生物大分子的液相色谱分离和制备(师治贤,王俊德编著)思维导图
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大分子生物分析概论(思维导图)
导论
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方法开发阶段 研究前验证阶段 研究中验证阶段
测试试剂的选择、稳定性、测试格式和运行/批次大小
方法开发阶段 研究前验证阶段
研究中验证阶段
参照物 特异性和选择性
方法开发阶段 研究前验证阶段
评估选择性即是评估存在基质成 分时对待测物的定量。这些基质 成分可能会干扰抗体与待测物的 结合，应当在定量下限或之上的 附近外加待测物到同一样本基质 类型的多个批次（至少10个） 中，并评估相对误差的百分比 （%RE）
ELISA在蛋白生物药开发中的应用
PK测试方法 生物标志物的定量分析方法
免疫原性测试方法
LBA定量分析方法的优点和缺点 历史视角
一个分析方法的生命周期通常可分为3个阶段：方法开发、研究前验证和研究中验 证。方法开发是建立分析方法的过程，而研究前验证是对分析方法的确认，研究 中验证则是在应用过程中，ex出现关键成分发生变化之后，进行的部分验证
导论 什么是干扰
免疫测试方法是一种常用的分析方法，用于测定抗体药物、抗药抗体和可溶性蛋 白生物标志物。这些测试针对的生物样本是复杂的基质，包含各种成分，其可以 显著的影响定量待测物的准确性
干扰
样品中存在的物质，其发挥影响或效应改变了对一个待测物的正确的分析结果； 该结果通常表达为待测物的浓度或活性数值。干扰可以区分为依赖于待测物的和 不依赖于待测物的两类
LBA定量抗体药物的背景干扰及其消除
可溶性蛋白生物标记物
特异性
结合蛋白 内源性抗体
关键术语
对分析方法特异性的错误解释是基质干扰的主要原因。一个可溶性蛋白生物标志 物可能会有不同的高度同源的家族成员，异构体或前体蛋白。如果一个结构上与 实际待测物相关 的蛋白质，而且免疫分析系统中的捕获试剂盒检测试剂都能识 别，那它就会导致可溶性蛋白生物标志物出现错误的高浓度结果
图1高效液相色谱仪的系统流程图原理
原理 基本结构
优点 应用 使用注意事项
检测器
高效液相色谱仪常用的检测器有紫外 吸收、示差折光率、荧光和安培检测 器等，对它们的要求和性能指标与气 相色谱检测仪基本相同。检测器主要 分为紫外吸收检测器、荧光检测器和 示差检测器。
原理 基本结构
优点 应用 使用注意事项
高效液相色谱仪的优点
高压——压力可达150～300 kg/cm2。色谱柱每米降压为75 kg/cm2以上。
组成。储液器中的流动相被高压泵打入系 统, 样品溶液经进样器进入流动相, 被流动 相载入色谱柱(固定相) 内, 由于样品溶液 中的各组分在两相中具有不同的分配系数, 在两相中作相对运动时, 经过反复多次的 吸附- 解吸的分配过程, 各组分在移动速度 上产生较大的差别, 被分离成单个组分依 次从柱内流出, 通过检测器时, 样品浓度被 转换成电信号传送到记录仪,数据以图谱形 式打印出来。
原理 基本结构
优点 应用 使用注意事项
高压泵
