Masson三色染色试剂盒说明书
Masson染色的操作
贝博Masson染色试剂盒利用不同阴离子染料先后作用完成染色，根据组织不同的渗透 性，选择分子大小不同的阴离子染料进行染色，区分不同组织成分。操作简捷，性能稳定， 显色清晰。
注意事项： 1、 每个染色步骤均要保持玻片湿润。 2、 分色后不需冲洗，直接复染。 3、 镜检观察时若胶原纤维部分蓝色着色太浅，可用复染液复染 2-3 分钟，至颜色合适 为止。复染液染色时间不宜过长，否者颜色过深会造成对比不强烈。 4、 若整体染色效果不佳，可用水浸泡 60-90 分钟，褪色后，再重复染色。
传真：021-60853530
本产品仅供科学研究使用！
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BestBio-贝博
3、水合：蒸馏水中浸泡 2 分钟。 4、漂洗：30-40℃水漂洗两次，每次 30-60 秒。
产品说明书
样本的染色 1、 用蒸馏水润湿玻片 30-60 秒。 2、 核染液染色 60 秒左右，冲洗液冲洗 30 秒。 3、 浆染液染色 30-60 秒，冲洗液冲洗 30 秒。 4、 分色液分色 6-8 分钟。 显微镜下观察，样本中胶原纤维部分褪成淡的粉红色为 宜。如果褪色效果不佳，可适当延长时间。 5、 复染液染色 5 分钟，用无水乙醇冲洗干净。 6、 吹干后，用封固剂封片。 7、 结果观察。染色试剂盒
产品组成：
产品编号 试剂组分 核染液 浆染液 分色液 复染液 冲洗液
403023 20ml * 8
20 ml 20 ml 20 ml 20 ml 20ml * 4
储存条件： 室温保存。
有效期： 一年。
产品简介： Masson染色是用于显示组织中纤维的染色方法之一，是胶原纤维（collagen fiber）染
Masson三色法
Masson三色法（根据Masson,1929）一、试剂配制（一）Weigert氏铁苏木素液（可用Herris苏木素代替）甲液：苏木素1g无水酒精（或95％酒精）100ml乙液：29％三氯化铁水溶液4ml蒸馏水95ml （30%三氯化铁溶液则为100ml）盐酸1ml临用时，取甲、乙液等量混合即可应用。
混合时应将乙液加人甲液内，染液呈紫黑色。
铁苏木素不能象明矾苏木素一样配制后可放置贮存备用，因铁与染色剂的色素根会化合生成不溶性沉淀，所以铁作媒染液时，必须与染液分别配制和分别保存，染片时临时混合应用。
由于这是一种铁苏木素，它将胞核染成黑色。
能抵抗在对比染色液中所含分色剂的脱色作用，且不会被光线退色，因此比钾矾苏木素染色较为持久。
（二）丽春红酸性品红液丽春红（Ponceau 2R）0.7g酸性品红（acid fuchsin）0.3g蒸馏水99ml冰醋酸(glacial acetic acid) 1ml（三）1%磷钼酸水溶液磷钼酸（phosphomolybdic acid）1g蒸馏水加至100ml（四）2%苯胺蓝液苯胺蓝（aniline blue）2g冰醋酸（glacial acetic acid ）2ml蒸馏水加至100ml（五）亮绿液亮绿（light green）1g蒸馏水99ml冰醋酸（glacial acetic acid ）1ml（六）Bouin氏液苦味酸饱和液（1.22％）75ml福尔马林25ml冰醋酸5ml此液一般在临用时配制，对皮肤及肌腱有软化作用。
二、操作方法1．组织固定于Bouin氏液，流水冲洗一晚，常规脱水包埋。
2．切片脱蜡至水：（1）二甲苯中脱蜡10分钟×3次，用吸水纸吸干液体；（2）100%乙醇5分钟×2次，用吸水纸吸干液体；（3）95%乙醇5分钟×2次，用吸水纸吸干液体；；（4）流水2分钟，用吸水纸吸干水分；3．Weiger氏铁苏木素染5-10分钟。
Masson三色染色法--染色案例
Masson三色染色法
1.实验目的
MASSON染色观察病变的组织
2.实验材料
2.1石蜡切片
2.2仪器与试剂
2.2.1
（1）电热恒温干燥箱
（2）光学显微镜及拍照设备
（3）冰箱
（4）电子天平
（5）盖玻片
（6）染缸
2.2.2
（1）二甲苯
（2）无水乙醇
（3）Weigent氏苏木素液
（4）1％盐酸液
（5）立春红-品红溶液
（6）1％磷钼酸液
（7）1％淡绿液
（8）1％醋酸液
3.实验步骤：
操作方法：
(1)切片常规脱蜡至水，蒸馏水洗；
(2)Weigent氏苏木素液染核5-10分钟；
(3)自来水洗；
(4)1%盐酸酒精分化数秒（在显微镜下控制染色，除核为黑色，片中其他均混为白色）；
(5)自来水洗；
(6)丽春红—品红溶液5-10分钟
(7)清水水溶液洗；
(8)1%磷钼酸分化直到各种成分被染清晰10分钟（胶原纤维呈淡红色，肌纤维、纤维素呈鲜红色）；
(9)清水洗
(10)1%淡绿液染2—5分钟（或用2%苯胺蓝水溶液替代）
(11)1％醋酸水溶液处理2MIN
(12)常规脱水、透明、封片。
结果：胶原纤维绿色（或蓝色），肌肉、纤维素红色，红细胞橘黄色，核蓝黑色。
Human-肺癌-马松染色法
Human-肺-马松染色法
Human-软骨-马松染色法
Human-胰腺癌-马松染色法
武汉云克隆诊断试剂研究所。
Masson三色染色液G1006
Masson 三色染色液30ml+20ml*5RT产品简介：由Mallory 三色染色改造，利用两种或三种阴离子染料混合一起或先后作用完成染色，与阴离子染料分子的大小和组织的渗透性有关。
根据组织不同的渗透性能，选择分子大小不同的阴离子的染料进行染色，便可把不同组织成分显示出来。
包装内容：产品货号产品名称规格G1006-1重铬酸钾媒染剂30ml G1006-2Weigert 铁苏木素A 液20ml G1006-3Weigert 铁苏木素B 液20ml G1006-4丽春红酸性品红染液20ml G1006-5磷钼酸溶液20ml G1006-6苯胺蓝染液20ml保存条件：室温保存，有效期1年。
操作说明：1、石蜡切片脱蜡至水：依次将切片放入二甲苯Ⅰ20min-二甲苯Ⅱ20min-无水乙醇Ⅰ5min-无水乙醇Ⅱ5min-75%酒精5min ，自来水洗。
