围（球蛋白）应用葡聚糖凝胶G-10<700缓冲液交换、脱盐，分离小分子，去除小分子葡聚糖凝胶G-15<1500缓冲液交换、脱盐，分离小分子，去除小分子葡聚糖凝胶G-251000-5000工业上脱盐及交换缓冲液葡聚糖凝胶G-501000-30000多肽分离、脱盐、清洗生物提取液、分子量测定葡聚糖凝胶G-752000-70000蛋白分离纯化、分子量测定、平衡常数测定葡聚糖凝胶G-1002000-120000蛋白分离纯化、分子量测定、平衡常数测定葡聚糖凝胶G-1505000-300000蛋白分离纯化、分子量测定、平衡常数测定葡聚糖凝胶G-2005000-600000蛋白分离纯化、分子量测定、平衡常数测定3使用方法3.1乙醇浸泡在室温下，将干粉浸泡于50-60%乙醇中至少24小时，并不断搅拌以保证凝胶溶胀，用无盐水洗去残存的乙醇滤干。
3.2无盐水浸泡室温下，在无盐水中充分溶胀24小时，间隙搅拌，以保证凝胶的完全溶胀。
葡聚糖凝胶柱的使用方法
葡聚糖凝胶柱的使用方法：(1) 预处理称取Sephadex G-25（50－100目）约5g，加入蒸馏水100ml，置室温下3h进行溶胀。
(2) 装柱凝胶层析柱的直径与柱长之比一般为1:15。
柱的底部用装有细玻璃管的橡皮塞塞紧，用洗净的玻璃丝（约200目尼龙布）垫底或购买类似规格的商品柱。
然后将柱垂直安装好，先加入1/3柱体积蒸馏水，接着将溶胀好的凝胶边搅匀边连续装入，使它们在柱内自然沉降。
同时大开下口慢速流出蒸馏水。
装柱后的凝胶必须均匀，不能有气泡或明显条纹。
否则，必须到出重装，装好后，用蒸馏水平衡2－3h即可加样品分离。
(3) 加样加样前，首先把柱内凝胶上面多余的蒸馏水放出，直到柱内液面与凝胶表面相齐（或留一极薄液层）为止。
然后，由柱的上端加水解液2ml，注意不要让溶液把凝胶冲松浮起，加完样品后，打开下口缓慢放出液体至液面与凝胶面相齐，再用少量蒸馏水冲洗原来盛样品的容器2－3次，待全部进入层析柱后，即可进行洗脱。
(4) 洗脱与收集洗脱时，用蒸馏水作洗脱剂，并且要连续不断地进行，使凝胶柱上端保持一定的液层，防止凝胶柱表面的液体流干。
本实验洗脱液流出的速度应控制在0.8－1.0ml/min。
洗脱液的收集采用分管连续顺序收集，每管收集3ml，共收集10管。
据经验，4或5号管核苷酸浓度最大，可作为层析鉴定的样品液。
但因层析柱长度的差异，管号会有变化，必要时可用紫外检测A260nm，找出浓度最大的管号。
(5) 凝胶的再生和回收凝胶柱使用一次后，必须反冲疏松一次，平衡后再使用。
若使用数次，就需要再生处理。
用0.1mol/L NaOH-0.5mol/L NaCl溶液浸泡，然后用蒸馏水洗至中性备用。
若实验完毕，将再生后的凝胶在布氏漏斗上用蒸馏水洗涤抽干，再用95%乙醇洗两次，在60℃烘箱中烘干，回收保存。
实验五. 葡聚糖凝胶层析【实验目的】1.掌握葡聚糖凝胶的特性及凝胶层析的原理。
2．学习葡聚糖凝胶层析的基本操作技术。
葡聚糖凝胶G-25的使用方法
产品筑.明=葡聚糖凝胶柱的使用方法：(1) 预处理称取Sephadex G-25 (50 —100 目)约5g，加入蒸馏水100ml ，置室温下3h进行溶胀。
⑵装柱凝胶层析柱的直径与柱长之比一般为1:15。
柱的底部用装有细玻璃管的橡皮塞塞紧，用洗净的玻璃丝(约200目尼龙布)垫底或购买类似规格的商品柱。
然后将柱垂直安装好，先加入1/3柱体积蒸馏水，接着将溶胀好的凝胶边搅匀边连续装入，使它们在柱内自然沉降。
同时大开下口慢速流出蒸馏水。
装柱后的凝胶必须均匀，不能有气泡或明显条纹。
否则，必须到出重装，装好后，用蒸馏水平衡 2 —3h即可加样品分离。
⑶加样加样前，首先把柱内凝胶上面多余的蒸馏水放出，直到柱内液面与凝胶表面相齐(或留一极薄液层)为止。
然后，由柱的上端加水解液2ml，注意不要让溶液把凝胶冲松浮起，加完样品后，打开下口缓慢放出液体至液面与凝胶面相齐，再用少量蒸馏水冲洗原来盛样品的容器2 —3次，待全部进入层析柱后，即可进行洗脱。
(4) 洗脱与收集洗脱时，用蒸馏水作洗脱剂，并且要连续不断地进行，使凝胶柱上端保持一定的液层，防止凝胶柱表面的液体流干。
本实验洗脱液流出的速度应控制在0.8 — 1.0ml/mi n 。
洗脱液的收集采用分管连续顺序收集，每管收集3ml ,共收集10管。
据经验，4或5号管核苷酸浓度最大，可作为层析鉴定的样品液。
但因层析柱长度的差异，管号会有变化，必要时可用紫外检测A260nm ，找出浓度最大的管号。
(5) 凝胶的再生和回收凝胶柱使用一次后，必须反冲疏松一次，平衡后再使用。
若使用数次，就需要再生处理。
用0.1mol/L NaOH-0.5mol/L NaCI 溶液浸泡，然后用蒸馏水洗至中性备用。
若实验完毕，将再生后的凝胶在布氏漏斗上用蒸馏水洗涤抽干，再用95% 乙醇洗两次，在60 C烘箱中烘干，回收保存。
实验五 . 葡聚糖凝胶层析【实验目的】1. 掌握葡聚糖凝胶的特性及凝胶层析的原理。
葡聚糖凝胶 G-50 Medium 使用说明书
葡聚糖凝胶G-50 Medium使用说明书为确保产品的性能和无忧的操作，使用前请仔细阅读本手册，有任何疑问请咨询本公司售后技术支持或销售人员。
1. 产品介绍葡聚糖凝胶G-50 Medium是一种凝胶过滤层析介质（也叫体积排阻色谱），适用于生物分子的脱盐、缓冲液置换、组群分离、精细纯化。
特点如下：a. 经典的葡聚糖介质，选择性好。
b. 生物大分子（>30kDa）的快速脱盐和缓冲液置换（一步完成）。
c. G-50 Medium，可用于组群分离和杂质的去除（以排阻限30kDa为分界点）。
d. G-50 Fine，可用于小分子蛋白的分离纯化（1.5-30kDa）。
表1：性能参数2.选择2.1 介质级别的选择a. 快速脱盐、缓冲液置换、组群分离和杂质的去除：选择G-50 Medium，粒径大、流速快。
b. 小分子蛋白分离纯化：选择G-50 Fine，粒径小、分辨率高。
2.2 层析柱的选择a. 快速脱盐、缓冲液置换、组群分离和杂质的去除（上样量可达到30%CV）：选择粗短型层析柱（柱床高度低，例如XK 16/20），流速快、周期短。
b. 小分子蛋白分离纯化（上样量为0.5%-4%CV）：选择细长型层析柱（柱床高度高，例如XK 16/70），柱效高、分辨率好。
备注：CV指柱体积。
3. 使用3.1 溶胀取一定量的干粉，加入过量的纯化水（缓冲液：干粉≥20ml：1g），在室温（25℃）溶胀24小时或沸水浴溶胀3小时。
备注：溶胀过程中可进行柔和的搅拌，杜绝使用高速或剧烈的搅拌方式（例如磁力搅拌等）。
3.2 清洗待介质自然沉降后，小心的倒出上清液（包括极少量没有溶胀好的干粉和一些漂浮的小颗粒介质），再加入3-5倍体积的纯化水进行重悬。
重复此步骤5次。
备注：用于清洗产品中残留的微量有机试剂和碱性物质。
3.3 重悬在清洗好的介质中加入一定量的缓冲液（缓冲液:介质=1:3），用玻璃棒或其它搅拌装置柔和搅拌3-5分钟。
葡聚糖凝胶的操作方法
葡聚糖凝胶的操作方法
1.将葡聚糖凝胶粉末放入1.5ml离心管中，并加入所需的培养基或溶液（通常是0.1M PBS缓冲液）
2.用紫外灯或消毒灯照射管子和粉末，以杀菌消毒。
3.将管子在室温下静置15分钟，使凝胶充分水解。
4.在使用前，用无菌过滤器或离心管转运转移液体中的小颗粒或杂质。
5.将细胞或材料悬浮在凝胶中，并快速转移和组装需要的实验器具（如培养皿、培养板等）。
6.将实验器具放置在37的恒温箱中，使凝胶在液体中固定并形成3D结构。
7.根据实验的需要，可以选择添加细胞营养物质或生长因子等，以促进细胞的生长和分化。
8.在实验结束后，可以用酶解剂将凝胶中的细胞和材料溶解，并收集并分离细胞和其他成分，进行后续的分析和研究。
葡聚糖凝胶柱使用方法2
葡聚糖凝胶柱的使用方法：(1) 预处理称取Sephadex G-25（50－100目）约5g，加入蒸馏水100ml，置室温下3h进行溶胀。
(2) 装柱凝胶层析柱的直径与柱长之比一般为1:15。
柱的底部用装有细玻璃管的橡皮塞塞紧，用洗净的玻璃丝（约200目尼龙布）垫底或购买类似规格的商品柱。
然后将柱垂直安装好，先加入1/3柱体积蒸馏水，接着将溶胀好的凝胶边搅匀边连续装入，使它们在柱内自然沉降。
同时大开下口慢速流出蒸馏水。
装柱后的凝胶必须均匀，不能有气泡或明显条纹。
否则，必须到出重装，装好后，用蒸馏水平衡2－3h即可加样品分离。
(3) 加样加样前，首先把柱内凝胶上面多余的蒸馏水放出，直到柱内液面与凝胶表面相齐（或留一极薄液层）为止。
然后，由柱的上端加水解液2ml，注意不要让溶液把凝胶冲松浮起，加完样品后，打开下口缓慢放出液体至液面与凝胶面相齐，再用少量蒸馏水冲洗原来盛样品的容器2－3次，待全部进入层析柱后，即可进行洗脱。
(4) 洗脱与收集洗脱时，用蒸馏水作洗脱剂，并且要连续不断地进行，使凝胶柱上端保持一定的液层，防止凝胶柱表面的液体流干。
本实验洗脱液流出的速度应控制在－min。
洗脱液的收集采用分管连续顺序收集，每管收集3ml，共收集10管。
据经验，4或5号管核苷酸浓度最大，可作为层析鉴定的样品液。
但因层析柱长度的差异，管号会有变化，必要时可用紫外检测A260nm，找出浓度最大的管号。
(5) 凝胶的再生和回收凝胶柱使用一次后，必须反冲疏松一次，平衡后再使用。
若使用数次，就需要再生处理。
用L L NaCl溶液浸泡，然后用蒸馏水洗至中性备用。
若实验完毕，将再生后的凝胶在布氏漏斗上用蒸馏水洗涤抽干，再用95%乙醇洗两次，在60℃烘箱中烘干，回收保存。
实验五. 葡聚糖凝胶层析【实验目的】1.掌握葡聚糖凝胶的特性及凝胶层析的原理。
2．学习葡聚糖凝胶层析的基本操作技术。
【实验原理】凝胶层析又称分子排阻层析或凝胶过滤，是以被分离物质的分子量差异为基础的一种层析分离技术，这一技术为纯化蛋白质等生物大分子提供了一种非常温和的分离方法。
葡聚糖凝胶Sephadex-G100使用说明书
SEPHADEX G-100 100 GArticle No: 17006001General Product Information===============================================ORDERINGPack size Code No.100 g 17-0060-01500 g 17-0060-025 kg 17-0060-0340 kg 17-0060-07¤ Thousands of documented applications.¤ Proven reproducibility.¤ Excellent recoveries.¤ Economical.---------------------------------------------------------------------------------Application area (Details) ===============================================* Fractionation and purification of proteins andpeptides.* Determination of molecular weights.* Determination of equilibrium constants.---------------------------------------------------------------------------------Autoclaving (Details) ===============================================In wet form (pH 7), at 120°C for 30 min.---------------------------------------------------------------------------------Calibration (Details) ===============================================Proteins: Use LMW Gel Filtration Calibration Kit.---------------------------------------------------------------------------------Checking the column packing (Details)===============================================1. Run Blue Dextran at 2 mg/ml.2. Watch the progress of a zone of this substancethrough the bed:You should see a discrete horizontal bandtravelling through the column.If not:A. The problem could be caused by dirty filters.Generated at:12/09/2002 05:45:57 PMB. More likely:An uneven bed surface or uneven packing isresponsible, in which case the column must berepacked.