活螨、大肠杆菌检查操作规程
大肠杆菌标准检测流程
大肠杆菌标准检测流程一、样品采集。
这可是检测的第一步呢，就像找宝藏得先知道宝藏大概在哪一样。
采集样品的时候得特别小心，要选对地方。
如果是检测食品里有没有大肠杆菌，那就要从食品的不同部位采集，像苹果的话，表面和果肉都得取点样，可不能只取一个地方就完事儿了。
要是检测水呢，那也得取有代表性的水样，比如说从水的表层、中层和底层都取一点混合起来，这样检测出来的结果才更靠谱。
采集样品的时候工具也要干净无菌，不然就把杂菌带进去了，那检测结果可就乱套了。
二、样品处理。
采集好样品就得处理啦。
对于固体的样品，像是食物之类的，得把它弄碎成均匀的小颗粒，就像把一块大蛋糕掰成好多小碎块一样。
然后加入一些特定的液体，这个液体能让大肠杆菌从食物颗粒里跑出来，进入到液体里，方便我们后续检测。
对于液体样品呢，要是比较浑浊的，可能还得过滤一下，把那些大的杂质去掉，留下清澈一点的液体，这样大肠杆菌在里面就更显眼啦。
三、增菌培养。
处理好的样品就可以进行增菌培养喽。
这就像是给大肠杆菌盖个小房子，还提供好多好吃的，让它们快快繁殖。
把样品放到专门的培养基里，这个培养基就像是为大肠杆菌特制的营养大餐，里面有它们生长需要的各种营养成分。
然后把这个放了样品的培养基放到合适的温度下，一般是37摄氏度左右，这个温度对大肠杆菌来说就像春天的阳光一样温暖舒适，它们就会在里面开心地繁殖起来啦。
这个过程可能得持续一段时间，几个小时到一天不等，就看大肠杆菌们的心情啦，哈哈，其实是看它们繁殖的速度啦。
四、分离培养。
等大肠杆菌繁殖得差不多了，就要把它们从一堆细菌里分离出来。
这时候就用到平板啦。
把增菌后的样品接种到平板培养基上，然后用一种特殊的方法把它们均匀地涂开，就像画画一样把细菌均匀地涂在平板上。
然后把平板放到培养箱里继续培养。
在平板上，大肠杆菌会长成一个个小菌落，每个菌落就像是一个小家庭一样，都是由一个大肠杆菌繁殖出来的。
而且大肠杆菌的菌落有它自己的特点，比如说颜色、形状、大小之类的，通过这些特点我们就能初步判断是不是大肠杆菌啦。
大肠菌群测试片操作流程
大肠菌群测试片检测操作流程1.样品的前处理:(建议使用蔬菜瓜果、河水及大肠菌群标准菌作为样品)（1）蔬菜瓜果：称取25g样品切成1cm左右的碎片，置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000r/min~10000r/min均质1min~2min制成1:10的样品匀液。
（2）河水：以无菌吸管吸取25mL河水置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶中，充分混匀，制成1:10的样品匀液。
（3）大肠杆菌标准菌：挑取平板上大肠杆菌标准菌的单菌落，于盛有5mL LB 液体培养基的试管中，37℃培养过夜，以此作为菌原液。
用1mL无菌吸管或微量移液器吸1mL菌原液于盛有9mL的稀释液的无菌试管中，制成1:10的样品匀液。
2.样本稀释倍数：用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品匀液1mL，沿管壁缓慢注于盛有9mL的稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸管尖端不要触及稀释液面），振荡试管或换用一只无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1:100的样品匀液。
按此操作程序，制备10倍系列稀释样品匀液，每递增稀释液需用1mol/L氢氧化钠（NaOH）或1mol/L盐酸（HCl）调节pH至7.0~7.2。
（1）蔬菜样品的稀释倍数：取100、10-1两个稀释度进行接种验证(可根据实际情况而定)。
（2）河水样品的稀释倍数：取10-1、10-2两个稀释度进行接种验证(可根据实际情况而定)。
（3）大肠菌群标准菌的稀释倍数：取10-7、10-8两个进行接种验证(可根据实际情况而定)。
（4）自来水的稀释倍数：直接取自来水接种进行验证。
3.接种一般食品选1～2个稀释度进行检测，含菌量少的液体样品（如饮用纯水和矿泉水等）可直接吸取原液进行检测。
将大肠菌群测试片置于平坦实验台面，揭开上层膜，用无菌吸管吸取1mL样品匀液垂直加入到测试片中央，用手轻轻将上层盖下，使检测样品液覆盖整个检测圈（应尽量避免产生气泡），静置1 min使培养基凝固，最后用手轻轻将上层盖下。
大肠杆菌的检测：大肠菌群测定的操作细则(中英文对照版)
大肠杆菌的检测:大肠菌群测定的操作细则大肠菌群系指一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。
该菌主要来于人畜粪便,故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量,推断食品中有否污染肠道致病菌的可能。
食品中大肠菌群数系以100mL(g)检样内大肠菌群最可能数(MPN)表示。
1 设备和材料1.1 温箱:36±1℃。
1.2 冰箱:0~4℃。
1.3 恒温水浴:44.5±0.5℃。
1.4 天平。
1.5 显微镜。
1.6 均质器或乳钵。
1.7 平皿:直径为90mm。
1.8 试管。
1.9 吸管。
1.10 广口瓶或三角烧瓶:容量为500mL。
1.11 玻璃珠:直径约5mm。
1.12 载玻片。
1.13 酒精灯。
1.14 试管架。
2 培养基和试剂2.1 乳糖胆盐发酵管:按GB 4789.28中4.9规定。
2.2 伊红美蓝琼脂平板:按GB 4789.28中4.25规定。
2.3 乳糖发酵管:按GB 4789.28中4.10规定。
2.4 EC 肉汤:按GB 4789.28中4.11规定。
2.5 磷酸盐缓冲稀释液:按GB 4789.28中3.22规定。
2.6 生理盐水。
2.7 革兰氏染色液:按GB 4789.28中2.2规定。
3.1 检样稀释3.1.1 以无菌操作将检样25mL(或g)放于有225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内(瓶内予置适当数量的玻璃珠)或灭菌乳钵内,经充分振摇或研磨做成1:10的均匀稀释液。
固体检样最好用均质器,以8 000-10 000 r/min的速度处理1min,做成1:10的均匀稀释液。
3.1.2 用1mL灭菌吸管吸取1:10稀释液1mL,注入含有9mL灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内,振摇试管混匀,做成1:100的稀释液。
3.1.3 另取1mL灭菌吸管,按上条操作依次做10倍递增稀释液,每递增稀释一次,换用1支1mL灭菌吸管。
3.1.4 根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计,选择三个稀释度,每个稀释度,接种3管。
大肠菌群测定操作规程
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大肠菌群测定操作规程
适用范围：大肠菌群系指一群在 36℃条件下培养 48h 能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧的革 兰氏阴性无芽孢杆菌。通常用此法作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量。
二． 1.
