血清丙氨酸氨基转移酶测定-标准操作程序
血清丙氨酸氨基转移酶测定
血清丙氨酸氨基转移酶测定1 检验目的指导本室工作人员规范操作本检测项目，确保检测结果的准确。
2 实验原理本试剂以国际临床化学会(IFCC)推荐方法为基础，所采用的反应原理与反应式如下。
⑴样本中的丙氨酸氨基转移酶（ALT）催化丙氨酸的氨基转换至α-氧代戊二酸，生成丙酮酸和L谷氨酸。
⑵丙酮酸被试剂中的乳酸脱氢酶（LDH）还原为L-乳酸的同时还原型辅酶I（NADH+ H+）被氧化为辅酶I（NAD+），而使波长340nm处的吸光度值下降。
通过对波长340nm处吸光度值的下降速率进行监测，即可测得样本中丙氨酸氨基转移酶（ALT）的活性。
(3)样本中内源性丙酮酸的干扰，可由试剂中的乳酸脱氢酶（LDH）在测定的延迟时间内快速、完全地消除，不会对测定产生干扰。
ALTL-丙氨酸 + -酮戊二酸丙酮酸 + L-谷LDH（乳酸脱氢酶）氨酸丙酮酸+ NADH + H+L-乳酸 + NAD+ + H2O3 标本3.1病人准备：12小时禁食。
3.2 类型：血清。
3.3. 标本存放：3天内的活性损失：2～8℃保存：<10%；15～25℃保存：<17%；标本稳定性：-20℃保存至少可稳定4周。
3.4 标本运输：常温条件下保存运输。
3.5 标本拒收标准：标本溶血、细菌污染的标本。
4 实验材料4.1 试剂：上海复星长征医学科学有限公司ALT试剂盒（沪食药监械（准）字2014第2400166号 YZB/沪 1546-40-2014）4.1.1 试剂组成试剂1 L丙氨酸 600mmol/L 乳酸脱氢酶＞1820U/L（R1）：NADH 0.26mmol/LTris缓冲液 80mmol/L试剂2（R2）：Tris缓冲液80mmol/L α氧代戊二酸36mmol/LEDTA 5.0mmol/4.1.2 试剂准备：试剂为即用式。
4.1.3 试剂稳定性与贮存：在2～8℃避光、密封的储存条件下，试剂盒自生产之日起有效期为12个月。
4.1.4 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。
丙氨酸氨基转移酶(ALT)实验操作规程
1.目的和适用范围：1.1.为保证血液检测的结果正确性，规范实验操作，特制定本操作规程。
1.2.适用于本实验室，全体工作人员都必须严格按照本操作规程进行操作。
2.术语：无。
3.职责：3.1.实验室工作人员都必须严格按照本操作规程进行操作。
3.2.实验室负责人负责最终实验室报告的签发。
4.操作说明4.1.实验原理：血清中谷－丙转氨酶作用于由丙氨酸及α酮戊二酸组成的基质产生丙酮酸，丙酮酸与2,4－二硝基苯肼作用，形成丙酮酸二硝基苯腙，在碱性溶液中呈红棕色。
反应过程如下：α酮戊二酸 + L丙氨酸→ L-谷氨酸 + 丙酮酸L-丙酮酸 + 2,4二硝基苯肼→ 2，4-二硝基苯腙 + 水4.2.实验所需设备和材料：ALT测定试剂盒、100μl加样器、一次性吸头、37℃水浴箱、DNM-9602酶标仪。
4.3.实验操作步骤：4.3.1.将基质液37℃保温5min。
4.3.2.微孔板上设定1个空白对照，3个标准孔，其余为样品孔。
4.3.3.各孔加缓冲液、基质液、丙酮酸与样品量如下：4.3.3.1.空白孔：10ul磷酸缓冲液后，再加50ul基质液。
4.3.3.2.标准孔：10ul磷酸缓冲液，加5ul丙酮酸标准液，再加45ul基质液。
4.3.3.3.样品孔：分别加样本10ul，加50ul基质液。
4.3.4.适当震荡混匀，置37℃温育30min。
4.3.5.每孔加2,4二硝基苯肼50ul,混匀后置37℃温育20min。
4.3.6.每孔加NaOH溶液150ul, 混匀后，置37℃温育5min。
4.4.结果判读：4.4.1.双波长（492nm,参考波长630nm）,以空白孔为零点，测定标准液与样品的OD值。
4.4.2.CUT OFF值为3个标准孔的平均值。
4.4.3.若样品OD值大于或等于CUT OFF值，为阳性。
4.4.4.若样品OD值小于CUT OFF值为阴性。
4.5.注意事项4.5.1.严重脂血，溶血或黄胆血清可使吸光度明显增加，因此检测此类标本应作血清对照管。
