猪细小病毒病灭活疫苗的安全性和抗体消长规律的研究
猪细小病毒研究进展_刘占通（PDF）
猪细小病毒研究进展刘占通王书丽(河南省兽药监察所河南郑州450008)猪细小病毒(P PV)是M ayr和M ahnel于1966年在用猪肾原代细胞进行猪瘟病毒组织培养时发现的112,是引起母猪繁殖障碍的主要病原体之一,其特征是母猪孕前期受到感染,经胎盘使胚胎或胎儿受到侵袭,引起初产母猪流产、胚胎死亡、胎儿畸形、胎儿木乃伊化及不孕等,同时还可引起仔猪的皮炎和腹泻。
各种类型、年龄段的猪均可感染PP V,但除怀孕母猪和仔猪外,其他类型的猪感染后均无明显临床症状12,32。
猪细小病毒病在世界各地广泛存在,严重影响着养猪业的发展,因此本病一直是猪病研究的热点之一,P PV又常同猪伪狂犬病毒、乙型脑炎病毒、圆环病毒、猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒等混合感染而加重了其危害。
自20世纪60年代中期以来,相继从欧洲、美洲、亚洲等很多国家分离到该病毒或检测出其抗体,我国也先后在北京、上海、吉林、黑龙江、四川、浙江等地分离到了多株P PV,血清学调查的阳性率为80%。
近几年来,该病毒给世界养猪业造成了严重的经济损失,因此受到了高度重视,国内外学者对该病毒的研究也逐渐深入。
1猪细小病毒病原学研究1.1形态和理化特性PP V属于细小病毒科、细小病毒属。
P PV外观呈六角形或圆形,无囊膜,直径为20~30nm,二十面体轴立体对称,核衣壳由32个壳粒组成,核心含单股线状负链DN A,核酸约占整个病毒粒子的26.5%,其G+C=48%。
P PV具有较强的耐热能力,适应pH范围极广,pH在3~10范围内,感染性无明显变化。
对酶、脂溶剂及有机溶剂具有很强的抵抗力,但0.5%漂白粉或氢氧化钠5min可杀死P PV,甲醛蒸汽和紫外线需要相当长的时间才能杀死P PV。
病毒培养液在pH9.0的甘油缓冲盐水中或在-20e及-70e以下保存1年以上其感染效价和血凝性都不减弱。
1.2细胞培养特性PP V的复制需要借助宿主细胞的蛋白质和核酸合成体系,因此P PV对培养细胞有一定的选择性。
浅谈猪细小病毒病的防治
2010．07B总第194期浅谈猪细小病毒病的防治山西省柳林县畜牧兽医局高志强摘要详细阐述了猪群中猪细小病毒病的流行特点、痛原特性及病理变化，提出强化生物安全体系建议、引种控制、疫苗接种等诊断和防治措施。
关键词猪细小病毒病病原病理诊断防治doi：l O．3969／j．i ssn．1673—887×．2010．07．016中图分类号$858．28文献标志码A1流行特点及发病机理1．1流行范围广PPV病最早由M ar y和M ahncel于1966年发现。
car t w r i幽t等人在1967年对猪的不孕、流产、死产等进行病原学研究时，首次从病料中分离出了PPV，证明了它的致病作用。
潘雪珠等人于1983年在我周首次分离到PPV。
病毒血清学研究表明，目前PPV只有1个血清型。
近年来，PPV感染呈扩大上升趋势，并呈现出新的流行特点，给养猪业造成了巨大的经济损失。
从1986年至今，我国学者对全国很多省市进行了PPV的流行病学调查和研究。
结果表明全国各地均有PPV的流行，已有文献报道的包括四Ji I、山东、河南、河北、广西、江西、云南和黑龙江等。
1．2猪是猪细小病毒的唯一宿主不同年龄、性另0和品种的家猪、野猪均可感染，常见于初产母猪。
本病多发生于春、夏季或母猪产仔和交配期。
母猪怀孕早期感染时，胚胎、胎猪死亡率可高达80％一100％。
母猪在怀孕期的前30一40d最易感染，孕期不同时间的感染，会分别造成死胎、流产、木乃伊、产弱仔猪和母猪久配不孕等不同症状。
病毒的感染率与动物年龄呈正比。
1．3带毒猪是本病的主要传染源带毒猪分泌物、排泄物及被其污染的饮水、饲料、器具均可引起本病的传播，带毒种公猪通过配种传染给母猪，怀孕母猪也可通过胎盘感染胎儿。
以前认为猪细小病毒病呈散发或地方性流行，因种(母)猪的引进及活猪交易传播，现很多规模猪场及生猪饲养密集区，时有本病发生。
1．4母猪妊娠早期易感母猪在配种后1月内感染猪细小病毒后会引起胎儿死亡，死亡胎儿迅速被吸收，因此母猪产仔数减少并出现假孕返情现象；妊娠中期(30一70d)母猪感染猪细小病毒，表现为部分母猪流产、死产及产木乃伊；妊娠后期(70d以后)母猪感染猪细小病毒，胎儿不仅存活，出生后一般也无异常表现，胎儿大部分产生免疫保护性应答，但这些出生仔猪可能带毒而成为感染源。
猪细小病毒病的研究进展
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１ ２
浙 江畜牧 兽 医
２０ ０ ６年 第 ６期
的卵细胞层看 到细胞碎片。Ｐ Ｖ还能使母猪黄体发 Ｐ 生萎缩 ， 如果怀孕母猪感染 Ｐ Ｖ， Ｐ 则妊娠黄体发生萎
较强的免疫力。Ａ ｉｒ 等将 Ｈ 株在猪肾细胞 上培 ｋｉ ｈｏ Ｔ
如淋巴生发中心 ， 结肠 固有层 等。子宫 内感染 的仔
猪至少可带毒 ９周， 有些具有免疫耐受性 的仔猪可 能终生带毒和排毒。被感染公猪的精细胞 、 精囊 、 附
