第二十二章免疫学检测技术及其应用
免疫检测技术的研究和应用
免疫检测技术的研究和应用随着现代生物技术的发展，免疫检测技术受到越来越多的关注和应用。
免疫检测技术是指利用生物学方法来检测和测量特定的生物体分子，如蛋白质、抗体、细胞等。
免疫检测技术广泛应用于医学诊断、生物学研究、环境监测、食品安全等领域，具有灵敏、特异、快速等优点。
目前，免疫检测技术主要有免疫层析、酶联免疫吸附检测（ELISA）、免疫荧光、免疫电泳等几种常见的方法。
其中，ELISA是最为常用的一种免疫检测方法。
它通过将待测物与特异性抗体结合，再通过酶偶联的二抗与该复合物发生化学反应，从而产生信号。
ELISA具有灵敏度高、特异性好的优点，因此被广泛应用于医学诊断、疫苗研发和生物药物监测等领域。
免疫检测技术在医学领域的应用尤为广泛。
例如，在临床医学中，免疫检测技术可以用于探测病原体感染、肿瘤标志物、免疫功能异常等疾病诊断。
通过对患者血清或组织样品中特定抗体或抗原的检测，可以快速、准确地确定疾病的类型和严重程度，有助于合理制定治疗方案。
此外，免疫检测技术还广泛应用于疫苗研发、药物监测与药代动力学研究等领域。
免疫检测技术的应用还涉及到生物学研究领域。
免疫检测技术可以用于研究细胞分子的产生和功能，揭示生物体内的信号传导机制和生命过程。
特定的抗体可以用于检测细胞表面的蛋白质，从而帮助研究人员了解细胞的结构与功能。
此外，免疫检测技术还可以用于蛋白质相互作用的研究，在研究蛋白质相互作用的分子基础和生物学功能方面发挥重要作用。
环境监测是另一个免疫检测技术的重要应用领域。
通过使用特定的抗体可以检测环境中的污染物或致病菌，从而帮助监测和评估环境质量。
例如，通过检测水体中的细菌或有毒物质，可以及早发现并遏制水污染的蔓延。
此外，免疫检测技术还可以应用于食品安全领域，检测食品中的残留物或有害物质，保障人民的食品安全。
总之，免疫检测技术在医学诊断、生物学研究、环境监测和食品安全等领域具有广泛的应用前景。
随着科学技术的不断进步和优化，免疫检测技术将更加灵敏、准确、可靠，为人们的生活和健康提供更多的保障。
免疫学检测原理及临床应用
免疫学检测原理及临床应用免疫学检测是一种通过检测体内免疫系统的反应来确定疾病状态或病原体存在的诊断技术。
其基本原理是利用体内自身的免疫系统对外来物质（如细菌、病毒或人工合成物质）做出特异性反应，产生特异性抗体或细胞免疫反应，并将其检测出来。
免疫学检测可分为血清学检测和细胞免疫学检测两种。
血清学检测是指通过检测血清中特异性抗体的存在来确定疾病状态或病原体存在的诊断方法。
主要有ELISA、免疫荧光、免疫印迹等方法。
其基本原理是将目标抗原或建立细胞突变株制备成特异性抗原，与患者血清中的特异性抗体结合，用酶、荧光或其他标记物检测出来。
例如，ELISA是一种广泛应用的免疫学检测技术，用于检测抗体和抗原的相互作用。
它的原理是将抗原吸附到多孔板上，在体外将待测样本加入其中，样品中如有特异性抗体，则与抗原结合，未结合的抗体被洗掉，再加入标记抗体，标记物与抗原相互结合形成复合物，可以根据标记物的性质来检测复合物的形成。
细胞免疫学检测是指通过检测免疫细胞的反应来确定疾病状态或病原体存在的诊断方法。
主要有淋巴细胞转化试验（LTT）、流式细胞术等方法。
其基本原理是将血液或其他体液样本中的免疫细胞与特异性抗原共同孵育，在体外激活免疫细胞产生抗体或细胞反应，使用流式细胞术分离、检测不同类型的免疫细胞。
例如，LTT可用于检测细菌或病毒等病原体感染及免疫功能异常等疾病。
其原理是将血液或其他体液样本加入培养基中，与特定抗原刺激后，在体外培养一段时间，测定培养物中的淋巴细胞增殖情况，反映细胞免疫应答功能的多样性和复杂性。
免疫学检测在临床实践中的应用非常广泛。
它被用来诊断多种感染性疾病，例如乙型肝炎、艾滋病、结核病等。
通过检测患者体内是否存在相应的抗体或细胞反应，可以确定疾病病原体是否存在以及疾病的严重程度。
此外，免疫学检测还被用于诊断自身免疫性疾病，例如狼疮、风湿性关节炎等。
通过检测患者体内是否存在特定的自身抗体，可以确定患者的疾病类型和严重程度。
免疫学检验技术与应用
免疫学检验技术与应用近年来，免疫学检验技术在医学领域中的应用越来越广泛。
这种技术通过检测机体免疫系统产生的抗体或免疫细胞来判断疾病的发生和发展，从而为临床诊断和治疗提供了重要的帮助。
本文将介绍免疫学检验技术的原理、方法以及在各个领域中的应用。
一、免疫学检验技术的原理免疫学检验技术主要基于机体免疫系统的反应原理。
当机体受到外界的入侵，如细菌、病毒、寄生虫等病原微生物的侵袭时，免疫系统会产生抗体来对抗这些病原微生物。
免疫学检验技术利用这种抗体的特异性来识别和检测特定的抗原，从而确定疾病的存在和发展。
免疫学检验技术可以分为两大类：免疫测定和免疫分析。
免疫测定主要通过检测抗体与抗原的特异性结合来确定疾病的存在和程度。
常见的免疫测定技术包括酶联免疫吸附试验（ELISA）、放射免疫测定（RIA）、荧光免疫测定（FIA）等。
免疫分析则通过测定免疫反应的变化，如特定细胞的增殖、分泌物的变化等，来判断疾病的发生和发展。
二、免疫学检验技术的方法1. 酶联免疫吸附试验（ELISA）ELISA是一种常用的免疫测定技术，它可以通过特定抗体与抗原的结合来检测样本中的特定物质。