2、重铬酸钾染色：切片入重铬酸钾浸泡过夜，自来水洗。
3、铁苏木素染色：铁苏木素A 液与B 液等比混合成铁苏木素染液，切片入铁苏木素3min ，自来水洗，盐酸酒精溶液分化，自来水冲洗。
4、丽春红酸性品红染色：切片入丽春红酸性品红浸染5-10min ，自来水漂洗。
5、磷钼酸染色：磷钼酸水溶液浸染1-3min 。
6、苯胺蓝染色：磷钼酸之后不用水洗，直接入苯胺蓝染液染3-6min 。
7、分化：切片用1%冰醋酸分化，两缸无水乙醇脱水。
8、透明封片：切片放入第三缸无水乙醇5min ，二甲苯5min 透明，中性树胶封片。
9、显微镜镜检，图像采集分析。
染色结果：胶原纤维、粘液、软骨呈蓝色。
弹力纤维呈棕色。
肌纤维、纤维素和红细胞染红色。
细胞核染蓝黑色。
G 1006注意事项：1、Weigert铁苏木素分A、B两液，临用前将两液等比例混合使用。
不宜预先混合，否则容易氧化沉淀而失去染色力。
2、重铬酸钾染完后水洗要稍快，切片洗干净即可。
3、根据切片的数量对铁苏木素染液进行更换，也可以现配现用；4、丽春红的染色程度要控制好，胶原部分不能是红色或者太红，会影响后续苯胺蓝的着色；5、冰醋酸分化苯胺蓝的过程中，若是分化过度，胶原蓝色太浅，若分化不足，易与丽春红的颜色叠加呈紫蓝色。
百度文库-Masson染色液说明书
广州市外显子生物技术有限公司Http//Masson染色液说明书货号：S-1518规格：20ml产品组成：名称规格保存Weigert铁苏木素A液20ml RT避光Weigert铁苏木素B液20ml RT避光丽春红酸性品红染液20ml 2-4℃低温环境磷钼酸溶液20ml 2-4℃低温环境苯胺蓝染液20ml 2-4℃低温环境盐酸酒精分化液1%冰醋酸溶液20ml 2-4℃低温环境20ml 2-4℃低温环境简介：利用两种或三种阴离子染料混合一起或先后作用完成染色，与阴离子染料分子的大小和组织的渗透性有关，根据组织不同的渗透性能，选择分子大小不同的阴离子的染料进行染色，便可把不同组织成分显示出来。
储存条件：本试剂盒应贮存于2-4℃低温环境。
有效期：原包装未开封试剂有效期为12 个月，在有效期内的已开封试剂应在开封后 6 个月内使用完，每次用后应及时拧紧瓶盖，以免挥发或变质。
操作步骤：1.切片脱蜡至水。
2.Weigert铁苏木素使用前Weigert铁苏木素A、B 液等比例混合。
染10-20分钟，流水稍洗。
3.盐酸酒精分化，流水冲洗数分钟。
4.丽春红酸性品红染液染5-10分钟，蒸馏水稍冲洗。
5.磷钼酸溶液处理约5分钟，去掉溶液，不用水洗，直接用苯胺蓝染液复染5分钟。
6.1%冰醋酸处理1分钟，95%酒精脱水。
7.无水酒精脱水，二甲苯透明，中性树脂封固。
注意事项：1.Weigert铁苏木素分A、B两液，应于临用前将两液等份混合使用，而不宜预先混合，否则容易氧化沉淀而逐渐失去染色力。
2.磷钼酸处理时可在镜下控制，见肌纤维呈红色，胶原纤维呈淡红色即可。
染色结果：骨组织×200 结果判定：胶原纤维、粘液、软骨呈蓝色，弹力纤维呈棕色，肌纤维、纤维素和红细胞染红色，细胞核染蓝黑色。
Masson三色法
Masson三色法（根据Masson,1929）一、试剂配制（一）Weigert氏铁苏木素液（可用Herris苏木素代替）甲液：苏木素1g无水酒精（或95％酒精）100ml乙液：29％三氯化铁水溶液4ml蒸馏水95ml （30%三氯化铁溶液则为100ml）盐酸1ml临用时，取甲、乙液等量混合即可应用。
混合时应将乙液加人甲液内，染液呈紫黑色。
铁苏木素不能象明矾苏木素一样配制后可放置贮存备用，因铁与染色剂的色素根会化合生成不溶性沉淀，所以铁作媒染液时，必须与染液分别配制和分别保存，染片时临时混合应用。
由于这是一种铁苏木素，它将胞核染成黑色。
能抵抗在对比染色液中所含分色剂的脱色作用，且不会被光线退色，因此比钾矾苏木素染色较为持久。
（二）丽春红酸性品红液丽春红（Ponceau 2R）0.7g酸性品红（acid fuchsin）0.3g蒸馏水99ml冰醋酸(glacial acetic acid) 1ml（三）1%磷钼酸水溶液磷钼酸（phosphomolybdic acid）1g蒸馏水加至100ml（四）2%苯胺蓝液苯胺蓝（aniline blue）2g冰醋酸（glacial acetic acid ）2ml蒸馏水加至100ml（五）亮绿液亮绿（light green）1g蒸馏水99ml冰醋酸（glacial acetic acid ）1ml（六）Bouin氏液苦味酸饱和液（1.22％）75ml福尔马林25ml冰醋酸5ml此液一般在临用时配制，对皮肤及肌腱有软化作用。
二、操作方法1．组织固定于Bouin氏液，流水冲洗一晚，常规脱水包埋。
2．切片脱蜡至水：（1）二甲苯中脱蜡10分钟×3次，用吸水纸吸干液体；（2）100%乙醇5分钟×2次，用吸水纸吸干液体；（3）95%乙醇5分钟×2次，用吸水纸吸干液体；；（4）流水2分钟，用吸水纸吸干水分；3．Weiger氏铁苏木素染5-10分钟。
Masson三色染色操作规程
Masson染色,操作规程实验目的： Masson染色,用于显示组织中纤维的染色方法之一实验原理：Masson氏染色时胶原纤维呈蓝色(被苯胺蓝所染),肌纤维呈红色(被酸性品红和丽春红所染),这与阴离子染料分子的大小和组织的渗透性有关。
不同的组织和细胞成分,它们的孔隙大小是不同的。
孔隙的大小,决定了组织的渗透性。
如孔隙小,组织结构致密,渗透性低；孔隙宽,组织结构疏松,渗透性高。
如已固定的组织用一系列阴离子水溶性染料先后或混合染色,则可发现红细胞被最小分子的阴离子染料着染.肌纤维与胞质被中等大小的阴离子染料着染,而胶原纤维则被大分子的阴离子染料着染。
由此说明了红细胞对阴离子染料的渗透性最小,肌纤维与胞质次之,而胶原纤维具有最大的渗透性。
根据组织不同的渗透性能,选择分子大小不同的阴离子染料进行染色,便可把不同组织成分显示出来.而染料分子的大小,主要由其分子量来体现。