操作内容： 检验程序： 检样→ 稀释 → LST 发酵管（36±1℃，24±2h）
↓→不产气 → 大肠菌群阴性 → 报告 产气 →BGLG（36±1℃，48±2h） → 不产气 → 大肠菌群阴性 → 报告 产气 → 大肠菌群阳性 → 报告 2. 操作方法：
2.1 以无菌操作，将检样 10ml 被测液放于含有 90ml 灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内（瓶 内预置适当数量的玻璃珠）或灭菌乳钵内，经充分振摇或研磨做成 1：10 的均匀稀释液。 2.2 用 1ml 灭菌吸管吸取 1：10 稀释液 1ml，沿管壁徐徐注入含有 9ml 灭菌生理盐水或其他稀释液的 试管内（注意吸管尖端不要触及管内稀释液） ，振摇试管，混合均匀，做成 1：100 的稀释液。 （均 液的 PH 值应在 6.5～７.5 之间，必要时分别用 1mol/L 氢氧化钠（NaoH）或(1mol/L)盐酸（HCL） 调节。 2.3 另取 1ml 灭菌吸管，按上条操作顺序，做 10 倍递增稀释液，如此每递增稀释一次，即换用 1 支 1ml 灭菌吸管。 2.4 根据食品卫生标准要求或对检污染情况的估计，选择三个稀释度，每个稀释度接种 3 管。 2.5 初发酵试验：将待检样品接种于月桂基硫盐胰蛋白胨发酵管内，接种量在 1ml，每一稀释度接种 3 管， 36±1℃文箱内培养 24±2h， 置 观察倒管内是否有气泡产生， 如未产气则继续培养至 48h±2h. 记录在 24h 和 48h 内产气的 LST 肉汤管数。未产气者为大肠菌群阴性，产气者则进行复发酵试验。 2.6 复发酵试验 用按种环从所有 48h±2h 内发酵产气的 LST 肉汤管中分别取培养物 1 环， 移种于 BGLB 肉汤管中， 36±1℃培养 48h±2h，观察产气情况。产气者，计为大肠菌群阳性管。 2.8 报告： 根据证实为大肠菌群阳性的管数， MPN 检索表 查 （见 GB/T4789.3 附表 B） 报告每 100ml ， （g） 大肠菌群的 MPN 值。
大肠杆菌检验大体步骤
大肠杆菌的检验方法(大体步骤)
1、稀释样品匀液根据对样品污染情况的估计,用稀释剂将样品匀液制成一系列十倍递增的样品稀释液。
2、对每个样品,选择适宜的三个连续稀释度的样品稀释液。
每个稀释度接种三管月桂基硫酸盐胰蛋白(月示)(LST)肉汤,每管接种1mL。
将接种管置于36±1℃培养48±2h。
3、将所有48±2h内产气的LST肉汤管培养物移种于EC肉汤管中，在30min内放入带盖44.5±0.5℃水浴箱内,培养48±2h。
4、取其产气管的培养物划线接种于伊红美蓝(EMB)平板,36±1℃培养24±2h。
5、如有黑色中心有光泽或无光泽的典型菌落用接种针从每个平板上至少挑取2个典型菌落移种到营养琼脂斜面上,36±1℃培养18～
24h。
6、将斜面培养物移种到色氨酸肉汤（24h±2）、MR-VP培养基(48±2h)、Koser氏枸椽酸盐肉汤(96h)、LST肉汤(48±2h)、革兰氏染色.观察判定是否是大肠杆菌。
简述大肠杆菌的鉴定流程
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在进行大肠杆菌鉴定之前，需要做好充分的准备。
活螨检查法标准
目的：规范活螨检查法标准操作规程。
适用范围：活螨检查法检验。
责任：化验员实施本操作规程，化验室主任负责监督本规程正确执行。
标准依据：《中华人民共和国药典》2005年版二部程序：活螨检查法1. 简述螨，属于节肢动物门，蛛形纲，蜱螨目。
种类多，分布广。
根据其生活习性，分为自由生活和寄生生活两种类型。
在土壤、池沼、江河和湖海里，动、植物体上，贮藏食品和药品中，都可能存在。
药品可因其原料、生产过程或包装、运输、贮存、销售等条件不良，受到螨的污染。
螨可蛀蚀损坏药品，使药品变质失效。
螨可引起皮炎及消化、泌尿、呼吸系统的疾病。
直接危害人体健康或传播疾病。
因此，药品特别是中成药，必须进行活螨检查。
2. 仪器及用具2.1 显微镜2.2 放大镜（5～10倍）、实体显微镜2.3 解剖针、发丝针、小毛笔解剖针（或用一段长约10cm、直径为0.1cm金属棒，将其一端磨尖：其尖端宜尖细且粗糙，否则不易挑取体表光滑的螨体。
发丝针：由一根长约10cm的小金属棒，将其一端磨成细尖，另取长约1.5cm 的头发一根，以其长度的一半紧贴在金属棒的尖端上，用细线将其缠紧，然后黏上加拿大树胶或油漆即得。
适用于挑取行走缓慢且体表刚毛较多的螨体。
小毛笔，即绘图毛笔。
适用于挑取活动快的螨类，笔锋宜尖细，以免螨体夹在毛笔中不易挑出。