ELISA方法简单、灵敏度高、特异性强，广泛应用于疾病的诊断和治疗监测。
它可以用于检测感染性疾病、自身免疫疾病和肿瘤等多种疾病。
2. 放射免疫测定（RIA）RIA是一种利用放射性同位素标记的反应物与抗原或抗体结合来检测特定物质的免疫测定技术。
由于放射性同位素的高灵敏度和特异性，RIA可以用于测定非常低浓度的物质，如激素、维生素等。
然而，由于放射性同位素的辐射危害，RIA的应用受到了一定的限制。
3. 荧光免疫测定（FIA）FIA利用特定的荧光标记物与抗原或抗体结合来检测特定物质。
荧光标记物的高灵敏度和快速反应使得FIA成为一种快速、高通量的免疫测定技术。
FIA常用于病毒检测、细胞检测等领域。
三、免疫学检验技术的应用1. 临床诊断免疫学检验技术在临床诊断中起着重要的作用。
免疫学检测技术及应用
划痕法
细胞因子的检测技术
一、 生物学检测技术 二、 免疫学检测技术 三、分子生物学检测技术
依赖细胞株测定法 ELISA法
分子杂交、PCR 等检测mRNA
细胞因子检测的特点
• 样品含量低 •样品具有时效性 •生物效应特异性差
Figure 14-12
细胞因子的功能
Cell activation
／immunogold staining)
（一）免疫荧光技术(又称荧光抗体技术) 原理：用荧光素(如异硫氰酸荧光素、罗
丹明B200等) 标记抗体(荧光抗体)，用荧光 抗体浸染细胞或组织切片，抗原与荧光抗体 结合，于荧光显微镜下观察荧光，确定被检 抗原的存在。
免疫荧光技术包括：
直接法
间接法
间接补体增强法
ELISA法： 直接法 间接法 双抗体夹心法(双位点法) 竞争法
ELISA
(三) 同位素标记技术(isotope-labelling technique) 放射免疫分析(radioimmunoassay,
RIA) 是一种用放射性同位素分析抗原抗体反应 相结合方法。 优点：灵敏度高, 可检测0.001pg／mL
Direct and indirect immunofluorescence staining of membrane antigen (mAg).
（二）免疫酶技术(immunoenzymatic techniques)
是将抗原抗体反应与酶催化底物的作用 相结合的一种方法。
主要有两种类型： 1.免疫酶染色 2.酶免疫测定（enzyme immunoassay, EIA）
•3H-胸腺嘧啶核苷参入法（3H-TdR）: 间接观察DNA 合成含量。灵敏度高，具有放射性。 •四甲基偶氮唑盐法（MTT）: MTT商品名为噻唑蓝。 原理：活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶可将外源性 MTT还原成蓝紫色结晶-甲瓒（formazan）, DMSO使 其溶解，酶标分析仪检测。简便，灵敏度高，稳定性 差。
医学免疫学第22章--免疫学检测技术
一、T细胞功能的检测
➢T细胞增殖试验 ➢T细胞分泌功能测定 ➢T细胞介导的细胞毒试验 ➢体内试验
（一）T淋巴细胞增殖试验
1. 原理：
•淋巴细胞
•刺激物
•DNA合成
•分化
•母细胞
•细胞变大 •细胞浆扩大 •空泡 •核仁明显 •核染色质疏松
• 凝集反应常用于溶血性疾病的诊断：
•+
•病人的RBC •体内anti-Rh
•+
•由于抗体多属于IgG，分子 量较小，抗体与红细胞间的 结合力不能克服细胞间的排 斥力，不出现凝集
•体外加 入抗人
IgG
•出现凝集现象， 叫直接库姆试验
•+
•正常人O型血 的Rh+的RBC
•患者血清内 的游离anti-Rh
第二节 检测抗原或抗体的体外试验
• 凝集反应 • 沉淀反应（中和反应） • 免疫标记技术：用标记抗体或抗原进行的抗原抗体反应 • 蛋白质芯片技术
一、凝集反应 (Agglutination)
• 细菌、红细胞等颗粒性抗原与相应抗体结 合、凝集的现象。
• 1、直接凝集：将细菌或红细胞与相应的抗 体直接反应，出现细菌凝集或红细胞凝集 现象。又分为玻片法（定性试验）和试管 法（半定量试验）。
负电的疏水胶溶液，因静电作用而呈稳定的胶体状态。 3. 该技术可应用于免疫组化(光镜下检查)和免疫层析快速诊断。
• ⑥免疫印迹法-Western blotting
免疫印迹法（Immunoblotting）
• 将凝胶电泳与固相免疫测定结合，先把电泳分区 的蛋白质转移到固相载体，再用酶免疫、放射免 疫等技术测定。
免疫学检验技术与应用
免疫学检验技术与应用免疫学检验技术作为现代医学领域中的重要组成部分，发挥着至关重要的作用。
通过检测和分析人体免疫系统的相关指标，免疫学检验技术能够帮助医生准确判断患者的疾病类型、病情严重程度，指导临床治疗方案的制定和调整，为患者的康复和治疗提供重要参考依据。
本文将就免疫学检验技术的原理、常见方法和应用进行介绍。
一、免疫学检验技术的原理免疫学检验技术是通过检测人体免疫系统中的特定抗体、抗原或其他免疫分子来判断患者免疫系统功能的一种检验方法。
该技术主要基于人体的免疫应答机制，通过检测免疫系统中特定抗体的产生情况，判断患者是否感染某种疾病或接种过某种疫苗，还可以帮助医生评估患者对某种药物的耐受性和疗效。
免疫学检验技术主要包括免疫荧光法、酶联免疫吸附试验（ELISA）、放射免疫测定法等多种方法。