泵应耐压、耐腐蚀、密封性好。高压泵主要用 于输送流动相，其压力一般为几兆帕至数十兆 帕。这是液体的黏度比气体大 100 倍，同时由 于固定相的颗粒极细，柱内压降大，为保证一 定的流速，必须借助高压迫使流动相通过柱 子。高压泵应无脉动或脉动极小，以保证输出 的流动相具有恒定的流速，同时采用脉动阻尼 装置可将产生的脉动除去，使流动相的流量变 动范围不宜超过 2%~3%。高压泵主要分为恒 压泵、恒流泵和螺旋传动注射泵三类。
原理 基本结构
优点 应用 使用注意事项
色谱柱
色谱柱是整个色谱系统的心脏，它的质量优劣直接影响 到分离的效果，一般情况下色谱柱通常采用优质不锈钢 管制成，并且柱内壁必须光洁平滑，否则内壁的纵向沟 痕和表面多孔性也会引起谱带的展宽，柱接头的体积应 尽可能小，柱长一般为 10 cm ~25cm，内径 4 mm ~5mm。若使用直径为5μm~10μm 固定相颗粒，理论塔板 可达到 5×104/m。尺寸排阻色谱柱的内径通常大于 5mm，制备色谱柱则会更大 ；为了减少溶剂用量，可采 用微径柱，内径为 1mm，长度为 30mm ~75mm，若采用 3μm 颗粒，理论塔板数高达 1×105/m。为了保护分析柱 不被污染，有时需在分析柱前加一短柱，约数厘米长， 此柱称为卫柱，为了防止卫柱过分增加柱阻力，在卫柱 中使用的颗粒大小约为 10μm ~30μm
第三章液相色谱法
7/22/2020
反相色谱法
一般用非极性固定相（如C18、C8）；流动相为水或缓冲液，常加入 甲醇、乙腈、异丙醇、丙酮、四氢呋喃等与水互溶的有机溶剂以调节 保留时间。适用于分离非极性和极性较弱的化合物。RPC在现代液相 色谱中应用最为广泛，据统计，它占整个HPLC应用的80%左右。 随着柱填料的快速发展，反相色谱法的应用范围逐渐扩大，现已应用 于某些无机样品或易解离样品的分析。为控制样品在分析过程的解离， 常用缓冲液控制流动相的pH值。但需要注意的是，C18和C8使用的 pH值通常为2.5~7.5（2~8），太高的pH值会使硅胶溶解，太低的pH 值会使键合的烷基脱落。有报告新商品柱可在pH 1.5~10范围操作。
7/22/2020
例如：固定相为非极性键合相，流动相为水溶液， 于流动相中加入与待测离子X+有相反电荷的离子Y-
X+水相 + Y-水相
X+Y-有机相
由于离子对XY具有疏水性，因而被非极性固定 相提取。其它待测离子A1，A2...因与B离子间的 成对能力不同，而形成不同疏水性的离子对，使 得各待测物在柱内的保留值不同，从而达到分离 的目的。
7/22/2020
• ①流动相传质阻抗Hm＝Cmdp2u/Dm，Cm为常数。这是由于在一个流 路中流路中心和边缘的流速不等所致。靠近填充颗粒的流动相流速较 慢，而中心较快，处于中心的分子还未来得及与固定相达到分配平衡 就随流动相前移，因而产生峰展宽。
• ②静态流动相传质阻抗Hsm＝Csmdp2u/Dm，Csm为常数。这是由于溶 质分子进入处于固定相孔穴内的静止流动相中，晚回到流路中而引起 峰展宽。Hsm对峰展宽的影响在整个传质过程中起着主要作用。固定 相的颗粒越小，微孔孔径越大，传质阻力就越小，传质速率越高。所 以改进固定相结构，减小静态流动相传质阻力，是提高液相色谱柱效 的关键。
反相色谱法