---------------------------------------------------------------------------------Choice of eluent (Details)===============================================* Eluent composition does not directly influence theresolution which can be obtained:A. Completely uncharged substances may be elutedwith distilled water.B. For substances carrying charged groups an eluentcontaining a buffer e.g. Tris-HCl, sodiumphosphate is used to control pH, and an ionicstrength of at least 0.02 is recommended tosafeguard against possible ionic interactionswith the gel matrix. NaCl can be used for thispurpose.* For the product that is to be lyophilized:Use volatile buffers e.g. ammonium acetate,ammonium bicarbonate or ethylenediamine acetate.---------------------------------------------------------------------------------Cleaning (Details)===============================================* Wash through 2 column volumes of a non-ionicdetergent solution.* Wash with 0.2 M NaOH outside the column due toswelling.---------------------------------------------------------------------------------Colour (Details)===============================================White.---------------------------------------------------------------------------------Column packing (Details)===============================================The gel suspension should reach the temperature of column operation before packing is begun.1. Inject eluent buffer into the outlet tubing untilit passes through the bed support net.2. Close the outlet tubing, when the dead space underthe net is properly filled.3. Pour the entire slurry into the column in a singleoperation. (Use reservoir if necessary.)4. Open the outlet valve.5. Start the pump or gravity flow to initiatepacking. The column should be packed at as highpressure as possible without deforming beads.The pressure should not be increased beyond 9.6kPa (value for 2.6 x 30 cm column in aqueousbuffer at room temperature. It may vary dependingon eluent viscosity. With wider columns, slightlyreduced maximum operating pressures must be used.)6. Remove the reservoir when all the gel hassedimented into the column.7. Insert the adaptor.8. Pack at the maximum operating pressure of the gel.9. Adjust the flow adaptor to the surface of thegel bed when the gel is thoroughly packed into thecolumn.---------------------------------------------------------------------------------Composition of the gel matrix (Details)===============================================Dextran, cross-linked with epichlorohydrin.Sephadex contains a small number of carboxyl groups, which at low ionic strength cause interaction between charged solutes and the matrix.---------------------------------------------------------------------------------Density (Details)===============================================We do not measure density.---------------------------------------------------------------------------------Equilibration (Details)===============================================1. Pass 2 to 3 column volumes of the aqueous bufferto be used in the separation.2. Readjust the flow adaptor to the surface of thebed.---------------------------------------------------------------------------------Exclusion limit (Details)===============================================Dextrans95 kDBuffer solution: Phosphate buffer 0.05 M- NaCl 0.15 M - NaN3 0.01% pH 7.0.-----Globular proteins210 kDBuffer solution: Phosphate buffer 0.05 M- NaCl 0.15 M - NaN3 0.01% pH 7.0.---------------------------------------------------------------------------------Expected shelf life (Details)===============================================8 years.---------------------------------------------------------------------------------Form as supplied (Details)===============================================Dry powder.---------------------------------------------------------------------------------Fractionation range (Details)=============================================== Dextrans1 kD - 100 kDBuffer solution: Phosphate buffer 0.05 M- NaCl 0.15 M - NaN3 0.01% pH 7.0.-----Globular proteins2 kD - 120 kDBuffer solution: Phosphate buffer 0.05 M- NaCl 0.15 M - NaN3 0.01% pH 7.0.-----Peptides2 kD - 120 kDBuffer solution: Info not available.---------------------------------------------------------------------------------Major separation mechanism (Details)=============================================== According to size.---------------------------------------------------------------------------------Max. linear flow rate (Details)===============================================50 cm/h.Values may vary depending on column packing and eluent viscosity.---------------------------------------------------------------------------------Max. operating pressure (Details)===============================================9.6 kPaValue for 2.6 x 30 cm column, in aqueous buffer at room temperature. Values may vary depending on column packing and eluent viscosity.---------------------------------------------------------------------------------Max. volumetric flow rate (Details)===============================================4.2 ml/minValue for 2.6 x 30 cm column, in aqueous buffer at room temperature. Values may vary depending on column packing and eluent viscosity.---------------------------------------------------------------------------------Optimisation (Details)===============================================* Parameters to change are:A. Sample volume.- A smaller sample volume gives betterresolution.B. Flow rate.