血清丙氨酸氨基转移酶测定
血清丙氨酸氨基转移酶测定1.实验原理国际临床化学学会(IFCC)推荐的紫外连续监测法。
ALTL-丙氨酸+ -酮戊二酸丙酮LDH（乳酸脱氢酶）酸+ L-谷氨酸丙酮酸+ NADH + H+L-乳酸+ NAD++ H2O 上述偶联反应中，NADH的氧化速率与`样品中ALT的活力成正比,在340nm处NADH呈现特性吸收峰，而NAD+则没有。
因此，可在340nm监测吸光度的下降速率（-△A/min）,计算出ALT的活性单位。
2. 标本：2.1 病人准备：12小时禁食。
2.2 类型：血清，肝素或EDTA血浆。
3. 标本存放：3天内的活性损失：2～8℃保存：<10%；15～25℃保存：<17%；标本稳定性：-20℃保存至少可稳定4周。
4. 标本运输：常温条件下保存运输。
5. 标本拒收标准：标本溶血、细菌污染的标本。
6. 实验材料6.1 试剂欧泰克ALT测定试剂盒6.1.1 试剂组成Tris缓冲液pH 7.4 80mmol/LL-丙氨酸800mmol/LLDH（乳酸脱氢酶）≥1200U/La-酮戊二酸18mmol/LNADH 0.18mmol/L6.1.2 试剂准备：试剂为即用式。
6.1.3 试剂稳定性与贮存：试剂保存于2～8℃，若无污染，可稳定至失效期。
试剂不可冰冻。
6.1.4 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。
6.1.5 注意事项：试剂中含叠氮钠（0.95g/L）为防腐剂。
不可入口！避免接触皮肤及粘膜。
应采取必要的预防措施使用试剂。
6.2 校准品：使用罗氏公司提供的校准品对自动分析仪进行校准，具体参见生化检验校准品和质控品.SOP 文件。
6.3 质控品：具体参见生化检验校准品和质控品.SOP 文件。
7. 仪器：日立7060生化分析仪8. 操作步骤8.1 项目基本参数：参见生化检验日立7060生化分析仪项目测定参数.SOP文件8.2 仪器操作步骤：参见生化检验日立7060生化分析仪操作规程.SOP文件9. 检验结果的判断与分析10. 质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。
血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性测定(改良赖氏法)
实验操作
取干净试管12支，按下表所示标号，要求各S 管和U管进行双管平行操作。先做对照管和测 定管，在30min保温期间再做空白管和标准管
1.标准曲线绘制：取试管5支，按下表操作
混匀，室温放置10分钟后，以蒸馏水调零，用 520nm波长比色，读取各管光密度。各管光密 度减去0管光密度，然后以光密度的差值为纵 坐标，各管相应的转氨酶活性单位为横坐标， 绘制标准曲线。为了方便，可将光密度相当于 转氨酶的卡门氏单位列于其后
2.酶活性的测定：取试管2支，注明测定管及对照管，
在测定前将底物液在37摄氏度水浴中预温5分钟，再按下表操作
混匀，室温放置10分钟后，以蒸馏水调零，用 520nm波长比色，读取光密度，用测定管的光 密度减去对照管的光密度查标准曲线，即得到 待测血清中所含ALT的酶的活性。 参考值：5~25卡门氏单位
临床意义
ALT（GPT)广泛存在于机体各种组织中，但 在肝细胞中含量最多，当肝脏有病变，特别是 急性肝炎及肝细胞坏死是，血清中ALT活性显 著升高。在肝癌、肝硬变以及胆道疾病时，此 酶活性也可或轻度增高。另外，其他脏器或组 织的疾病，该酶活性也升高。
注意事项
1.不同血清对照管光密度基本相同，因此，同一批标本制作2~3个血清 对照管求其平均值即可，亦可用空白管代替对照管。对超过正常的标本 进行复查时，每份标本均应作对照管。 2.严重脂血症、黄疸或溶血的血清都能引起测定管OD值增加，因此，检 查此类标本时，应做血清对照管。 3.赖氏法标准曲线只到97卡门氏单位，其线性关系良好。超过此活力的 标本，应将血清稀释后再测定，结果乘以稀释倍数。 4.ALT底物液与2，4-二硝基苯肼液配置要准确，每次测定时空白管的 OD值上下波动不应超过0.015.如超出此范围应检查试剂及仪器等方面的 问题。 5.除了丙酮酸与2，4-二硝基苯肼再碱性溶液中能成腙外，α -酮戊酸亦 能与2，4-二硝基苯肼产生苯腙，两种苯腙的吸光度在520nm处有较大 差异，因此超过一定范围时，该方法所绘制的标准曲线呈抛物线。