一般用非极性固定相（如C18、C8）；流动相为水或缓冲液，常加入 甲醇、乙腈、异丙醇、丙酮、四氢呋喃等与水互溶的有机溶剂以调节 保留时间。适用于分离非极性和极性较弱的化合物。RPC在现代液相 色谱中应用最为广泛，据统计，它占整个HPLC应用的80%左右。 随着柱填料的快速发展，反相色谱法的应用范围逐渐扩大，现已应用 于某些无机样品或易解离样品的分析。为控制样品在分析过程的解离， 常用缓冲液控制流动相的pH值。但需要注意的是，C18和C8使用的 pH值通常为2.5~7.5（2~8），太高的pH值会使硅胶溶解，太低的pH 值会使键合的烷基脱落。有报告新商品柱可在pH 1.5~10范围操作。
7/22/2020
例如：固定相为非极性键合相，流动相为水溶液， 于流动相中加入与待测离子X+有相反电荷的离子Y-
X+水相 + Y-水相
X+Y-有机相
由于离子对XY具有疏水性，因而被非极性固定 相提取。其它待测离子A1，A2...因与B离子间的 成对能力不同，而形成不同疏水性的离子对，使 得各待测物在柱内的保留值不同，从而达到分离 的目的。
7/22/2020
• ①流动相传质阻抗Hm＝Cmdp2u/Dm，Cm为常数。这是由于在一个流 路中流路中心和边缘的流速不等所致。靠近填充颗粒的流动相流速较 慢，而中心较快，处于中心的分子还未来得及与固定相达到分配平衡 就随流动相前移，因而产生峰展宽。
• ②静态流动相传质阻抗Hsm＝Csmdp2u/Dm，Csm为常数。这是由于溶 质分子进入处于固定相孔穴内的静止流动相中，晚回到流路中而引起 峰展宽。Hsm对峰展宽的影响在整个传质过程中起着主要作用。固定 相的颗粒越小，微孔孔径越大，传质阻力就越小，传质速率越高。所 以改进固定相结构，减小静态流动相传质阻力，是提高液相色谱柱效 的关键。
高效液相色谱讲座第一讲高效液相色谱概貌和设备
离分析 。
１ 现代高效液相色谱与经典液相色 ）
谱的比较
Ｔ Ｃ 部分地克服了Ｔ Ｃ固有的缺点，可以 Ｌ） Ｌ 和高效柱液相色谱互为补充。 ２ 高效液相色谱与气相色谱的比较 ） 气相色谱自五十年代出现以来，获得了 飞速发展，它的特点是高效、快速和灵敏， 其分离分析复杂混合物的能力是以前其他色 谱方法无法比拟的，应用相当广泛和普遍。 但是由于气相色谱使用气体流动相，被分析 样品必须要有一定的蒸汽压，汽化后才能在 柱上分析，这使分离对象的范围受到一定的 限制。对于那些挥发性差的物质 （ 高沸点化
１％）。
与此相反，液相色谱则不受样品挥发度 和热稳定性的限制，液相色谱一般在室温下 操作，最高不超过流动相溶剂的沸点，所以 只要被分析物质在流动相溶剂 （ 各式各样） 中有一定的溶解度，便可以分析。所以液相 色谱特别适合于那些沸点高、极性强、热稳 定性差的化合物，例如生化物质和药物，离 子型化合物，热不稳定的天然产物等等。事
定，但一般说来，柱效受些影响。 自 动进样 器适合于多样品重复操作，便于用微处理机 控制，实现自动化。 检测器 被分析组分在柱流出液中浓度 的变化可通过检测器转化为光学的或电学的 信号而被检出，是色谱仪的 “ 眼睛”。检测 器性能的好坏直接关系着定性定量分析结果 的可靠性和准确性。在高效液相色谱中最常 用的检测器是光学检测器，例如示差折光、
素的石油醚溶液从一根主要装有碳酸钙吸附
剂的玻璃管上端加入， 沿管滤下， 后用纯石油 醚淋洗，结果按照不同色素的吸附顺序在管 内观察到它们相应的色带， 就象光谱一样。 茨
维特把这些色带称为“ 色谱图”Ｃ ｒｍ ｔｇ （ｈｏ ａｏ－ ｒｍ ，相应的方法叫做“ ａ） 色谱法”Ｃ ｒｍ － （ｈｏ ａ ｔｇａｈｃ ｔｏ） ｏｒｐｉ ｍ ｈｄ。这就是最初的液相色 ｅ