¤ Lower flow rate gives better resolution forhigh molecular weight components.¤ The opposite may be true for small componentssince they diffuse more quickly.- The longer the separation time is, the widerthe sample zones become.C. Column length.¤ The resolution of two separated zonesincreases as the square root of the columnlength.¤ The effective bed height can be increased by:- Recycling.- Coupling two columns in series.* Buffer choice and pH are normally of minorimportance.---------------------------------------------------------------------------------pH stability; operational (Details)=============================================== 2 - 10---------------------------------------------------------------------------------Range of dry bead size (Details)=============================================== 40 - 120 µm---------------------------------------------------------------------------------Range of wet bead size (Details)=============================================== 100 µm - 310 µm---------------------------------------------------------------------------------Rec. column (Details)=============================================== Long, narrow column e.g. C 16, 26 / 40 - 100 cmXK 16, 26 / 40 - 100 cm* The length of the column is decided by theresolution required, (the resolution of twoseparated zones in gel filtration increases as thesquare root of column length) and the diameter bythe sample size.* The effective bed height can be increased byrecycling or using columns coupled in series.---------------------------------------------------------------------------------Rec. linear flow rate (Details)=============================================== 2 - 5 cm/h---------------------------------------------------------------------------------Sample volume fractionation (Details)=============================================== 1 - 5 % of bed volume.---------------------------------------------------------------------------------Solvent regain (Details)=============================================== Distilled water 9 - 11 ml/g.---------------------------------------------------------------------------------Storage of unused material (Details)=============================================== 4 - 25°C, dry.---------------------------------------------------------------------------------Storage of used material (Details)=============================================== 4 - 8°C, pH 6 - 8, do not freeze.Bacteriostatic agent (e.g. 20 % ethanol, 0.04 % sodium azide). Storage of column:1. Wash with 0.04 % sodium azide.2. Put a stop screw into a bottom tubing of thecolumn and insert the tubing from the adaptor ina Parafilm â protected vessel (e.g. test tube)with 20 % ethanol.---------------------------------------------------------------------------------Swelling dry gel (Details)=============================================== Swelling time: 72 h at 20°C or 5 h at 90°C.1. Weigh out the appropriate amount of dry gel forthe required bed volume.(Approx. bed volume: 15 - 20 ml/g dry gel.)2. Add enough buffer to equal the total volume ofthe column plus 30 % more.3. Stir - excessive stirring should be avoided as itmay break the beads.DO NOT USE MAGNETIC STIRRERS!!!!!The process is accelerated by using a boilingwater bath, which also serves to deaerate thebuffer.4. Decant the supernatant (after complete swelling).5. Add back buffer to make a suspension.This should be fairly thick, (about 75 % settledgel) and de-gassed.---------------------------------------------------------------------------------Swelling of dry material (Details)=============================================== Dimethyl sulphoxide 45 ml/gDistilled water 15 - 20 ml/gSaline 19 ml/g---------------------------------------------------------------------------------Temperature stability (Details)===============================================120°C.Dry gel should not be heated to more than 120°C as it will caramelize. ---------------------------------------------------------------------------------Toxicity data (Details)===============================================We do not have any toxicity data for our gels.They are intended for in vitro use only.---------------------------------------------------------------------------------2-chloroethanol 30 % (Stability)===============================================Should be OK.---------------------------------------------------------------------------------2-mercaptoethanol 0.1 M (Stability)===============================================OKOK 60 min, 60°C.---------------------------------------------------------------------------------Acetic acid 50% (Stability)===============================================Not recommended.Degradation of the gel."It seems probable that solubilization of the morehighly cross-linked gels (than Sephadex G-150) bystrong formic and acetic acids also occurs but hasescaped notice, because the most commonly appliedprocedures for examining peptide containing eluentswould not have detected the presence of thecarbohydrate."---------------------------------------------------------------------------------Acetic acid 1 M (Stability)===============================================OKOK equilibration/elution.---------------------------------------------------------------------------------Alkaline solutions (Stability)===============================================OK---------------------------------------------------------------------------------Aqueous salt solutions (Stability)=============================================== OK---------------------------------------------------------------------------------Brij 58 16 mg/ml (Stability)=============================================== Should be OK.