小分子量者易于穿透结构致密、渗透性低的组织,而大分子最者则只能进入结构疏松,渗透性高的组织。
一般来说,结构疏松,渗透性高的组织多选择大分子染料,而结构致密,渗透性低的组织多选择小分子染料。
试剂仪器：Harris 氏苏木精：苏木精0.4g，硫酸铝钾6g，黄色氧化汞0.16g，蒸馏水80ml。
将蒸馏水预热,预热过程中加入硫酸铝钾，沸腾后拔下电源，加入苏木精，接通电源再度沸腾后，拔掉电源，缓慢加入氧化汞，搅拌混匀，冷却后第二天加入5%比例的冰醋酸即可用。
透明玻璃瓶装缓慢氧化可省略冰醋酸，长期有效。
Masson丽春红酸性复红液：丽春红0.7g，酸性复红0.3g，蒸馏水99ml，冰醋酸1ml。
1%冰醋酸水溶液：冰醋酸1 ml，蒸馏水100 ml。
1%磷钼酸水溶液：磷钼酸1g，蒸馏水100 ml。
1%苯胺蓝水溶液：苯胺蓝1g，蒸馏水100 ml，冰醋酸2 ml。
1%光绿水溶液：光绿 1g，蒸馏水100 ml实验操作程序：1、石蜡切片脱蜡至水。
2、铬化处理或去汞盐沉淀（甲醛固定的组织此步可略）。
马松三色染色原理masson
备注
1 Bouin氏液是常用的混合固定液
配方： 苦味酸饱和液（1.22％）75ml 制，对皮肤及肌腱有软化作用。
福尔马林25ml
冰醋酸5ml
此液一般在临床用时配
2 苦味酸-酸性品红法
一Weigert氏铁苏木素液
甲酒精） 100ml
乙液 29％三氯化铁水溶液
4ml
蒸馏水
二 Van Gieson氏染液
A液:1%酸性品红水溶液 B液：苦味酸饱和水溶液（约1.2%） A、 B两夜分瓶盛放。临用前取A液1份，B液9份混合后使用 操作方法 1 组织固定于10%甲醛液，常规脱水包埋 2 切片脱蜡至水 3 用Weigert氏铁苏木素染液5~10分钟 4 流水稍洗 5 1%盐酸酒精迅速分化 6 流水冲洗数分钟 7 用Van Gieson氏染液染1~2分钟 8 倾去染液，直接用95%酒精分化和脱水（可放入温箱烤干后，直接透明封片） 9 无水酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封固 结果：肌纤维，胞质及红细胞黄色，胞核蓝褐色
95ml （30%三氯化铁溶液则为100ml）
盐酸
1ml
临用时，取甲、乙液等量混合即可应用。混合时应将乙液加人甲液内，染液呈紫黑色。铁苏木素不能象明矾苏 木素一样配制后可放置贮存备用，因铁与染色剂的色素根会化合生成不溶性沉淀，所以铁作媒染液时，必须与染 液分别配制和分别保存，染片时临时混合应用。
由于这是一种铁苏木素，它将胞核染成黑色。能抵抗在对比染色液中所含分色剂的脱色作用，且不会被光线退 色，因此比钾矾苏木素染色较为持久。
Masson染色 (2010-09-02 14:43:20)
标签： 杂谈 分类： 实验日志
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masson 染色原理
Masson三色法 （根据Masson,1929） 试剂配制 （一） Weigert氏铁苏木素液（见苦味酸——酸性品红法） （二） 丽春红酸性品红液 丽春红（Ponceau 2R） 0.7g 酸性品红（acid fuchsin） 0.3g 蒸馏水 99ml 冰醋酸(glacial acetic acid) 1ml （三） 1%磷钼酸水溶液 磷钼酸（phosphomolybdic acid） 1g 蒸馏水加至 100ml （四） 2%苯胺蓝液 苯胺蓝（aniline blue） 2g 冰醋酸（glacial acetic acid ） 2ml 蒸馏水加至 100ml （五） 亮绿液 亮绿（light green） 1g 蒸馏水 99ml 冰醋酸（glacial acetic acid ） 1ml 操作方法 1． 组织固定于Bouin氏液或Zenker氏液，流水冲洗一晚，常规脱水包埋。 2． 切片脱蜡至水。 如用Zenker氏液固定者，应进行除汞处理，其步骤如下： （1） 切片脱蜡后于0.5%碘酒精作用10分钟。 （2） 稍水洗 （3） 5%硫代硫酸钠作用5分钟。 （4） 流水冲洗10分钟 3． Weiger氏铁苏木素染5-10分钟。 4． 流水稍洗。 5． 1%盐酸酒精分化。 6． 流水冲洗数分钟。 7． 丽春红酸性品红液染5-10分钟。 8． 蒸馏水稍冲洗。 9． 1%磷钼酸水溶液处理约5分钟。 10．不用水洗，直接用苯胺蓝液或绿液复染5分钟。 11．1%冰醋酸处理1分钟。 12．95%酒精脱水多次。 13．无水酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封固 结果： 胶原纤维虽蓝色(用苯胶蓝液复染)或绿色(用亮绿复染)。胞质、肌纤维和红细胞红色。胞核蓝褐 色。 注意事项: 1.组织用Bouin氏液或Zenker氏液固定为佳。如已用10%甲酸液固定,切片可在脱蜡至水后.再放入 Bouin氏液作用一晚或置37。C温箱内1-2小时,然后流水冲洗切片至黄色消失再进行染色。 2.铁苏木素染核(见苦味酸一酸性品红法)。 3.如没有丽春红染料,可把酸性品红加至1克来配制。 4.用1%磷钼酸处理时可在镜下控制.见肌纤维呈红色,胶原纤维呈淡红色即可。 染色原理: 上面介绍的胶原纤维染色如苦味酸-酸性品红法和三色染色法,都是利用两种或三种阴离子染料混合 一起或先后作用而完成鉴别染色的。Van Gieson氏染色中,为什么胶原纤维呈红色(被酸性品红所 染),肌纤维呈黄色(被苦味酸所染).而Masson氏染色时胶原纤维呈蓝色(被苯胺蓝所 染),肌纤维呈红色(被酸性品红和丽春红所染),这与阴离子染料分子的大小和组织的渗透性有关。 组织的渗透性(Permeability),取决于组织的结构密度。如果细致地观察,会发现组织和细胞成分都
Masson三色染色图示
Masson三色染色法
试剂
1.Bouin液
饱和苦味酸75ml，甲醛25ml，冰醋酸5ml.