１ 现代高效液相色谱与经典液相色 ）
谱的比较
Ｔ Ｃ 部分地克服了Ｔ Ｃ固有的缺点，可以 Ｌ） Ｌ 和高效柱液相色谱互为补充。 ２ 高效液相色谱与气相色谱的比较 ） 气相色谱自五十年代出现以来，获得了 飞速发展，它的特点是高效、快速和灵敏， 其分离分析复杂混合物的能力是以前其他色 谱方法无法比拟的，应用相当广泛和普遍。 但是由于气相色谱使用气体流动相，被分析 样品必须要有一定的蒸汽压，汽化后才能在 柱上分析，这使分离对象的范围受到一定的 限制。对于那些挥发性差的物质 （ 高沸点化
１％）。
与此相反，液相色谱则不受样品挥发度 和热稳定性的限制，液相色谱一般在室温下 操作，最高不超过流动相溶剂的沸点，所以 只要被分析物质在流动相溶剂 （ 各式各样） 中有一定的溶解度，便可以分析。所以液相 色谱特别适合于那些沸点高、极性强、热稳 定性差的化合物，例如生化物质和药物，离 子型化合物，热不稳定的天然产物等等。事
定，但一般说来，柱效受些影响。 自 动进样 器适合于多样品重复操作，便于用微处理机 控制，实现自动化。 检测器 被分析组分在柱流出液中浓度 的变化可通过检测器转化为光学的或电学的 信号而被检出，是色谱仪的 “ 眼睛”。检测 器性能的好坏直接关系着定性定量分析结果 的可靠性和准确性。在高效液相色谱中最常 用的检测器是光学检测器，例如示差折光、
素的石油醚溶液从一根主要装有碳酸钙吸附
剂的玻璃管上端加入， 沿管滤下， 后用纯石油 醚淋洗，结果按照不同色素的吸附顺序在管 内观察到它们相应的色带， 就象光谱一样。 茨
维特把这些色带称为“ 色谱图”Ｃ ｒｍ ｔｇ （ｈｏ ａｏ－ ｒｍ ，相应的方法叫做“ ａ） 色谱法”Ｃ ｒｍ － （ｈｏ ａ ｔｇａｈｃ ｔｏ） ｏｒｐｉ ｍ ｈｄ。这就是最初的液相色 ｅ
高清版新课标高中生物思维导图
过程
光反应 暗反应
场所，条件 物质变化 能量变化
实质、意义
影响光合作用 的因素及应用
内部因素 外界因素
叶面积指数 叶龄 光照强度 温度 二氧化碳浓度 必需矿质元素
水
ATP的主要来源
概念
有氧呼吸
方式
比较
无氧呼吸
实质
意义
影响呼吸作用 的因素及应用
内部因素 环境因素
遗传因素 温度 氧气浓度 CO2浓度
含水量
DNA
分类 RNA
功能
糖类
元素 种类及作用
脂质
元素 种类及作用
有氧呼吸主要场所 光合作用的场所
线粒体 叶绿体
双层膜 细胞器
对来自内质网的蛋白质 进行加工、分类和包装
高尔基体
增大膜面积，与蛋白质、脂质 和糖类的合成有关，蛋白质 的运输通道
维持渗透压，使细胞膨胀
内质网 液泡
单层膜 细胞器
含有多种水解酶，可 分解细胞器和病毒
染色质
结构 功能
遗传物质的载体
是遗传信息库，是细胞代谢和遗传的控制中心
细胞膜 细胞壁
细胞的基 本结构
2/20
细胞骨架
组成 蛋白质纤维组成的网状结构
作用
在真核中维持细胞形态； 保持细胞内部结构的有序性
细胞质基质
成分
水、无机盐、脂质、糖类、 氨基酸、核苷酸和多种酶
状态 呈不断流动的胶质状
作用 活细胞代谢的主要场所
保护、物质交换、能量转换、 信息传递等；提供酶的附着位点； 使细胞内区域化
功能
生物膜系统
研究意义 实验：体验制备细胞膜的方法
纤维素和果胶 成分
保护和支持作用 功能