2.4 载玻片、盖玻片2.5 酒精灯2.6 培养皿或小搪瓷盘（内衬黑色纸片）2.7 扁形称量瓶（高3cm、宽6cm）2.8 30%甘油溶液（简称甘油溶液）2.9 饱和食盐水：市售食盐（或氯化钠），配成约36%的水溶液，煮沸，过滤，备用2.10 封固液3.活螨的检查方法3.1 螨的形态特征3.1.1 螨的体形微小，多在1mm以下。
一般呈卵形或椭圆形，无头、胸、腹界限。
幼螨足三对，若螨足四对，成螨足多数为四对。
足通常由六节组成。
口器向前端突出，螯肢常呈螯钳状，有齿，由2～3节组成。
须肢节数因种类而异，由1～2节到5节组成。
微生物限度检查标准操作规程
微生物限度检查标准操作规程《微生物限度检查标准操作规程》一、目的微生物限度检查是药品、食品、化妆品等产品质量的重要指标之一，其目的是为了保障产品的安全性和稳定性。
本标准操作规程旨在规范微生物限度检查的操作流程，确保检查结果的准确性和可靠性。
二、范围本标准操作规程适用于药品、食品、化妆品等产品的微生物限度检查，包括大肠菌群、金黄色葡萄球菌、霉菌和酵母菌等微生物指标的检查。
三、检查设备和试剂1. 培养基：根据不同的微生物指标选择适当的培养基，如大肠培养基、Mannitol盐琼脂、Sabouraud葡萄糖琼脂等。
2. 培养皿：使用符合规定的试验培养皿。
3. 培养箱：保证培养条件的恒温培养箱。
4. 其他常用实验用具：包括无菌采样容器、吸管、移液器、无菌培养皿等。
四、操作流程1. 样品采集：从产品中采集适量样品，保持无菌状态。
2. 制备稀释液：根据样品的特性，选择适当的稀释液将样品进行适当稀释。
3. 接种培养：将稀释后的样品接种在适当的培养基上，并在符合条件的培养箱中进行培养。
4. 观察和统计：观察培养皿中微生物的生长情况，统计出微生物的数量。
5. 结果判定：根据标准规定的微生物限度标准，判断检测结果是否符合规定。
五、质量控制1. 实验员必须进行严格的无菌操作训练，并使用正确的个人防护用具。
2. 培养基的质量必须符合规定，避免培养基带有细菌污染。
3. 检查设备必须经过定期的检查和校准，保持正常的工作状态。
4. 标本的采集、处理、保存和运送必须符合规定，避免外界的污染和干扰。
六、结果报告根据检测结果和规定的限度标准，出具检测报告，标明产品的微生物限度是否符合规定，以及具体的检测结果数据。
七、总结微生物限度检查是产品质量检验的重要环节，严格按照标准操作规程进行操作，可以保证检测结果的准确性和可靠性。
实验员在操作过程中也需严格遵守规程，做好个人防护措施，确保实验室的安全和卫生。
活螨检查法标准
目的：规范活螨检查法标准操作规程。
适用范围：活螨检查法检验。
责任：化验员实施本操作规程，化验室主任负责监督本规程正确执行。
标准依据：《中华人民共和国药典》2005年版二部程序：活螨检查法1. 简述螨，属于节肢动物门，蛛形纲，蜱螨目。
种类多，分布广。
根据其生活习性，分为自由生活和寄生生活两种类型。
在土壤、池沼、江河和湖海里，动、植物体上，贮藏食品和药品中，都可能存在。
药品可因其原料、生产过程或包装、运输、贮存、销售等条件不良，受到螨的污染。
螨可蛀蚀损坏药品，使药品变质失效。
螨可引起皮炎及消化、泌尿、呼吸系统的疾病。
直接危害人体健康或传播疾病。
因此，药品特别是中成药，必须进行活螨检查。
2. 仪器及用具2.1 显微镜2.2 放大镜（5～10倍）、实体显微镜2.3 解剖针、发丝针、小毛笔解剖针（或用一段长约10cm、直径为0.1cm金属棒，将其一端磨尖：其尖端宜尖细且粗糙，否则不易挑取体表光滑的螨体。
发丝针：由一根长约10cm的小金属棒，将其一端磨成细尖，另取长约1.5cm 的头发一根，以其长度的一半紧贴在金属棒的尖端上，用细线将其缠紧，然后黏上加拿大树胶或油漆即得。
适用于挑取行走缓慢且体表刚毛较多的螨体。
小毛笔，即绘图毛笔。
适用于挑取活动快的螨类，笔锋宜尖细，以免螨体夹在毛笔中不易挑出。
2.4 载玻片、盖玻片2.5 酒精灯2.6 培养皿或小搪瓷盘（内衬黑色纸片）2.7 扁形称量瓶（高3cm、宽6cm）2.8 30%甘油溶液（简称甘油溶液）2.9 饱和食盐水：市售食盐（或氯化钠），配成约36%的水溶液，煮沸，过滤，备用2.10 封固液3.活螨的检查方法3.1 螨的形态特征3.1.1 螨的体形微小，多在1mm以下。
一般呈卵形或椭圆形，无头、胸、腹界限。
幼螨足三对，若螨足四对，成螨足多数为四对。
足通常由六节组成。
口器向前端突出，螯肢常呈螯钳状，有齿，由2～3节组成。
须肢节数因种类而异，由1～2节到5节组成。
大肠杆菌的检测方法
大肠杆菌的检测方法大肠杆菌（Escherichia coli，简称E. coli）是一种常见的细菌，它存在于人和动物的肠道中，同时也是一种重要的指示性微生物，可以用来评估环境和水源的卫生状况。
对大肠杆菌的检测具有重要的意义，可以帮助预防细菌感染和传播，保障公共卫生安全。