高其感染效价 ； 只有在来源 于猪的细胞 （ 如原 代猪 肾、 猪睾丸细胞 、 次代猪 肾、 Ｐ ． 、 Ｒ ．、 Ｐ 、 及 Ｋ １ Ｉ Ｓ Ｃ Ｋ ５ Ｂ ２ Ｍ Ｐ 、Ｔ等传代 细胞 ） Ｖ ＫＳ 和人 的某些 传代 细胞 （ 如
在配种后前 ６ ｄ ４ 的各个 阶段经子宫感染胎儿 ， 怀孕 后期则感染胎儿产生抗体。我 国已先后在北 京、 上 海、 黑龙江、 四川和浙江等地分离到病毒和检测到抗 凝涪 ｌ物质 。Ｐ Ｖ基 因编码 的 三种非结构 蛋 白为 生 Ｐ Ｎ １Ｎ ２和 Ｎ ３其 中 Ｎ １ Ｓ 、Ｓ Ｓ， Ｓ 蛋白具有调节 Ｐ Ｖ Ｄ Ａ Ｐ Ｎ 复制作用 ， Ｓ Ｎ ２和 Ｎ ３的功 能 目前 尚不 清楚。Ｐ Ｖ Ｓ Ｐ 的组织嗜性与致病性决定于病毒的基因结构和宿主
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２０ 第 ６期 ０６年
浙 江畜牧兽 医
猪 细小 病毒 病 的研 究进 展
马晓平 余 华 。 （． １ 四川农业大学动物科技学院， 四川雅安 ６ ５ １ ；． ２０４２ 四川省绵阳市畜牧局 ） 中图分类号 ： ５． 文献标识码： 文章编号 ： ０ — ３７２０）６ ０１ — ０ ￥ ８２ ８ ８ Ａ １ ５ ７０（０６０ — ０１ ０４ ０
猪细小病毒病的诊断与防控
疫病防治ＬＩＶＥＳＴＯＣＫＡＮＤＰＯＵＬＴＲＹＩＮＤＵＳＴＲＹＮｏ．４，２０２４猪细小病毒病的诊断与防控丁希军肇庆市动物疫病预防控制中心，广东肇庆５２６０４０摘 要 猪细小病毒病是因猪细小病毒所引发的一种繁殖障碍性疾病，该病在规模化猪场较常见，具有较强的传染性和较快的传播速度，对猪的健康及繁殖影响甚大。
着重对猪细小病毒病的诊断与防控措施展开了深入探析。
关键词 规模猪场；细小病毒病；诊断；防控措施ｄｏｉ：１０．１９５６７／ｊ．ｃｎｋｉ．１００８ ０４１４．２０２４．０４．０２１０ 引言目前养猪业在畜牧经济发展中占据着重要地位，保证养猪业稳定发展意义重大。
近年来，受到引种、环境、营养、疫苗等诸多因素的影响，导致猪细小病毒病的发病率呈现升高趋势，患细小病毒病的猪主要表现为繁殖障碍，如流产、产死胎或畸形胎、公猪不育等，严重阻碍了畜牧经济的增长。
如何有效防控猪细小病毒病的发生成为行业工作者思考的关键问题。
１ 病原学猪细小病毒病的致病原是单股ＤＮＡ病毒属的细小病毒，该病毒直径为２０～２３ｎｍ，形态不一，有椭圆形、圆形、六角形，没有囊膜，对自然环境的适应性和抵抗力非常强，因此能够长期在粪便、土壤、污水中生存，即使在５６℃的高温环境下依然能够存活４８ｈ，但随着温度的升高，猪细小病毒的活性及感染性均会呈现出明显的下降态势。
当温度升高至７０℃时２ｈ就能够让病毒丧失感染性；温度升高至８０℃时５ｍｉｎ病毒即失去活性和感染力。
猪细小病毒病具备较强的抗酸性和碱性能力，在ｐＨ值３～９环境下依然可以生存。
该病毒对紫外线及甲醛蒸汽有一定的抵抗性，需要长时间方可将病毒杀死。
该病毒对氢氧化钠、漂白粉等有较高的敏感性，能够被其快速杀灭。
短时间胰酶处理无法降低病毒感染性，甚至会增强其感染力。
细小病毒对低温环境的适应性也非常强，即使在－２０℃的环境下毒力也不会出现非常明显的变化［１］。
２ 流行特点细小病毒病可发生于任何猪，患病的母猪是该病的主要传染源之一，处于妊娠期的母猪患病后可将病毒经胎盘垂直传播给腹中胎儿，流产母猪所产下的死胎以及胎衣、羊水等，均含有大量病毒，是重要的传染源。
猪细小病毒病的症状 猪细小病毒病的诊治与预防 - 养猪技术
猪细小病毒病的症状猪细小病毒病的诊治与预防-养猪技术猪细小病毒是一种只能在来源于猪的生长分裂旺盛的细胞上增殖，其体外复制是杀细胞性的，细胞病变表现为细胞隆起、变圆、核固缩和溶解，最后许多细胞碎片黏附在一起，使受感染的细胞单层外形不整，呈破布条状。
另外，不同毒株间存在培养温度依赖性差异，从而可以解释不同分离株在猪体内的复制能力和毒力差异的现象。
传染源主要来自感染细小病毒的母猪和带毒的公猪，后备母猪比经产母猪易感染，病毒能通过胎盘垂直传播，感染母猪所产的死胎、仔猪及子宫内的排泄物中均含有很高滴度的病毒，而带毒猪所产的活猪可能带毒、排毒时间很长，甚至终生。
下面就具体来了解一下：猪细小病毒病的症状猪细小病毒病的诊治与预防。
1、患病症状这种病毒主要攻击成年猪的生殖器官及生长旺盛的细胞，如精子，对于胎盘中的仔猪主要攻击仔猪的肝、脏、肺，以及生殖器官，不但具有很强的致命性还有很高的感染性。
患有此种病毒，对于成年猪来说没有什么明显的特征，但过了数个月之后成年猪也会发生明显的特征反应，母猪表现为不孕不育，子宫溃烂，身体不适，严重时会出现死亡。
公猪表现为性欲底下，身体不适，严重将会导致死亡。
对于胎盘中的仔猪，情况比较严重，出现流产，生出死猪、畸形胎、病猪或生理虚弱的仔猪，有些猪在生出不久就夭折，还有出现木乃伊的现象。
只有少数猪在生出之后才能免于一死，幸运存活，绝大多数猪都难逃厄运，给养殖者带来巨大的经济损失。
2、诊断猪患上细小病毒的可能性总会存在，为了及早发现患病猪，应该经常对猪群进行抽样检查，以防病毒在猪群内传播，造成巨大损失。
对猪细小病毒的诊断方法有很多，这里笔者就简单介绍几种经常用到的，主要有血清学诊断包括了血凝试验和血凝抑制试验、血清中和试验、酶联免疫吸附试验、免疫荧光技术、乳胶凝集试验。