液相色谱仪工作流程图
液相色谱仪工作流程图(原理）南京科捷是分析仪器生产型厂家，专业生产气相色谱仪、液相色谱仪、色谱仪配件、色谱零件，并提供色谱仪售前售后服务。
与您共享技术文章：液相色谱仪工作流程，液相色谱仪原理，欢迎您技术咨询、业务咨询。
现在的液相色谱仪一般都做成一个个单元组件，然后根据分析要求将各所需单元组件组合起来.最基本的组件是高压输液泵、进样器、色谱柱、检测器和数据系统（记录仪、积分仪或色谱工作站)。
此外,还可根据需要配置流动相在线脱气装置、梯度洗脱装置、自动进样系统、柱后反应系统和全自动控制系统等.图８-1是具有基本配置的液相色谱仪的工作流程图。
液相色谱仪的工作过程：输液泵将流动相以稳定的流速（或压力)输送至分析体系，在色谱柱之前通过进样器将样品导入，流动相将样品带入色谱柱,在色谱柱中各组分因在固定相中的分配系数或吸附力大小的不同而被分离,并依次随流动相流至检测器，检测到的信号送至数据系统记录、处理或保存.图8-1是具有基本配置的液相色谱仪工作流程图：进样器从液相色谱仪工作流程图看出,进样器是将样品溶液准确送入色谱柱的装置，分手动和自动两种方式。
ﻫ进样器要求密封性好，死体积小，重复性好，进样时引起色谱系统的压力和流量波动要很小。
现在的液相色谱仪所采用的手动进样器几乎都是耐高压、重复性好和操作方便的六通阀进样器，其原理与气相色谱中所介绍的相同。
色谱柱１. 色谱柱的构成从液相色谱仪工作流程中看到，色谱柱是实现分离的核心部件，要求柱效高、柱容量大和性能稳定。
柱性能与柱结构、填料特性、填充质量和使用条件有关.色谱填料：经过制备处理后,用于填充色谱柱的物质颗粒，通常是5-10粒径的球形颗粒. 色谱柱管: 内部抛光的不锈钢管。
典型的液相色谱分析柱尺寸是内径4.6mｍ，长250mm。
色谱柱：也称固定相,是将色谱填料填充到色谱柱管中所构成的，其结构如图8-８所示。
2。
色谱柱的填充干法填充：在硬台面上铺上软垫，将空柱管上端打开垂直放在软垫上,用漏斗每次灌入５０—100mｇ填料，然后垂直台面墩10—2０次。
生物大分子的分离与制备 PPT
5、 聚合酶链反应(PCR)6、 分子杂交
7、 12、 基因芯片
13、 基因敲除
14、 RNAi
15、 转基因动物
生物大分子相互作用分析:
• 生化反应过程实际上是生物分子间的相互作 用过程。生物大分子间的相互作用是它们的 功能基础。随着分子生物学研究的进展,建立 了一系列研究核酸及蛋白质相互作用的技术。
生物大分子的分离与制备
引
言
❖ 生物化学研究的三个主要发展时期:
– 叙述生物化学时期(1770～1903 年)。又称为静态或形态生物化 学,研究内容以分析生物体内物质的化学组成、性质和含量为主。
– 动态生物化学时期(1903～1950 年)。又称为生理化学。主要研 究生物体内组成物质的化学变化及相互转变。
发生溶胀、破碎。
2 非机械破碎
非机械方法特别多 1)酶解 2)化学法溶胞 3)物理法
–渗透压冲击 –冻结和融化 –干燥法
其中酶法和化学法溶胞应用最广。
四、酶解法 Enymatic lysis)
酶解是利用溶解细胞壁的酶处理菌体细胞,使
细胞壁受到破坏后,再利用渗透压冲击等方法
破坏细胞膜。
溶菌酶、
1)外加酶法
干燥 处理
高
超 酶溶法
压
声
匀
破
浆
碎
溶胞 作用
化学法 物理法
细胞破碎方法及其原理