这些方法可以根据检测的具体目的和样本类型选择合适的技术手段，以达到最佳的检测效果。
二、常见免疫学检验方法及其应用1. 免疫荧光法免疫荧光法是通过标记荧光物质的抗体与待测抗体或抗原结合，再利用荧光显微镜观察标记物质的位置和数量，从而判断待测物质的含量和分布情况。
该方法在临床诊断中常用于自身免疫性疾病、感染性疾病和肿瘤等方面的检测，具有高灵敏度和特异性的优势。
2. 酶联免疫吸附试验（ELISA）ELISA是利用酶标记的抗体与待测物质结合，再加入底物使酶发生化学反应产生发光或颜色反应，从而测定待测物质的含量。
ELISA方法简单、灵敏，适用于大规模的检测和筛查工作，广泛应用于感染病原体、药物浓度、激素水平等多个领域。
3. 放射免疫测定法放射免疫测定法是利用放射性同位素标记抗体与待测物质结合后，通过测定同位素辐射的放射性进行定量检测的一种方法。
该方法具有极高的灵敏度和准确性，广泛应用于体液激素、肿瘤标志物、免疫球蛋白等物质的检测。
除了以上介绍的几种常见方法，还有流式细胞术、凝集试验、凝血酶法等多种免疫学检验技术，它们在不同的领域和疾病诊断中发挥着重要作用，为医学诊断与治疗提供了有力的支持。
生物医学中的免疫检测技术及其应用
生物医学中的免疫检测技术及其应用免疫检测技术是生物医学领域中不可或缺的一部分，可以用于检测生物体内的抗体、药物、蛋白质等。
其在许多领域中都有应用，例如医学、生态学以及食品安全等。
本文将介绍免疫检测技术的分类、原理及其在医疗领域中的应用。
一、免疫检测技术分类免疫检测技术可以分为四种类型: 免疫荧光法、酶联免疫检测法、放射性免疫分析法以及免疫印迹分析法。
1、免疫荧光法免疫荧光法是一种利用特殊的抗体与待检测物相互作用并用荧光显色的技术。
这种技术可用于检测单倍体、基因、蛋白质甚至肿瘤等。
它的原理是将特定荧光染料标记到抗体上，将该标记抗体与待测物相互作用后，未结合荧光抗体是用荧光显色检测出来开。
本方法具有高度的敏感性和特异性，是检测细胞内某些成分的重要方法。
2、酶联免疫检测法酶联免疫检测法是一种利用抗体与待检测物相互作用，并用酶的反应作为检测结果的技术，这种技术被广泛地应用于医学、生产以及食品安全等领域。
该方法的优点在于稳定、成本低、灵敏度和特异度高。
3、放射性免疫分析法放射性免疫分析法是利用放射性同位素标记化合物来对待测物进行标记，用射线比较测量出样品中同位素标记量的方法。
这种方法具有分子水平的敏感度，但缺点在于具有放射性污染的风险。
因此，尽管具有高灵敏度，但不被广泛使用。
4、免疫印迹分析法免疫印迹法是一种常用的生物学实验技术，可以用于鉴定和检测蛋白质和其他大分子化合物的存在和特性。
该方法的操作流程简单，样品处理方便，但灵敏度不如放射性免疫分析法。
二、免疫检测技术原理免疫检测技术利用特异性的免疫反应检测特定物质。
这种技术的原理是抗体与待检测物质之间的结合反应。
抗体可与蛋白质、生物毒素、药物等特定分子作用，形成具有特异性的抗原-抗体复合物。
当标记物和待测抗原/抗体发生特异性结合后，通过分析检测标记物、抗原或抗体的指标（如荧光、酶、放射性同位素）以确定待测物质的存在。
三、免疫检测技术在医学领域中的应用免疫检测技术在医学领域中有着广泛的应用，例如如下:1. 诊断疾病免疫检测技术可以用于检测疾病，如癌症、糖尿病、肝炎病毒等。
免疫学检测技术基本原理
1:8
1:16
Ag
Ab
扩散
免疫学检测技术基本原理
15
免疫学检测技术基本原理
16
３、免疫电泳 （immuno electrophoresis)
+
-
标本先电泳
**** **** ****** **** ***** ***
两侧挖槽加Ab孵 育后出现肉眼可
见沉淀
免疫学检测技术基本原理
17
免疫学检测技术基本原理
抗体直接结合所出现的凝集现象 ：
（1）玻片法—定性试验：已知 Ab 未知 Ag(?) ABO血型鉴定， 细菌种属抗原型别的鉴定
+
免疫学检测技术基本原理
10
（2）试管法—半定量试验： 诊断伤寒副伤寒的“肥达氏反应”
病人血清 倍比稀释
伤寒细菌悬液
1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 1:64 对照
1、免疫荧光技术
（immunofluorescence techniques）
利用荧光素标记抗体或抗抗体以检测细胞表面或 细胞内抗原的技术。
免疫学检测技术基本原理
21
1、免疫荧光技术 （immunofluorescence techniques）
直接法
间接法
免疫学检测技术基本原理
22
免疫学检测技术基本原理
23
间接免疫荧光检测自身抗核抗体
免疫学检测技术基本原理
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2、免疫酶标技术： 免疫酶标技术：酶联免疫吸附试验 （enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）
用酶标记Ab(或Ag)与标本中的Ag(或Ab)发生 特异性结合
加入酶的底物，在酶作用下产生有色物质 根据颜色可作出判断或测量光密度值
免疫学检验技术的研究与应用
免疫学检验技术的研究与应用免疫学检验技术是一种用于识别和量化人体内某些物质的分析方法。