---------------------------------------------------------------------------------CHAPS 30 mM (Stability)=============================================== OKOK for equilibration/elution.---------------------------------------------------------------------------------Chloroform/methanol (3:1) (Stability)=============================================== OKOK for equilibration/elution.---------------------------------------------------------------------------------Dextranase (Stability)=============================================== Should be avoided.---------------------------------------------------------------------------------Dimethyl sulphoxide (Stability)=============================================== OKOK for equilibration/elution.---------------------------------------------------------------------------------Dithiothreitol 1 mM (Stability)=============================================== Should be OK.---------------------------------------------------------------------------------Empigen BB 1 % (Stability)=============================================== Should be OK.---------------------------------------------------------------------------------Formamide 14 M (Stability)=============================================== Should be OK.---------------------------------------------------------------------------------Formic acid 10% (Stability)=============================================== OKOK equilibration/elution.---------------------------------------------------------------------------------Formic acid 50 % (Stability)=============================================== Use with care.Conflicting reports.1. OK for equilibration/elution.2. Degradation of the gel."It seems probable that solubilization of the morehighly cross-linked gels (than Sephadex G-150) bystrong formic and acetic acids also occurs but hasescaped notice, because the most commonly appliedprocedures for examining peptide, containing eluentswould not have detected the presence of the carbo-hydrate."---------------------------------------------------------------------------------Glucose 0.1 M (Stability)=============================================== OKOK elution.---------------------------------------------------------------------------------Glycine-HCl 0.1 M pH 1.0 (Stability)=============================================== OKOK elution.---------------------------------------------------------------------------------Guanidine hydrochloride 6 M (Stability)=============================================== OKOK equilibration/elution.---------------------------------------------------------------------------------Hydrazine 80 % (Stability)=============================================== Should be OK.---------------------------------------------------------------------------------Hydrochloric acid 0.02 M (Stability)=============================================== OKThe gel was well soaked in the cold room in 0.02 M HCl.---------------------------------------------------------------------------------Methanol 50% (Stability)=============================================== OKOK elution.---------------------------------------------------------------------------------Organic solvents (Stability)=============================================== OK---------------------------------------------------------------------------------Oxidizing agents (Stability)=============================================== Should be avoided.---------------------------------------------------------------------------------Piperidine 1 M (Stability)=============================================== Should be OK.---------------------------------------------------------------------------------Propionic acid 1 M (Stability)=============================================== OKOK equilibration/elution.---------------------------------------------------------------------------------Sodium cholate 15 mM (Stability)=============================================== OKOK for equilibration/elution.---------------------------------------------------------------------------------Sodium deoxycholate 16 mg/ml (Stability)=============================================== Should be OK.---------------------------------------------------------------------------------Sodium dodecyl sulphate 3 % (Stability)=============================================== Should be OK.---------------------------------------------------------------------------------Strong acids (Stability)=============================================== Should be avoided.---------------------------------------------------------------------------------Triton X-100 30 mM (Stability)=============================================== OKOK for equilibration/elution.---------------------------------------------------------------------------------Urea 8 M (Stability)=============================================== OKOK equilibration/elution.---------------------------------------------------------------------------------Weakly acidic solutions (Stability)=============================================== OK---------------------------------------------------------------------------------。
葡聚糖凝胶G说明书
南京森贝伽生物科技有限公司葡聚糖凝胶不同规格型号的葡聚糖用英文字母G表示，G后面的阿拉伯数为凝胶得水值的10倍。
例如，G-25为每克凝胶膨胀时吸水2.5克，同样G-200为每克干胶吸水20克。
交联葡聚糖凝胶的种类有G-10、G-15、G-25、G-50、G-75、G-100、G-150、和G-200。
因此，“G”反映，凝胶的交联程度，膨胀程度及分布范围。
实验：葡聚糖凝胶层析【实验目的】1.掌握葡聚糖凝胶的特性及凝胶层析的原理。
2．学习葡聚糖凝胶层析的基本操作技术。
【实验原理】凝胶层析又称分子排阻层析或凝胶过滤，是以被分离物质的分子量差异为基础的一种层析分离技术，这一技术为纯化蛋白质等生物大分子提供了一种非常温和的分离方法。
层析的固定相载体是凝胶颗粒，目前应用较广的是：具有各种孔径范围的葡聚糖凝胶（Sephadex）和琼脂糖凝胶（Sepharose）。
