实验10 细胞融合

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四、实验方法与步骤
⑤ 细胞悬液的制备
用吸管轻轻吹打细胞团数次，使细胞团分散，1000rpm 离心5 min，使细胞完全沉降。弃去上清液，加1 ml Hanks 液，悬浮细胞团，混匀。
⑥ 染色和Leabharlann Baidu检
吸取细胞悬液，在凹面载玻片上滴 1 滴，加入1 滴瑞氏染 液混匀，染色5 min后盖上盖玻片，在显微镜下观察细胞融合 情况（区分细胞融合与细胞重叠）。
① 鸡血细胞悬液的制备
从家鸡的翼根静脉采血制备抗凝全血。加入 4 倍体积的阿 氏血液保存液，制成红细胞储备液，保存于 4℃。（已完成） 取鸡血细胞储备液1 ml，1200rpm离心5 min，弃去上清 液。按红细胞压积，加入 10 倍体积的 Hanks 溶液轻轻悬浮细 胞，制成10%鸡血细胞悬液，备用。（每组一管）
成细胞的融合率较低。
2. 必须严格控制 PEG 的作用时间，通常处理细胞 1 ～ 2min 。 PEG和二甲基亚砜（DMSO）并用，可以提高细胞的融合率。
3. 融合细胞继续培养就变成一个杂种细胞，它的染色体数不是
两核的倍数，因为一些染色体会逐渐消失。
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六、实验报告
• 1. 绘制你所观察到的融合细胞。 • 2. 选取5个随机视野进行观察，计算融合率。 • 3. 请写出细胞融合基本原理及应用。
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二、实验原理
• PEG溶液作为助融剂可 改变各类细胞的膜结构， 使两细胞接触点处脂类 分子发生疏散和重组， 引起细胞融合。

细胞融合的频率和活力与所用 PEG的分子质量、浓度、作用时间 以及细胞的生理状态及密度等有关。用分子质量为400～ 6000的
PEG溶液可引起细胞的聚集和粘连，产生高频率的细胞融合。
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实验 10
细胞融合
一、实验目的
1.掌握PEG体外诱导细胞融合的原理和基本方法。 2.掌握在光学显微镜下融合细胞的形态特征。
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二、实验原理
细胞融合是用人工的方法
使两个或以上的细胞融合 成异核细胞。异核细胞可 进入有丝分裂，使来自两 个亲本细胞的基因组合在 一起，形成只含一个细胞 核的杂种细胞。
② 50％的PEG溶液的配制 （每组一管）
称取3克PEG(MW=400)放入烧杯内，在酒精灯上融化之， 迅速加入3 ml预热的Hanks液混匀制成50％的PEG溶液。放入 37℃水浴中待用。
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四、实验方法与步骤
③ PEG诱导细胞融合 （每人一管）
取①中 10 ％的鸡红细胞悬液 1 ml 放入离心管中，再加
入5 ml的Hanks溶液混匀，1000rpm离心5 min，小心弃去上 清，用指弹法将细胞团块弹散。
吸取1 ml 37℃温热的50%PEG溶液② ，在1分钟内，慢
慢沿着离心管壁逐滴加入，边加边轻摇离心管，使PEG与细 胞混匀，然后在37℃水浴中静置1-2 min。
④ 终止PEG作用 （每人一管）
缓慢加入 5 ml Hanks 液，轻轻吹打混匀，于 37℃水浴中 静置5 min。
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四、实验方法与步骤
⑥ 计算细胞融合率
细胞融合率是指在显微镜的视野内，已发生融合的细胞 其细胞核总数与该视野内所有细胞的细胞核总数之百分比。
视野内融合细胞的核数 融合率 = ×100％ 视野内细胞的总核数
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五、注意事项
1. 高Ca2+浓度能够提高细胞融合率。有些抗凝剂中含有和Ca2+ 结合的化合物，与血液中的Ca2+形成难解离的可溶性络合物， 导致血液中的Ca2+ 浓度降低，故起抗凝血作用，但同时会造
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三、实验材料、仪器和试剂
1.材料：成年家鸡。 2.主要仪器：
注射器、刻度离心管、离心机、水浴锅、滴管、 显微镜、烧杯、容量瓶、凹面载玻片、盖玻片、酒 精灯等。
3.主要试剂：
阿氏血液保存液、Hanks溶液、50%（W/V）PEG400溶液、瑞氏染液。
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四、实验方法与步骤