ai14转基因小鼠原理

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转基因的原理

转基因的原理
转基因食品的原理是什么?其实转基因技术的原理很简单,就是利用生物工程将某些目标基因导入植物体内,使之成为对人类有益的基因.这种技术最早出现在20世纪70年代中期,当时利用杂交技术培育抗虫棉花和杂交玉米等作物。

由于各种外源基因插入到自然界本来没有或者根本不存在的生物个体中,通过生物学过程进行筛选、淘汰,获得的基因可以改变自身遗传性状,从而造福人类。

但是,如果我们把转基因食品看做一种特殊的商品,那它又同样具备了新的优势:1.安全2.营养3.方便4.美味5.价廉6.天然7.保健8.节约能源9.提高产量10.提升质量11.提高效率12.更加环保13.提供健康14.解决温饱问题。

ai14小鼠原理

AI14转基因小鼠是通过基因工程技术将人类基因或突变基因导入小鼠胚胎中，使其成为转基因小鼠。

该转基因小鼠带有荧光标记，可以发出绿色荧光，便于研究人员直观地观察和研究小鼠体内特定细胞类型的活动。

AI14转基因小鼠的主要基因改造是在葡萄糖激活的胰岛素样生长因子2（IGF2）基因上插入了一个荧光蛋白基因。

这个荧光蛋白基因能够产生一种绿色荧光蛋白，使得转基因小鼠的细胞和组织能够发出绿色荧光。

这个基因改造使得研究人员能够直观地观察和研究小鼠体内特定细胞类型的活动，特别是神经元的活动。

AI14转基因小鼠的荧光标记基因是由一个启动子控制的，这个启动子是人类神经元特异性磷酸酶碱性酶（NSE）基因的启动子。

这意味着，只有表达了NSE基因的细胞才会产生荧光蛋白。

NSE基因主要在神经元中高表达，因此AI14转基因小鼠的神经元会发出明亮的绿色荧光。

这种标记可以帮助科学家更容易地追踪和研究小鼠的神经元活动和连接情况。

因此，AI14转基因小鼠是一种重要的实验动物模型，为科学家们研究人类疾病和基因功能提供了有力的工具。

它们不仅可以用于研究神经元的功能和行为，还可以用于研究其他疾病的发生和发展机制，以及测试新药物的疗效和安全性。

以上信息仅供参考，如需了解更多信息，请查阅相关书籍或咨询专业人士。

ai14转基因小鼠原理

ai14转基因小鼠原理AI14转基因小鼠是一种常用的转基因模型，被广泛应用于生物医学研究领域。

它的原理是通过基因工程技术将外源基因导入小鼠的基因组中，从而使小鼠表达人类或其他物种的特定基因。

通过对AI14转基因小鼠的研究，科学家们可以深入探究与这些特定基因相关的生理和病理过程，为人类疾病的预防和治疗提供重要的基础。

AI14转基因小鼠的制备过程基本分为以下几个步骤：1. 选择目标基因：科学家们首先需要确定他们想要研究的特定基因，这通常是与某种生理过程或疾病相关的基因。

选择目标基因的确定是研究的关键，它直接决定了后续实验的方向和结果。

2. 构建转基因载体：转基因载体是将目标基因导入小鼠基因组的工具。

科学家们通常使用质粒或病毒载体来构建转基因载体，其中包含了目标基因的DNA序列以及一些调控元件，如启动子、终止子和增强子等。

这些调控元件可以确保目标基因在适当的组织和时间点表达。

3. 转基因小鼠的制备：一旦构建好转基因载体，科学家们就可以将其导入小鼠的基因组中。