2.Ⅰ液：1%比布列西猩红水溶液90ml，1%酸性复红水溶液10ml，冰醋酸1ml。
3.Ⅱ液：磷钼酸 2.5g，磷钨酸2.5g，蒸馏水100ml
4.Ⅲ液：苯胺蓝2.5g，冰醋酸2ml，蒸馏水100ml。
5.weigert铁苏木精液
A液
苏木精1g
90%乙醇100ml
B液
30%氯化铁4ml
蒸馏水100ml
纯盐酸1ml
A和B液需要分瓶存放，临用前A液和B液等量混合
6.1%冰醋酸水溶液冰醋酸1ml，蒸馏水100ml。
Masson三色染色步骤
染色步骤
1.石蜡切片常规脱蜡至水
2.Bouin液室温过夜或56℃1h
3.流水冲洗黄色消失
4.蒸馏水洗
5.Weigerrt铁苏木精染核10mins
6.盐酸酒精分化
7.流水冲洗10mins
8.蒸馏水洗
9.Ⅰ液2mins
10.蒸馏水洗
11.Ⅱ液15mins
12.Ⅲ液5mins
13.蒸馏水洗
14.1%冰醋酸浸洗5mins
15.常规脱水、透明、封固
结果
肌肉红色
胶原纤维蓝色
核黑色。
马松三色染色原理masson
标签： 杂谈 分类： 实验日志
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masson 染色原理
Masson三色法 （根据Masson,1929） 试剂配制 （一） Weigert氏铁苏木素液（见苦味酸——酸性品红法） （二） 丽春红酸性品红液 丽春红（Ponceau 2R） 0.7g 酸性品红（acid fuchsin） 0.3g 蒸馏水 99ml 冰醋酸(glacial acetic acid) 1ml （三） 1%磷钼酸水溶液 磷钼酸（phosphomolybdic acid） 1g 蒸馏水加至 100ml （四） 2%苯胺蓝液 苯胺蓝（aniline blue） 2g 冰醋酸（glacial acetic acid ） 2ml 蒸馏水加至 100ml （五） 亮绿液 亮绿（light green） 1g 蒸馏水 99ml 冰醋酸（glacial acetic acid ） 1ml 操作方法 1． 组织固定于Bouin氏液或Zenker氏液，流水冲洗一晚，常规脱水包埋。 2． 切片脱蜡至水。 如用Zenker氏液固定者，应进行除汞处理，其步骤如下： （1） 切片脱蜡后于0.5%碘酒精作用10分钟。 （2） 稍水洗 （3） 5%硫代硫酸钠作用5分钟。 （4） 流水冲洗10分钟 3． Weiger氏铁苏木素染5-10分钟。 4． 流水稍洗。 5． 1%盐酸酒精分化。 6． 流水冲洗数分钟。 7． 丽春红酸性品红液染5-10分钟。 8． 蒸馏水稍冲洗。 9． 1%磷钼酸水溶液处理约5分钟。 10．不用水洗，直接用苯胺蓝液或绿液复染5分钟。 11．1%冰醋酸处理1分钟。 12．95%酒精脱水多次。 13．无水酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封固 结果： 胶原纤维虽蓝色(用苯胶蓝液复染)或绿色(用亮绿复染)。胞质、肌纤维和红细胞红色。胞核蓝褐 色。 注意事项: 1.组织用Bouin氏液或Zenker氏液固定为佳。如已用10%甲酸液固定,切片可在脱蜡至水后.再放入 Bouin氏液作用一晚或置37。C温箱内1-2小时,然后流水冲洗切片至黄色消失再进行染色。 2.铁苏木素染核(见苦味酸一酸性品红法)。 3.如没有丽春红染料,可把酸性品红加至1克来配制。 4.用1%磷钼酸处理时可在镜下控制.见肌纤维呈红色,胶原纤维呈淡红色即可。 染色原理: 上面介绍的胶原纤维染色如苦味酸-酸性品红法和三色染色法,都是利用两种或三种阴离子染料混合 一起或先后作用而完成鉴别染色的。Van Gieson氏染色中,为什么胶原纤维呈红色(被酸性品红所 染),肌纤维呈黄色(被苦味酸所染).而Masson氏染色时胶原纤维呈蓝色(被苯胺蓝所 染),肌纤维呈红色(被酸性品红和丽春红所染),这与阴离子染料分子的大小和组织的渗透性有关。 组织的渗透性(Permeability),取决于组织的结构密度。如果细致地观察,会发现组织和细胞成分都
Masson三色染色试剂盒甲苯胺蓝
Masson 三色染色试剂盒（甲苯胺蓝）说明书修订日期：2018.07.31Cat number：KGMST-8004Store at 2-8℃ for 12 monthsFor Research Use Only（科研专用）【适用范围】Masson 三色染色试剂盒主要用于结缔组织染色。
用于判定各种组织、器官的病变程度与修复情况，以不同色调显示与区分某些非结缔组织及物质成分；如显示与区分肌肉及其肿瘤组织的正常或异常成分。
尤适用于软组织肿瘤的鉴别诊断。
【主要成分】【染色步骤】1、切片脱蜡处理至水。
2、滴加 1 滴（50-100µl）苏木素染色液（试剂 A）染色 5-10 分钟。
蒸馏水冲掉染液。
3、蒸馏水或自来水冲洗 2-5 分钟。
4、滴加 1 滴（50-100µl）复合染色液（试剂 B）染色 5 分钟。
5、蒸馏水或自来水冲洗一下（2-3 秒，冲掉染液即可）。
6、滴加 1 滴（50-100µl）磷钼酸（试剂 C）染色 1 分钟。
7、甩干或自然晾干。
8、滴加 1 滴（50-100µl）甲苯胺蓝染色液（试剂 D）染色 5min 左右。
9、蒸馏水或自来水冲洗一下（2-3 秒，冲掉染液即可）。
10、放入烘箱（50－60 摄氏度）烘干。
中性树胶封片。
【结果】胶元纤维、黏液、软骨、神经纤维呈蓝色；肌肉、弹力纤维呈红色；神经轴索呈粉红色；纤维素呈紫红色；红血球呈橘红色。
细胞核呈蓝紫色。
【注意事项】1、不同的固定液或固定时间以及不一样的组织，染色效果可有差异，要根据显微镜下观察来掌握染色或分化时间。