丙氨酸氨基转移酶检测操作程序
丙氨酸氨基转移酶检测操作程序丙氨酸氨基转移酶（alanine aminotransferase ，ALT ）属于转氨酶类，主要存在于肝细胞内，参与肝细胞内的新陈代谢，在血液中不发挥催化作用。
采用速率法测定，能有效地降低内源性物质的干扰，使测定结果较为准确。
主要用于肝脏等疾病的诊断。
实验原理L-丙氨酸和a-酮戊二酸在ALT 作用下，生成丙酮酸和L-谷氨酸。
丙酮酸被试剂中的LDH 还原为L-乳酸，同时NADH 被氧化为NAD +，通过监测340nm 处吸光度值下降的速率，可以测定ALT 活力。
样本中内源性丙酮酸的干扰可由试剂中LDH 在初始孵育期内快速、完全地消除，不会干扰测定。
反应如下：L-丙氨酸 + a-酮戊二酸丙酮酸 + L-谷氨酸丙酮酸 + NADH L-乳酸 + NAD+样本中丙酮酸 + NADH L-乳酸 + NAD+试剂与仪器1. 试剂1.1.丙氨酸氨基转移酶试剂盒（由上海复兴长征医学科学有限公司提供）化学组成：R1: L-丙氨酸600mmol/L 乳酸脱氢酶 ＞1820U/L NADH 0.26mmol/L Tris 缓冲液 80mmol/L R2: Tris 缓冲液 80mmol/L a-酮戊二酸 36mmol/LEDTA5.0mmol/L在开展项目之前或更换试剂品牌时，将以上工作参数输入到仪器内，并按要求进行调整后，方可进行实验。
技术性能指标:试剂空白起始吸光度（340nm37℃）≤1.60A 。
线性范围：450U/L ±10%。
准确度：相对偏差(RE%)≤±10%。
精密度：批内精密度变异系数(CV%)≤5%；批间精密度相对极差(%)≤5%。
储存条件、有效期：储存于2～8℃，避光可稳定12个月。
启用后可稳定30天。
混浊或以蒸馏水为空白在340nm 处光吸收值高于1.0A 时，则不能使用。
ALTLDH LDH计算公式： ALT(U/L )= K= ——————————式中 TV=总反应体积(mL )SV=样本体积(mL )6.3=NADH 在340nm 处的毫摩尔吸光系数P=比色杯光径(cm )K 为工作参数表中的【K Factor 】以上是依据化学实验计算测试结果的公式，全自动分析时将工作参数（K 值）输入仪器即可。
丙氨酸氨基转移酶测定方法操作规程
丙氨酸氨基转移酶（ALT）测定方法操作规程【产品名称】通用名称：丙氨酸氨基转移酶（ALT）测定试剂盒（IFCC法）【预期用途】该试剂盒采用IFCC法，用于体外定量测定人血清或肝素血浆中丙氨酸氨基转移酶的活力。
【检验原理】在ALT催化下，从丙氨酸转移到2个氨基到α-酮戊二酸上，生成产物谷氨酸和丙酮酸。
后者通过乳酸脱氢酶催化下转变成乳酸，在340nm波长条件下检测到NADH吸光度下降速率，与ALT的活力成比例。
L-ALT丙酮酸+ L-谷氨酸+LDH L-乳酸+NAD++H2O【主要组成成份】R1：Tris缓冲液150mmol/LL-丙氨酸750 mmol/L乳酸脱氢酶（LDH） 1200U/LNADH 0.4mmol/LR2：α-酮戊二酸90mmol/LNADH 0.9mmol/L*不同批号试剂盒各组分请勿混用。
【储存条件与有效期】未开启的试剂盒在2℃~8℃保存有效期为一年。
试剂开瓶后应避光保存，在2℃~8℃可稳定28天。
试剂不可冰冻。
【适用仪器】迈瑞BS系列全自动生化分析仪、日立7180型全自动生化分析仪、日立7060型全自动生化分析仪、日立7600P自动生化分析仪、奥林巴斯AU400型全自动生化分析仪、奥林巴斯AU2700型全自动生化分析仪、贝克曼库尔特AU680型全自动生化分析仪。
若需自动生化分析仪应用参数，请随时和公司联系。
建议用户在不同仪器上使用本产品时，根据实验室情况进行验证。
【样本要求】新鲜血清或肝素血浆样本，采集后及时测定，应避免污染。
【检验方法】试剂准备R1：即用液体试剂R2：即用液体试剂测定条件波长340nm温度37℃分析类型动力学法反应方向下降反应操作步骤* ΔA/min=ΔA/min样本管—ΔA/min空白管* 试剂和样本量可根据不同生化分析仪要求按比例适当增减。