这些物质可能是病原体、细胞表面标志物、蛋白质、激素等。
免疫学检验技术广泛应用于临床诊断、药物开发、基础研究等领域。
本文将介绍免疫学检验技术的基本原理、分类、优势以及未来研究方向和应用前景。
一、免疫学检验技术的基本原理免疫学检验技术的基本原理是利用免疫反应中特异性结合的原理，即抗原和抗体之间的结合。
免疫学检验技术主要分为两种类型：直接免疫法和间接免疫法。
直接免疫法是直接检测抗原，利用标记的抗体来检测待测物。
间接免疫法利用待测物作为抗原，检测与待测物特异性相对应的抗体。
常用的标记技术包括放射性同位素标记、酶标记、荧光标记等。
二、免疫学检验技术的分类免疫学检验技术主要可以分为下面几种类型：1. 免疫荧光技术免疫荧光技术是一种基于黏附于细胞表面的抗原和配对的荧光色素标记抗体之间的相互作用而建立的免疫试验法。
它可用于人类血液和组织的分子诊断，例如流感病毒、人类免疫缺陷病毒等。
2. 酶联免疫吸附测定法 (ELISA)ELISA是一种广泛应用的酶标记技术，其原理是将已知抗原或抗体附加在一种固体的基质上，使之便于识别。
它不仅能鉴定多种抗原和抗体，还可测定某些化学物质如激素、酶、细胞因子等，是目前临床和科研领域最常用的免疫学检验技术之一。
3. 免疫电泳技术免疫电泳技术是指先将蛋白质电泳分离，然后用识别特定蛋白质的抗体进行检测的方法。
它可用于检测肝病、血液疾病等多种疾病。
达成良好的信号和灵敏度的结果的基础在于平衡电场、硅胶不对称性、像淬火等过程的优化。
三、免疫学检验技术的优势1、高度特异性：免疫学检验技术基于抗原和抗体的特异性结合，能够高度准确地检测某种分子。
与其他检测技术相比如酶促荧光测定，免疫学检验技术具有更高的特异性。
2、高度灵敏性：免疫学检验技术可用于检查非常少量的生物分子。
例如，在HIV感染者的血液中检测HIV抗体，其灵敏度可达到非常关键的20 cd4 / mm3或更少。
免疫学检测技术的基本原理及其应用
免疫学检测技术的基本原理及其应用免疫学检测技术是一种通过测定机体中的抗体或抗原来进行诊断、监测或研究的检测方法。
其基本原理是利用人体免疫系统的特性，通过抗原与抗体的特异性结合来检测和定量分析抗原或抗体的存在与水平。
下面将详细介绍免疫学检测技术的基本原理及其主要应用。
一、免疫学检测技术的基本原理1.直接免疫检测方法：直接免疫检测方法是通过将待检测样品与已知特异性抗体标记物直接反应，利用标记物发出的信号来检测目标物质。
常用的标记物有放射性同位素、荧光物质、酶和金等。
2.间接免疫检测方法：间接免疫检测方法是通过将待检测样品与已知特异性抗体反应后，再经过第二抗体与标记物结合的方式来检测目标物质。
这种方法主要应用于寻找含有多重抗原决定簇的抗原。
二、免疫学检测技术的主要应用1.临床应用：免疫学检测技术在临床上应用广泛，例如用于检测病毒、细菌、寄生虫等病原体的感染，常见的如乙肝、艾滋病、流感等病毒的检测。
此外，免疫学检测技术还可用于检测肿瘤标志物、自身免疫性疾病、免疫功能检测等。
2.生物制药与生物工程：免疫学检测技术在生物制药与生物工程中有着重要应用。
例如，通过免疫学检测技术来检测和定量分析生物制药产品中的杂质和残留物，确保产品质量和安全性。
另外，免疫学检测技术还可用于基因工程草甘膦抗性作物的筛选和鉴定。
3.食品安全监测：免疫学检测技术在食品安全监测中起到重要作用。
通过免疫学检测技术可以检测食品中的有害物质或者过敏原，如重金属、农药、酒精、过敏原等，确保食品的质量和安全。
4.动物疫病监测：免疫学检测技术在兽医领域有着广泛应用。
例如，可以通过免疫学检测技术来检测动物体内的病原体感染，如猪瘟、狂犬病、禽流感等，及时采取措施进行防治。
5.环境监测：免疫学检测技术还可用于环境污染物的监测。
例如，通过检测水体、大气中的有害物质，判断环境中的污染程度和对人体的危害。
总结起来，免疫学检测技术基于抗原与抗体的特异性结合反应，可以应用于临床诊断、药物开发、食品安全监测、动物疫病监测和环境监测等多个领域。
免疫学检测技术及应用概述
免疫学检测技术及应用概述免疫学检测技术的原理是利用机体产生的特异性抗体与抗原之间的特异性结合反应。
当机体感染病原体或注射外源性抗原后，免疫系统将识别并生成相应的抗体。
免疫学检测技术通过将已知的抗原与待测物进行结合，利用特异性抗体识别和测定待测物的存在与含量。
常见的免疫学检测技术包括免疫荧光、酶联免疫吸附法（ELISA）、放射免疫分析法（RIA）、免疫电泳、免疫印迹等。
其中，免疫荧光是一种通过将荧光标记的抗体与待检测物结合后，利用荧光显微镜观察来检测抗原或抗体的存在。
ELISA是一种通过将待检测物与酶标记的抗体结合，再利用底物与酶反应来产生颜色变化，通过光密度计读取颜色变化程度来测定待检测物的含量。
RIA则是通过将放射性同位素标记的抗体与待检测物结合，再通过放射性测定来确定待测物的含量。
免疫学检测技术在临床诊断中被广泛应用。
例如，通过检测病毒或细菌感染所产生的特异性抗体，可以确定患者是否感染此病原体。
免疫学检测还广泛用于肿瘤标志物的检测，根据肿瘤细胞产生的特异性抗原来判断肿瘤的存在与发展程度。
此外，免疫学检测还可用于血型鉴定、妊娠检测、自身免疫性疾病等多个方面的诊断。
免疫学检测技术在生物学研究中也发挥着重要作用。
