显微镜及制片技术

（二).显微镜的类型
显微镜可分为光学显微镜和电子显微镜
光学显微镜以可见光作为光源,用玻璃制
作透镜的显微镜.其有效放大倍数可达1250倍, 最高分辨力为0.2微米.
电子显微镜使用电子束作光源的一类显
微镜,以特殊的电极和磁极作为透镜代替玻璃 透镜,能分辨相距0.2左右的物体放大倍数可80 -120万倍
目的与要求
1、了解显微镜的构造及维护。 2、初步掌握使用显微镜地方法。 3、了解光学显微镜的主要类型. 4、了解普通显微镜的成像原理及光路图
材料和仪器
生物显微镜，测微尺，“E”字 玻片标本，香柏油等
实验内容
一、显微镜
二、植物制片技术 三、绘图法
一、显微镜
（一）.显微镜成像原理 （二).显微镜的类型 (三).显微镜的构造
3.油镜的使用.
（1）先从低倍油镜找到被检部分后,再换高倍镜调整 焦点,然后再换用油浸镜头. （2）在换用油镜前在盖玻片上滴加一滴香波油，在 油镜观察标本时，用细调焦螺旋调节焦点。 （3）油镜使用完毕，需立即擦净，擦拭方法是用棉 棒或擦镜纸蘸少许清洁剂（乙醇或无水酒精的混合物， 最好不用二甲苯，以免侵入镜头后使树胶溶化，透镜 松散）
10X4 低倍观察 10X10 中倍观察
10X40 高倍观察
10X100 油镜
暗视野显微镜特点是该显微镜具有暗视野聚
光器，使光线不直接进人物镜，故呈暗视野。 暗视野 Dark field microscope 根据Tyndall 效应原理设计， 在黑背景下观察物体的外部 细节，分辨率高该显微镜适用于观察细胞内微 小颗粒，例如线粒体、细菌运动等。
使标本中的结构清晰可辨。
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电子显微镜
使用电子束作光源的年一类显微镜,以特殊的电极和磁极 作为透镜代替玻璃透镜,能分辨相距0.2左右的物体放大倍数可 80-120万倍。
透射电镜是以电子束透过样品经过聚焦与放大后所产生的 物像， 投射到荧光屏上或照相底片上进行观察。透射电镜的分辨 率为0.1～0.2nm，放大倍数为几万～几十万倍。 点击看图 扫描电镜是用极细的电子束在样品表面扫描，将产生 的二次电子用特制的探测器收集，形成电信号运送到显像管， 在荧光屏上显示物体。（细胞、组织）表面的立体构像，可 摄制成照片。 点击看图
临界照明：光源经扣光镜后哦汇聚在被检物体， 光束狭而强，这是它的优点，但是光源的灯丝像与 被检物体的平面重合，这样就造成被检物体的照明 呈现出不均匀性，在有灯丝的部分则明亮，无灯丝 的部分则暗淡，不仅影响成像质量，更不适于显微 照相。
柯拉照明：照明光路中的光学组件包括光源、集 光器、视场光栏、孔径光栏、聚光器和物台。在柯 拉照明光路中，在集光器透镜两侧，灯丝和孔径光 栏位一对共轭面，灯丝的像成在孔径光栏的平面上。 在聚光器透镜两侧，视场光栏和物台为一对共轭面， 视场光栏的像呈现在舞台上，因此柯拉照明比临界 照明要优越。一是照明均匀。二是通过调节视场光 栏的大小和位置可以可以控制标本平面上照明区域 的大小和位置。
（六）.测微尺的使用
台式测微尺
目镜测微尺
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1。 将目镜测量尺（目尺）刻度向下装在目镜内。将镜 台测量尺（台尺）安置在载物台上，调焦使台尺上的标尺分 度清晰。使台尺与目尺上的标尺在“0”刻度上对齐。
4、显微镜使用后整理
观察完毕升高镜筒取下玻片，再转 动物镜转换器，使两个物镜位于载物台
上通光孔的两侧，罩上防尘罩。
（五）.放大率
1.显微镜总放大率 =物镜的放大倍数×目镜的放大倍数 2。显微镜的分辨力是主要由镜口率决定 物镜的有效镜口率 =(物镜镜口率+聚光器镜口率)/2 3.目镜光栏所围绕的圆即视野宽度, 视野宽度与放大率成反比 .
光学显微镜
光学显微镜可分为单式显微镜和复式显微 镜。 单式显微镜结构简单,扩大的是方向一致的 虚像. 复式显微镜结构比较复杂,放大倍数较高,包 括普通生物显微镜, 暗视野显微镜, 相差显微 镜, 荧光显微镜等.
单筒复式普通生物显微镜
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普通显微镜 的放大倍数
双筒复式普通生物显微镜
普通生物显微镜的放大倍数
1、低倍镜观察 2、高倍镜的使用 3、油镜的使用 4、显微镜使用后整理
1、低倍镜观察
（ ） 对 Fra Baidu bibliotek 和 放 置 切 片
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（2）调焦
（3）低倍观察:将需观察的材料放到最有利的位
置上,根据材料的颜色厚薄,成像反差再调节,如:视野太亮 可下降聚光器或调小光圈.
2、高倍镜的使用
（1）.选取目标:用低倍镜选取目标,并移至 视野中央,换上高倍镜. （2）.调整焦点:换上高倍镜后视野中即有模 糊图象,调节细准焦螺旋使图象清晰0 （3）.调节亮度,因高倍镜视野较暗需升高聚 光器,或放大光圈
透射电镜
（三）.显微镜的构造
显微镜的基本构 造包括两大部分,光学 系统和机械系统,机械 系统有镜座,镜柱,镜 壁,镜筒,物镜转换器, 载物台,调焦螺旋,聚 光器调节螺旋.光学系 统有物镜,目镜,反光 镜,聚光器,虹彩光圈.
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（四）.使用显微镜的主要步骤和方法
（四）.使用显微镜的主要步骤和方法 （五）.放大率
（六）.测微尺的使用
（一）显微镜的成像原理
1.显微镜的光学原理 2.显微镜的照明原理 （1）临界照明 （2）柯拉照明
1.显微镜的光学原理
被检物AB放在物镜 (O1) 下方的一倍焦距之间， 则在物镜 (O1) 后方形成一个倒立得放大实像，这个 实像正好位于目镜 (O2) 的下焦点之内，通过目镜后 形成一个放大的虚像 A2B2，这个虚像通过调焦装置 使其落在眼睛明视距处，即 25cm ，使所看到的物 体最清晰，也就是虚像A2B2 是在眼睛晶状体的两 倍焦距之外，在眼球后的视网膜形成一个倒立的 A2B2 缩小像A3B3.
荧光显微镜是用以观察细胞及组织内荧光物质的分 布。它是装有、能产生紫外线（短波长）的光源及系列 滤片装置的显微镜。
相差显微镜的特点①装有不同大 小环状光阑的聚光器。②物镜内装有位 相板。③中心望远镜装置。相差显微镜 的基本原理是通过上述装置。把透过标 本的可见光的相位差变成振幅 差，从而 提高了标本内各种结构之间的对比度，