2、染色液必须充分淹盖组织。
3、每次染色宜用阳性切片作对照。
【有效期】12 个月仅供研究、不用于临床诊断。
马松三色染色原理masson
备注
1 Bouin氏液是常用的混合固定液
配方： 苦味酸饱和液（1.22％）75ml 制，对皮肤及肌腱有软化作用。
福尔马林25ml
冰醋酸5ml
此液一般在临床用时配
2 苦味酸-酸性品红法
一Weigert氏铁苏木素液
甲液 苏木素
1g
无水酒精（或 95％酒精） 100ml
乙液 29％三氯化铁水溶液
4ml
蒸馏水
二 Van Gieson氏染液
A液:1%酸性品红水溶液 B液：苦味酸饱和水溶液（约1.2%） A、 B两夜分瓶盛放。临用前取A液1份，B液9份混合后使用 操作方法 1 组织固定于10%甲醛液，常规脱水包埋 2 切片脱蜡至水 3 用Weigert氏铁苏木素染液5~10分钟 4 流水稍洗 5 1%盐酸酒精迅速分化 6 流水冲洗数分钟 7 用Van Gieson氏染液染1~2分钟 8 倾去染液，直接用95%酒精分化和脱水（可放入温箱烤干后，直接透明封片） 9 无水酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封固 结果：肌纤维，胞质及红细胞黄色，胞核蓝褐色
95ml 用时，取甲、乙液等量混合即可应用。混合时应将乙液加人甲液内，染液呈紫黑色。铁苏木素不能象明矾苏 木素一样配制后可放置贮存备用，因铁与染色剂的色素根会化合生成不溶性沉淀，所以铁作媒染液时，必须与染 液分别配制和分别保存，染片时临时混合应用。
由于这是一种铁苏木素，它将胞核染成黑色。能抵抗在对比染色液中所含分色剂的脱色作用，且不会被光线退 色，因此比钾矾苏木素染色较为持久。
临用前取a液1份b液9份混合后使用操作方法1组织固定于10甲醛液常规脱水包埋2切片脱蜡至水3用weigert氏铁苏木素染液510分钟4流水稍洗51盐酸酒精迅速分化6流水冲洗数分钟7用vangieson氏染液染12分钟8倾去染液直接用95酒精分化和脱水可放入温箱烤干后直接透明封片9无水酒精脱水二甲苯透明中性树胶封固结果肌纤维胞质及红细胞黄色胞核蓝褐色
MASSON三色染色法
因此：在Masson染色法中，酸 性品红和丽春红染肌纤维，而苯 胺蓝或亮丽染胶原纤维。
【试剂配置】：
（1）Masson复合染色液
酸性品红1g ；丽春红2g；橘黄G 2g；0.25%醋酸300ml
（2）亮绿染色液
亮绿SF 0.1g ，0.2%醋酸100ml。
[染色步骤]：
（1）中性甲醛液固定组织，石蜡切片，常规脱蜡至水 （2）Masson复合染色液5min （3）0.2%醋酸水溶液稍洗。 （4）5%磷钨酸5-10min （5）0.2%醋酸水溶液浸洗2次 （6）亮绿染色液5min，0.2%醋酸水洗2次 （7）无水乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。
不同的组织和细胞成分，它们的空隙大小是 不同的，空隙的大小，决定了组织的渗透性， 如空隙小，组织结构致密，渗透性低；空隙 宽，组结构疏松，渗透性高。 如已固定的组织用一系列阴离子水溶性染料 先后或混合染色，则可发现红细胞被最小分 子的阴离子染料着染。由此说明红细胞对阴 离子染料的渗透性最小。肌纤维与胞质次之， 而胶原纤维具有最大的渗透性。 根据组织不同的渗透性能，选择分子大小不 同的阴离子染料进行染色，便可把不同组织 成分显示出来。
染料分子的大小，主要由其分子量来体现。 一般来说小分子量者易于穿透结构致密， 渗透性低的组织，而大分子染料只能进入 结构疏松，渗透性高的组织。 常用胶原纤维染色而几种阴离子染料的分 子量由小到大分别是：
Masson三色
Masson三色染色液说明书【产品名称】Masson三色染色液【包装规格】货号：DC0032套组包装规格：8×20ml/盒、8×100ml/盒、8×250ml/盒【预期用途】主要用于组织中结缔组织、肌肉和胶原纤维的组织细胞学染色。
【检验原理】Masson三色染色又称马松染色，是胶原纤维染色权威而经典的技术方法，所谓三色染色通常是指染胞核和能选择性的显示胶原纤维和肌纤维。
该法染色原理与阴离子染料分子的大小和组织的渗透有关：分子的大小由分子量来体现，小分子量易穿透结构致密、渗透性低的组织；而大分子量则只能进入结构疏松的、渗透性高的组织，苯胺蓝的分子量很大，染色后肌纤维呈红色，胶原纤维呈蓝色，主要用于区分胶原纤维和肌纤维。
【主要组成成分】试剂组成主要成分1、Weigert铁苏木素A液苏木素2、Weigert铁苏木素B液三氯化铁3、酸性乙醇分化液乙醇4、蓝化液碳酸盐5、丽春红品红染色液丽春红、品红6、乙酸溶液乙酸7、磷钼酸溶液磷钼酸8、苯胺蓝染色液苯胺蓝【储存条件及有效期】5℃～35℃保存，原包装未开封染色液的有效期为l8个月，在有效期内的已开封染色液建议在开封后6个月内使用完，每次用后应及时拧紧瓶盖，以免挥发或变质。
【样本要求】组织片充分固定和脱蜡。
【检验方法】1、组织固定于Bouin氏固定液(另购)或Zenker氏固定液(另购)或10%中性福尔马林固定液(另购)等，流水冲洗，常规脱水包埋；2、切片常规脱蜡至水；3、取适量的Weigert铁苏木素A液和Weigert铁苏木素B液等量混合,即为Weigert铁苏木素染色液，用Weigert铁苏木素染色液染色，流水稍洗；4、酸性乙醇分化液分化数秒，流水冲洗数分钟；5、蓝化液返蓝数秒，流水冲洗数分钟；6、丽春红品红染色液染色数分钟，流水稍冲洗；7、将蒸馏水:乙酸溶液按一定的比例配制乙酸工作液，用乙酸工作液洗切片；8、磷钼酸溶液处理后，倾去玻片上磷钼酸溶液(不用水洗)；9、苯胺蓝染色液复染，倾去玻片上染色液(不用水洗)；10、用乙酸工作液处理切片，至切片无蓝色脱出(必要时镜下控制)；11、95%乙醇迅速脱水，无水乙醇脱水数次后，二甲苯透明，中性树胶封固。