机械破碎 物理破碎 化学破碎 酶促破碎
通过机械运动产生的剪切 力,使组织、细胞破碎。
通过各种物理因素的作用,使 组织、细胞的外层结构破坏, 而使细胞破碎。
通过各种化学试剂对细胞 膜的作用,而使细胞破碎
通过细胞本身的酶系或外 加酶制剂的催化作用,使细 胞外层结构受到破坏,而达 到细胞破碎
《生物》必修一思维导图(思维导图)
组成元素：主要由C、H、O、N等元素组成，有些含有S、Fe等
相对分子质量：几千~100万以上，属于大分子化合物
基本单位：氨基酸，大约有20多种
结构通式
第二章：组成细胞的分子 第三章：细胞的基本结构
生命活动的主要主要承担者-蛋白质
结构特点是至少含有一个氨基（NH2和一个羧基（COOH），并且都有一个有一个 氨基（NH2和一个羧基（COOH）连接在同一个碳原子上，将氨基酸区别为不同的 种类的依据是R基（侧链基团）。
探索历程
20世纪六十年代发现细胞膜并非是静态的
1970年细胞融合等实验表明细胞膜具有流动性 1972年桑格和尼克森提出流动镶嵌模型为大多数人所接受
生物膜的流动镶嵌模型
磷脂双分子层构成了膜的基本支架，具有流功性。蛋白质 分子有的镶在磷脂双分子层表面，有的部分或全部嵌入磷 脂双分子层中有的贯穿于整个磷脂双分子层。大多数蛋白 质分子也是可以运动的。
人
多细胞
缩手反射
人
多细胞
免疫
应激性 应激性
反射等神经活动需要多种细胞的参 与
免疫作为机体对入侵病原微生物的 种防御反应，需要淋巴细胞的参与
细胞：细胞是生物体结构和功能的基本单位啊
组织：由形态相似，结构、功能相同的细胞联合在一起的细胞
器官：不同的组织按照一定的次序结合在一起而构成器官
生命系统的结构层次
（3）空间结构
一条或几条肽链通过一定的化学键互相链接在一起，形成具有复杂空间结构的蛋 白质。高温、强酸强碱和重金属都会破坏蛋白质的空间结构。
结构的多样性：
组成蛋白质的氨基酸数目不同、氨基酸的种类不同、氨基酸排列顺序不同、多肽链的盘曲、折叠方 式及其形成的空间结构千变万化
生物化学思维导图
生物化学思维导图体会：生物大分子是生物信息的载体（携带、体现、传递、表达）；有序性是信息载体的基础；链的长短、数组成：元素组成特点、构件分子组成特点（可修饰性）目、缠绕方式等是信息携带量的基础。
结构：一级结构、空间结构、作用力（共价与非共价）、静态生物化学糖类、脂类、蛋白质、核酸主干链的单调重复性、支链的多变性、异构与构象、结构的主次性。
（生物大分子结构与功能）（酶、维生素、激素）性质：物理、化学、生物学功能：生物学功能的主次性物质代谢：细胞定位、关键酶、代谢物、反应特点、调节。
体会：各代谢途径的意义、生理功能。
合成代谢：从头合成、半合成（补救合成）分解代谢：水解、磷酸解、硫解、焦磷酸解生动态生物化学糖代谢、脂类代谢、氨基酸物化（物质代谢与调节）代谢、核苷酸代谢学能量代谢（能量变化）放能反应、吸能反应（偶联）核酸、蛋白质生物合成的定义、体系（模板、体会：基因表达的内容、调控及意义。
酶、原料、辅助因子）、方向、方式、特点、过程（起始、延长。
终止）、加工修饰。
复制、转录、翻基础分子生物学基因表达的调控、操纵子模式（概念、结构、合成、蛋白质合成DN合成RN（基因的表达与调控）控方式）。