目前常用的方法是通过胚胎干细胞技术或直接注射载体DNA进入受精卵。

这些转基因载体会在小鼠的细胞中随着细胞分裂被复制，并最终导入小鼠的生殖细胞中。

4. 筛选和鉴定转基因小鼠：为了确定哪些小鼠成功地导入了目标基因，科学家们通常会对小鼠进行筛选和鉴定。

这包括对小鼠的DNA 进行PCR分析、Southern印迹等实验技术，以确定目标基因是否成功导入小鼠的基因组中。

5. 遗传稳定性的维持：一旦获得了目标基因转基因小鼠株系，科学家们需要确保这些转基因小鼠的遗传稳定性。

为此，他们通常会进行多代交配，并对后代进行基因型分析，以确保目标基因的稳定遗传。

通过AI14转基因小鼠模型的研究，科学家们可以深入研究特定基因在生理和病理过程中的作用。

例如，他们可以观察和分析目标基因在小鼠身上的表达模式以及对生理功能的影响，进而揭示该基因的功能机制。

此外，科学家们还可以利用AI14转基因小鼠模型来研究某些疾病的发生机制，寻找潜在的治疗靶点，并评估新药物的疗效。

全人源抗体转基因小鼠构建技术原理

全人源抗体转基因小鼠构建技术原理全人源抗体转基因小鼠技术之所以诞生以来一直官司缠身，主要原因是技术体系和方法有限。

将小鼠的内源免疫球蛋白基因失活，有以下几种不同的策略：策略1将鼠免疫球蛋白基因重链和轻链的J区敲除，该策略的原理是通过阻断VDJ重排过程，阻止小鼠内源性抗体生成，如HuMAb和Xenomouse。

策略2将小鼠免疫球蛋白基因重链VDJ区倒置，扰乱顺式作用元件与编码区的调控作用，阻止小鼠内源性抗体生成，但是小鼠内源V、D、J区仍然存在，如Kymouse.策略3在小鼠免疫球蛋白基因上游的调控区插入转录终止元件stop cassette，关闭基因转录，阻止小鼠内源性抗体生成，但是小鼠内源V、D、J区仍然存在，如OminiRat/Mouse、 H2L2 Tg Mice。

策略4将小鼠免疫球蛋白基因重链V、D、J，轻链V、J区全部敲除，是最彻底的阻断鼠源抗体生成的策略，完全避免了鼠源抗体基因表达泄露、灭活不充分的风险，如Veloclmmune mouse。

将人源免疫球蛋白基因导入小鼠基因组则更难，如果基因导入的技术策略相似，导入的人源抗体基因的序列和敲入位点也基本相似，则很容易产生专利纠纷。

为了使导入小鼠基因组的人免疫球蛋白基因正常表达，各公司基本采用了将人源基因在C区上游定点敲入、或将小鼠的同源基因原位替换的策略，以保证基因表达调控不受影响。

然而人免疫球蛋白基因相当庞大，IGH 约2Mb，IGK 约2Mb，IGλ约1Mb，无论是采用同源重组还是位点特异性重组，都受到重组载体容量的限制。

大多数公司采用的基因导入载体是BAC/YAC，BAC 的容量在100kb，YAC的容量在1Mb，如果采用同源重组基因敲入策略，每个重组载体两端还要保留足够长的同源序列，想要将全部人免疫球蛋白基因导入小鼠基因组，就成为一项极限挑战！目前该记录的保持者是Regeneration通过9次基因打靶导入大约1.0Mb人IGH，其中包含了绝大多数的80个VH区，和几乎全部的DH和JH区。

转基因技术的原理及其应用

转基因技术的原理及其应用1. 转基因技术的基本原理转基因技术，又称基因工程技术，是一种通过人为方式将外源基因导入目标生物体内，使其产生新的性状或改变原有性状的技术。