冰冻切片胶原纤维(MASSON)染色试剂盒产品说明书
GENMED SCIENTIFICS INC. U.S.A GMS80013.2 v.A GENMED冰冻切片胶原纤维（MASSON）染色试剂盒产品说明书（中文版）主要用途GENMED冰冻切片胶原纤维（MASSON）染色试剂是一种旨在使用胞核－胞浆－胶原蛋白三色染料（trichrome），分析和区分存档中的冰冻组织切片中的胶原纤维（collagen fiber）的权威而经典的技术方法。
该技术由大师级科学家精心改良传统方法、成功实验证明的。
主要适用于胶原蛋白和平滑肌的鉴别分析。
广泛用于结缔组织、肌肉组织和胶原蛋白的研究等。
产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，显色清晰。
技术背景基于摩罗利（mallory）首次应用三色系统的方法，马森（masson）进行了改良，在三色复合染料体系中，使用苯胺篮（aniline blue）替代绿篮，作为胶原蛋白的染色。
三色复合染料选择性地染色肌肉、胶原纤维、纤维蛋白（fibrin）和红细胞。
肝肾疾病，例如纤维化（cirrhsis）等，其胶原蛋白增多。
产品内容GENMED清理液（Reagent A）XX毫升GENMED包氏液（Reagent B）XX毫升GENMED韦格液（Reagent C）XX毫升GENMED比氏液（Reagent D）XX毫升GENMED酸性液（Reagent E）XX毫升GENMED染色液（Reagent F）XX毫升GENMED修正液（Reagent G）XX毫升产品说明书1份保存方式保存在4℃冰箱里，避免光照；试剂具有腐蚀性，注意安全；有效保证6月用户自备小型玻璃染色缸：用于组织或切片处理的容器培养箱：用于样品反应孵育微波炉：用于样品反应孵育处理载玻片和盖玻片：用于切片后铺片中性树脂：用于切片封片光学显微镜：用于切片染色后观察分析实验步骤操作一：标准染色1．准备好XX微米厚的冰冻切片2．小心加上XX微升GENMED清理液（Reagent A）在切片上，铺满整个切片样品表面3．室温下孵育XX分钟4．小心移去切片上的GENMED清理液（Reagent A）5．小心加入XX微升GENMED包氏液（Reagent B）在切片上，铺满整个切片样品表面6．放进60℃恒温培养箱孵育XX分钟（注意：避免干枯；如果强化效果，可以室温孵育16小时） 7．小心移去GENMED包氏液（Reagent B）8．室温下，小心将切片置入XX毫升GENMED清理液（Reagent A）中孵育2分钟9．小心移去切片上的GENMED清理液（Reagent A）10．小心加入XX微升GENMED韦格液（Reagent C）在切片上，铺满整个切片样品表面11．室温下孵育XX分钟12．小心移去GENMED韦格液（Reagent C）13．室温下，小心将切片置入XX毫升GENMED清理液（Reagent A）中孵育XX分钟14．小心移去切片上的GENMED清理液（Reagent A）15．小心加入XX微升GENMED比氏液（Reagent D）在切片上，铺满整个切片样品表面16．室温下孵育XX分钟（注意：可以延长至15分钟，增强染色效果）17．小心移去GENMED比氏液（Reagent D）18．小心加入XX微升GENMED清理液（Reagent A）在切片上，铺满整个切片样品表面19．小心移去切片上的GENMED清理液（Reagent A）20．重复实验步骤18至19二次21．小心加入XX微升GENMED酸性液（Reagent E）在切片上，铺满整个切片样品表面（注意：可以孵育15分钟，增强染色效果）22．小心移去切片上的GENMED酸性液（Reagent E）23．小心加上XX微升 GENMED染色液（Reagent F）在切片上，铺满整个切片样品表面24．室温下孵育XX分钟，避免光照（注意：可以延长至10分钟，增强染色效果）25．小心移去切片上的GENMED染色液（Reagent F）26．小心加上XX微升 GENMED修正液（Reagent G）在切片上，铺满整个切片样品表面27．室温下孵育XX分钟28．小心移去切片上的GENMED修正液（Reagent G）29．室温下，小心将切片置入XX毫升GENMED清理液（Reagent A）中孵育XX分钟30．小心移去切片上的GENMED清理液（Reagent A）31．放上盖玻片或封片（中性树脂）32．即刻在一般光学显微镜下观察：细胞核――呈现黑色细胞质――呈现红色肌纤维――呈现红色红细胞――呈现红色胶原纤维――呈现蓝色操作二：热处理染色1．准备好XX微米厚的冰冻切片2．小心加上XX微升GENMED清理液（Reagent A）在切片上，铺满整个切片样品表面 3．室温下孵育XX分钟4．小心移去切片上的GENMED清理液（Reagent A）5．准备1个XX毫升烧杯或小型染色缸6．加入XX毫升GENMED包氏液（Reagent B）7．小心放进上述脱腊处理的切片8．放进微波炉（600瓦）加热XX分钟9．室温下静置15分钟10．取出切片，小心移去切片上的GENMED包氏液（Reagent B）11．室温下，小心将切片置入XX毫升GENMED清理液（Reagent A）中孵育5分钟 12．小心移去切片上的GENMED清理液（Reagent A）13．小心加入XX微升GENMED韦格液（Reagent C）在切片上，铺满整个切片样品表面 14．室温下孵育XX分钟15．