分子生物学诊断技术包括了PCR检测技术、核酸探针技术、单克隆抗体技术、基因芯片技术。
这些技术在检测中准确率高，速度快，但是成本相对来说比较高。
猪细小病毒病疫苗有哪些？怎么打？.doc
猪细小病毒病疫苗有哪些？怎么打？概述：猪细小病毒的防治主要以免疫预防为主，在我国主要以疫苗免疫为主。
目前用于防治猪细小病毒的疫苗主要有弱毒活疫苗和灭活疫苗，这两种疫苗使用最为广泛，在世界范围内取得了较好的效果。
当然，除此之外还有基因工程疫苗、油乳剂灭活疫苗、(CP—99)灭活疫苗也是市场上比较常见的，建议根据猪群情况进行选择。
猪细小病毒病疫苗有哪些?1.猪细小病毒灭活疫苗灭活疫苗又称死苗，是将病原体经理化方法灭活后，但仍保持其免疫原性而制成的疫苗。
灭活疫苗具有安全性好，诱导产生抗体时间长，不需要低温保存等优点。
但是灭活疫苗产生抗体慢，不能诱导细胞免疫反应，抗体水平相对活疫苗较低，需重复接种，使用剂量大，费用较高。
PPV灭活疫苗的研究、开发与应用已经历了30余年，目前仍是预防猪细小病毒感染的主要手段。
免疫佐剂是影响PPV灭活疫苗的重要因素，Moliter等比较了14种不同佐剂用于PPV灭活疫苗的效果，结果发现50%氢氧化铝，顺丁烯乙酰(EMA)、油水乳剂及DDA作佐剂的疫苗，均诱导猪产生了高滴度的抗体，而用油佐剂、SDS、L-121、氢氧化铝和油乳剂混合物作佐剂的疫苗产生的抗体滴度均较低。
目前在PPV灭活苗的制备中，经常采用的佐剂是氢氧化铝和油水乳剂。
Mengeling等将通过细胞培养增殖的PPV和PRV，用AEI在37℃灭活后混合，加入10%氢氧化铝制成灭活二联疫苗用于免疫预防试验，结果发现PRV-PPV灭活二联疫苗具有良好的免疫保护作用。
PRV，PPV，和JEV病均是引起母猪繁殖障碍的主要疾病，研制出灭活多联疫苗可以简化免疫程序，降低临床应激反应，适合规模化养猪业的发展趋势。
通过二联苗和单联苗比较试验显示，二联苗与两种单苗免疫产生的抗体水平无显著差异。
多种试验表明两种病毒抗原同时刺激机体没有相互干扰作用。
2.猪细小病毒弱毒疫苗弱毒苗又称活疫苗，经人工致弱而失去对原宿主的致病力，但仍保持良好的免疫原性的病原体，或者用自然弱毒病原体制成的疫苗。
猪细小病毒病毒样颗粒疫苗研究进展_刘运超
河南农业科学，2015，44（10）：12-16Journal of Henan Agricultural Sciencesdoi ：10．15933/j．cnki．1004-3268．2015．10．003收稿日期：2015－05－21基金项目：中国博士后科学基金（2013M541980）；河南省重大科技专项（141100110100）；河南省基础前瞻类项目（20141644）作者简介：刘运超（1982－），男，河南周口人，助理研究员，博士，主要从事动物疫病与疫苗研究。
E －mail ：yunchaoliu2012@163．com*通讯作者：张改平（1960－），男，河南内黄人，研究员，博士，主要从事动物疫病免疫机制与疫苗研究。
E －mail ：zhanggaiping2003@163．com猪细小病毒病毒样颗粒疫苗研究进展刘运超1，陈玉梅1，2，姬鹏超1，赵宝磊3，王聚财3，邓瑞广1，张改平1，3*（1．河南省农业科学院河南省动物免疫学重点实验室/农业部动物免疫学重点实验室，河南郑州450002；2．郑州大学基础医学院，河南郑州450001；3．河南农业大学牧医工程学院，河南郑州450002）摘要：猪细小病毒（PPV ）感染可导致母猪繁殖障碍、断奶仔猪多系统衰弱综合征和肠炎性腹泻等疾病，给养猪业造成巨大的经济损失。
临床防控以接种疫苗为主，常用的疫苗有弱毒疫苗和灭活疫苗。
随着生物技术的发展，新型PPV 疫苗的研究工作成绩显著。
VP2蛋白是PPV 主要的衣壳蛋白，对研究新型PPV 疫苗至关重要，综述了猪细小病毒VP2蛋白及病毒样颗粒疫苗的研究进展，以期为新型PPV 疫苗的研究提供参考。
关键词：猪；猪细小病毒；VLP ；疫苗；VP2蛋白中图分类号：S852．65文献标志码：A 文章编号：1004－3268（2015）10－0012－05Ｒesearch Progress of Virus Like Particles Vaccine Against PPVLIU Yunchao 1，CHEN Yumei 1，2，JI Pengchao 1，ZHAO Baolei 3，WANG Jucai 3，DENG Ｒuiguang 1，ZHANG Gaiping 1，3*（1．Henan Provincial Key Laboratory of Animal Immunology ，Henan Academy of Agricultural Sciences /Key Laboratory of Animal Immunology of the Ministry of Agriculture ，Zhengzhou 450002，China ；2．College of Basic Medical Science ，Zhengzhou University ，Zhengzhou 450001，China ；3．