校准校准品类型S1：生理盐水S2：迈瑞配套校准品推荐进行2点线性校准校准周期和要求（包括但不限于以下情况）更换试剂批号时仪器关键零部件更换时室内质控失效时质控每批样品检测时，建议使用迈瑞公司提供的配套质控品进行内部质量控制。
检验科生化丙氨酸氨基转移酶ALT测定的标准操作规程
丙氨酸氨基转移酶测定的标准操作规程【目的】体外检测血清中丙氨酸氨基转移酶（ALT ）的含量。
【职责】1.实验室工作人员均应熟知并严格遵守本SOP，室负责人监督落实。
2.本SOP的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字:室负责人、科主任。
【标本类型及实验前准备】1.受检者的准备病人空腹12h，不饮酒24h后采集血样。
体检对象抽血前应有两周的的正常状况记录。
注意有无应用影响测试项目的药物。
此外，对于体检者，采血的季节都应做相关记录，因为样本中各项目的含量有季节性变动，为了前后比较应在每年同一季节检验。
应嘱体检对象在抽血前24小时内不做剧烈运动。
2.静脉采血除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。
体位影响水分在血管内外的分布，会影响测试项目的浓度。
在采血前至少应静坐5分钟，一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1分钟，穿刺成功后立即松开止血带。
【仪器设备】东芝TBA-FX8全自动生化分析仪，低速离心机一、原理谷丙转氨酶催化L-丙氨酸的氨基转移，生成丙酮酸。
丙酮酸与NADH在LDH的催化下反应生成乳酸和NAD+。
NADH在340nm处有特异吸收峰，其被氧化的速率与血清中ALT的活性成正比，在340nm处测定NADH下降速率，即可测出ALT活性。
ALTL-丙氨酸+ a-酮戊二酸丙酮酸+ L-谷氨酸LDHNADH + 丙酮酸+ H+L-乳酸+ NAD+一、试剂1.试剂本科使用上海科华生物工程股份有限公司ALT试剂盒，为液体双试剂，各组分如下:2.校准血清使用上海科华生物工程股份有限公司提供的多项校准血清或采用因数法。
按照说明书提供的样本和试剂比例计算理论因数。
校准频次：空白定标：每日需做试剂空白定标。
全点定标：试剂换批号使用时或质控结果超过规定的2SD范围，需要全点定标。
三、操作样品为血清或肝素/EDTA抗凝血浆。
本法为IFCC法。
参数见后附，附录A。
试剂参数设置、定标操作以及样本检测常规操作，见仪器操作规程。
生物化学实验2.血清丙氨酸氨基转移酶测定.专科
一、实验目的
1.掌握血清丙氨酸氨基转移酶测定的原理和 方法
2.熟悉722G型可见光分光光度计的使用
二、实验原理
血清中的丙氨酸氨基转移酶（ALT），在37℃、pH7.4 的条件下，可催化基质（底物）液中的丙氨酸与α-酮戊 二酸生成谷氨酸和丙酮酸。
在足量底物作用下，生成产物越多表明酶活力越大， 酶浓度越高。一般以在一定时间内丙酮酸的生成量代 表血清ALT活力的大小
三、试剂和仪器
(一）试剂 1、 小牛血清 2、ALT底物液、2,4-二硝基苯肼溶液 0.4mol/L NaOH
(二）仪器 722G型可见光分光光度计、恒温水浴箱
四、操作步骤
1.标准曲线的绘制（不做）。 2.血清ALT活力测定 取两支试管按下表操作：
试剂（ml）
测定管
对照管
血清
0.1
0.1
ALT底物液
实验二
血清丙氨酸氨基转移酶测定
血清丙氨酸氨基转移酶测定
丙氨酸氨基转移酶（ALT）是体内最重要的转 氨酶之一，正常情况下，丙氨酸氨基转移酶主要存 在于各组织细胞中（以肝细胞中含量最多，心肌细 胞中次之），只有极少量释放入血，所以血清中此 酶活力很低。当这些组织病变、细胞坏死或通透性 增加时，细胞内的此类酶即可大量释放入血液中， 使血清中该酶活力显著增高。因此在患各种肝炎急 性病、药物中毒性干细胞坏死等疾病时，血清丙氨 酸氨基转移酶活力明显增高。
•从标准曲线上查出酶活力单位。
本法正常值：0~30单位。
注意事项
• 加完试剂需要将试管内溶液混匀 • 注意水浴的温度及时间 • 分光光度计的正确使用