现在，我将详细介绍大肠杆菌的检测方法。
大肠杆菌的检测方法主要分为传统培养法和分子生物学方法两大类。
传统培养法是最常用的大肠杆菌检测方法之一。
其基本原理是将样品在含有大肠杆菌生长所需的培养基上孵育，然后观察培养基上是否有典型的大肠杆菌形态和生长特征。
具体步骤如下：1. 准备样品：样品可以是水、食品、环境表面等。
2. 分装样品：将样品分装到培养基培养皿或试管中。
3. 孵育培养：将分装好的样品在适当的温度和时间条件下进行培养，通常是在37摄氏度下孵育24小时，有时也需要采用其他不同的条件。
4. 观察结果：在培养基上观察是否有大肠杆菌形态和生长特征的典型菌落，如红色菌落、金属光泽等。
5. 进一步确认：对观察到的典型菌落进行进一步的生化和生理测试，如大肠杆菌产气试验、甲烷气生成试验等，以确认是否为大肠杆菌。
传统培养法有着较长的检测时间和较低的检测灵敏度，但由于其成本较低且操作简单，仍然是大肠杆菌检测的常用方法。
另一种常用的大肠杆菌检测方法是分子生物学方法。
相对于传统培养法，分子生物学方法具有更高的检测灵敏度和特异性，且检测速度更快。
以下是一些常用的分子生物学方法：1. PCR扩增法：该方法利用特异性引物和酶的作用，通过对大肠杆菌特定基因（如16S rRNA基因）进行扩增，可以检测到极少量的大肠杆菌DNA。
2. 实时荧光PCR法：该方法是PCR扩增法的改进，可以同时进行扩增和检测，通过实时监测荧光信号的产生来判断样品中是否存在大肠杆菌。
3. 基因芯片技术：这种技术利用微阵列芯片，含有大肠杆菌的特异性探针，可同时检测多个基因和多个大肠杆菌菌株。
大肠菌群测试片操作流程
大肠菌群测试片检测操作流程1.样品的前处理:(建议使用蔬菜瓜果、河水及大肠菌群标准菌作为样品)（1）蔬菜瓜果：称取25g样品切成1cm左右的碎片，置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000r/min~10000r/min均质1min~2min制成1:10的样品匀液。
（2）河水：以无菌吸管吸取25mL河水置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶中，充分混匀，制成1:10的样品匀液。
（3）大肠杆菌标准菌：挑取平板上大肠杆菌标准菌的单菌落，于盛有5mL LB 液体培养基的试管中，37℃培养过夜，以此作为菌原液。
用1mL无菌吸管或微量移液器吸1mL菌原液于盛有9mL的稀释液的无菌试管中，制成1:10的样品匀液。
2.样本稀释倍数：用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品匀液1mL，沿管壁缓慢注于盛有9mL的稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸管尖端不要触及稀释液面），振荡试管或换用一只无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1:100的样品匀液。
按此操作程序，制备10倍系列稀释样品匀液，每递增稀释液需用1mol/L氢氧化钠（NaOH）或1mol/L盐酸（HCl）调节pH至7.0~7.2。
（1）蔬菜样品的稀释倍数：取100、10-1两个稀释度进行接种验证(可根据实际情况而定)。
（2）河水样品的稀释倍数：取10-1、10-2两个稀释度进行接种验证(可根据实际情况而定)。
（3）大肠菌群标准菌的稀释倍数：取10-7、10-8两个进行接种验证(可根据实际情况而定)。
（4）自来水的稀释倍数：直接取自来水接种进行验证。
3.接种一般食品选1～2个稀释度进行检测，含菌量少的液体样品（如饮用纯水和矿泉水等）可直接吸取原液进行检测。
将大肠菌群测试片置于平坦实验台面，揭开上层膜，用无菌吸管吸取1mL样品匀液垂直加入到测试片中央，用手轻轻将上层盖下，使检测样品液覆盖整个检测圈（应尽量避免产生气泡），静置1 min使培养基凝固，最后用手轻轻将上层盖下。
大肠杆菌检测方法步骤
饮用水中大肠杆菌及检测方法一、乳糖发酵实验（初发酵实验）溶液与试剂：乳糖胆盐发酵管成分：蛋白胨20g，猪胆盐5g，乳糖10g，0.04%溴甲酚紫水溶液25mL，蒸馏水1000mL，pH7.4。
（乳糖胆盐培养基取30g，溶于1000mL纯水中即可）操作步骤1：将配制好的培养液，分装于每管10mL，共装9个试管，并各放入一个小倒管，115℃高压灭菌15min。
2：水样稀释（1）无菌操作取水样1 mL放于含9mL的灭菌生理盐水中，置于容量瓶中，震荡摇匀为1:10的稀释液。
取上述稀释液1mL，注入9mL灭菌生理盐水，震荡摇匀，为1:100的稀释液。
（2）取水样，1:10稀释液，1：100稀释液各1mL接种到乳糖胆盐发酵管中。