例如，在分子生物学研究中，通过检测特定的抗体可以确定蛋白质的表达和定位，从而理解其功能。
免疫学检测还可以用于研究免疫系统的功能和异常情况，为疾病的治疗和预防提供参考。
在药物研发中，免疫学检测技术可以用于药物的安全性和有效性评估。
例如，通过检测特定抗体的产生，可以评估疫苗的免疫效果。
免疫学检测技术还可以用于药物代谢和药物动力学研究，为药物的合理应用提供依据。
总之，免疫学检测技术是一项重要的分析和检测技术，广泛应用于临床诊断、生物学研究和药物研发等领域。
随着技术的不断发展，免疫学检测技术将继续发挥其在疾病诊断、药物研发和生物学研究中的重要作用。
临床免疫学检验第二十二章 流式细胞仪分析技术及应用
第二十二章流式细胞仪分析技术及应用本章要点1.流式细胞仪的分析及分选原理2.数据的显示与分析3.流式细胞仪免疫分析的技术要求4.流式细胞术在免疫学检查中的应用概述：流式细胞术（FCM）是以流式细胞仪为检测手段的一项能快速、精确地对单个细胞理化特性进行多参数定量分析和分选的新技术。
流式细胞仪的发展综合了激光技术、计算机技术、显微荧光光度测定技术、流体喷射技术、分子生物学和免疫学等多门学科的知识。
流式细胞仪：是集光电子物理，光电测量，计算机，细胞荧光化学，单抗技术为一体的高科技细胞分析仪。
第一节流式细胞仪的分析及分选原理流式细胞计的基本结构流式细胞计主要由四部分组成。
它们是：流动室和液流系统；激光源和光学系统；光电管和检测系统；计算机和分析系统。
一、工作原理（一）基本组成结构1.流动室和液流系统：流动室由样品管、鞘液管和喷嘴等组成，常用光学玻璃、石英等透明、稳定的材料制作。
设计和制作均很精细，是液流系统的心脏。
样品管贮放样品，单个细胞悬液在液流压力作用下从样品管射出；鞘液由鞘液管从四周流向喷孔，包围在样品外周后从喷嘴射出。
为了保证液流是稳液，一般限制液流速度<10m／s。
由于鞘液的作用，被检测细胞被限制在液流的轴线上。
流动室上装有压电晶体，受到振荡信号可发生振动。
2.激光源和光学系统：经特异荧光染色的细胞需要合适的光源照射激发才能发出荧光供收集检测。
常用的光源有弧光灯和激光；激光器又以氩离子激光器为普遍，也有配合氪离子激光器或染料激光器。
光源的选择主要根据被激发物质的激发光谱而定。
氩离子激光器的发射光谱中，绿光514nm和蓝光488nm的谱线最强，约占总光强的80%；氪离子激光器光谱多集中在可见光部分，以647nm较强。
免疫学上使用的一些荧光染料激发光波长在550nm以上，可使用染料激光器。
将有机染料做为激光器泵浦的一种成份，可使原激光器的光谱发生改变以适应需要即构成染料激光器。
例如用氩离子激光器的绿光泵浦含有Rhodamine 6G水溶液的染料激光器，则可得到550～650nm连续可调的激光，尤在590nm处转换效率最高，约可占到一半。
免疫检测技术及其应用研究
免疫检测技术及其应用研究免疫检测技术是一种能够检测身体免疫反应、抗原-抗体反应以及细胞表面分子表达和功能等的检测方法。
免疫检测技术在疾病诊断、治疗监测和免疫学研究中扮演着不可或缺的角色。
一、免疫检测技术的分类免疫检测技术包括多种方法，根据不同的原理和应用可以分为以下几种。
1.免疫荧光检测技术：免疫荧光检测技术是通过标记特定的免疫分子（如抗体）和激发它们的荧光来检测免疫分子在样本中的表达以及抗原-抗体结合。
2.酶联免疫吸附测定（ELISA）：ELISA法基于抗原-抗体反应，在试剂盒中直接反应形成可检测的颜色和荧光信号，用于检测分子间特异性的相互作用，如抗原和抗体之间的相互作用。
3.流式细胞术：流式细胞术是一种多参数分析技术，通常用于分析细胞表面分子的表达和功能，可以用于定量细胞表面特异性的抗原-抗体结合，检测细胞内的蛋白表达和功能状态。
4.免疫电泳：免疫电泳是一种将蛋白质或核酸分离并在电泳技术中联合免疫反应进行识别的方法，它是一种在电泳胶上进行免疫染色的方法，主要用于检测血清和组织蛋白的多态性。
5.免疫印迹：免疫印迹是一种通过对蛋白质的空间结构和特异性抗原-抗体结合来检测特定蛋白质表达和活性的方法。
它能够用于病原体的识别和鉴定，以及重组蛋白质的制备和检测等。
二、免疫检测技术的应用免疫检测技术应用广泛，在生命科学研究和临床医学等领域都有很大的应用价值。
1.疾病诊断：免疫检测技术可以用于疾病的早期诊断、疾病的监测和治疗效果的评估，如HIV、乙肝等常见病的检测和诊断。
2.药物开发：免疫检测技术可以用于药物的发现和开发，如用于检测药物分子和靶标分子之间的相互作用，筛选新型药物分子。
3.生命科学研究：免疫检测技术可以用于分子和细胞水平的研究，如研究基因表达、肿瘤细胞、细胞因子等方面。
三、未来发展方向在未来的研究中，我们可以预见到免疫检测技术会继续向着更高级、更精细的方向发展。
具体而言，未来的发展方向包括以下几个方面。
免疫学检测技术研究及其应用
免疫学检测技术研究及其应用近年来，随着生物学、化学等领域的迅速发展，免疫学检测技术也得到了广泛的应用。
免疫学检测技术基于抗原与抗体相互作用的原理，能够快速、准确地定性或定量检测出某些物质或病原体。
本文将重点介绍免疫学检测技术的研究进展以及其在临床和生物医学领域的应用。
一、免疫学检测技术的研究进展1. 抗体结构及其识别机制的研究抗体是免疫学中的重要组成部分，其结构和识别机制的研究一直是关注的焦点。