其基本原理包括以下几个步骤：1.1 选择外源基因转基因技术首先需要从其他生物中选择具有所需性状的外源基因。

外源基因可以来自于同一物种的不同个体，也可以来自于不同物种。

1.2 构建基因载体基因载体是将外源基因运输到目标生物体内的工具。

常用的基因载体包括质粒、病毒和人工染色体等。

在构建基因载体时，需要将目标基因与适当的启动子、终止子和其他调控元件组合在一起。

1.3 导入基因载体导入基因载体可以通过多种方法实现，例如化学法、生物法和物理法等。

其中，常用的方法包括转化、感染和基因枪等。

导入基因载体后，目标生物体会将外源基因整合到自身的基因组中。

1.4 检测与筛选转基因生物体一旦产生，需要经过一系列的检测和筛选，以确认外源基因的存在和功能。

常用的筛选方法包括PCR、Southern印迹和克隆等。

只有通过筛选后，具有所需性状的转基因生物体才能继续应用。

2. 转基因技术的应用转基因技术在农业、医疗和环境保护等领域具有广泛的应用。

以下列举了几个常见的应用领域：2.1 农业领域转基因农作物是转基因技术在农业领域最主要的应用之一。

通过引入抗虫、抗病、耐旱或耐盐等基因，转基因农作物能够提高产量和抗逆能力，减少对农药和化肥的依赖，从而实现可持续发展。

目前，转基因大豆、转基因玉米和转基因棉花等已经在全球范围内种植并广泛应用。

2.2 医疗领域转基因技术在医疗领域的应用主要体现在基因治疗和基因诊断两个方面。

基因治疗是利用转基因技术将具有治疗效果的基因导入人体细胞中，用于治疗一些遗传性疾病或其他疾病。

而基因诊断则是利用转基因技术检测人体细胞中的基因变异，用于疾病的早期诊断和风险评估。

2.3 环境保护领域转基因技术在环境保护领域的应用主要包括重金属污染修复、水体污染治理和生态修复等方面。

转基因的方法和原理

柯氏质粒 Cosmid
• 柯氏质粒可克隆携带40kb大小的DNA片段，并在大肠杆菌中复制保存，综合了质粒载体和噬菌体载体二者的优点。 • 柯氏质粒上带有多个单克隆位（RE2），两个cos位点， DNA复制起始位点和抗生素抗性基因，在两个cos位点之间还有一个限制性内切酶位点（RE1）。
PCR反应过程
• 1、变性，即将模板DNA置于 95℃的高温下，使双链DNA的双链解开变成单链DNA； • 2、退火，将反应体系的温度降低至55℃左右，使得一对引物分别与变性后的两条模板链相配对； • 3、延伸，将反应体系温度调整到Taq DNA聚合酶作用的最适温度72℃，然后以目的基因为模板，合成新的DNA链。 • 反复进行约30个循环左右，即可扩增得到目的DNA序列。
基因枪介导的DNA转移
• 基因枪法最早是由美国康奈尔大学的Sanford最先提出的。它通过高速飞行的金属颗粒将包被其外的目的基因直接导入到受体细胞内，从而实现基因转化的方法。1992年，世界首例转基因小鼠就是通过该法获得的。
基因枪转化的原理
(2)基因枪轰击法（微弹轰击技术micro-projectile bombardment)
质粒载体pBR322
• 1.大小为4361bp，含有抗氨苄青霉素和抗四环素这样两个抗生素抗性基因 • 2.在四环素抗性基因内部，还具有BamH I Hind Ⅲ和 BamH I、Hind Sal I 三个识别位点。 • 3.Pst I识别位点在氨苄青霉素抗性基 • 4.pBR322带有一个复制起点，可以保证质粒只在大肠杆菌里进行复制功能。
转基因的方法和原理
• 1目的基因制备和载体系统 • 2几种有效的转基因方法 • 3定点突变和受体系统

转基因

什么是转基因通俗的说，就是一种生物体内的基因转移到另一种生物或同种生物的不同品种中的过程。

一般来说转基因是通过有性生殖过程来实现的。

例如，植物的花粉(含有雄配子)通过不同的媒介由一个植物“跑”到另一种植物，或“跑”到同一种植物的另一个品种花朵里边的雌蕊(含有雌配子)上并与其杂交，这种杂交的过程就产生了基因的转移。