（根据检样的污染程度可以适当调整稀释的比例）每一稀释度接种三管。
3：将试管连同试管架放入培养箱中37℃左右培养24h。
产酸溶液会由紫色变为黄色，产气发酵管中会有气泡。
如所有乳糖胆盐发酵管都不产气，则报告大肠杆菌群阴性，如有产气管，就需要进行分离培养，即进行伊红美蓝培养基鉴别实验。
二、伊红美蓝培养基鉴别实验（接种实验）伊红美蓝琼脂（EMB)成分：蛋白胨10g，乳糖10g，磷酸氢二钾2g，琼脂17g，2%伊红溶液20mL。
0.65%美蓝溶液10mL，蒸馏水1000L，pH7.1.制法：将蛋白胨，磷酸盐和琼脂溶解于蒸馏水中，校正pH，分装于烧瓶内，121℃高压灭菌15min，备用。
临用时加入乳糖，并加热融化琼脂，冷至50~55℃，加入伊红美蓝溶液，摇匀，倾注平板。
操作步骤1称量：准确称取各成分。
2 溶化：加热熔化，定容。
3 调pH：用1mol/L NaOH溶液调节pH至偏碱性。
4 灭菌：将两个500ml的三角瓶中加上棉塞。
将培养皿用报纸包好，放入灭菌锅内，121℃高压灭菌15min。
5 倒平板（均在无菌台中操作）：灭菌后，待固体培养基冷却至60℃左右时在酒精灯火焰附近操作进行。
其过程是：①将灭过菌的培养皿放在火焰旁，右手拿装有培养基的三角瓶，左手拔出棉塞；②右手拿三角瓶，使三角瓶的瓶口迅速通过火焰；③用左手将培养皿打开一条稍大于三角瓶口的缝隙，右手将培养基倒入培养皿，立刻盖上皿盖；④待平板冷却凝固后，将平板倒过来放置。
大肠杆菌检测方法
大肠杆菌检测方法一：进入无菌室步骤1、进入无菌室前应打开紫光灯进行灭菌，时间为0。
5—1小时。
2、关灯后0•5小时后放可进入。
3、进入更衣间更换衣服，佩带口罩、帽子、鞋套。
二：实验步骤1、进入无菌室后，先把酒精灯点燃，然后在用酒精棉进行手部消毒。
（酒精棉是用75%的酒精加入脱脂棉中制成）。
2、准备双料管3根，单料管6根，培养皿7个。
3、直接从原液中吸取10ml放入双料管，（3根每根各10ml）。
4、再吸取原液1ml放入单料管中（3根每根各1ml）。
5、再吸取原液1ml放入培养皿中（2个培养皿各1ml）。
6、再吸取原液1ml放入盐水管中制成－1梯度的样液。
7、更换一根吸管，从－1梯度的样液吸取1ml样液放入单料管中（3根每根各1ml）8、再吸取－1梯度样液1ml放入培养皿中（2个培养皿各1ml）9、再把每个培养皿中到入营养琼脂平铺底部摇允（注另作3个培养皿：空气空白，把培养皿打开十分钟倒入营养琼脂平铺底部摇匀。
琼脂空白，把培养皿中倒入营养琼脂平铺底部摇匀。
盐水空白，吸1ml生理盐水放入培养皿中，倒入营养琼脂平铺底部摇匀）。
10、把全部作好的放入培养箱中，温度36C＋－1×C，大肠24H ＋－2H，菌落48H＋－2H，（待培养皿中的琼脂凝固后反转过来放入培养箱中）11、梯度：－1梯度为1ml原液加入9ml生理盐水配成－2梯度为1ml－1梯度样液加入9ml生理盐水配成－3梯度－4梯度配制方法和－1、－2梯度的配制方法一样。
12、如果大肠初发酵产生气泡，用接种笔沾一个产气的液在伊红美兰平板上画之字形然后放入培养箱中36C，24H＋－2H 。
（接种笔在每次使用前必须在酒精灯上消毒。
所画之形不能划破伊红美兰琼脂表面）。
13、取出后在用接种笔在伊红美兰平板之字形上挑菌，放入乳糖复发酵管中，然后再培养36C＋－1C，24H＋＋－2H。
14、再在伊红美兰平板之字形上挑菌，放到载玻片上作镜检。
（方法见标准）。
大肠杆菌操作细则
大肠杆菌操作细则大肠杆菌，学名为肠杆菌属（Escherichia），是一类常见的革兰氏阴性杆状细菌，是肠道中最重要的正常菌群之一、大肠杆菌的基因组结构简单，易于研究，所以被广泛应用于生物学和医学领域的研究。
下面是大肠杆菌操作的一些基本细则。
1.试剂准备使用纯净的生化试剂，并根据实验的需要进行配制。
2.菌液的制备在无菌条件下，选择合适的培养基，如LB培养基，加入适量的试剂，如琼脂糖，混合均匀后灭菌。
将所需菌株转接至含有适量培养基的无菌试管中，静置孵育一夜，最好在37摄氏度的恒温培养箱中培养。
3.菌液的保存将培养好的菌液进行冷冻保存，-80摄氏度保存效果更好。
同时，在每次冻存之前，应检测菌液的纯度和活性。
4.菌株的接种在接种大肠杆菌之前，首先要进行洗涤步骤，去除可能存在的外源性种菌。
取一株菌落转移到无菌培养基上，进行稀释操作。
选择适当的浓度的细菌悬液，在孵育过程中注意观察。
5.培养条件大肠杆菌适合在富含养分的培养基上生长。
常用的培养基有LB培养基、M9培养基等。
培养温度通常设定为37摄氏度，培养基的pH值为7.0。
培养器的摇床速度和通气量等参数也要根据实验需求进行调整。
6.无菌操作在进行大肠杆菌的操作时，要保持无菌状态，常用的方法有酒精灯消毒，超净工作台等。