葡聚糖凝胶层析，是使待分离物质通过葡聚糖凝胶层析柱，各个组分由于分子量不相同，在凝胶柱上受到的阻滞作用不同，而在层析柱中以不同的速度移动。
分子量大于允许进入凝胶网孔范围的物质完全被凝胶排阻，不能进入凝胶颗粒内部，阻滞作用小，随着溶剂在凝胶颗粒之间流动，因此流程短，而先流出层析柱；分子量小的物质可完全进入凝胶颗粒的网孔内，阻滞作用大，流程延长，而最后从层析柱中流出。
若被分离物的分子量介于完全排阻和完全进入网孔物质的分子量之间，则在两者之间从柱中流出，由此就可以达到分离目的。
本实验以葡聚糖凝胶G—25作为固定相载体，来分离蓝色葡聚糖—2000和溴酚蓝。
蓝色葡聚糖—2000分子量接近2×106，而溴酚蓝分子量为670，二者分子量相差较大，前者完全排阻，而后者则可完全进入凝胶颗粒网孔内，二者通过层析柱的时间不同而分开。
【实验材料】1.实验器材层析柱(1×20cm)附有一小段乳胶管及螺旋夹；洗脱液瓶(带下口的三角瓶，250m1)；试管及试管架；量筒10m1；721型分光光度计2.实验试剂(1) Tris—醋酸缓冲液(pH7.0):南京森贝伽生物科技有限公司取0.0lmol/L Tris溶液(含0.1mol/L KCl)900ml，用浓醋酸调pH至7.0，加蒸馏水至1000m1。
葡聚糖凝胶Sephadex-G100使用说明书
葡聚糖凝胶Sephadex-G100使用说明书SEPHADEX G-100 100 GArticle No: 17006001General Product Information====================================== =========ORDERINGPack size Code No.100 g 17-0060-01500 g 17-0060-025 kg 17-0060-0340 kg 17-0060-07¤ Thousands of documented applications.¤ Proven reproducibility.¤ Excellent recoveries.¤ Economical.---------------------------------------------------------------------------------Application area (Details) ========================================= ======* Fractionation and purification of proteins andpeptides.* Determination of molecular weights.* Determination of equilibrium constants.---------------------------------------------------------------------------------Autoclaving (Details) ========================================= ======In wet form (pH 7), at 120°C for 30 min.---------------------------------------------------------------------------------Calibration (Details) ========================================= ======Proteins: Use LMW Gel Filtration Calibration Kit.---------------------------------------------------------------------------------Checking the column packing (Details)====================================== =========1. Run Blue Dextran at 2 mg/ml.2. Watch the progress of a zone of this substancethrough the bed:You should see a discrete horizontal bandtravelling through the column.If not:A. The problem could be caused by dirty filters.Generated at:12/09/2002 05:45:57 PMB. More likely:An uneven bed surface or uneven packing isresponsible, in which case the column must berepacked.---------------------------------------------------------------------------------Choice of eluent (Details)====================================== =========* Eluent composition does not directly influence theresolution which can be obtained:A. Completely uncharged substances may be elutedwith distilled water.B. For substances carrying charged groups an eluentcontaining a buffer e.g. Tris-HCl, sodiumphosphate is used to control pH, and an ionicstrength of at least 0.02 is recommended tosafeguard against possible ionic interactionswith the gel matrix. NaCl can be used for thispurpose.* For the product that is to be lyophilized:Use volatile buffers e.g. ammonium acetate,ammonium bicarbonate or ethylenediamine acetate.---------------------------------------------------------------------------------Cleaning (Details)====================================== =========* Wash through 2 column volumes of a non-ionicdetergent solution.* Wash with 0.2 M NaOH outside the column due toswelling.---------------------------------------------------------------------------------Colour (Details)====================================== =========White.---------------------------------------------------------------------------------Column packing (Details)====================================== =========The gel suspension should reach the temperature of column operation before packing is begun.1. Inject eluent buffer into the outlet tubing untilit passes through the bed support net.2. Close the outlet tubing, when the dead space underthe net is properly filled.3. Pour the entire slurry into the column in a singleoperation. (Use reservoir if necessary.)4. Open the outlet valve.5. Start the pump or gravity flow to initiatepacking. The column should be packed at as highpressure as possible without deforming beads.The pressure should not be increased beyond 9.6kPa (value for 2.6 x 30 cm column in aqueousbuffer at room temperature. It may vary dependingon eluent viscosity. With wider columns, slightlyreduced maximum operating pressures must be used.)6. Remove the reservoir when all the gel hassedimented into the column.7. Insert the adaptor.8. Pack at the maximum operating pressure of the gel.9. Adjust the flow adaptor to the surface of thegel bed when the gel is thoroughly packed into thecolumn.---------------------------------------------------------------------------------Composition of the gel matrix (Details)====================================== =========Dextran, cross-linked with epichlorohydrin.Sephadex contains a small number of carboxyl groups, which at low ionic strength cause interaction between charged solutes and the matrix.---------------------------------------------------------------------------------Density (Details)====================================== =========We do not measure density.---------------------------------------------------------------------------------Equilibration (Details)====================================== =========1. Pass 2 to 3 column volumes of the aqueous bufferto be used in the separation.2. Readjust the flow adaptor to the surface of thebed.---------------------------------------------------------------------------------Exclusion limit (Details)====================================== =========Dextrans95 kDBuffer solution: Phosphate buffer 0.05 M- NaCl 0.15 M - NaN3 0.01% pH 7.0.-----Globular proteins210 kDBuffer solution: Phosphate buffer 0.05 M- NaCl 0.15 M - NaN3 0.01% pH 7.0.