College of Animal Science and Veterinary Medicine ，Henan Agricultural University ，Zhengzhou 450002，China ）Abstract ：Porcine parvovirus （PPV ）is the major causative agent in swine ，which usually causesreproductive failure ，weaned piglets multiple system weak syndrome ，inflammatory diarrhea and otherdiseases ，causing serious economic losses in the swine industry．The vaccination is the most effective method for preventing PPV infection and its complications ，which including attenuated vaccine andinactivated vaccine．With the development of genetic engineering ，the research work of the novel vaccine against PPV has a remarkable progress．The VP2protein is a main target for neutralizing antibodies ，which is very important for the novel vaccine against PPV．This paper reviewed the research progress of parvovirus VP2protein and virus like particles vaccine against PPV ，which would be helpful for the novel vaccine against PPV．Key words ：swine ；porcine parvovirus ；VLP ；vaccine ；VP2猪传染病对我国养猪业危害严重，防治猪传染病对养猪业发展至关重要。
猪细小病毒的症状和治疗防控
猪细小病毒的症状和治疗防控猪细小病毒是一种传染病，会引发母猪繁殖机能的障碍，这个猪病在后期其实没有什么特别明显的症状，就是因为这一点，让很多篇养猪户朋友都吃过大亏。
下面一起学习了解下猪细小病毒的症状以及防控治疗。
猪细小病毒是一种传染病，会引发母猪繁殖机能的障碍，这个猪病在后期其实没有什么特别明显的症状，就是因为这一点，让很多篇养猪户朋友都吃过大亏。
下面一起学习了解下猪细小病毒的症状以及防控治疗。
一、猪细小病毒病临床症状猪细小病毒病可以导致妊娠母猪繁殖异常或者失去繁殖能力。
患病母猪常发生不孕、流产，产死胎、木乃伊胎、畸形胎或者弱胎。
部分妊娠母猪在染病初期会有体温升高，也有可能造成屡配不孕、发情异常等。
未妊娠母猪和公猪感染此病，通常没有明显的临床症状，公猪的精液带毒，不影响受精率。
二、猪细小病毒病的防控和治疗1.免疫接种灭活疫苗有猪细小病毒油乳剂灭活疫苗和猪细小病毒氢氧化铝灭活疫苗。
猪细小病毒油乳剂灭活疫苗肌肉注射，种公猪和母猪要在6月龄和配种前半个月进行接种。
成年公猪和经产母猪每年要接种1次,但是此疫苗不适合妊娠母猪。
氢氧化铝灭活疫苗可在母猪妊娠前几周接种，可以保证妊娠期都有抗体。
初产母猪在6月龄时母源抗体会消失，应在这时接种疫苗。
如果不打算马上配种,可以先不免疫，在7月龄后再进行免疫。
对于发病的猪场，每年要进行2次抗体检测，对抗体浓度低的猪要及时补接疫苗。
2.加强饲养管理猪场按时清扫卫生，定期对猪舍和饲喂用具消毒。
猪场应实行封闭式管理,对来往的人员和车辆进行消毒。
猪场应坚持自繁自养模式，如果必须引种的话,一定要从非疫区引进，而且种猪需要有检疫证明。
新引进来的种猪需要先隔离一段时间，观察无问题后进行合群。
综上所述，猪细小病毒病传播率高、发病广泛，其对养猪业造成的影响巨大，严重影响养猪业效益。
此病暂无特效药,所以免疫接种是最有效的防控手段。
养殖人员应提高防病意识，积极采取措施预防此病，制定合理的消毒计划和免疫计划，降低此病的发病率。
猪细小病毒疫苗研究进展
作者简 介 ：孙海燕 （９ ５ ） 女 ，黑龙 江抚远人 ，硕 士研究生 ，研究方 向为预防兽 医学 。 １７ 一 ，
通 讯 作 者 ：副 教 授 ，硕 士生 导 师 。
２１年第６ 饲料博览 ４９ ０１ Ｍ
和 较强 的免疫 力 Ｉ。杜 坚 等对 分 离 到 的一株 猪 细小
病毒 自然弱毒株进行免疫接种试验证实 ，该弱毒 株具有 良好 的免疫原性和保护力 ，并且不产 生病
收稿 日期 ：２ １－ ２ ２ ０ １０—５
毒株在细胞上连续传 ５ 代 以上致弱的。该毒株 的 ０ Ｖ ２基 因 比 强 毒 株 Ｎ Ｄ 一 Ｐ Ａ Ｌ ８少 ３０ｂ 。 日本 学 者 ０ ｐ
Ｆｊ ａｌ 将 猪 细小 病 毒 野 毒 株 在 猪 肾 细胞 上 低 温 ｕｉ ｋ等 ｓ