• 【临床意义】
• 肝细胞中含ALT最丰富，因此当肝脏疾病致肝细 胞受损伤时，ALT即大量释放入血液，致使血清 中ALT活性增高。测定ALT是检查肝功能的重要 指标之一。ALT显著增高见于各种急性肝炎及药 物中毒性肝细胞坏死，中等程度增高见于肝癌、 肝硬化、慢性肝炎及心肌梗塞，轻度增高则见于 阻塞性黄疸及胆道炎等疾病。骨骼肌损伤、多发 性肌炎亦可引起转氨酶活性升高。
血清谷丙转氨酶测定标准操作规程
6 质控品与室内质控规则
6.1质控品采用由Beckman-Coulter公司提供的两个不同水平未定值质控血清。
6.2质控液重建方法：液态质控血清，即开即用，无需特殊准备。
6.3质控品测定：在每一批标本中测定两个水平质控血清各一次。
2.1.3急诊标本应记录采集时间、送检时间、接收时间。
2.1.4标本采集后与检验申请单一起及时运送至检验科。专人负责标本的接收并记录标本的状态，对不合格标本予以拒收。
2.1.5下列标本为不合格标本
2.1.5.1标本量不足：少于0.3ml的全血标本，或少于0.1ml的血清或血浆。
2.1.5.2对反应吸光度有干扰的标本，包括严重溶血、严重浑浊的标本。
血清丙氨酸氨基转移酶测定标准操作规程
1 检验申请
单独验项目申请：血清丙氨酸氨基转移酶测定(缩写ALT)；组合项目申请：血生化中肝功能测定。临床医生根据需要提出检验申请。
2 标本采集与处理
2.1标本采集
2.1.1常规静脉采血约2ml，不抗凝，置普通试管中。或采用含分离胶的真空采血管。
2.1.2检验申请单和血标本试管标上统一且唯一的标识符。
18.2北京利德曼生化技术有限公司丙氨酸氨基转移酶测定试剂盒说明书。
16 威胁生命的“紧急值”及报告规定：暂无规定。
17 有关引用程序与文件
17.1Abbott自动生化分析仪仪器标准操作规程。
17.2生化检验室内质控标准操作程序。
17.3检验结果审核程序。
17.4标本送检和接收程序。
18 参考文献
18.1陆永绥，张伟民主编. 临床检验管理与技术规程. 杭州:浙江大学出版社, 2004.
实验4血清丙氨酸氨基转移酶测定
实验六血清丙氨酸氨基转移酶测定一实验目的(1)了解血清酶活性测定的基本方法(2)掌握血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）测定的临床意义二实验原理丙氨酸及α-酮戊二酸在ALT作用下，生成丙酮酸及谷氨酸，丙酮酸与２,４-二硝基苯肼作COOH COOH| |COOH C=O COOH H –C–NH2| | ALT | |HC-CH3 +CH2 C=O + CH2| | | |NH2CH2NH2CH2|| |COOH COOH丙氨酸α-酮戊二酸丙酮酸谷氨酸用,生成丙酮酸２,４-二硝基苯腙,在碱性溶液中呈红棕色。
于波长505nm 处读取吸光度值,计算酶活性。
三试剂与主要器材（1）0.1mol磷酸盐缓冲液（PH7.4）：将0.1mol/L磷酸氢二钠溶液420ml，0.1mol/L磷酸二氢钾80ml，混匀，即为PH7.4、0.1mol磷酸盐缓冲液，加氯仿数滴，4℃保存。
（2）ALT基质液：称DL-丙氨酸1.79g,α-酮戊二酸29.2mg,加磷酸盐缓冲液（PH7.4）约50ml煮沸溶解后，待冷，用1mol/LnaOH调整PH7.4（约加0.5ml）,缓冲液加到100ml,加氯仿数滴, 4℃保存。
该溶液可稳定2周。
（3）２,４-二硝基苯肼溶液：称取２,４-二硝基苯肼19.8mg,溶于10mol/L 盐酸10ml中,完全溶解后蒸馏水至100ml，置棕色瓶中，室温保存，若有结晶析出，应重新配置。
（4）2μmol/L丙酮酸标准溶液：精称纯丙酮酸钠22.0mg于100ml容量瓶内,加磷酸盐缓冲液（PH7.4）至刻度。
此液应新鲜配制，不能存放。
（5）0.4mol/LnaOH溶液：将16gNaOH溶液于蒸馏水中，加蒸馏水至1000ml,置塑料瓶内，可长期使用。
四实验方法（1）标准曲线的制作。