使用无菌操作的工具，避免向周围环境带入细菌。
同时在操作过程中避免直接接触菌株，以减少外源性细菌的污染。
7.菌液的收获培养一定时间后，可根据需求收获大肠杆菌菌体。
使用无菌技术配制无菌离心管，用离心机将菌液离心，沉积菌体，去除上清液。
然后用冷PBS缓冲液洗涤菌体，最后可以按需求冻存或进行后续实验。
8.表达工具的利用大肠杆菌可以使用过表达工具进行外源蛋白的表达。
常用的表达载体有pET、pGEX等。
选择合适的载体，将目标基因插入表达载体中，再将重组载体转化入大肠杆菌中，在适合的培养条件下诱导表达。
9.检测菌落和纯度对于分离获得的大肠杆菌菌株，应进行菌落检测和纯度检测。
1-046大肠杆菌检查法标准操作程序
部门：题目：大肠杆菌检查法标准操作程序共 10 页第 1 页编号：S/SOP/QC1-046-0起草：部门审核：质量部审核：批准：实施日期：1 目的：规范大肠杆菌检查操作，保证检验结果准确。
2 范围：本程序适用于药品大肠杆菌的检查。
3 责任者：QC员、QC复核人员、QC主任。
4 程序：4.1试药与试液除特别注明外，试验中所用的试剂均为分析纯试剂，水为纯化水。
4.1.1 0.9%无菌氯化钠溶液取氯化钠[NaCl]9.0g，加水使溶解成1000ml，121℃灭菌20分钟。
4.1.2 无菌磷酸盐缓冲溶液(pH7.2)取磷酸氢二钠[Na2HPO4·12H2O]25.8g和磷酸二氢钠[NaH2PO4·H2O]4.4g，加水使溶解至1000ml，121℃灭菌20分钟。
4.1.3 α－萘酚乙醇试液取α－萘酚6.0g，加无水乙醇溶解使成100ml。
4.1.4 40％氢氧化钾试液取氢氧化钾40g，加水溶解使成100ml。
4.1.5 靛基质试液取对二甲氨基苯甲醛[C9H11NO]1g，加入95%乙醇[C2H5OH]95ml，充分振摇，使完全溶解后，取浓盐酸[HCl]20ml徐徐滴入，边加边振摇，以免骤热导致溶液色泽变深，置冰箱保存，备用。
4.1.6 甲基红试液取甲基红[C15H15N3O2]0.1g，加95%乙醇[C2H5OH]300ml与水适量，使溶解，再加水至500ml，即得。
4.1.7 V-P试液取α-萘酚[C10H7OH]6.0g，加无水乙醇[C2H5OH]使溶解成100ml。
另取氢氧化钾40.0g，加水使溶解成100ml。
分别将试药与各溶剂混合即得。
4.1.8 革兰染色液4.1.8.1 沙黄染液取沙黄0.25g，加95%的乙醇[C2H5OH]10ml，使完全溶解后，加水至100ml。
部门：题目：大肠杆菌检查法标准操作程序共 10 页第 2 页编号：S/SOP/QC1-046-0起草：部门审核：质量部审核：批准：实施日期：4.1.8.2 结晶紫染液取结晶紫[C25H30ClN3]1.0g，加95%的乙醇[C2H5OH]20ml，使溶解，加1%的草酸铵溶液80ml，混匀。
大肠杆菌活菌数含量的测定操作规程
大肠杆菌活菌数含量的测定操作规程1. 引言大肠杆菌是一种常见的细菌，在食品、水源和环境中广泛存在。
测定大肠杆菌的活菌数含量对于食品安全、水质检测和环境卫生监测具有重要意义。
本文档旨在规范大肠杆菌活菌数含量的测定操作流程。
2. 设备和试剂准备- 培养基：LB培养基- 培养物：已经培养好的含有大肠杆菌的培养物- 烧杯、移液器、试管、平皿等常用实验室器材- 紫外灯或显微镜3. 测定操作步骤1. 准备样品：将待检样品按照指定方法进行采样，保持样品的完整性和代表性。
2. 样品处理：将样品转移到烧杯中，并进行适当的稀释，以保证菌落计数的准确性。
3. 制备培养基：按照LB培养基的配方准备培养基，在适当的温度下热化并均匀混合。
4. 接种培养基：将适量的样品接种到LB培养基中，通过摇床或培养箱进行培养，时间和培养条件根据需求确定。
5. 培养时间：根据实验需求，在适当的温度下，在摇床或培养箱中进行长时间培养。
6. 菌落计数：将培养的菌液制成适当的稀释液，然后取适量的菌液在平皿中均匀涂布，放置在恒温箱中进行菌落生长。
菌落生长后，使用显微镜或紫外灯统计菌落数量。
7. 结果记录：将统计得到的菌落数量记录下来，并计算大肠杆菌的活菌数含量。
4. 结果处理和数据分析1. 根据菌落计数的结果计算出大肠杆菌的活菌数含量。
2. 将结果与相应的标准进行对比，评估样品的卫生质量。
5. 结论本操作规程能够规范大肠杆菌活菌数含量的测定操作流程，为食品安全、水质检测和环境卫生监测提供准确可靠的数据依据。
6. 参考文献（列出参考文献，如有需要）。
大肠杆菌检测系统安全操作及保养规程
大肠杆菌检测系统安全操作及保养规程前言大肠杆菌检测系统是一种常用的医疗设备，它可以帮助医生快速准确地判断患者是否感染大肠杆菌。
为了确保设备的正常运作和人员的安全，我们需要对其进行正确的操作和保养。
