过氧化物酶的检测方法

POD检测方法

(Horseradish Peroxidase)

1原理

Purpurogallin的产生可以通过420nm的光吸收进行检测。

2试剂：

A.5.0%焦酚溶液

B.0.5% 过氧化氢（H2O2）溶液

C 酶稀释液：100mM PB 缓冲液, pH6.0

3 操作规程：

3.1仪器参数设定

检测方法：时间扫描

测量波长：420nm 系数/因子：2.5 测量温度：20±0.5℃

3.2 样品准备

若待测样品为固体，可以按10mg 样品/1000ul 超纯水比例溶解。溶解后于2-8度放置30min。

3.3 检测方法

3.3.1在石英比色皿中加入525ul水，80ul试剂A, 40ul试剂B,80ul 试剂C于20度孵育

2min。

3.3.2加入25 ul 样品后, 温和混匀后开始测定。

3.3.3 测定结束后，每隔20秒计算△OD，取△OD最大值

3.3.4 活性值（U/ml）范围为0.3-0.7U/ml，若超出范围，待测样品需经试剂C稀释后再次

进行检测。

3.3.5测定样品前需检测空白反应值，即其他操作不变，用25ulC代替样品，测定OD blank。

3.3.6计算公式

活性（U/ml）