同样，例如在猫这种动物中，不同品种和类型的猫进行交配后产生了与父母都不—样的仔代，就是由于产生了基因的转移。

因此，转基因是大自然中每天都在发生的事情，只不过在自然界中，基因转移没有目标性，好的和坏的基因都可以一块转移到不同的生物个体。

同时，通过自然杂交进行的转基因是严格控制在同一物种内(特别是在动物中)，或是亲缘关系很近的植物种类之间。

转基因生物保持生物生命特征的物质是细胞核中的基因（DNA）。

所谓转基因生物，即为了达到特定的目的而将DNA 进行人为改造的生物。

通常的做法是提取某生物具有特殊功能（如抗病虫害、增加营养成分）的基因片断，通过基因技术加入到目标生物当中。

转基因食品转基因食品就是移动动植物的基因并加以改变，制造出具备新特征的食品种类。

人们可以用鲜鱼的基因帮助西红柿、草莓等普通植物来抵御寒冷；把某些细菌的基因接入玉米、大豆的植株中，就可以更好地保护它们不受害虫的侵袭。

而以这些转基因生物为原料加工生产的食品就是转基因食品。

历史背景1983年世界上第一例转基因植物——一种含有抗生素药类抗体的烟草在美国成功培植。

1993年世界上第一种转基因食品——转基因晚熟西红柿正式投放美国市场。

1996年世界转基因作物种植总面积仅为170万公顷2002年全球转基因农作物种植面积已扩大到5870万公顷。

迄今全世界已有近50个国家和地区开展转基因作物种植实验，有16个国家的近600万农民以种植转基因作物为主。

任何生物体之间都能够进行转基因，而且，在转基因动物身上也可以再次进行转基因。

猪的一些部位能够发荧光，是转基因的结果。

转基因小鼠技术-精品文档

缺点
精密仪器，供体细胞易技术操作较难，衰老易造成宿主动物基因组的插入突变
有些结果不能重复
2019/2/28
14
Electroporation
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转基因小鼠技术
---转基因小鼠在科研中的应用
2019/2/28
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小鼠的历史
1. 7500万－1.25亿年前 -- 人鼠始祖
2. 19世纪 -- 宠物鼠---实验鼠的“先驱”
3. 1897年 -- 重组表型
2019/2/28
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小鼠的历史
6. 1909年 -- 实验鼠的诞生
2019/2/28
10
5、精子载体法
优点
基因转化方法简便,效率高
动物育种不经过嵌合体,实验周期短缺点目的基因整合的随机性无法早期验证修饰事件成功率不高、效果不稳定
2019/2/28 11
பைடு நூலகம்
6、YAC法（人工酵母染色体法）
优点：
克隆百万碱基对(Mbp) 级的大片段外源DNA 的能力,可以保证巨大基因的完整性; 保证所有顺式作用因子的完整并与结构基因的位置关系不变; 保证较长的外源基因片段在转基因动物研究中整合率的提高;

转基因动物技术原理与应用

基因结构图示
转录起始点翻译起始点
Enhancer
CCAAT box TATA box
Exon I
Intron IExon NhomakorabeaI…
5’U T
IV
3’-UT
AATAAA
mRNA结构
5’-UTR
Exon I
3’-UTR II
III
IV
AAAAAAAAA
基因转录复合体
转基因载体构建
• • • • • 启动子选取 cDNA 选取 Poly A 选用内含子和封闭区载体构建
表达基因（cDNA）的类别
显示基因(reporters): lacZ, GFP, CAT, AP等调节基因: Cre, ER-Cre, tTA, tTR,PTX等蛋白质功能研究：蛋白突变体的表达基因剪接：研究外显子、内含子功能商业基因：药用蛋白，改良基因等生理功能基因: 基因治疗，干细胞移植等非编码基因：非编码RNA功能研究，siRNA 基因沉默, CRISPR/Cas9 gRNA基因组修饰 • 抗性基因：细胞筛选 • • • • • • •
利用小鼠动物模型研究基因表达与病理发育
郑耀武转基因动物实验中心综合实验楼205 zhengyw442@ 85098583
转基因动物技术原理与应用
第一部分：常规转基因技术原理第二部分：基因定位修饰技术原理第三部分： CRISPR/Cas9技术原理与应用
第一部分
常规转基因动物原理与应用
转基因动物原理及应用
第一部分：常规动物转基因技术原理第二部分：基因定位修饰技术原理第三部分： CRISPR/Cas9技术原理与应用
第二部分：基因定位修饰
•基因定位修饰原理 •基因定位修饰过程 •基因定位修饰应用