３ ０℃ 连续传 ５ 代 ，产生了 Ｈ 变异株 ，该毒株接 ４ Ｔ 种猪后 能诱导产生 高滴度的抗体和较强 的免疫力 ， 并且不产生病毒血症 ，但能诱导产生高滴度的抗体
（ ｎｍ ｌ ｓｉ ｌＮ ｒ ｅｓ Ａ ｒ ｕｔｒｌ ｎｖｒｉ ， ｒｉ １０ ３， ｈｎ ） Ａ ｉ ａ ｐｔ ， ｏｔ ａｔ ｇｉ ｌ ａ ｉｅｓ ｙ Ｈａｂｎ ５０ ０ Ｃ ｉａ Ｈｏ ａ ｈ ｃ ｕ Ｕ ｔ
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猪细小病毒灭活疫苗安全性试验及佐剂的筛选_张超范
第6期
张超范，等. 猪细小病毒灭活疫苗安全性试验及佐剂的筛选
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为了解决这一问题，国内外学者通过实验证实豚鼠 可作为 PPV 疫苗的效检替代动物。Joo 等曾报道豚 鼠和兔子对 PPV 疫苗的血清学反应与猪相似[5]。潘 雪珠等证明了豚鼠对 PPV 灭活疫苗的抗体反应特异 敏感[6]。蒋玉雯等用豚鼠检测 PPV N 株弱毒苗，证 明其敏感性与猪一致[7]。因此，本试验选用成 年豚 鼠作为 PPV 灭活疫苗的效检动物进行 PPV-BQ 株灭 活疫苗的免疫效果比较试验。在 PPV 灭活疫苗研制 过程中，病毒含量与疫苗的免疫效果密切相关；灭 活剂和佐剂的类型同样影响灭活疫苗的免疫效果。 因此，本研究通过改进猪细小病毒的培养方法来提 高病毒含量，通过改进制苗工艺，最大程度降低牛 血清含量来减少灭活疫苗的副反应。制成疫苗以后 进行了大量有关灭活疫苗的动物安全性试验和佐剂 的筛选试验，为研制新型佐剂 PPV 灭活疫苗做了前 期准备工作。
母猪的繁殖障碍，还可与其他病原体协同作用引起 多种疾病，给养猪业造成很大的经济损失 。 [2-4]
猪细小病毒血清型单一、具有较高的免疫原 性 ， 疫 苗 接 种 是 控 制 PPV 感 染 的 有 效 措 施 。 检 测 PPV 疫苗的效力要求使用 PPV 血清学阴性的母猪， 由于其成本高，管理和操作比较费时费力，目前国 内能满足试验要求的 PPV 阴性母猪较难筛选得到 。
2结果
2.1 病毒培养工艺优化结果 采用同步接毒的方 式，病毒接种剂量为培养液体积的 2 %，ST 细胞接 毒后 24 h 换细胞生长维持液，不添加犊牛血清。结 果生产工艺改进组病毒含量比对照组增加 1 个～2个 滴度，并且血凝价较稳定，收毒后测定毒价，病毒
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中国预防兽医学报
猪细小病毒
猪细小病毒（Porcine parvovirus，PPV）是一类小DNA病毒，是引起猪繁殖障碍的主要病原之一，其危害主要表现为受感染的母猪，特别是初产母猪及血清学阴性经产母猪发生流产、不孕、产死胎、畸形胎、木乃伊胎及弱仔等。
该病毒对理化因素有很强的抵抗力，广泛分布于世界各地并在大多数猪场呈地方性流行，严重地影响着养猪业的发展，该病的严重危害受到了国内外许多学者的关注，对PPV诊断方法及免疫防制的研究成为了热点之一。
猪细小病毒感染可依据临床症状和流行病学作出初步诊断，一般认为，如果仅妊娠猪发生流产、死胎、木乃伊胎、胎儿发育异常，同时有证据表明是传染性疾病时，则应考虑到PPV感染的可能，但进一步确诊必须进行实验室诊断。
自1967年，Cartwright等首次报道PPV病以来，有关该病诊断方法的研究报告较多，从最初的病毒分离鉴定，到血凝及血凝抑制试验、酶联免疫吸附试验等免疫学方法，直到核酸探针、聚合酶链式反应等分子生物学技术应用到PPV病的诊断中。
病毒分离和鉴定用于诊断PPV感染的最大优点是结果准确可靠，可以作为最后确诊。
用于分离PPV的病料，一般为流产或死产胎儿的脑、肾、肝、肺、睾丸、胎盘及肠系膜淋巴结等，其中以肠系膜淋巴结和肝脏的分离率最高。
虽然此方法是最准确的诊断方法，但是其费时费力，并且需要一定的技术条件和设备，另外，其感染力会随着胎儿死亡时间而降低从而限制了临床应用；红细胞凝集试验(HA)操作简便易行，且能进行快速、大量的诊断，但是其灵敏度低、特异性不强，只能作为辅助诊断方法。
血凝抑制(HI)试验是检测PPV抗体最常用的经典方法，一般采用试管法和微量法。
利用HI试验检测人工感染PPV的猪，发现感染后5d即可检测到相应抗体，12~14d 抗体滴度高达1024~4096，并能持续多年检出抗体。
待检血清进行HI试验时需要首先进行热灭活处理，然后再用红细胞吸附，以除去血清中的非特异性血凝素，进一步用高岭土吸附以除去或减少血清中非特异性抑制因子。
猪细小病毒疫苗研究进展及应用情况
发现 所产 生两 种病 毒的 抗体 的 几何平 均滴 度 （ ＧＭＴ） 与
引起 的 ， 该病 的主 要 特 征 为受 感 染 的 母 猪 ， 别是 初产 母 猪 及 Ｐ Ｖ单联 火活苗 、 特 Ｐ 伪狂犬病 病毒单联灭 活苗免疫猪所产 生 血 清 学 阴性 经 产母 猪 发生 流 产 、 孕 、 胎 、 形 胎 、 乃 伊 胎 病 毒 抗 体 滴 度 一 样 ， 前 者 稍 高 于 后 者 。 不 死 畸 木 一 或
活 疫 苗 免 疫 原 性 良好 并 且 安 全 。 灭 活 疫 苗 在 ４ ℃保 存 ６ 月 该 个 好 的保护 力， 可显著地 降低死胎率 ， 中２ 其 种疫苗即使大