近年来，结构生物学技术的发展使得抗体结构的解析变得更加快速、准确，也推动了我们对抗体识别机制的深入认识。
例如，研究人员通过对病毒和抗体相互作用的分子动力学模拟，揭示了抗体和病毒结合时的结构变化，这些成果有望开发出更加有效的疫苗和药物。
2. 小型化检测技术的发展在生物医学和临床诊断领域中，小型化检测技术越来越受到关注和重视。
这类技术的优势在于可以使用较少的样品量进行检测，并且操作简便、速度快，而且成本相对较低。
例如，微流控芯片技术能够实现快速、准确地检测多种生物标志物，并且在临床实践中已经得到一定的应用。
3. 分子印迹技术的发展分子印迹技术是一种可以通过对分子之间的特定相互作用进行识别和分离的技术。
相比于其他免疫学检测技术，分子印迹技术其操作简单、灵敏性高的优势，已经被广泛应用在生物医学和环境监测领域。
例如，研究人员利用这种技术成功开发出了低成本、可重复使用、可降解的纳米分子印迹探针，用于检测水中难降解污染物的存在。
二、免疫学检测技术的应用1. 临床检测领域在临床检测领域中，免疫学检测技术已经成为影响治疗方案选择和疾病检测的重要手段。
例如，酶联免疫吸附试验 (ELISA) 能够快速检测出很多疾病的标志物，如肿瘤标志物、传染病病原体等。
另外，免疫组化技术可以通过检测特定蛋白的表达来确定肿瘤的类型和分级，指导治疗方案和预后判断。
2. 食品安全检测食品中的病菌、毒素等污染物质对于公共卫生安全构成了威胁。
免疫学检测技术正被广泛应用于食品安全检测，以快速检测和鉴定食品中的病原菌、致病因子等。
免疫检测技术及其在诊断和治疗中的应用
免疫检测技术及其在诊断和治疗中的应用随着现代医学的迅猛发展，越来越多的疾病被发现并且被研究。
有些疾病可能症状不明显，需要进行检测才能发现，并且部分疾病需要长期监测和治疗。
随着免疫学的不断进步，免疫检测技术也在不断完善，越来越多的疾病可以通过免疫检测技术进行诊断和治疗。
这篇文章将介绍免疫检测技术及其在诊断和治疗中的应用。
一、免疫检测技术是什么？免疫检测技术，也称为免疫诊断技术，是指利用机体免疫系统的反应特异性来检测和诊断疾病的一类检测技术。
免疫检测技术可以通过检测机体中特定的生物标志物，如抗体、抗原、细胞因子、肿瘤标志物等来诊断疾病。
常见的免疫检测方法包括酶联免疫吸附试验(ELISA)、免疫荧光技术、放射免疫测定术、免疫印迹技术等。
二、免疫检测技术的应用1、诊断感染性疾病免疫检测技术在感染性疾病的诊断中起着重要的作用。
常见的检测方法包括检测特定病原体的抗体和抗原，如乙肝病毒表面抗原(HBsAg)、丙肝病毒核心抗体(HBcAb)等，这些标志物的检测可以帮助诊断病毒感染。
糖尿病人士需要终身定期检测血糖浓度和尿糖，防止糖尿病恶化，免疫检测技术对于糖尿病的筛查和诊断也具有重要的意义。
2、诊断自身免疫性疾病免疫检测技术对自身免疫性疾病的诊断也具有重要的作用。
自身免疫性疾病是由机体免疫系统异常攻击自身组织和细胞所导致的疾病。
通过检测血液中的抗体和自身抗原可以帮助早期诊断多种自身免疫性疾病。
例如风湿性关节炎、全身性红斑狼疮、硬皮病等。
3、肿瘤诊断和治疗监测免疫检测技术是肿瘤诊断和治疗监测中非常重要的方法。
通过检测肿瘤标志物，可以帮助早期发现肿瘤，从而采取更加有效的治疗方式。
同时，免疫检测技术还可以用于肿瘤治疗的监测。
如癌症患者经过放化疗后，检测肿瘤标志物的水平可以帮助判断治疗是否有效。
4、移植排异反应的检测移植是治疗器官或组织失效的常见方法。
移植病人需要长期使用免疫抑制药物来避免移植排斥反应，然而使用免疫抑制药物会增加感染和肿瘤的风险。
课件：第22章 免疫学检测枝术
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• (2)间接荧光法：
• 将组织或细胞上的抗原直接与相应抗体(不标记荧光)结 合，此为第—抗体，再把能与第一抗体特异结合的荧光标 记的抗免疫球蛋白抗体加入，为荧光标记的第二抗体，观 察结果与直接法相同
• 间接法比直接法敏感性高，如果用于检查抗原的第一抗 体是人或动物的只需制备一种抗人或动物的免疫球蛋白荧 光抗体
• 本法敏感、快速简便，可取代单向扩散法定量 测定免疫球蛋白的浓度
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• 免疫标记抗体或抗原进行的抗原、抗体反应
• 用荧光素、同位素或酶标记抗体或抗原，用于 抗原或抗体检测是目前广泛应用的敏感、可靠的 方法
• 上述三种常用的标记物与抗原或抗体化学连接之 后不改变后者的免疫原性
• 本方法可用于定性、定量或定位检测
• 另一部分则与绵羊红细胞的亲和力较弱，需在放 置1小时以上才能形成花环。此时的E花环形成细胞 数称为总花环形成细胞。
• E花环形成细胞的正常值为60％一80％
• 活性E花环形成细胞正常值为25X一40％
• 目前认为活性E花环形成细胞比例数更能反映机体 的细胞免疫水平
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• (2)淋巴细胞转化试验：
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第一节 体外抗原抗体结合反应的 特点及影响因素