转基因小鼠制备实验

转基因小鼠制备实验方法1、选取7~8周龄雌性小鼠，阴道口封闭，作为供体，下午3:00左右，每只小鼠腹腔注射PMSG(10 IU)。

2、 47~48小时后，每只小鼠腹腔注射HCG(0.8 IU)，并与正常公鼠合笼；另取数只适龄母鼠(2月龄以上)作为受体，阴道口潮红，与结扎公鼠合笼。

3、第二天上午9:00前观察供体、受体，有精栓者拿出备用。

受体笼拿出作好隔离措施。

4、10:30左右，断颈处死供体，手术取出整个输卵管，放入透明质酸酶~0.3mg/M2液中。

显微镜下，用镊子撕开输卵管壶腹部，受精卵随同颗粒细胞即一同流出。

5、仔细观察放在透明质酸酶M2液中的受精卵，当受精卵周围的颗粒细胞脱离时，将受精卵吸出，放入M2液中洗涤，最后放在M16液中放入5% CO2，37C0培养箱培养。

6、在显微镜下观察，挑选细胞饱满，透明带清晰，雄原核清晰可见的受精卵待用。

7、安装持卵针和注射针，使其末端平行于载物台，在凹玻片的中央滴入一滴M2液，覆盖石蜡油，移入待注射的受精卵。

DNA在注射针中的气泡应在先前全部弹走。

8、在高倍镜下，将注射针轻触持卵管，使DNA缓慢流出并控制其流量；反复吹吸受精卵，使其处于最佳位置，将注射针刺入受精卵的雄原核，直至看到原核膨大即退出。

将注射过的和未注射过的受精卵上下分开放置，不致于混搅，注射完毕后，放入5% CO2，37C0培养箱培养。

9、将受体麻醉，注射计量为1%戊巴比妥钠0.01ml/g，腹腔注射。

手术取出卵巢连接输卵管，用脂肪镊固定，在显微镜下找到输卵管开口。

吸取注射后经培养成活的受精卵，吸取方法是先吸一段较长的M2，吸一个气泡，然后吸取受精卵，尽量紧密排列，再吸一段液体，吸一个气泡，再吸一段液体，共四段液体三个气泡。

除较长的那段液体，其余的液体大致1cm 左右，气泡0.2cm左右。

将移植管口插入输卵管口，轻轻将移植管内的液体吹入，看到输卵管壶腹部膨大并清晰地看到三个气泡，即移植成功。

转基因鼠构建原理与流程

转基因鼠构建原理与流程
1、原核显微注射导入的目的基因是将目的基因随机整合到小鼠或者大鼠的基因组，因此首代转基因鼠（F0）将会有不同的整合位点。

整合基因的拷贝数可能在不同的首代转基因鼠中也不同。

因此，每只F0代鼠需要作为一个独立的谱系研究，并且与其它F0代鼠分开进行繁殖。

由于外源基因一般只整合在二倍体动物的其中一条染色体上，属于半合子，其后代只有一部分个体带有整合的基因，需要进行筛选鉴定。

2、原核显微注射获得PCR阳性F0代杂合子鼠。

3、F0代鼠达到性成熟后（8周）与野生型鼠进行交配，获得F1代鼠。

4、对交配获得的F1代鼠进行基因型鉴定，理论上，F1代鼠中有50%为转基因杂合子鼠，50%为野生型鼠。

转基因小鼠构建实验方法

转基因小鼠构建实验方法
实验方法原理：遗传的基本物质是DNA，基因是位于染色体上有遗传效应的DNA片段，对于储存在生物全套染色体中的全部遗传信息，可称其为基因组。