其免疫原性不 变。
低免疫剂量也可 提供很好的保 护力。
Ｍｅ ｇ ｌ ｇ ｎ ｅｉ 等用乙酰二 甲亚胺灭活Ｐ ＶＳ成 的灭活疫苗免 ｎ Ｐ ｔ Ｊ 产胎 儿未 检测到Ｐ Ｖ抗原和抗 体。 Ｐ
产生抗体时 间长 ， 不需 要低温 保存等优 点。Ｅ ｆ 足灭活疫苗产生 Ｅ 【 ＭＡ， 水乳化液 ， 油 ＤＤＡ可 产生较高的Ｐ Ｖ ＨＩ Ｐ 抗体滴度
抗体慢 ， 不能 诱导 细 胞 免 疫 反 应 ， 体 水 平 相 对 活 疫 苗较 低 ， 抗 Ｐ ｕ等 给 猪 静 脉注 射Ｐ Ｖ抗体 ， 后 进 行 Ｐ Ｖ灭 活 疫 ａｌ Ｐ 然 Ｐ
及弱仔等 ， 其以产木 乃伊 为主 ， 尤 而母猪本身并不表现除流产
Ｊｏ ｏ 等用Ｐ Ｖ灭活疫苗免疫豚鼠、 Ｐ 兔和猪 ， 试验结果表 日 Ｊ
之 外 的 临 床 症 状 ， 他 猪感 染后 也 无 明显 的 临 床 症 状 。 清 学 生 持 续Ｐ Ｖ ＨＩ 滴 度 的 最 佳 免 疫 浓 度 为 ２ ６ Ｐ Ｖ ＨＡ滴 其 血 Ｐ 高 ５ （Ｐ
猪细小病毒疫苗研究进展
研究 综述 如 下 ：
灭 活 疫 苗 。Ｐ Ｖ 灭 活 疫 苗 的 研 制 中 ， 用 的灭 活 剂响 Ｐ 应
福 尔 马林 、 丙 内 酯 （ Ｌ） ＡＥ （ 乙酰 乙 烯 亚 胺 ） Ｐ 、 Ｉ Ｎ一 以
及 Ｂ Ｉ二 乙烯 亚歧 ） Ｅ（ 等 Ｆ ｊａ ｉ ｕｉ ｋ 用福 尔 马林 灭 活 病 毒 ｓ 制成 的疫 苗 ， 免疫 动物 诱 导 产 生 了较 高 的抗 体滴 度 ． 但 保 护 效果 不 理 想 ； 雪 珠 比较 了福 尔 马 林 和 ＡＥ 的 灭 潘 Ｉ 活效 果 ， 证实 ＡＥＩ 于 福 尔 马 林 ＋ｏ 优 Ｊ ｏ等 用 丙 内酯 灭
１ 弱毒疫苗
最早 发现 和 应 用 于 临 床 的 是 Ｐ Ｖ Ｐ ＮＡＤＬ ２弱 毒 一 株 ， 毒株 是 将 Ｐ Ｖ 强 毒在 实 验 室利 用 细胞 培养 连 续 该 Ｐ
传代 ５ Ｏ次以上毒 株 Ｐ Ｖ Ｐ ＮＡＤ 一 Ｌ ８在 ＶＰ ２基 因上 少 ３０ ０ ｂ 。临床实验 证实 ， ｐ一 血清 学 阴性的怀孕 母猪 口服或 鼻 内接 种 ＮＡＤＬ ２株 ， 管 有病毒 血 症存 在 ， 不 引起 胎 一 尽 却 儿感 染 ； 若将 该毒 株经 子 宫 内接 种 ， 引起胎 儿 感染 ， 可 从 而导 致繁 殖 障碍 日本学 者 Ｆ ｊ ａｌ等将 Ｐ Ｖ 野毒 在 ｕｉ ｋ ｓ Ｐ 猪 肾细 胞上低 温 （０℃ ） ３ 连续 传 ５ ４代 ， 产生 了 ＨＴ 变异 株 ， 毒株 接 种 猪 后不 产 生 病毒 血 症 ， 能诱 导 产 生 高 该 但 滴度 的抗体 和 较强 的免疫 力 。。在此 基 础 上 ， ｉｉ ］ Ａｋｈｒ ｏ
猪细小病毒病的诊断与科学防控
摘要：猪细小病毒病是由猪细小病毒感染引起的猪的一种繁殖障碍类传染病。
该病在我国很多猪场广泛存在，造成大量的妊娠母猪出现流产，产死胎和木乃伊胎，给养猪业带来了严重危害。
为使广大养殖户能够更加全面地掌握猪细小病毒病的流行趋势，掌握该病科学的诊断和防治方法。
本文对最近几年来我国猪场细小病毒病的病原学、流行病学、临床症状、诊断方法和防治策略等方面进行了总结，旨在为兽医诊断和防治该病提供参考。
关键词：猪；细小病毒病；诊断；综合防治猪细小病毒病的诊断与科学防控文新吾（湖南省衡阳市衡东县新塘镇农业综合服务中心湖南衡阳421411）收稿日期：2023-03-28作者简介：文新吾（1974.05—），男，湖南衡东人，本科，中级兽医师，从事畜牧动物防疫和检疫工作。
猪细小病毒病又称猪繁殖障碍病，与猪繁殖与呼吸综合征和猪伪狂犬病并列成为目前危害最为严重的三种重要繁殖障碍类传染病。
该病自20世纪60年代发现后，便开始在世界范围内广泛流行。
流行病学调查显示，猪细小病毒病（porcine parvovirus ，PPV ）在我国多个省份的猪场普遍存在，呈地方流行性，发病率相当高，检出率可达85%，严重阻碍了我国生猪养殖业健康发展[1]。
目前，世界大部分地区的猪场流行的细小病毒毒株主要为PPV1，虽然PPV2~PPV27在猪群中普遍存在，但是其流行特点，临床症状及致病机制等尚未明确。
现有的研究结果显示，PPV2在育肥猪中的检出率较高，在小于9周龄的仔猪中检出率最低[2]。
目前，感染细小病毒病的猪群尚无特效治疗药物，主要通过免疫接种的方式进行疫病防控。
为使广大养殖户能够更加全面地掌握猪细小病毒病的流行趋势，掌握该病科学的诊断和防治方法。
本文对最近几年来我国猪场细小病毒病的病原学、流行病学、临床症状、诊断方法和防治策略等方面进行了总结，旨在为兽医诊断和防治该病提供参考。
1病原学猪细小病毒属细小病毒科，细小病毒亚科成员，病毒粒子呈圆形或六角形，直径约为28nm ，由60个VP1/VP2结构蛋白组成，其中VP2和VP1分子分别占90%和10%，VP2具有抗原特性以刺激宿主免疫反应，在PPV 感染过程中参与病毒基因组的入核和成熟病毒粒子的组装。
猪细小病毒病的鉴别与防治要点