生物化学课程体系1 思维导图生物化学思维导图）、直链及环状结构的书写方式α、βL重要单糖结构：构型（D、、物理性质：旋光性（比旋光度）、变旋性单糖化学性质：还原性、氧化性、成脎、成苷、成酯、颜色反应、鉴定等衍生物：磷酸糖、氨基糖、糖醇、糖苷、脱氧糖等糖重要双糖结构：单糖种类、构型、序列、糖苷键寡糖类重要双糖性质：旋光性、氧化还原性、分析鉴定化学重要多糖组成特点：二糖单位、方向性、糖苷键、分支多糖糖胺聚糖：类型、组成、功能肽聚糖：组成、功能复合多糖糖蛋白：组成、功能蛋白聚糖：组成、功2 思维导糖类化学知识体系生物化学思维导图思维导图3 糖蛋白与蛋白聚糖生物化学思维导图中性脂结构、性质、生物学功能脂肪酸：结构特点、命名、性质，如碳链的长度、饱和度、空间结构、溶解度、熔点等中性脂油脂：结构特点、性质，如乳化现象、皂化作用、卤化作用、酸败等常见甘油磷脂及生物学功能脂磷脂组成单位、化学键、解离情况类化固醇组成特点、衍生物、功能学分类、组成特点、功能脂蛋白结构：由脂质双分子层、蛋白质镶嵌而成，脂质是骨架，决定膜的流动性、排列方式生物膜生物学功能：蛋白质决定生物膜的生物学功能。
初中生物思维导图大全之欧阳学文创作
专题六动物的运动和行为
专题七生物的生殖、发育和遗传
1、生物的生殖和发育
2、生物的遗传和变异
专题八生物的多样性
1、生物的分类
2、生物的多样性
3、生物的起源和进化Βιβλιοθήκη 专题九生物技术专题十健康的生活
专题一科学探究
欧阳学文
专题二生物的结构层次
专题三、生物与环境
1、生物的生存依赖于一定的环境
2、生物与环境组成生态系统
3、生物圈是人类与其他生物的共同家园
专题四生物圈中的绿色植物
专题五生物圈中的人
1、人的食物来源于环境
2、人体生命活动的能量供给
3、人体代谢废物的排出
4、人体生命活动的调节
5、人体是一个统一的整体
专题七生物的生殖、发育和遗传
1、生物的生殖和发育
2、生物的遗传和变异
专题八生物的多样性
1、生物的分类
2、生物的多样性
3、生物的起源和进化Βιβλιοθήκη 专题九生物技术专题十健康的生活
专题一科学探究
欧阳学文
专题二生物的结构层次
专题三、生物与环境
1、生物的生存依赖于一定的环境
2、生物与环境组成生态系统
3、生物圈是人类与其他生物的共同家园
专题四生物圈中的绿色植物
专题五生物圈中的人
1、人的食物来源于环境
2、人体生命活动的能量供给
3、人体代谢废物的排出
4、人体生命活动的调节
5、人体是一个统一的整体
第七章生物大分子的色谱分离和纯化120319-PPT文档资料
第七章生物大分子的色谱分离和纯化120319
精品着操作时间的增加，膜透过流 速的迅速下降，溶质的截留率也明显下降，这 被称为膜的污染。污染是由膜的劣化和水生物 (附生)污垢所引起的。
复习
防止膜污染的方法
（1）预处理法 调整供给液的pH值或添加阻氧化剂来防止化学 劣化；预先清除供给液中的微生物，以防止生 物性劣质等。 （2）开发抗污染的膜 （3）加大供给液的流速
吸附色谱与其它色谱法的异同点
类型
机理
优点
缺点
适用范围
吸附色谱 化学、物理吸附 操作简便
易受离子干 各种生物大分
扰
子的分离、脱
色、和去热源
凝胶过滤 分子筛的排阻效应 分 辨 力 高 ， 不 各 种 凝 胶 介 分 子 量 有 明 显 会引起变性 质 昂 贵 ， 处 差 别 的 可 溶 性 理量有限制 生物大分子
固定相的物理特性
物理特性
名称