小心移去GENMED韦格液（Reagent C）16．室温下，小心将切片置入XX毫升GENMED清理液（Reagent A）中孵育5分钟 17．小心移去切片上的GENMED清理液（Reagent A）18．小心加入XX微升GENMED比氏液（Reagent D）在切片上，铺满整个切片样品表面 19．室温下孵育XX分钟（注意：可以延长至15分钟，增强染色效果）20．小心移去GENMED比氏液（Reagent D）21．小心加入XX微升GENMED清理液（Reagent A）在切片上，铺满整个切片样品表面 22．小心移去切片上的GENMED清理液（Reagent A）23．重复实验步骤21至22二次24．小心加入XX微升GENMED酸性液（Reagent E）在切片上，铺满整个切片样品表面 25．室温下孵育XX分钟（注意：可以延长至15分钟，增强染色效果）26．小心移去切片上的GENMED酸性液（Reagent E）27．小心加上XX微升 GENMED染色液（Reagent F）在切片上，铺满整个切片样品表面 28．室温下孵育XX分钟，避免光照（注意：可以延长至10分钟，增强染色效果） 29．小心移去切片上的GENMED染色液（Reagent F）30．小心加上XX微升 GENMED修正液（Reagent G）在切片上，铺满整个切片样品表面 31．室温下孵育XX分钟32．小心移去切片上的GENMED修正液（Reagent G）33．室温下，小心将切片置入XX毫升GENMED清理液（Reagent A）中孵育2分钟 34．小心移去切片上的GENMED清理液（Reagent A）35．放上盖玻片或封片（中性树脂）36．即刻在一般光学显微镜下观察：细胞核――呈现黑色细胞质――呈现红色肌纤维――呈现红色红细胞――呈现红色胶原纤维――呈现蓝色注意事项1．本产品为50次操作2．操作时，须戴手套3．试剂具有腐蚀性，注意操作安全4．建议使用玻璃染色缸5．每次更换试剂溶液时，保持切片面基本晾干6．试剂溶液在切片表面时，避免有气泡存在，同时确保铺满切片表面7．整个操作，在避光状态下进行8．染色完成后，即刻进行光学显微镜观察9．样品染色后保存，避免光照10．本公司提供系列特定组织染色试剂产品质量标准1．本产品经鉴定性能稳定2．本产品经鉴定显色清晰使用承诺杰美基因秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。
MASSONS三色
胶原纤维- MASSON'S 三色(TRI)目的：用于鉴别胶原纤维和平滑肌肿瘤，肝硬化的胶原纤维增生。
肝肾活检组织的常规染色。
原理：与名称暗示的一样，三种染料分别着染肌肉、胶原纤维、纤维蛋白和红细胞。
三色染色的基本原理是孔隙较小的组织被最小的染料分子着染。
只要大分子的染料能够穿透组织，而损失的总是较小的染料分子。
建议染色时首先染酸性染料。
比布里希猩红能与嗜酸性组织成分结合。
当用磷酸处理时，只有渗透性较小组织成分能保留红色，胶原纤维组织的红色被冲出。
同样原理使胶原纤维与苯胺蓝结合。
固定：首选Bouin's液，10%甲醛。
技术：石蜡切片4μm。
设备：蒸馏水清洗玻璃器皿，染色缸，60°C 烤箱或水浴箱，微波炉。
试剂：Bouin’s 固定液饱和苦味酸1500.0 ml甲醛500.0 ml冰醋酸100.0 ml混合溶解，标签，日期和签名。
保存期2年。
警告：致癌物质，刺激性。
比布里希猩红：比布里希猩红 2.7 gm酸性品红0.3 gm蒸馏水300.0 ml冰醋酸 3.0 ml混合溶解，标签，日期和签名。
保存期6个月。
警告：避免接触和吸入。
Weigert's铁苏木精原液A：苏木精 5.0 gm95% 酒精500.0 ml混合溶解，标签，日期和签名。
保存期1年。
警告：易燃性，避免接触和吸入。
原液B：29%三氯化铁20.0 ml蒸馏水475.0 ml盐酸 5.0 ml混合溶解，标签，日期和签名。
保存期1年。
Weigert's 苏木精工作液溶液A 25.0 ml溶液B 25.0 ml混合溶解，溶液可保留3-4。
磷钼酸/磷钨酸溶液：磷钼酸25.0 gm磷钨酸25.0 gm蒸馏水1000.0 ml混合溶解，标签，日期和签名。
保存期6个月。
警告：避免接触和吸入。
苯胺蓝：苯胺蓝 2.5 gm蒸馏水100.0 ml冰醋酸 1.0 ml混合溶解，标签，日期和签名。
保存期6个月。
警告：避免接触和吸入。
Masson三色染色液染色步骤及注意事项
Masson三色染色液染色步骤及注意事项步骤一：预处理1. 切片：将需要染色的组织标本切成厚度约为5um的切片，将切片均匀地放置在已经预先烘干和标记好的玻片上。
2.固定：用10%中性缓冲福尔马林固定切片，固定时间约为24小时。
步骤二：染色1. 染色剂的准备：将Masson三色染色液购买回来后，根据品牌推荐比例稀释至适当浓度。
不同品牌染色液稀释比例可能有所不同，因此以具体品牌的说明为准。
2.染色操作：(1)将切片放入染色盒中，并将染色盒放入水浴中加热，温度为60-70摄氏度，时间为20-30分钟。
(2)将加热后的染色盒取出，用水冲洗2-3分钟，直至明显的污染物被冲走。
(3)将切片置于70%酒精中，时间为5分钟。
(4)在20%盐酸酒精中浸泡1-2秒钟，然后立即将切片漂洗至酸性的第一盐酸酒精。
(5)在酸性的第一盐酸酒精中浸泡30秒至1分钟，然后漂洗至酸性的第二盐酸酒精中。
(6)在酸性的第二盐酸酒精中浸泡30秒至1分钟，然后漂洗至蒸馏水中。
(7)转移到可溶性亮蓝GR中染色5分钟。
(8)快速漂洗后，放入蒸馏水中清洗1-2分钟。
(9)再次转移到1%醋酸中染色1分钟。
(10)最后，在6%石蜡溶液中浸泡5-10分钟。