不同种类、不同个体的生物基因组成是不同的，对动物个体来说，非自身的基因成分属于外源基因，如果把外源基因整合或导入动物染色体基因中，这个外源基因就被称为转基因(transgene)(即转移来的基因)，这种动物就是转基因动物。

实验材料:小鼠
试剂、试剂盒:HCG、PMSG、透明质酸酶、戊巴比妥钠
仪器、耗材：显微镜、镊子、持卵针、注射针。

可诱导性组织特异性转基因小鼠构建技术原理

可诱导性组织特异性转基因小鼠构建技术原理
制作转基因小鼠最常用的一种方法是DNA原核显微注射。

DNA 原核显微注射是指将外源DNA通过显微注射的方法注射到受精卵的原核内，注射DNA整合到小鼠受精卵的基因组中，并稳定遗传给后代。

使用PiggyBac系统DNA显微注射，制备的转基因鼠基因表达阳性率为常规质粒DNA显微注射的2倍以上！
可诱导性/组织特异性转基因小鼠
将构建的广泛表达启动子-lox-stop-lox-转基因载体通过显微注射制备组织特异性转基因小鼠模型，转基因在正常情况下并不表达，只有与相应的组织特异性表达Cre/CreERT2小鼠杂交后，因Stop终止序列在特定的组织中被去除，从而达到转基因在诱导性/特定组织中特异性表达的目的。