本规程旨在帮助医护人员掌握大肠杆菌检测系统的安全操作及保养要点。
安全操作要点1.使用前检查设备是否完好无损。
若发现异常情况，应立即停止使用并联系维修人员进行维修。
2.在使用设备前，应先进行消毒清洗，确保设备表面无菌。
使用完毕后，应及时进行清洁消毒，避免污染其他器械。
3.操作设备时，应仔细阅读操作说明并按照说明进行操作。
如有不明确的地方应及时向专业人员请教。
4.在使用设备时，应佩戴面罩、手套、隔离衣等防护用品，以避免被污染物喷溅到身上。
5.禁止将强酸、强碱等腐蚀性物质放到设备中。
6.操作设备过程中，应保持设备及周围环境清洁、整洁，避免造成交叉感染。
7.操作结束后，应将设备关闭并及时清理。
若发现设备异常情况，应及时报修。
保养要点1.设备应定期进行保养检查。
保养间隔时间视使用频率而定，一般为每年一次。
2.在开展保养工程时，应先切断设备的电源。
避免维护人员受到电击伤害。
3.拆卸设备时，应按照规定程序进行。
注意不要强行拆卸，避免对设备造成损坏。
4.拆卸后的部件应单独进行清洁消毒，避免对其他部件造成污染。
5.在重新组装设备时，应仔细核对各部件，确保无残留物或者未被正确组装的部件。
6.对于一些易损部件，可以在日常使用过程中进行定期更换。
如有疑问，可以咨询专业人士。
7.在保养结束后，应进行全面检测，确保设备安全可靠。
总结大肠杆菌检测系统是一种应用广泛的医疗设备，正确的操作和保养是确保设备安全运行的重要保障。
本规程主要介绍了大肠杆菌检测系统的安全操作和保养要点。
我们在使用和保养设备时务必严格按照规定操作，确保设备安全可靠、免于污染，以保障患者和操作人员的健康安全。
大肠杆菌、菌落总数检测步骤
大肠杆菌及菌落总数检测方法为了对鸡精产品的微生物指标进行有效的控制，对微生物的检测就显的十分重要。
下面是鸡精产品的大肠杆菌及菌落总数实验检测方法。
一、大肠杆菌：1）培养基准备（以3.5g乳糖胆盐发酵琼脂为例）双料试管配制A、用量杯量取加热的100ML蒸馏水（实验前需对蒸馏水进行高压灭菌处理，处理方法详见注一）。
B、用0.1g称量天平秤取7g乳糖。
C、将A、B混合均匀，并用10ml吸管各取10ml混合液分别注入三根装有小导管的试管中（此三根为双料试管，即双倍原料）。
单料试管配制A、用量杯量取加热的100ML蒸馏水（实验前需对蒸馏水进行高压灭菌处理，处理方法详见注一）。
B、用0.1g称量天平秤取3.5g乳糖。
C、将A、B混合均匀，并用10ml吸管各取10ml混合液分别注入六根装有小导管的试管中（此六根为单料试管，即单倍原料）。
2）将配制好的试管放入灭菌锅进行115℃进行灭菌10min。
3）将灭菌过后的试管放置在无菌室，常温保存一周。
4）若要对生产的样品检测其大肠杆菌，其步骤如下：A、量取灭菌后的蒸馏水225ml加温后与25g样品混合均匀。
（样品需要在无菌室中，有封盖的塑料杯中进行混合）B、取三个玻璃培养皿，分别标上-1、-2、-3标记。
C、取两根新试管取9ml蒸馏水分别标为a、b。
D、用吸管吸取1ml样品液体，注入-1培养皿中，并盖上盖子。
E、用吸管吸取1ml样品液体，注入a试管中，记为-2培养基液。
F、用吸管吸取1ml a试管中的液体，注入到b试管中，记为-3培养基液。
G、用1ml吸管取样品液体分别注入3根单料试管中，用10ml 吸管取样品液体分别注入双料试管中H、用1ml吸管取-2培养试管液体，分别注入到单料试管中。
I、装好液体的试管，用试管塞封好，放到36℃±1℃的恒温培养箱中24小时培养。
J、24小时培养后，取出并用肉眼观察试管的颜色及冒气泡情况，若有其中的任意状况，说明有大肠杆菌，需要通过美兰做进一步的检测。
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4.1.3.2.1 有虫粉现象的片，可用直检法或漂浮法检查。同时注意检查药瓶口内壁与内盖有无活螨。
4.1.5.5.2.4 干燥：制成的玻片标本必须干燥，一般将玻片标本放在50~60℃的温箱内干燥约一周或放载玻璃干燥器中使之失水干燥。也可在室温下放置一个月左右，令其自然干燥。
4.1.5.5.2.5 封固：标本干燥后，在盖玻片周围用指甲油或加拿大树胶或油漆封固，以便长期保存。
4.2大肠杆菌检查法
4.2.1简述
4.内容：
4.1活螨检查法
4.1.1．简述
4.1.1.1螨，属于节肢动物门，蛛形钢，蜱螨目。种类繁多，分布甚广。其生活习性各异，分为自由生活和寄生生活两种类型。在土壤、池沼、江河和湖海里，动、植物体上，贮藏食品和药品中，都可能有它们的存在。
4.1.1.2药品可因其原料、生产过程或包装、运输、贮存、销售等条件不良，受到螨的污染。
4.1.2.8 30%甘油溶液（简称甘油溶液）
4.1.2.9 饱和食盐水：市售食盐（或氯化钠），配成约36%的水溶，煮沸，过滤，备用