一、抗原抗体反应特点 (一)高度特异性 (二)表面化学基团之间的可逆结合 (三) (四)
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• 影响因素
• 空间构型互补程度不同，抗原和抗体分子 之间结合力强弱也不同。互补程度高，则 亲和力强
• 此外，反应的温度、酸碱度和离子浓度 对抗原和抗体分子上各基团的解离促和电 荷持性也有重要的影响
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提高浓度可增加抗原与抗体分子碰撞机会， 加速抗原-抗体复合物的形成。
通常抗原-抗体反应的最适温度是37℃。
3.酸碱度
抗原-抗体反应的最适pH值在6-8之间。
pH过高或过低，均可影响抗原或抗体的理化性 状，影响试验的可靠性。
三、抗原-抗体反应类型和检测方法
根据抗原的性质、参与反应的成分和反应呈现的结果， 将抗原-抗体反应分为四类：
（二）B细胞增殖试验
2、酶联免疫斑点试验（ELISPOT）： 方法与原理 用已知抗原包被固相载体（硝酸纤维素膜/PVDF膜），加入相应抗 原致敏的B细胞（抗体形成细胞）共同孵育后，当抗原致敏的B细胞通过 膜表面抗原识别受体（mIgM）接受固相表面相应抗原刺激后，可分泌 抗体并与固相表面相应抗原特异性结合；去除细胞和未结合的抗体，加 入酶标记第二抗体，通过底物显色，可在分泌抗体的B细胞所在处呈现 有色斑点。
2、间接凝集反应（indirect agglutination） 概念：将已知可溶性抗原或抗体与免疫无关的载体颗粒结合形成致敏颗 粒后，再与相应抗体或抗原进行反应出现的凝集现象。
应用
抗链“O”试验（ASO）——风湿病 类风湿因子测定（RF试验）——类风湿性关节炎（RA）
速率散射比浊/免疫比浊
单向琼脂扩散 2、沉淀反应 琼脂扩散
酶免疫测定法：ELISA 免疫测定技术 放射免疫测定法 化学发光免疫分析 酶免疫组化技术 3、免疫标记技术 免疫组化技术 免疫荧光技术 免疫胶体金技术 免疫电镜技术 免疫印迹技术 — Western blotting法 免疫层析技术 — 金标免疫层析法
第三节 免疫细胞的检测
一、免疫细胞的分离 （一）外周血单个核细胞的分离 （二）淋巴细胞及其亚群的分离 1.玻璃粘附分离法 2.尼龙毛分离法 3.E花结分离法 4.免疫吸附分离法（洗淘法）
（二）B细胞增殖试验 1、抗体形成细胞测定试验： 又称溶血空斑形成细胞试验（plaque forming cell assay，PFC） 或溶血空斑试验（hemolytic plaque assay） 可用来检测产生抗体的B细胞数量。
方法 ①将绵羊红细胞免疫4天后的小鼠脾细胞（内含绵羊红细胞致敏的B细胞— —抗体形成细胞）与绵羊红细胞在凝胶介质中混匀； ②倾注于平皿板进行孵育，使抗体形成细胞（antibody forming cell，AFC） 周围的绵羊红细胞被AFC产生的抗体致敏； ③在平皿板表面加豚鼠新鲜补体进行二次孵育，致敏绵羊红细胞激活补体 而发生溶解，在AFC周围出现肉眼可见的溶血空斑。 一个溶血空斑代表一个抗体形成细胞（浆细胞），通过计算溶血空斑数目 即可得知B细胞增殖分化和产生抗体的能力。 溶血空斑试验可分为直接法和间接法。上法为直接溶血空斑试验法，可用 来检测分泌IgM的抗体形成细胞。检测分泌IgG或其它类别Ig的抗体形成细胞须 用间接法。 间接法前两步与直接法相同，第三步需先加入抗IgG或其他类别Ig的抗体 （抗-抗体）后，再加豚鼠新鲜补体进行观察。
计数公式： 试验孔cpm均值-自然释放对照孔cpm均值 细胞毒活性（%）= 最大释放对照孔cpm均值-自然释放对照孔cpm均值 ×100%
（三）细胞毒试验
2、乳酸脱氢酶释放法：
方法与原理 将效应细胞与靶细胞按一定比例混合孵育，若靶细胞被杀伤，则存 在于胞内的乳酸脱氢酶（LDH）释放。用光度计测定培养上清液中乳酸 脱氢酶活性（通过加入LDH底物显色），根据计算公式可获得效应细胞 的杀伤活性。
特点：所需时间较长，从数分钟、数小时到 数日不等，且受电解质、温度和酸碱度等因 素影响。
二、抗原-抗体反应的影响因素 1.电解质：
在电解质作用下，抗原-抗体复合物失 去较多负电荷，使彼此连接出现肉眼可见的 凝集或沉淀现象。 试验中常用0.85%的NaCl溶液作为 稀释液，提供适当浓度的电解质。
2.温度
（一）T细胞增殖试验
常用检测方法： 1、3H-TdR掺入法： 取外周血单个核细胞（PBMC）与PHA共同培养，在终止培养 前8-15小时加入氚标记的胸腺嘧啶核苷（ 3H-TdR ）。 在细胞增殖过程中， 3H-TdR可掺入细胞新合成的DNA中，掺 入量与细胞增殖水平成正比。 培养结束后收集细胞，用液体闪烁仪测定样品的放射活性， 可反映细胞的增殖状况。 该法灵敏可靠，应用广泛，但需特殊仪器，且易发生放射性 污染。
3、适宜的抗原抗体浓度和比例 在一定浓度范围内，二者比例合适，可出 现肉眼可见的反应物；
若比例不合适，即抗原或抗体过剩时，可 形成小分子抗原-抗体复合物。此种小分子复 合物多呈游离状态，不能为肉眼所见。
4、抗原-抗体反应的两个阶段