转基因技术的原理和应用

转基因技术的原理和应用原理转基因技术（Genetic Modification, GM）指将外源基因导入目标生物体，使其产生新的特征或功能的技术。

它通过对生物体的遗传物质进行精确的改造和编辑，实现了对基因组的准确操控。

转基因技术主要包括以下几个步骤：1.选择目标基因：根据需要改造的特征或功能，在合适的来源中选择目标基因。

2.构建重组DNA：利用重组DNA技术，将目标基因与转载体（一种载体DNA）正确拼接，形成重组DNA。

3.转化细胞：将重组DNA导入目标生物体的细胞中，使其成为转基因细胞。

转化的方法有多种，如农杆菌介导转化、基因枪法等。

4.筛选和培育：对转化后的细胞进行筛选，确保只有含有目标基因的细胞生存下来。

然后通过培育和繁殖，获得转基因生物体。

应用转基因技术在农业、医学和工业等领域有着广泛的应用。

农业应用1.提高作物产量和抗性：通过转基因技术，可以将抗虫、抗病等有益基因导入作物中，增加作物的抗性和产量。

例如，转基因水稻可以在不使用农药的情况下抵抗病虫害，并提高产量。

2.改善作物品质和营养价值：转基因技术可以改变作物的化学成分，使其具备更高的营养价值。

例如，转基因大豆可以增加蛋白质含量，转基因玉米则可提高抗氧化能力。

3.减少农药使用：转基因作物可增加抗虫性和抗病性，减少对化学农药的需求，降低农业对环境的影响。

医学应用1.生物药生产：转基因技术可以用于大规模生产治疗性蛋白质，如人类胰岛素、人类生长激素等。

通过将目标基因导入细胞中，细胞会表达并合成这些蛋白质，用于治疗各种疾病。

2.疾病基因研究：转基因技术可以模拟人类疾病，通过将与特定疾病相关的基因导入小鼠或其他模型中，使其表现出疾病的特征，用于深入研究疾病的发生机制和治疗方法。

3.基因治疗：转基因技术可用于治疗基因缺陷等遗传性疾病。

通过将正常基因导入患者细胞中，矫正缺陷基因的功能，达到治疗目的。

工业应用1.生物材料生产：转基因微生物可以合成各种有用的化合物，如生物塑料、生物燃料、生物降解材料等。

转基因技术原理与方法

1、目的基因制备和载体系统
目的基因来源：基因组DNA分离菌体、柯氏质粒、YAC载体等工具酶：限制性内切酶、连接酶、DNA聚合酶等
1.目的基因的分离

（1）已知基因的获得
①化学合成法 ②PCR扩增
彩色玉米
2012-10-23
Copyright© Jiangyong
巨型鲑鱼
2012-10-23
Copyright© Jiangyong
荧光鱼
2012-10-23
Copyright© Jiangyong
超级奶牛
2012-10-23
Copyright© Jiangyong
培育出人耳的小鼠
2012-10-23
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电击法的主要原理是
将原生质体在溶液中与 DNA混合,然后利用高压电脉冲作用,使原生质体膜的某些部位被击穿而产生可回复的小孔,外源 DNA可通过小孔进入原生质体内,而且不影响经电击处理的原生质体再生植物的能力.
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花粉管通道法是利用开
花植物授粉后形成的花粉管通道,直接将外源目的基因导入尚不具备正常细胞壁的卵、合子或早期胚胎细胞,实现目的基因转化.
3、转基因苗的筛选与鉴定
培养过程中利用标记基因筛选
选择标记基因(Slective gene)
抗生素类选择基因抗除草剂类选择基因生物安全性标记类选择基因 ……
标记基因
报告基因(Report gene)
β-D-葡萄糖酸苷酶基因(Gus) 荧光素酶基因(Luc) 氯霉素乙酰转移酶基因(Cat) 绿色荧光蛋白基因(Gfp) ……
柯氏质粒 Cosmid
柯氏质粒可克隆携带40kb大小的DNA片段，并在大肠杆菌中复制保存，综合了质粒载体和噬菌体载体二者的优点。柯氏质粒上带有多个单克隆位（RE2），两个cos位点， DNA复制起始位点和抗生素抗性基因，在两个cos位点之间还有一个限制性内切酶位点（RE1）。

转基因的方法和原理

利用cDNA法
• 由于真核生物的mRNA具有poly A这一结构特点，可以用结合长度大约为15bp的短链多聚DT的纤维素填充的柱子，根据碱基配对原则，将其吸附，从真核细胞的总RNA中提取出来，再用能打断A-T氢键的缓冲液洗脱。 • 在mRNA群体中，有高丰度的mRNA，拷贝数多；也有低丰度的mRNA，但种类多，高丰度的mRNA容易合、非变性蔗糖梯度离心和羟甲基蔗糖剃度离心等分级分离不同长度的mRNA，也可以利用cDNA的大小分级分离。
基因枪介导的DNA转移
• 基因枪法最早是由美国康奈尔大学的Sanford最先提出的。它通过高速飞行的金属颗粒将包被其外的目的基因直接导入到受体细胞内，从而实现基因转化的方法。1992年，世界首例转基因小鼠就是通过该法获得的。
基因枪转化的原理
(2)基因枪轰击法（微弹轰击技术micro-projectile bombardment)
分离基因
克隆到某中间载体
pKS,pBR332,pGEM-T
转化大肠杆菌提取质粒限制酶切/连接克隆到植物表达载体
JM109, TOP10…
HindIII/EcroI… T4 ligase pBI121, pCAM1001…
转化农杆菌
LBA4404, EHA
基因枪转化
几种有效的转基因方法
• 基因转移（transgenosis）是借助于物理、化学或生物的手段将外源基因导入受体细胞，并检查其在该细胞内表达情况的一种技术，是细胞工程中一项重要而应用广泛的技术。 • 细胞直接摄取外源DNA的过程称为转化（transformation），如果通过噬菌体的释放和感染将DNA从一个细胞转移到另一个细胞的过程，称为转导(transduction)