---------------------------------------------------------------------------------Expected shelf life (Details)====================================== =========8 years.---------------------------------------------------------------------------------Form as supplied (Details)====================================== =========Dry powder.---------------------------------------------------------------------------------Fractionation range (Details)====================================== ========= Dextrans1 kD - 100 kDBuffer solution: Phosphate buffer 0.05 M- NaCl 0.15 M - NaN3 0.01% pH 7.0.-----Globular proteins2 kD - 120 kDBuffer solution: Phosphate buffer 0.05 M- NaCl 0.15 M - NaN3 0.01% pH 7.0.-----Peptides2 kD - 120 kDBuffer solution: Info not available.---------------------------------------------------------------------------------Major separation mechanism (Details)====================================== ========= According to size.---------------------------------------------------------------------------------Max. linear flow rate (Details)====================================== =========50 cm/h.Values may vary depending on column packing and eluent viscosity.---------------------------------------------------------------------------------Max. operating pressure (Details)====================================== =========9.6 kPaValue for 2.6 x 30 cm column, in aqueous buffer at room temperature. Values may vary depending on column packing and eluent viscosity.---------------------------------------------------------------------------------Max. volumetric flow rate (Details)====================================== =========4.2 ml/minValue for 2.6 x 30 cm column, in aqueous buffer at room temperature. Values may vary depending on column packing and eluent viscosity.---------------------------------------------------------------------------------Optimisation (Details)====================================== =========* Parameters to change are:A. Sample volume.- A smaller sample volume gives betterresolution.B. Flow rate.¤ Lower flow rate gives better resolution forhigh molecular weight components.¤ The opposite may be true for small componentssince they diffuse more quickly.- The longer the separation time is, the widerthe sample zones become.C. Column length.¤ The resolution of two separated zonesincreases as the square root of the columnlength.¤ The effective bed height can be increased by:- Recycling.- Coupling two columns in series.* Buffer choice and pH are normally of minorimportance.---------------------------------------------------------------------------------pH stability; operational (Details)====================================== ========= 2 - 10---------------------------------------------------------------------------------Range of dry bead size (Details)====================================== ========= 40 - 120 μm---------------------------------------------------------------------------------Range of wet bead size (Details)====================================== ========= 100 μm - 310 μm---------------------------------------------------------------------------------Rec. column (Details)====================================== ========= Long, narrow column e.g. C 16, 26 / 40 - 100 cm XK 16, 26 / 40 - 100 cm* The length of the column is decided by theresolution required, (the resolution of twoseparated zones in gel filtration increases as thesquare root of column length) and the diameter bythe sample size.* The effective bed height can be increased byrecycling or using columns coupled in series.---------------------------------------------------------------------------------Rec. linear flow rate (Details)====================================== ========= 2 - 5 cm/h---------------------------------------------------------------------------------Sample volume fractionation (Details)====================================== ========= 1 - 5 % of bed volume.---------------------------------------------------------------------------------Solvent regain (Details)====================================== ========= Distilled water 9 - 11 ml/g.---------------------------------------------------------------------------------Storage of unused material (Details)====================================== ========= 4 - 25°C, dry.---------------------------------------------------------------------------------Storage of used material (Details)====================================== ========= 4 - 8°C, pH 6 - 8, do not freeze.Bacteriostatic agent (e.g. 20 % ethanol, 0.04 % sodium azide). Storage of column:1. Wash with 0.04 % sodium azide.2. Put a stop screw into a bottom tubing of thecolumn and insert the tubing from the adaptor ina Parafilm a protected vessel (e.g. test tube)with 20 % ethanol.---------------------------------------------------------------------------------Swelling dry gel (Details)====================================== ========= Swelling time: 72 h at 20°C or 5 h at 90°C.1. Weigh out the appropriate amount of dry gel forthe required bed volume.(Approx. bed volume: 15 - 20 ml/g dry gel.)2. Add enough buffer to equal the total volume ofthe column plus 30 % more.3. Stir - excessive stirring should be avoided as itmay break the beads.DO NOT USE MAGNETIC STIRRERSThe process is accelerated by using a boilingwater bath, which also serves to deaerate thebuffer.4. Decant the supernatant (after complete swelling).5. Add back buffer to make a suspension.This should be fairly thick, (about 75 % settledgel) and de-gassed.