相比抗体检测，PPV病原检测具有快速、准确、敏感性高等特点。因为PPV的感染特点，猪场发现 疾病的时间多在感染后1个月以上，因此，母猪分泌物和血液不是病原检测的合适样本。不过，发 病母猪流产胎儿的各脏器组织都可以用于检测，一般建议采集死亡胎儿的肝脏、肠道、肺脏组织， 而不仅仅是胎儿表面分泌物，采样时最好选择长度在16cm以下的死胎或者同窝存活的弱仔。当选择 木乃伊胎进行检测时，需要考虑假阳性问题，假阳性原因：（1）胎儿死亡，组织自溶被母体吸收； （2）母猪感染产生的针对性抗体进入到自溶组织中中和病毒，降低病毒含量。此外，对于繁殖障 碍疾病，因为疾病发生时并非所有仔猪都一定会受到感染，为了防止漏检，采样仔猪数量应该有要 求，采样仔猪数占整窝仔猪数的1/3以上，例如总产仔数为15头，则应至少采集5头仔猪的样本。
PPV最早于1967年在英国被报道，1980年以后，国内专家学者从上海、北京和江苏等地陆续分离 到病毒。病毒基因组为单股线状DNA，无囊膜，对环境抵抗力很强，90℃干热短时间内不能灭活病 毒；70%酒精、0.05%季铵盐、2500ug/L次氯酸钠等消毒剂也不能灭活病毒；杀灭病毒时往往需要 选择乙醛和高浓度次氯酸钠（25000ug/ L）以及7.5%过氧化氢等消毒剂。 无论免疫疫苗与否，几 乎80%以上猪场都可以监测到PPV的存在。在一点式猪场，人们还发现未免疫疫苗的肥猪，血清抗 体阳性率会随着日龄的增加而逐步升高，同时感染猪只可以通过分泌物持续排毒。猪只一般在感染 病毒后3～4d开始排毒，排毒持续时间长达42d，其中前2周的排毒量最高。感染猪只血清抗体转化 在第6天后可以检测到，第14-21天抗体达到峰值。尽管如此，最近的研究已经证实即使是已经获得 抗体的母猪也不能完全阻止感染和排毒的发生，尤其当抗体值不高时更加如此。另一些学者则认为， 高滴度抗体可以阻止病毒感染，而低滴度抗体则不能阻止病毒感染。
ISA206
动 物 中心 。
１ ． ２ 方 法
验用 Ｉ Ｓ Ａ ２ ０ ６ Ｖ Ｇ 油 佐 剂 代 替 白油 佐 剂 进 行 猪 细 小 病
１ ． ２ ． ３ 疫苗检测： （ １ ） 物 理 性 状 检测 ： （ ａ ） 外观 ： 本
品应 为 乳 白 色 乳 状 液 ， 静 置后 下层 略带 粉 红色。
毒 病油乳剂 疫苗 的配 制 ， 通 过疫 苗 的物 理性 状检 测 、
＊ 为通 讯 作 者
吸管 ， 吸取 疫苗 １ ｍＬ， 使 其 垂 直 自然 流 出 ， 流 出
１ ． ２ 。 １ ＨＩ 试验 ： 按 文献 ［ ２ ］ 操 作 。 ＨＩ ≥１ ６判 为
阳性 。
和免疫原性 ， 于 １ ９ ９ ４年 在 国 内首先 获得 农 业部 颁 发 的新 兽药证书 ， 填补 了国内这一领 域的空 白 。该疫 苗
是将 灭活的猪细小病 毒加入 白油佐 剂经二 步乳化 ， 配 制成 水包油 包水 （ ｗ／ ｏ ／ ｗ） 的双 相 油乳剂 疫 苗 ， 疫 苗 配制所需 的白油佐 剂是实验室熬制牧 兽 医通讯 》 ２ ０ １ ５年 第 ２期
Ｉ Ｓ Ａ ２ ０ ６佐 剂 配制 的猪细 小 病 毒病 油乳 剂 疫 苗 的检 测
朱永 军 邹 勇 倪 建平 张春 玲 （上海市 农业 科学 院畜牧 兽 医研究 所 何 锡 忠 张婉 华 ２ ０ １ １ ０ ６） 上海佳 牧生 物制 品有 限公 司 上 海
猪细小病毒油乳剂灭活疫苗
PCR检测
通过PCR方法检测疫苗接 种后猪体内病原的数量， 以评估疫苗的防疫效果。
临床效果观察
发病率和死亡率
观察疫苗接种猪群与未接种猪群 的发病率和死亡率差异，评估疫
苗的保护效果。
增重和饲料转化率
比较疫苗接种猪群与未接种猪群的 生长性能，如增重和饲料转化率等 ，以评估疫苗对生产性能的影响。
THANKS
谢谢您的观看
接种剂量与接种途径
接种剂量
按照疫苗说明书推荐剂量进行接种，一 般为1-2ml/头份。
VS
接种途径
肌肉注射，注射部位可选颈部或后腿肌肉 丰满处。接种前应充分摇匀疫苗，确保接 种剂量准确。
接种后观察与护理
01
观察时间
接种后应持续观察猪群状态，至少观察3-5天，以确保无异常反应发生
。
02
观察内容
注意观察猪群的精神状态、食欲、呼吸、排泄等方面，如出现异常情况
在疫苗研发过程中，需要对疫苗的安全性、有效性和质量进 行全面评价，确保疫苗对目标动物具有良好的免疫保护效果 ，同时符合相关法规和标准要求。
02
疫苗特点与优势
高效预防猪细小病毒
高抗原含量
疫苗中含有高浓度的猪细小病毒抗原 ，能够刺激机体产生强烈的免疫反应 ，有效预防猪细小病毒感染。
交叉保护
疫苗对猪细小病毒不同血清型具有一 定的交叉保护效果，降低因病毒变异 导致的免疫失败风险。
应及时处理。
03
护理措施
保持圈舍干燥、通风良好，避免应激因素。对于出现轻微反应的猪只，
可适当增加营养和护理，一般可自行恢复。对于严重反应的猪只，应及
细美瑞(哈药疫苗 猪细小病毒灭活疫苗)使用方法
细美瑞（哈药疫苗猪细小病毒灭活疫苗）使用方法
细美瑞（哈药疫苗猪细小病毒灭活疫苗）使用方法
产品特点：
1.自主分离和培育的L株，与国内流行毒株同源性高，组织嗜性相似，适用于国内使用。
2.疫苗经离心和过滤处理，再以切向流超滤达到5倍浓缩，致使抗原含量高，疫苗纯净，减轻了非抗原物质对机体的刺激。
3.疫苗采用BEI进行灭活，具有安全性好的特点。
4.免疫后抗体产生迅速，效价高，保护力持久。
