微生物学实验9 微生物生理生化实验的结果观察及放线菌、酵母菌和霉菌的培养

南京大学生物技术系实验报告

题目微生物生理生化实验的结果观察

及放线菌、酵母菌和霉菌的培养

姓名年05 月17 日

【一、实验目的】

1、了解反应原理和细菌的生理生化特性。

2、正确掌握测定的方法并用作鉴别细菌的重要依据。

【二、实验原理、步骤和结果】

一、细菌生理生化实验

1、过氧化氢试验

取一干净的载玻片，在上面滴一滴H2O2溶液，挑取一环菌苔，在H2O2溶液中涂抹，若产生气泡(氧气)为过氧化氢阳性反应，不产生气泡为阴性反应，本次实验用E.Coli和苏云金芽孢杆菌。

实验结果：两种细菌都产生了气泡(O2)，但E.Coli产生的气泡比苏云金芽孢杆菌更剧烈也更多。实验证明E.Coli含有较多的过氧化氢酶。

2、淀粉水解试验(最后做，先每4人转接其中的菌种于斜面，然后做实验)

淀粉是一种多糖，不能透过细菌细胞，但有的细菌能产生胞外的淀粉酶，将淀粉水解成麦芽糖后入细胞，淀粉遇碘呈蓝紫色。

取一瓶淀粉肉膏培养基熔化，每人倒一皿。冷却，把平板划分成两部分，一边接种E.Coli，一边接种枯草杆菌。用碘液淹没平板观察现象。

实验结果：E.Coli边缘呈蓝色，中间呈黄；而枯草芽孢杆菌则不变色。

3、甲基红(M.R.)试验

有些细菌在降解葡萄糖过程中产生大量的酸，使培养基的pH显著下降。甲基红指示剂可检测之，它在中性时呈黄色，酸性时呈红色。

将E.Coli及假单胞杆菌各接种2支葡萄糖蛋白水培养基。另有1支不接种对照。37℃培养7天。每支试管加5滴甲基红试剂观察颜色变化。

实验结果：对照组呈黄色，E.Coli呈红色证明有酸的产生；而假单胞杆菌的2支都变黄色。

4、乙酰甲基甲醇(V.P.)试验

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有些细菌能将糖代谢过程中产生的丙酮酸脱羧形成乙酰甲基甲醇、乙酰甲基甲醇在碱性条件下被空气中氧气氧化成二乙酰。二乙酰与蛋白胨中精氨酸所含的胍基超作用，生成红色化合物，为V.P.试验阳性。

接种、培养同甲基红试验。每ml培养液中加入0.6ml α－萘酚和0.2ml KOH溶液，充分振荡，静止15min后观察。

实验结果：E.Coli中加入α－萘酚后开始变红，再加入KOH后变绿色，振荡静置15min后上端有2cm呈红色为V.P.试验阳性；而假单胞杆菌呈绿色。

5、吲哚试验

有些细菌能分解蛋白胨中的色氨酸产生吲哚。吲哚与Kovac’s试剂中的对二甲基氨基苯甲醛作用，形成红色的玫瑰吲哚。

将E.Coli及枯草杆菌分别接入4支胰蛋白胨水培养基中，另有1支不接种作对照。37℃培养7天。每管滴入4～5滴乙醚，静止片刻，待乙醚浮至液面后缓慢加入Kovac’s试剂10滴，观察结果。

实验结果：E.Coli及枯草杆菌在该实验中都呈红色，证明两者都能分解蛋白胨中的色氨酸产生吲哚。

6、糖醇发酵试验

细菌利用葡萄糖的方式可能是氧化，也可能是发酵，糖代谢的结果是有酸产生，前者产酸量少，后者产酸量大，利用含有低有机氮的培养基可以鉴别细菌从糖类是氧化性产酸还是发酵性产酸。产生的酸可以通过在近中性时呈绿色，在酸性时呈黄色的指示剂表现出来。

取E.Coli和假单胞杆菌在葡萄糖发酵培养基和甘露醇发酵培养基上作穿刺接种，每种菌每种培养基接2支。其中4支用液体石蜡约8mm封管作为闭管，另4支不封作为开管，另作4支不接种的闭管及开管以作为对照。37℃培养7天后观察结果。

从实验结果来看，E.Coli是兼性细菌，在开管时进行氧化糖代谢，闭管

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时进行发酵(可能产生乳酸)；而假单胞杆菌是需氧型细菌，不能发酵产酸。

二、霉菌的三点接种法

根霉、产黄青霉、曲霉

1、找到PDA培养基(斜面或瓶装)、无菌培养皿。

2、划培养基，倒平板，冷凝(每4人最好3皿)。

3、接种(斜面或平板的三点接种或单点接种，每4人保证3种

霉菌都能培养)，温箱28℃培养。

三、微培养

需要无菌的(培养皿＋滤纸＋三角架)培养室

用无菌滴管滴加或接种环反复几次取一滴PDA于玻片接种，加盖片，微室(加无菌水湿润)培养(26~28℃)(不严格要求无菌)。

四、盖片法培养酵母菌(假菌丝形成)

于PDA平板上接种，平放盖片于接种划线上，每4人1皿。

五、插片法培养放线菌(26~28℃)

1、找到高氏培养基，无皿菌。

2、划培养基，倒平板。

3、划线接种。

4、无菌盖片45度斜插于划线上(深入培养基)，置28℃下培养

3～5天后取出盖玻片放在载玻片上镜检，可见菌体自然生长个体形态。

六、清理器皿、实验桌面

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