---------------------------------------------------------------------------------Swelling of dry material (Details)====================================== ========= Dimethyl sulphoxide 45 ml/gDistilled water 15 - 20 ml/gSaline 19 ml/g---------------------------------------------------------------------------------Temperature stability (Details)====================================== =========120°C.Dry gel should not be heated to more than 120°C as it will caramelize. ---------------------------------------------------------------------------------Toxicity data (Details)====================================== =========We do not have any toxicity data for our gels.They are intended for in vitro use only.---------------------------------------------------------------------------------2-chloroethanol 30 % (Stability)====================================== =========Should be OK.---------------------------------------------------------------------------------2-mercaptoethanol 0.1 M (Stability)====================================== =========OKOK 60 min, 60°C.---------------------------------------------------------------------------------Acetic acid 50% (Stability)===============================================Not recommended.Degradation of the gel."It seems probable that solubilization of the morehighly cross-linked gels (than Sephadex G-150) bystrong formic and acetic acids also occurs but hasescaped notice, because the most commonly appliedprocedures for examining peptide containing eluentswould not have detected the presence of thecarbohydrate."---------------------------------------------------------------------------------Acetic acid 1 M (Stability)====================================== =========OKOK equilibration/elution.---------------------------------------------------------------------------------Alkaline solutions (Stability)====================================== =========OK---------------------------------------------------------------------------------Aqueous salt solutions (Stability)====================================== ========= OK---------------------------------------------------------------------------------Brij 58 16 mg/ml (Stability)====================================== ========= Should be OK.---------------------------------------------------------------------------------CHAPS 30 mM (Stability)====================================== ========= OKOK for equilibration/elution.---------------------------------------------------------------------------------Chloroform/methanol (3:1) (Stability)====================================== ========= OKOK for equilibration/elution.---------------------------------------------------------------------------------Dextranase (Stability)====================================== ========= Should be avoided.---------------------------------------------------------------------------------Dimethyl sulphoxide (Stability)====================================== ========= OKOK for equilibration/elution.---------------------------------------------------------------------------------Dithiothreitol 1 mM (Stability)====================================== ========= Should be OK.---------------------------------------------------------------------------------Empigen BB 1 % (Stability)====================================== ========= Should be OK.---------------------------------------------------------------------------------Formamide 14 M (Stability)====================================== ========= Should be OK.---------------------------------------------------------------------------------Formic acid 10% (Stability)====================================== ========= OKOK equilibration/elution.---------------------------------------------------------------------------------Formic acid 50 % (Stability)====================================== ========= Use with care.Conflicting reports.1. OK for equilibration/elution.2. Degradation of the gel."It seems probable that solubilization of the morehighly cross-linked gels (than Sephadex G-150) bystrong formic and acetic acids also occurs but hasescaped notice, because the most commonly appliedprocedures for examining peptide, containing eluentswould not have detected the presence of the carbo-hydrate."---------------------------------------------------------------------------------Glucose 0.1 M (Stability)====================================== ========= OKOK elution.---------------------------------------------------------------------------------Glycine-HCl 0.1 M pH 1.0 (Stability)====================================== ========= OKOK elution.---------------------------------------------------------------------------------Guanidine hydrochloride 6 M (Stability)====================================== ========= OKOK equilibration/elution.---------------------------------------------------------------------------------Hydrazine 80 % (Stability)====================================== ========= Should be OK.---------------------------------------------------------------------------------Hydrochloric acid 0.02 M (Stability)====================================== ========= OKThe gel was well soaked in the cold room in 0.02 M HCl.---------------------------------------------------------------------------------Methanol 50% (Stability)====================================== ========= OKOK elution.---------------------------------------------------------------------------------Organic solvents (Stability)====================================== ========= OK---------------------------------------------------------------------------------Oxidizing agents (Stability)====================================== ========= Should be avoided.