推荐免疫程序：
后备种猪：配种前50天内接种2次，相隔2-3周。
经产母猪：产后跟胎免疫，一年两次。
种公猪：每年春秋各免疫1次
猪细小病毒病及其疫苗相关常见问题：
1已发生过猪细小病毒病的猪场是否还需要进行PPV疫苗免疫？
近些年来，PPV的致病特点已经发生了很大变化，其主要危害对象已由初产母猪延伸到初生仔猪，目前相关研究已显示，不同型的PPV对仔猪皮肤、仔猪肠道都有影响，且PPV容易与其他病原发生混合感染，有实验证实，呼吸型PPV毒株可能参与到PMWS和PRDC的形成，只依靠病原自然感染不能保证母猪体内抗体水平足以维护仔猪健康，因此即便猪场已经发生过PPV，建议仍对母猪定期进行PPV免
疫，以保证仔猪健康。
2PPV毒株是否发生变异，现有疫苗能否对该病不同类型病原进行抵抗？
根据现有文献病毒血清学实验结果，PPV只有一个血清型，根据各地疫苗使用情况来看，疫苗仍是预防PPV的重要且有效的手段，而现地分离的L株通过对其VP2基因进行克隆测序，发现该毒株与其它PPV毒株核苷酸同源性在99.19%以上，氨基酸同源性在98.87%以上，表明该毒株在组织嗜性等方面与流行毒株较为相似。
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参考文献（略）
猪细小病，等
来源：《兽医导刊》 2016年第7期
李晓艳 刘超 何平有 郁宏伟/ 瑞普（保定）生物药业有限公司
猪细小病毒病是由细小病毒科猪细小病毒(PPV) 感染猪引起的胚胎感染及死亡，而母猪并不表现明显症状的猪繁殖障碍性疾病。妊娠前期的母猪易感染，主要引起母猪流产、胎儿死亡、胎儿畸形、木乃伊胎、弱胎及不孕等，同时还可引起仔猪发生皮炎和腹泻，与猪圆环病毒协同感染是导致断奶仔猪多系统衰竭综合症的主要原因之一。本病目前已广泛分布于世界各地，并呈现出与猪蓝耳病毒、圆环病毒感染、猪伪狂犬病毒以及猪瘟病毒混合感染的严重态势，给世界范围内的养猪业造成了极大的损失。
三、结果
（一）疫苗制备
采用同步接毒的方式，病毒接种剂量为培养液体积的1%，结果运用单克隆ST 细胞培养纯化后的PPV病毒制备的灭活疫苗其抗原含量比克隆前增加1 个～ 2个滴度，并且血凝价较稳定，收毒后测定毒价，病毒TCID50 ≥ 108.0/ml，血凝价≥ 212/0.25 ml。
（二）安全性试验
目前，对于由PPV 引起的猪繁殖障碍尚缺乏有效的治疗方法，唯一的防制措施就是对易感猪进行疫苗免疫。不同厂家生产的疫苗免疫，其免疫效果参差不齐，猪体免疫后有时出现发热、食欲不振、接种部明显红肿块、疫苗免疫后保护率低和疫苗持续期较短。针对目前情况，我公司对猪细小病毒病灭活疫苗的抗体消长规律和安全性研究，现报告如下。
一、材料
（一）病毒毒株、细胞与血清
猪细小病毒RP 株、ST 细胞均由瑞普（保定）生物药业有限公司经扬州优邦公司转让资源克隆获得；犊牛血清购自Hyclone 公司；猪细小病毒标准阳性血清购自美国VMRD 公司；阴性血清由本公司研发中心实验室制备并保存。
（二）参考疫苗
进口疫苗产地：德国，批号：20150501。
（三）试剂
胰酶购自GIBCO 公司；BEI 购自FLUCA 公司。
二、方法
（一）疫苗制备
按照“猪细小病毒病灭活疫苗规程草案”制备3 批疫苗， 批号分别为20150301 批、20150402 批和20150403 批。
（二）安全性试验
1. 乳鼠安全性试验。取3 ～ 5 日龄乳鼠25 只，随机分为5 组，5 只/ 组，分别免疫3 批疫苗，0.1 ml/ 只，观察10 d，同时设进口疫苗对照和空白对照组。
四、讨论
猪用灭活疫苗的安全高效和副作用小是此项研究的关键。病毒滴度高，细胞培养物的牛血清含量低，灭活剂浓度低且中和彻底是灭活疫苗研究要重点着手解决的问题。
本研究运用单克隆细胞株培养纯化的PPV 毒株，极大的提高猪细小病毒的病毒滴度，降低生产成本。病毒液采用新型灭活剂二乙烯亚胺（BEI）对猪细小病毒（PPV）进行灭活，通过灭活验证以及安全性试验。表明对PPV的灭活是彻底的、安全的，疫苗免疫乳鼠、仔猪均无不良反应，免疫豚鼠后产生较高的抗体水平。
本试验制备的3 批灭活疫苗连同进口厂家的疫苗，各分别注射3 ～ 5 日龄昆明乳鼠5 只和4 ～ 6 周龄仔猪5 头，临床观察3 批疫苗免疫后均无全身或局部不良反应，乳鼠和仔猪发育良好，精神和食欲都正常，增重比对照组无差异。
（三）疫苗HI 抗体消长情况
3 批猪细小病毒灭活疫苗连同进口疫苗免疫豚鼠，结果均于14 d 开始全部产生抗体反应，免疫后60 d 血清HI 抗体达到高峰（1∶5 405），免疫后180 d 仍可达到1∶256，均达到同类进口疫苗标准。4 种疫苗免疫成年豚鼠后的抗体检测结果见表1 和图1。
2. 仔猪安全性试验。取4 ～ 6 周龄仔猪25 头，随机分为5 组，5 头/ 组，其中3 组分别皮下注射3 批疫苗，4 ml/ 只，观察21 d，同时设进口疫苗对照和空白对照组。
（三）疫苗HI 抗体消长情况
取体重350 g ～ 400 g 健康豚鼠25 只，随机分为5 组，5 只/ 组，其中3 组分别皮下注射3 批疫苗，0.5 ml/ 只，并设进口疫苗对照和空白对照组，免前先心脏采血1 ml，免后每月采血，连续采血6 月，分离血清后检测HI 抗体滴度。