0 1 2 3 4丙酮酸标准液（ml） 0 0.05 0.10 0.15 0.20基质液（ml） 0.5 0.45 0.40 0.35 0.30磷酸盐缓冲液（ml） 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1相当于酶活性单位（卡门单位） 0 28 57 97 150各管加入2，4–二硝基苯肼0﹒5 ml，混匀，37℃水浴20 min后加入0﹒4 mol/L NaOH 5﹒0 ml，混匀。
实验七血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性测定
实验七血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性测定生化实验生化实验释的丙酮酸标准液(500μg/ml)0.1ml,再按下表操作。
各管混匀，于室温静置10分钟，520nm波长，以第11管为空白管比色，读取各管光密度将各管丙酮酸含量（5－50μg）按下式换算成谷丙转氨酶活力单位: 以每100ml血清中丙氨酸氨基转移酶活力单位为横坐标，光密度为纵坐标绘制标准曲线。
2．酶活性的测定取干燥洁净试管2支，标明测定管和对照管，按下表操作。
混匀，静置10min，用分光光度计，在520nm波长，用蒸馏水调节零点，读取测定管和对照管光密度，以测定管光密度值减去对照管光密度值，然后从标准曲线上查出其酶的活力单位。
【注意事项】1．标本应空腹取血，当时进行测定或将分离的血清贮存于冰箱中。
2．酶的测定结果与酶作用时间、温度、PH及试剂加入量等有关，在操作时均应准确掌握。
3．测定试剂更换时，要重新制作标准曲线。
【临床意义】ALT广泛存在于一般组织细胞中,肝细胞中此酶含量最多。
肝炎、中毒性肝细胞坏死等肝病时，血清中此酶活性增加，其他疾病如心肌梗塞、心肌炎等亦有增高。
故血清丙氨酸氨基转移谷丙转氨酶活性得测定在临床诊断上具有重要意义。
【附注】1．酶活力的意义及测定方法研究酶促反应速度和各种因素对酶促反应速度的影响时，一般以酶的活力单位为观察指标。
酶活力是指酶催化化学反应的能力；酶活力的大小用酶活力单位表示，酶的一个国际单位为在25℃下，1分钟内催化1μmol/L底物的酶量，或是转化1微摩尔（1μmol）底物的有关基团的酶量。
测定酶活力时，常常用产物的生成量或是底物的消耗量来计算。
一般以测定产物增加量为好，因为产物从无到有，只要方法足够灵敏就可以准确测定。
2．测定血清丙氨酸氨基转移酶活性的方法简介一类是分光光度法，另一类是比色法。
前者是测定酶速率的方法，需要紫外分光光度计与酶试剂。
后者有金式(King)法，穆氏（Mohum）法与赖氏（Reitman Frankel）法3种。
丙氨酸氨基转移酶测定
丙氨酸氨基转移酶测定标准操作程序（SOP ）文件单位：故城县计划生育技术服务站编写者：宿金涛日期：2012年5月28日一、方法学原理丙氨酸+2-氧代戌二酸 丙酮酸+L-谷氨酸丙酮酸+NADH+H + L-乳酸+NAD ++H 2O NADH 氧化成NAD +引起340nm 处吸光度的下降,其下降速率与样品中ALT 活性成正比。
二、试剂深圳迈瑞 规格：R1：6*40mL ，R2：2*32mL ，试剂文号：粤食药监械（准）字2009第2400553号主要组成成分：试剂1（R1）：Tris 缓冲液 150mmol/LL-丙氨酸 750mmol/L乳酸脱氢酶 LDH ≥1200U/L试剂2（R2）：α-酮戌二酸 90mmol/LNADH 0.9 mmol/L三、仪器迈瑞BS-390生化分析仪四、样本要求不溶血血清或肝素抗凝血浆。
样品中丙氨酸氨基转移酶在2-8℃可稳定7天。
五、检验方法：测定条件：主波长 340nm温度 37℃分析类型 连续监测法检测 扣队空白杯六、操作步骤：*ΔA/min-ΔA/min 样本营-ΔA/min 空白管计算：建议使用校准品校准仪器，以吸光度变化率（ΔA/min ）为Y 轴，浓度为X 轴，在生化分析仪上建立校准曲线，根据样本的ΔA/min 在校准曲线上得到相应的浓度。
七、参考范围男性 女性37℃ <40U/L <28U/L30℃ <29U/L <20U/L仅供参考，建议各实验室对此予以确认或建立所服务人群的参考值。
空白/校准/样本 20uL试剂1 200uL混匀，37℃孵育1min试剂2 50uL混匀，37℃孵育1min 后,连续测定3min 内的吸光度，计算吸光度变化率（ΔA/min)。