---------------------------------------------------------------------------------Piperidine 1 M (Stability)====================================== ========= Should be OK.---------------------------------------------------------------------------------Propionic acid 1 M (Stability)====================================== ========= OKOK equilibration/elution.---------------------------------------------------------------------------------Sodium cholate 15 mM (Stability)====================================== ========= OKOK for equilibration/elution.---------------------------------------------------------------------------------Sodium deoxycholate 16 mg/ml (Stability) ====================================== ========= Should be OK.---------------------------------------------------------------------------------Sodium dodecyl sulphate 3 % (Stability) ====================================== ========= Should be OK.---------------------------------------------------------------------------------Strong acids (Stability)====================================== ========= Should be avoided.---------------------------------------------------------------------------------Triton X-100 30 mM (Stability)====================================== ========= OKOK for equilibration/elution.---------------------------------------------------------------------------------Urea 8 M (Stability)====================================== ========= OKOK equilibration/elution.---------------------------------------------------------------------------------Weakly acidic solutions (Stability)====================================== ========= OK---------------------------------------------------------------------------------。
Sephadex LH-20使用说明
技术文章Sephadex LH-20使用说明Sephadex LH-20使用说明1 Sephadex G型葡聚糖凝胶只适合在水中使用，SephadexG-25羟丙化后就是SephadexLH-20。
其既有分子筛作用，在由极性与非极性溶剂组成的溶剂中还有反相层析效果。
虽然价位很高，但由于性能颇佳，可再生利用，所以倍受亲睐。
此外上柱样品损失很少，对处理小样品较好，这也是实验室常用的原因之一。
2Sephadex LH20的原理。
SephadexLH20的分离原理主要有两方面：以凝胶过滤作用为主，兼具反相分配的作用（在反相溶剂中）。
因为凝胶过滤作用，所以大分子的化合物保留弱，先被洗脱下来，小分子的化合物保留强，最后出柱。
如果使用反相溶剂洗脱，SephadexLH20对化合物还起反相分配的作用，所以极性大的化合物保留弱，先被洗脱下来，极性小的化合物保留强，后出柱。
如果使用正相溶剂洗脱，这主要靠凝胶过滤作用来分离。
3Sephadex LH20洗脱溶剂。
SephadexLH20洗脱溶剂因分为两类：反相和正相两种。
用得最多的是反相溶剂洗脱，以甲醇－－水系统最为常见，先用水，逐渐增加甲醇比例，最后用100％甲醇冲柱。
正相系统以氯仿－－甲醇最为常见，先用50％氯仿－－甲醇，逐渐增加甲醇比例，最后用100％甲醇冲柱。
4Sephadex LH20样品的处理和洗脱溶剂的选择。
如果样品极性大，这选用反相溶剂洗脱（甲醇－水），样品用最少体积的甲醇－水（尽可能甲醇少一些）溶解，过滤后，湿法上样（一定要滤！要是把Sephadex LH20堵啦，就得将SephadexLH20的柱头部分弃去）。
如果样品极性小，这选用正相溶剂洗脱（氯仿－甲醇），样品用最少体积的氯仿－甲醇溶解，过滤后，湿法上样。
5Sephadex LH-20的步骤。
(1)选择条件：梯度洗脱在Sephadex使用中并不象在正相柱层析中那么重要。
首先你的样品须要能溶解在尽量少量的洗脱剂中。
葡聚糖凝胶柱使用及注意事项
葡聚糖凝胶柱使用及注意事项1 Sephadex G型葡聚糖凝胶只适合在水中使用，Sephadex G-25羟丙化后就是Sephadex LH-20。
其既有分子筛作用，在由极性与非极性溶剂组成的溶剂中还有反相层析效果。
虽然价位很高，但由于性能颇佳，可再生利用，所以倍受亲睐。
此外上柱样品损失很少，对处理小样品较好，这也是我们实验室常用的原因之一。
2 Sephadex LH20 的原理。
Sephadex LH20的分离原理主要有两方面：以凝胶过滤作用为主，兼具反相分配的作用（在反相溶剂中）。
因为凝胶过滤作用，所以大分子的化合物保留弱，先被洗脱下来，小分子的化合物保留强，最后出柱。
如果使用反相溶剂洗脱，Sephadex LH20对化合物还起反相分配的作用，所以极性大的化合物保留弱，先被洗脱下来，极性小的化合物保留强，后出柱。
如果使用正相溶剂洗脱，这主要靠凝胶过滤作用来分离。
3 Sephadex LH20 洗脱溶剂。
看完第2点后，就应该清楚Sephadex LH20 洗脱溶剂因分为两类：反相和正相两种。
用得最多的是反相溶剂洗脱，以甲醇－－水系统最为常见，先用水，逐渐增加甲醇比例，最后用100％甲醇冲柱。
正相系统以氯仿－－甲醇最为常见，先用50％氯仿－－甲醇，逐渐增加甲醇比例，最后用100％甲醇冲柱。
4 Sephadex LH20 样品的处理和洗脱溶剂的选择。
如果样品极性大，这选用反相溶剂洗脱（甲醇－－水），样品用最少体积的甲醇－－水（尽可能甲醇少一些）溶解，过滤后，湿法上样（一定要滤喔！要是把Sephadex LH20 堵啦，就得将Sephadex LH20 的柱头部分弃去，很心痛呀）。
如果样品极性小，这选用正相溶剂洗脱（氯仿－－甲醇），样品用最少体积的氯仿－－甲醇溶解，过滤后，湿法上样。
5 Sephadex LH-20的步骤。
(1) 选择条件：梯度洗脱在Sephadex使用中并不象在正相柱层析中那么重要。
葡聚糖凝胶柱使用及注意事项(包含各种溶剂的溶胀系数)
(1)选择条件：
梯度洗脱在Sephadex使用中并不象在正相柱层析中那么重要。首先你的样品须要能溶解在尽量少量的洗脱剂中。极性在的用甲醇水系统;极性小者一般用不含水的系统。我们实验室常用正己烷二氯甲烷甲醇系统，用了很多年，效果较好。
(2)饱和层析柱：
用洗脱剂将凝胶摇匀，直立柱身，让其自然沉降，此时要防止气泡留在其中。至少半小时打开开关，流出几个柱体种的洗脱剂，目的是使其膨胀在正确比例的洗脱剂中。
Tetrahydrofuran四氢呋喃3.3～3.6
Dioxane二氧杂环已烷3.2～3.5
Acetone丙酮2.4～2.6
Acetonitrile***乙腈2.2～2.4
Carbon tetrachloride四氯化碳1.8～2.2
Benzene苯1.6～2.0
Ethyl acetate乙酸乙酯1.6～1.8
(3)样品处理：用尽量少的洗脱剂溶解样品，常压过滤。
(4)湿法上柱。这也是要有技巧的步骤。
(5)洗脱：控制流速，一般1drop/s以下，可参见厂家的一些参数;必要时更改极性（很多时一个极性就可以将样品洗脱完毕）。
再生以备下次使用。
6分离的技巧，最后说说我的使用心得
（1）流速不可太快，切切不可新急，所谓欲速则不达。
2 Sephadex LH20的原理。
Sephadex LH20的分离原理主要有两方面：以凝胶过滤作用为主，兼具反相分配的作用（在反相溶剂中）。因为凝胶过滤作用，所以大分子的化合物保留弱，先被洗脱下来，小分子的化合物保留强，最后出柱。如果使用反相溶剂洗脱，Sephadex LH20对化合物还起反相分配的作用，所以极性大的化合物保留弱，先被洗脱下来，极性小的化合物保留强，后出柱。如果使用正相溶剂洗脱，这主要靠凝胶过滤作用来分离。
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葡聚糖凝胶使用说明
Sephadex Gel Manuals
1化学和物理性质
葡聚糖凝胶是一种珠状的凝胶，含有大量的羟基，很容易在水中和电解质溶液中溶胀。
G型的葡聚糖凝胶有各种不同的交联度，因此它们的溶胀度和分级分离范围也有所不同。
葡聚糖凝胶的溶胀度基本上不因盐和洗涤剂的存在而受影响。
葡聚糖凝胶有不同的粒度。
超细级的葡聚糖凝胶是用于需要极高分辨率的柱色谱和薄层色谱。
粗级和中级的凝胶用于制备性色谱过程，可在较低的压力下获得较高的流速。
另外，粗级也可用于批量工艺。
1.1化学稳定性
葡聚糖凝胶不溶于一切溶剂（除非它被化学降解）。
它在水、盐溶液、碱和弱酸性溶液中都是稳定的，在强酸中凝胶骨架的糖苷键被水解。
长期接触氧化剂将破坏凝胶，因而应避免使用。
1.2物理稳定性
葡聚糖凝胶并不熔融，可以在湿态、中性PH进行灭菌。
干态的凝胶加热至120℃以上将开始焦糖化。
葡聚糖凝胶的机械强度取决于交联度。
2产品说明
名称分离范围（球蛋白）应用
葡聚糖凝胶G-10<700缓冲液交换、脱盐，分离小分子，去除小分子
葡聚糖凝胶G-15<1500缓冲液交换、脱盐，分离小分子，去除小分子
葡聚糖凝胶G-251000-5000工业上脱盐及交换缓冲液
葡聚糖凝胶G-501000-30000多肽分离、脱盐、清洗生物提取液、分子量测定
葡聚糖凝胶G-752000-70000蛋白分离纯化、分子量测定、平衡常数测定
葡聚糖凝胶G-1002000-120000蛋白分离纯化、分子量测定、平衡常数测定
葡聚糖凝胶G-1505000-300000蛋白分离纯化、分子量测定、平衡常数测定
葡聚糖凝胶G-2005000-600000蛋白分离纯化、分子量测定、平衡常数测定
3使用方法
3.1乙醇浸泡
在室温下，将干粉浸泡于50-60%乙醇中至少24小时，并不断搅拌以保证凝胶溶胀，用无盐水洗去残存的乙醇滤干。
3.2无盐水浸泡
室温下，在无盐水中充分溶胀24小时，间隙搅拌，以保证凝胶的完全溶胀。
3.3盐酸浸泡
在常温下再用0.1M HCl浸泡12小时，间隙搅拌，滤干，水洗只中性。
3.4装柱
将溶胀好的凝胶根据装柱要求一次性置入柱内，注意保持湿态装柱，并避免柱内产生气泡或断层。
3.5平衡
上样前平衡层析柱至少3-5个柱体积直到记录仪基线变得平稳为止（流出液的PH值等于上柱的Buffer的PH值）。
3.6上样
凝胶过滤的上样量一般为5%的柱床体积，我们建议初次上样控制在1-2%的床体积，视分离情况可以调整；脱盐时上样量可以达到20%的柱床体积，柱高的选择也与分离要求相关，柱高控制在40-50cm以下，过高的凝胶层会引起较大的反压，应当尽可能避免。
难分离物质要有一定柱高和流速控制，脱盐时高径比为5：1即可。
3.7洗脱方法
可以用无盐水，也可以采用上柱时的缓冲液洗脱；在上柱Buffer中加入NaCl等梯度洗脱或盐梯度洗脱也可以完全分离纯化。
3.8清洗
每次用完之后，将柱子里的缓冲液置换为去离子水，然后用20%的乙醇封存。
3.9在位清洗（CIP）
凝胶使用十次后作一次CIP，目的是去除柱床内沉淀的及顽固残留的蛋白。
方法是以40cm/h用0.1M氢氧化钠反向洗四个柱体积，再以至少三个柱体积平衡缓冲液再生。
特别注意：
上样之前，样品至少用0.45微米膜过滤，尽量去除色素，否则色素会被吸附到填料上，影响填料的正常使用。
在使用过程中，不能使用强酸强碱，酸和碱的浓度应低于0.15摩尔。