步骤三：封片1.脱水：将切片放入95%乙醇中，时间为1-2分钟，然后放入绝对乙醇脱水2-3分钟。
2.渗透：将切片放入二氯甲烷中，时间为5分钟，再在房温下放置3-5分钟以充分渗透。
3. 封片：将切片放入500-1000ml锡兰红封片剂中，时间为1-2分钟，然后将切片转到盖玻片上，将封片剂挤满，盖上玻片，压平后放在60摄氏度的烘箱中加热2-3小时。
注意事项：1.操作中应注意个人防护，佩戴手套和口罩，避免接触有害物质。
2.染色过程中要严格控制温度和时间，避免染色过程中出现偏差。
3.在脱水和封片过程中要注意将切片完全浸透，防止切片变形或脱落。
4.染色溶液和液体处理过程中，应注意防止溅溢和污染，保持操作环境清洁。
masson三色法染色
Masson复合染色液的配制：酸性复红1 g丽春红2 g橘黄G 2 g0.25%醋酸300 ml混匀，过滤后备用。
亮绿染色液的配制：亮绿干粉0.1 g0.2%醋酸100 ml充分混匀，过滤后备用。
Masson染色（1）常规脱蜡至水：二甲苯Ⅰ10 min→二甲苯Ⅱ10 min→100%酒精Ⅰ5 min→100%酒精Ⅱ5 min→95％酒精3 min→90％酒精3 min→80％酒精3 min→70％酒精3 min→蒸馏水1 min（2）Masson染色：Masson复合液5 min→自来水过洗2次→0.2%醋酸Ⅰ1 min→0.2%醋酸Ⅱ1 min→自来水过洗1次→1%磷钨酸6 min→自来水过洗1次→亮绿15min→自来水过洗2次→0.2%醋酸Ⅰ1 min→0.2%醋酸Ⅱ1 min→自来水过洗1次（3）常规脱水透明：70%酒精30 s→80％酒精30 s→90%酒精30 s→95％酒精30 s→100%酒精Ⅰ5 min →100%酒精Ⅱ5 min→二甲苯Ⅰ5 min→二甲苯Ⅱ10 min→中性树胶封片至于操作要点的话觉得就是在masson复合液和亮绿的染色时间得摸索一下，还有就是70，80酒精时间尽量短，脱色很厉害，不过要是实在脱得严重的话，还可以倒回来重新染色附图一张，心肌梗死masson染色，肌纤维红色，胶原绿色，红细胞橘黄色高倍镜下•脱水4%多聚甲醛中固定，常规石蜡包埋切片；切片脱蜡至水后入重铬酸钾—醋酸液或3%升汞处理1小时；水洗后染Regaud氏苏木素10分钟；自来水充分洗后，用2%盐酸酒精分化；流水冲洗到蓝黑色；1%丽春红酸性品红液中染5分钟；蒸馏水洗；1%磷钼酸水溶液媒染5分钟；不经水洗入2%淡绿液3分钟；1%醋酸液分色1分钟；脱水、透明、中性树胶封固。
结果：细胞核染黑蓝色，胶原纤维呈绿色，神经胶质纤维、肌纤维、红细胞呈红色。
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Masson三色染色试剂盒说明书
Masson 三色染色试剂盒说明书（南京森贝伽生物科技有限公司）
【产品介绍】
Masson 染液是显示组织中纤维染色的主要方法之一，是胶原纤维染色权威而经典的技术方法。
该法染色原理与阴离子染料分子的大小和组织的渗透有关。
分子的大小由分子量来体现，小分子量易穿透结构致密、渗透性低的组织，而大分子量则只能进入结构疏松的、渗透性高的组织。
淡绿分子量最大。
因此Masson 染色肌纤维红色，胶原纤维绿色，主要用于区分胶原纤维和肌纤维。
【用途】主要用于胶原纤维染色。
【产品特点】
①染色稳定；②分化时间短，1～2 分钟；③色彩清晰鲜艳；④适用范围广，适宜于组织的石蜡切片、冰冻切片等染色；⑤所染切片保存时间长且不易褪色。
固定：甲醛升汞或甲醛盐溶液。
切片：所有类型。
【产品组成】
编号名
SBJ0126
（7×50ml）SBJ0126
（7×100ml）
SBJ0126
（7×500ml）
Storage
试剂（A）
A1：苏木素染色液25ml 100ml 500ml RT
A2：三氯化铁水溶液25ml 100ml 500ml RT 临用时取A1、A2 等量混合，成为试剂（A），不可预先配制后放置，因染色液的色素根与铁
会化合，形成不容性沉淀，等量混合后，一般24h 后失去染色力。
试剂（B）: 盐酸乙醇分化液50ml 100ml 500ml RT 试剂（C）: 氨水水溶液50ml 100ml 500ml RT 试剂（D）: 丽春红酸性品红染色液50ml 100ml 500ml RT 试剂（E）: 乙酸水溶液50ml 100ml 500ml RT 试剂（F）: 磷钼酸水溶液50ml 100ml 500ml RT 试剂（G）: 苯胺蓝染色液50ml 100ml 500ml RT 【参考操作步骤】
1、切片脱蜡至水。
2、试剂（A）染色5min～10min。
3、试剂（B）分化、水洗，试剂（C）返蓝、水洗。
4、蒸馏水或者去离子水洗1min。
5、试剂（D）染色5～10min。
6、试剂（E）洗1min。
7、试剂（F）洗1～2min。
8、试剂（E）洗1min。
9、直接放入试剂（G）染色1～2min。
10、试剂（E）洗1min。
11、95%乙醇和无水乙醇脱水、二甲苯透明、中性树胶封固。
【染色结果】
细胞核呈蓝色，胞浆、肌肉、红细胞呈红色，胶原蛋白呈蓝色。
【贮存】
本试剂盒应置2℃～25℃，Masson A、D、F、G 液需要避光保存。
【注意事项】
1、组织固定起着非常重要的作用，使用不同的固定液可延或缩短染色时间。
2、一般要求试剂（A）染核，也可用Harris 苏木精染核，但染核后切片颜色不够鲜艳。
3、试剂（F）分化要在镜下控制，分化到胶原纤维呈淡红色，纤维呈红色即可，分化时间根据染色深浅而定，一般1～2min。
4、试剂（E）为0.2%乙酸水溶液，可使色彩更清晰鲜艳，如果使用量大可自行配制。