① 抗原-抗体特异性结合阶段： 特点：反应快，数秒钟至几分钟内完成。 ② 反应可见阶段：
（一）T细胞增殖试验
常用检测方法： 2、MTT法： MTT是一种噻唑盐，化学名3-（4，5-二甲基-2-噻唑）-2，5二苯基溴化四唑。 取外周血单个核细胞与PHA共同培养，在培养终止前数小时 加入MTT。 在细胞增殖过程中，MTT可掺入 细胞，并作为胞内线粒体琥 珀酸脱氢酶的底物参与反应，形成褐色甲臜颗粒。 甲臜生成量与细胞增殖水平成正比，当甲臜被盐酸异丙醇或 二甲基亚砜溶解后，借助酶标测定仪检测细胞培养物OD值，即可 反映细胞的增殖水平。 该法灵敏度不如3H-TdR掺入法，但操作简便，无放射性污染。
二、淋巴细胞及其亚群的分离 1、免疫吸附分离法（洗淘法）： 将已知抗淋巴细胞表面标志的抗体包被聚苯乙烯培养板，加入淋 巴细胞悬液，使表达相应表面标志的淋巴细胞结合在培养板上，洗脱 后即可获得具有相应表面标志的淋巴细胞。 例 用抗CD4抗体包被聚苯乙烯培养板，可将CD4+T细胞与 CD8+T细胞相分离。 2、免疫磁珠（immune magnetic bead，IMB）分离法： 免疫磁珠由抗淋巴细胞表面标志的抗体与磁性微珠交联结合组成。 将免疫磁珠加入细胞悬液中后，可使表达相应表面标志的淋巴细 胞与之结合。然后，在磁场作用下，结合相应淋巴细胞的免疫磁珠吸 附在靠近磁铁的管壁上。弃去悬液中游离的细胞，将免疫磁珠结合的 细胞分离，即可获得具有某种表面标志的淋巴细胞。 该法所获细胞纯度高（93%-99%），活细胞率＞95%，比流式细 胞术省时、费用低，操作简单。
2.表面化学基团之间的可逆结合
3.适宜的抗原抗体浓度和比例 4.抗原抗体反应的两个阶段： 1）抗原抗体特异性结合阶段 2）可见反应阶段
一、抗原-抗体反应的特点
1、高度特异性： 抗原表位与抗体分子CDR的互补结合是抗原-抗 体反应的化学本质。
2、表面化学基团的可逆性
抗原与相应抗体除空间构型具有互补性外， 两者主要是通过分子表面的氢键、疏水键、静 电和范德华力非共价结合。 亲合力（avidity）: 指抗体分子的抗原结合部位与抗原表位之间 的结合强度
二、 免疫细胞功能测定
一、淋巴细胞功能测定
（一）T细胞增殖试验 1、特异性T细胞增殖试验： 2、非特异性T细胞增殖试验： 1、抗体形成细胞测定试验（溶血空斑试验）： 2、酶联免疫斑点试验（ELISPOT）： 1、51Cr释放法 （三）细胞毒试验 2、乳酸脱氢酶释放法 形态学检测法 琼脂糖电泳法 3、凋亡细胞检测法 TUNEL法 流式细胞术检测法 二、吞噬细胞功能测定 （一）中性粒细胞趋化功能的测定 （二）中性粒细胞吞噬功能测定 （三）巨噬细胞吞噬功能测定
双向琼脂扩散
对流免疫电泳 免疫电泳技术 火箭免疫电泳 免疫电泳
（1）单向琼脂扩散试验（single agar diffusion） 特点：定量试验；敏感性较高。 应用： 测定血清中IgG、IgM、IgA等含 量和C3、C4等补体含量
单项琼脂扩散试验：
定量测定血清中IgG、M、A和单一补体含量 方法与原理
3、流式细胞术（flow cytometry）分离法：
是借助荧光激活细胞分类仪（fluorescence activated cell sorter,FACS）将荧光 抗体标记的细胞进行快速准确鉴定和分类的技术。
荧光激活细胞分类仪（简称流式细胞仪）集光学、流体力学、电力学和 计算机技术于一体，可对细胞作多参数定量测定和综合分析。 程序原理 将待测细胞悬液与荧光素标记的抗体反应后，在压力作用下（细胞）排成 单列经喷嘴喷出形成液滴射流（每个液滴包裹一个细胞）；在液滴射流与高速 聚焦激光束相交处，液滴中细胞受激发光照射可产生散射光并激发各种荧光信 号；荧光信号被光电检测器接受可转化为电信号；电信号经加工处理存储于计 算机中，再用分析软件对数据进行统计处理和图像显示，快速准确获得结果。 流式细胞仪的主要用途 ①定量分析鉴定活细胞表面表达的特异分子； ②免疫细胞分类和百分计数； ③白血病和淋巴瘤的免疫学分型； ④细胞周期和细胞凋亡检测。 此外，流式细胞仪还具有分选功能，借助光电效应、微滴通过电场时出现 不同偏向，可分类收集所需的细胞及其亚群。分选纯度高达95%以上，且可保 持细胞活性，可进一步研究使用。
5.免疫磁珠分离法（IMB法）
6.流式细胞术分离法
一、外周血单个核细胞的分离 外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cells,PBMC）包括淋巴细胞和单核 细胞，它们是免疫学实验中最常用的细胞。
常用的分离方法： 葡聚糖-泛影葡胺（又称淋巴细胞分离液）密 度梯度离心法。
2、双向琼脂扩散试验（double agar diffusion ）
应用（1）定性试验：①鉴定可溶性抗原和抗体。
②分析复杂抗原成分和抗体
（2）半定量试验：免疫血清稀释后进行的血清 效价测定。
4火箭电泳（rocket electrophoresis）
又称电泳免疫扩散
优点：敏感性同单扩散；所需时间短。 应用：快速测定标本中可溶性抗原的含量。
1、直接凝集反应（direct agglutination） 概念：颗粒性抗原直接与相应抗体结合出现的凝集现象。 检测方法： （1）玻片法： 特点 定性试验； 用已知抗体检测未知抗原； 本法简捷快速；