4.1.2．10 封固液
4.1.3、活螨的检查方法
4.1.3.1 活螨的一般检查方法
4.1.3.1.1直检法 取供试品先用肉眼观察，有无疑似活螨的白点或其他颜色的点状物，再用5～10倍放大镜或实体显微镜检视。有螨者，用解剖针或发丝针或小毛笔挑取活螨放在滴有一滴甘油溶液的载玻片上，置显微镜下观察。
4.1.5.5.2 长期保存标本：
4.1.5.5.2.1 用具：先将载玻片、盖玻片洗净擦干备用。对于过大的盖玻片，亦可用小砂轮分割成四开小方块使用。
4.1.5.5.2.2 清洗螨体上的杂物：由于螨体上的许多刚毛和突出物，往往粘附着一些微粒状杂物。在制片时，宜用解剖针或发丝针或小毛笔，挑取螨体放在滴有一滴清水的载玻片上，轻轻搅动，洗去杂物。
4.1.1.3螨可蛀蚀损坏药品，使药品变质失效，并可直接危害人体健康或传播疾病。必须进行活螨检查。
4.1.2．仪器、设备及用具
4.1.2.1显微镜
4.1.2.2放大镜
4.1.2.3解剖针、发丝针、毛笔
4.1.2.4载玻片、盖玻片
4.1.2.5酒精灯
4.1.2.6培养皿或小搪瓷盘（内衬黑色纸片）
4.1.2.7 扁形称量瓶
4.1.5.4每次检查后的供试品、器皿和用具，特别是阳性供试品，应即时用焚烧、加热等法处理，杀灭活螨、以免污染操作环境及人体。
4.1.5.5为保留阳性结果备查，可将检出的活螨制成临时观察标本和长期保存标本。
4.1.5.5.1 临时观察标本：挑取检出的活螨，放在预先滴有1滴75%乳酸溶液的载玻片上，加盖玻片，置于酒精灯小火焰上，来回移动，缓缓加热片刻，使其适当透化，即可镜检。鉴定后的螨体，亦可放入50~70%的乙醇溶液中保存，或作适当处理。
4.1.5.2 活满多为略带白色，晶亮的囊状小体，以暗色背景相衬，十分明显，故检查时一定要注意与背景的反差，白色的背景常常掩盖螨的发现。
4.1.5.3漂浮法检螨用的称量瓶，以高3cm,口径6cm为宜，由于液面较宽，便于直接用放大镜或实体显微镜检查。用载玻片沾取检样时，接触面积大，检出率高。亦可用其他适当容器代替。
4.2.1.1大肠杆菌即大肠埃希菌，为肠杆菌科埃希菌属的模式种。埃希菌属除大肠埃希菌外，新近发现有非脱羧希菌等四个种。大肠埃希菌是人和温血动物肠道内的栖居菌，随粪便排出体外。在药品中检出大肠杆菌，表明该样品受到人和温血动物的粪便污染，即可能污染肠病原体。大肠埃希菌除普通大肠杆菌外尚有致病性大肠杆菌，可引起婴幼儿、成份爆发性腹泻。为保证人体健康，口服药品必须检查大肠杆菌。
4.1.5.5.2.3 螨体封存：取1~2滴螨类封固液放在载波片中央偏右的位置，挑取洗去杂物的螨体1~2只，放在螨类封固液中，在低倍显微镜下用发丝针拨正螨体的姿态、位置（背面、腹面）后，如封固液中出现气泡，可用烧热的解剖针插入气泡，即可消除。然后加上盖玻片。将载玻片置酒精灯的小火焰上来回移动，缓缓加热，促使螨体附肢伸展，切勿沸腾，以免产生气泡，甚至螨体爆裂。撤离火焰后，用红色的玻璃铅笔在载玻片的背面圈出螨栓的位置，便于镜检时寻找。然后在载玻片的左端贴上标签。
文件名：活螨、大肠杆菌检查操作规程
制定人：
制定日期：
分发份数：3
审核人：
审核日期：
颁发部门：GMP办
批准人：
批准日期：
生效日期：
分发至：质量保证部、质监科、质量检验中心
1.目的：规范活螨、大肠杆菌检查方法，以保证检验结果的准确性。
2.范围：活螨、大肠杆菌检查。
3.责任：质量保证部、质监科、质量检验中心、检验操作人员。
4.1.3.2.2 先用75%乙醇将药瓶的外盖螺口周围消毒后，小心
旋开外盖，用直接法，检查药瓶外盖的内侧及瓶口内外的周围与内盖有无活螨。
4.1.4．结果判断
凡供试品按上述有关剂型项下规定检查，发现活螨者，作检出活螨报告。
4.1.5、注意事项
4.1.5.1螨在春夏和秋冬相交季节，繁殖旺盛，爬行活跃，易于检出，在寒冬时则活动微弱甚至不动。鉴别时，可在灯下检查，光和热的刺激促使其活动，利于检查。
4.1.3.1.2漂浮法 取供试品放在盛有饱和食盐水搅拌均匀，置10倍放大镜或实体显微镜下检查，可继续加饱和食盐水至瓶口处（为防止盐水样品溢出污染桌面，宜将上述容器放在装有适量（甘油溶液的培养皿中）用洁净的载玻片盖在瓶口，使与液面接触，沾取液面上的漂浮物，迅即反转玻片，置显微镜下检查。
4.1.3.1.3分离法 也称烤螨法。取供试品放在附有孔径大小适宜的筛网的普通玻璃漏斗里，利用活螨避光、怕热的习性，在漏斗的广口上面放一个60～100W的灯泡，距离药品约6cm处，照射1～2h。活满可沿着漏斗内的底部细颈内壁向下爬，用小烧杯装半杯甘油溶液，放在漏斗的下口处，收集爬出的活满。
在上述三种方法中，以前两种方法操作简便、效果好、检出率高，故多采用。而后一种方法操作较繁琐、费时、效率低，较少采用。