毕赤酵母的原生质体和分离出的丝状真菌的细胞核融合[外文翻译]

本科毕业论文外文翻译

译文：

毕赤酵母的原生质体和分离出的丝状真菌的细胞核融合

来源：Enzyme Microb. Technol., 1997, vol. 21, July

*PROMI, Av. Belgrano y Pje. Caseros, Tucumdn, Argentina; ‘Universidad National de San Juan;

and *Universidad National de Tucumdn, Tucumdn, Argentina

摘要：原子质体是从丝状真菌串珠镰刀菌的菌丝及里氏木霉菌中分离出来，并使用聚乙二醇作为融合剂，来融合发酵木糖酵母毕赤酵母的原生质体。混合物是似酵母的形态，当夹紧均匀电场电泳被完成时，能够表现出类似染色体模式向亲代的酵母水解木聚糖。这些杂交被孤立，同时他们的木聚糖酶活性进行定量确定。木聚糖酶活性在亲代的真菌物种在96小时时表现出最大的增长；在培养基为F 时，它到达796nkat每毫升。在120小时时，串珠菌898nkat每毫升成长为T。里氏木霉菌。木聚糖酶活动在其中的一个混合物达到350nkat每毫升时，并在9小时时，毕赤酵母本身没有显示出木聚糖酶的活动。

关键词：华赤酵母；孤立丝状真菌；细胞融合

介绍

半纤维素代表着所有木本植物资料的一个重要的部分，并像是一个大型闲置的蓄水池的碳源为微生物的生长提供环境；然而，大部份的酵母无法正常代谢木聚糖和其他半纤维素的成分。这限制了他们作为碳源，为日益增加的若干环节使用酵母来生产饮料、食品、药品以及许多其他产品。丝状真菌的许多物种产生木聚糖酶和其他的水相酶,和一些发酵产生的木糖并产生乙醇。

我们正在调查发酵木糖，通过休哈塔假丝酵母，管囊酵母，和毕赤酵母成为乙醇的研究。酵母菌株的原生质体属于上面所提到的物种与酿酒酵母的原生质体融合在一起。得到了所有的混合物与木糖相似,但没有被同化了。

无论是从其它谷草转氨酶菌株中获得的核酵母株或从不相关的生物中获得的原子核，来使酵母原生质体融合被认为是可行的已有一段时间了。并且它已应用于从大鼠肝细胞核的DNA序列中获得的酵母株的构造(布鲁斯)。哈茨木霉菌的菌株核已经从相同的菌株或也用另一个相似物种的菌株来融入原生质体；以此

产生混合物。

不同种类的曲霉菌及木霉菌的原生质体的融合是公认改良遗传的工业菌株技术的物种。最近,据Kumari和Panda7报道了一种里氏木霉菌和酿酒酵母属间的原生质体融合。

我们最近进行的是一项以从镰胞菌种中的丝状真菌来水解木聚糖，及木霉菌属病菌的酵母种类的毕赤酵母和里氏木酶发酵木糖基因的转移为目标的，并且病菌的物种也同样使用发酵木糖。我们已经成功构建了由原生质体融合似酵母的混合物转为水解木糖。此外，这些似酵母的混合物也保留了发酵木糖成为乙醇能力,因此可以用于发酵木聚糖直接制造乙醇。

融合物是需要使用木聚糖作为碳源和以硝酸盐作为氮源以选择性的条件来混合重获的。在融合菌株用于工业用途中，营养缺陷型的标记的使用被认为是不受欢迎的，由于营养缺陷型的转变也可以修改基因控制的主要工业中的重要特征的酵母。

我们想强调由于亲代的酵母菌种并不采用硝酸盐作为含氮源，也不会使木聚糖变形,因此它不会从木聚糖生产乙醇，同时拥有的染色体粒度范围在大多数的酵母中获得。利用硝酸盐的混合物作为一个氮源，发酵木聚糖产生乙醇,而且也有同样的大小范围中的染色体作为大多数的酵母。以取得真正的混合物。这篇论文研究结果是混合物的具有特点。

材料与方法

有机体

酵母有毕赤酵母。真菌有串株镰刀菌，赤霉病菌，镰刀菌，和尖孢镰刀菌是在宾夕法尼亚大学的研究中心，由阿根廷的安蒂奥基亚大学的S.Chulze博士进行研究的，此外里氏木酶是由阿根廷西北部沼泽地的安蒂奥基亚大学的Cuevas 博士进行研究的。

栽培维护

丝状真菌维持在PDA偏含10克Lˉ¹葡萄糖。毕赤酵母仍保持在YEPD琼脂含10gLˉ¹酵母提取物、20gLˉ¹蛋白胨，其次是20克Lˉ¹葡萄糖，15gLˉ¹夏甲。此外有机体以15天为一定期做培养。

丝状真菌的培养媒体

丝状真菌的栽培介质主要是将碳源添加到20克Lˉ¹葡萄糖或birchwood20克Lˉ¹木聚糖的媒体中。

融合产物再生的重建媒介

在融合产物中发现了10gLˉ¹木聚糖，2gLˉ¹酵母提取物、0.6MKC1(作为一种渗透稳定剂)，和30gLˉ¹夏甲的查氏介质。

融合产物的选择性介质

为了研究在不同的媒体中毕赤酵母与融合产物的成长能力，这些细胞被培养下列媒体：

a)C-Glu：包含20g/mL葡萄糖的查氏介质。

b)C-Xln：包含20g/mL木聚糖的查氏介质。

c)C-Xln-YE：包含20g/mL酵母膏和20g/mL木聚糖的查氏介质。

d)YNB-Xln：6.7g/mL酵母氮基（培养基）混合20g/mL木聚糖。

e)YNB-Xln-YE：6.7g /mL酵母氮基（培养基）混合20g/mL木聚糖和20g/mL 酵母膏。

f)YNB-Glu：6.7g/mL酵母氮基（培养基）混合20g/mL葡萄糖。

YNB-/酵母氮基（培养基）混合20g/mL木胶糖。

在所有的介质中，琼脂浓度是20g/mL。

木聚糖酶活性测定的媒介

木聚糖酶活性是在XP-Xln介质中测定其栽培生长率(10gLˉ¹酵母提取物、20gLˉ¹蛋白胨和20gLˉ¹木聚糖)。

发酵媒体

亲代菌株毕赤酵母，串株镰刀菌，里氏木酶与融合的产品,来测试发酵木糖和木聚糖产生乙醇的能力。

发酵媒体的合成物是：

a)YP-Xyl：10gLˉ¹酵母提取物，20gLˉ¹蛋白胨，和20gLˉ¹木胶糖。

b)YP-Xln：10Lˉ¹酵母提取物，20gLˉ¹蛋白胨，和20gLˉ¹木聚糖。

丝状真菌培养

为了进一步的融合来选择真菌菌株，串株镰刀菌NRRL13616，赤霉病菌NRRL5883，镰刀菌NRRL6322，尖孢镰刀菌，和氏木霉QM9441的栽培都生长