LDH八、用途本试剂用于人血清或血浆中丙氨酸氨基转移酶的活性测定。
丙氨酸氨基转移酶在肝脏有较高的含量，而在心、肾、骨骼肌、胰、脾、肺中则含量较少。
丙氨酸氨基转移酶活性升高可由某些与肝脏有关的疾病，如：肝硬化、肝癌、病毒性或中毒性肝炎、阻塞性黄疸等引起。
丙氨酸氨基转移酶测定标准操作规程
丙氨酸氨基转移酶测定标准操作规程1.检验原理：（酶偶联速率法）L-丙氨酸和α-酮戊二酸在丙氨酸氨基转移酶的作用下生成丙酮酸和L-谷氨酸。
丙酮酸在乳酸脱氢酶（LDH ）作用下生成L-乳酸，同时还原型辅酶Ⅰ（NADH ）被氧化为氧化型辅酶Ⅰ（+NAD ），在340nm 处测得吸光度呈下降趋势与ALT 活性成正比。
根据NADH 吸光度下降程度计算丙氨酸氨基转移酶的活力单位。
试剂内不含磷酸弼哆醛。
L-丙氨酸+α-酮戊二酸−−→−ALT 丙酮酸+L-谷氨酸丙酮酸+NADH++H −−→−LDH L-乳酸++NAD2.试剂组成成分3.样本要求：新鲜无溶血血清。
在22～25℃保存8小时，2～8℃保48小时，-20℃保存7天，样本不可反复冻融！4.检验方法；仪器法（详见DF-603/DI-600标准操作规程）5.参考范围：6.检验结果的解释：6.1样本含量超出线性范围时，建议用0.9%（W/V ）的氯化钠溶液稀释样本。
6.2.单位换算：ukat/L=U/L ×16.67×310-7.检验方法的局限性7.1结果的准确性依赖于仪器的校正和测定温度、时间的控制。
7.2若试剂浑浊，或以水空白在340nm处吸光度小于1.000时不能使用。
8.试剂性能指标8.1试剂外观：无色或淡黄色透明液体，无悬浮物及沉淀。
8.2装量：不低于标识值。
8.3试剂空白吸光度：在340nm处，光径1cm时，空白吸光度A≥1.0008.4试剂空白吸光度变化率：在340nm处，光径1cm时，△A/min≤0.0048.5线性区间：试剂的线性区间为[10-500]U/L，在此线性区间内：a）线性相关系数r应不小于0.9900；b)[10-50]U/L区间内，线性绝对偏差不超过±5U/L；（50-500）U/L区间内，线性相对偏差不超过±10%。
8.6准确度：相对偏差应不大于±15%。
8.7分析灵敏度：在340nm处，光径1cm时，测量已知浓度的样品后换算成1U/L的丙氨酸氨基转移酶时，吸光度变化△AU/L/min≥2×4108.8批内精密度：CV≤5%8.9批间精密度：R≤10%8.10稳定性：（2-8）℃下，原包装存放的试剂有效期为12个月.取到期后一个月的试剂进行测试，应满足1-8的要求。
生化检验实验赖氏法测定血清丙氨酸氨基转移酶
步骤：一．组长取5个试剂瓶贴标签注明将要装的实际名称，然后倒取试剂。
血清由老师分装后，由组长领取。
二．测定血清ALT1.取2支试管，贴标签注明组别、学号、对照管（B）和测定管（U），用微量移液器分别加0.1ml血清。
2.用移液管向U管中加入0.5ml基质缓冲液。
B管不加。
混匀后同时在水浴温箱中37℃保温30min。
作用：U管中有酶促反应，B管无。
3.用移液管向B、U管各加0.5ml 2,4-二硝基苯肼溶液。
作用：终止反应，生成显色物质。
4.用移液管向B管加入0.5ml基质缓冲液，U管不加。
混匀后在水浴温箱中37℃保温20min。
作用：保证检测条件的一致性。
5.用移液管向B、U管各加2,4-二硝基苯肼溶液作用：碱性条件，显色。
6.B、U管室温放置5min，在波长505nm以蒸馏水调零，读取吸光度。
注意：基质缓冲液和2,4-二硝基苯肼溶液的加入顺序不能颠倒A。
表13-7三．ALT标准曲线绘制1.取5支试管，贴标签标明组别、学号、序号（0、1、2、3、4）。
用移液管取0.1 mol/l磷酸盐缓冲液，各加0.1ml。
2.用移液管取2.0 mol/l丙酮酸标准液加入各试管，0管不加，1、2、3、4管各加0.05、0.10、0.15、0.20ml。
作用：代替酶促反应产物。
3.用移液管取基质缓冲液加入各试管，0、1、2、3、4管分别加0.50、0.45、0.40、0.35、0.30ml。
4.用移液管取2,4-二硝基苯肼溶液加入各试管，各加0.5ml。
5.混匀，各试管同时在水浴温箱中37℃保温20min。
6.用移液管向各试管加2,4-二硝基苯肼溶液。
7.混匀，室温放置5min，在波长505nm以蒸馏水调零，读取吸光度A。
各管吸光度减去0管吸光度为该标准管的吸光度值。
8.以吸光度值为纵坐标，对应的卡门单位为横坐标，各标准管代表的活性单位与吸光度值作图，即成标准曲线。
表13-6。
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血清丙氨酸氨基转移酶试剂盒在2-8℃下避光保存可稳定一年；试剂R-1、R-2开启后在2-8℃避光保存可稳定一个月。
3.4样本稳定性与贮存
3.4.1分析用人基质质控血清：该血清自生产之日起，在2-8℃下保持可稳定4年；该血清一旦复融，在25℃下可稳定24小时，在2-8℃下可稳定7天，在-20℃
三级文件
血清丙氨酸氨基转移酶测定标准操作程序
文件编号：Leabharlann 版本/状态：A/1第2页共3页
生效日期：
目的：建立血清丙氨酸氨基转移酶测定标准操作规程。
范围：适用于血清丙氨酸氨基转移酶测定的标准操作。
职责：生化部检验人员对本规程的实施负责。
规程：
1测定方法：采用连续监测法测定人血清中丙氨酸氨基转移酶（ALT/GPT）的活力。
2仪器设备
GS200全自动生化分析仪
3试剂
3.1血清丙氨酸氨基转移酶试剂盒，包括试剂1（R-1）、试剂2(R-2)。
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试剂成份含量
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R-1乳酸脱氢酶（LDH）≥4000U/L
4.2检验方法
分析方法：速率A；主波长：340 nm；副波长：405nm；样品量：15.0ul；R-1：400ul，R-2：100ul；校准方式：K因子；反应方向：下降；测定温度：37℃。
样品与R-1混匀后反应5分钟，加入R-2混合后延迟60秒，测定240秒。
样品15ul主波长340nm
R-1 400ulR-2 100ul副波长405nm
三级文件
血清丙氨酸氨基转移酶测定标准操作程序
文件编号：
版本/状态：A/1
第3页共3页
生效日期：
可稳定1个月。
3.4.2待测血清：2-8℃保存可稳定7天；-20℃保存可稳定3个月。样本不可反复冻融。不可使用已被污染的样本。
4操作步骤
4.1打开全自动生化仪，按照GS200全自动生化分析仪操作维护保养程序，完成普通测试流程。
丙氨酸氨基转移酶催化L-丙氨酸的氨基转移到α-酮戊二酸生成丙酮酸和L-谷氨酸。乳酸脱氢酶（LDH）在催化丙酮酸还原的同时将NADH氧化成NAD+。通过测定NADH在340nm处吸光度下降的速度可求得丙氨酸氨基转移酶的活力。
ALT
L-丙氨酸+α-酮戊二酸────→丙酮酸+ L-谷氨酸
LDH
丙酮酸+ NADH + H+─────→乳酸+ NAD+
5检验结果的解释
抗坏血酸≤40mg/dl、游离胆红素≤684umol/L（40mg/dl）、结合胆红素≤684umol/L（40mg/dl）、血红蛋白≤500mg/dl、乳糜微粒≤3000浊度单位对测定无影响。
6注意事项
6.1高度溶血可导致正的误差。
L-丙氨酸≥025g/L
Tris≥7g/L
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R-2α-酮戊二酸二钠≥12.5g/L
辅酶I二钠盐（NADH·Na2）≥0.6g/L
Tris≥4g/L
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3.2分析用人基质质控血清（RANDOX）、血清
测光测光
K =4448
0 5610min
4.3计算
△A/min×Vt×1000
ALT（U/L）=─────────────
6.22×Vs×d
△A/min =每分钟吸光度变化率Vt =反应液总体积（ml）
1000 =U/ml到U/L的转换系数6.22 = NADH的毫摩尔吸光系数
Vs =样品体积（ml）d =比色杯光径（cm）