板状 纸
一薄层 根柱子 填充紧密 空心管壁 流动相高 压
平板色谱 纸色谱
薄层色谱 柱色谱(液相) 填充柱色谱 空心柱色谱 高效液相色谱
气体
液体 固体
气相色谱
根柱子 柱色谱(气相)
气液色谱 分配系数 气液分配色谱 填充紧密 填充柱色谱
气固色谱 吸附能力 气体吸附色谱 空心管壁 空心柱色谱
分配色谱 溶质在固定相和流 分 辨 力 高 ， 重 影 响 因 子 多 ，用 于 各 种 生 物
动相中分配系数的 复 性 较 好 ， 能 上样量太小 大 分 子 的 分 析
差异
分离微量物质
鉴定
亲和色谱 亲和色谱生物大分 分辨力很高 子与配体之间有特 殊亲和力
一种配体只 各种生物大分 能用于一种 子 生物大分子， 局限性大
精品着操作时间的增加，膜透过流 速的迅速下降，溶质的截留率也明显下降，这 被称为膜的污染。污染是由膜的劣化和水生物 (附生)污垢所引起的。
复习
防止膜污染的方法
（1）预处理法 调整供给液的pH值或添加阻氧化剂来防止化学 劣化；预先清除供给液中的微生物，以防止生 物性劣质等。 （2）开发抗污染的膜 （3）加大供给液的流速
吸附色谱与其它色谱法的异同点
类型
机理
优点
缺点
适用范围
吸附色谱 化学、物理吸附 操作简便
易受离子干 各种生物大分
扰
子的分离、脱
色、和去热源
凝胶过滤 分子筛的排阻效应 分 辨 力 高 ， 不 各 种 凝 胶 介 分 子 量 有 明 显 会引起变性 质 昂 贵 ， 处 差 别 的 可 溶 性 理量有限制 生物大分子
固定相的物理特性
物理特性
名称
板状 纸
一薄层 根柱子 填充紧密 空心管壁 流动相高 压
平板色谱 纸色谱
薄层色谱 柱色谱(液相) 填充柱色谱 空心柱色谱 高效液相色谱
气体
液体 固体
气相色谱
根柱子 柱色谱(气相)
气液色谱 分配系数 气液分配色谱 填充紧密 填充柱色谱
气固色谱 吸附能力 气体吸附色谱 空心管壁 空心柱色谱
分配色谱 溶质在固定相和流 分 辨 力 高 ， 重 影 响 因 子 多 ，用 于 各 种 生 物
动相中分配系数的 复 性 较 好 ， 能 上样量太小 大 分 子 的 分 析
差异
分离微量物质
鉴定
亲和色谱 亲和色谱生物大分 分辨力很高 子与配体之间有特 殊亲和力
一种配体只 各种生物大分 能用于一种 子 生物大分子， 局限性大
第二章高效液相色谱法
2. 分配色谱（液-液分配色谱）
早期通过在担体上涂渍一薄层固定液制备固定相, 现多为化学键合固定相，即用化学反应的方法通过化学键 将固定液结合在担体表面。
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3. 离子交换色谱
固定相为离子交换树脂，流动相为无机酸或无机碱 的水溶液。各种离子根据它们与树脂上的交换基团的交 换能力的不同而得到分离。
（2）由于液体的扩散性比气体的小105倍，因此，
溶质在液相中的传质速率慢，而在气相色谱中 气体的传质速率要快得多。
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（3）液相色谱能完成难度较高的分离工作
①气相色谱的流动相载气是色谱惰性的，而在 液相色谱中流动相液体也与固定相争夺样品分子， 为提高选择性增加了一个因素。
②液相色谱固定相类型多，作为分析时选择余 地大；而气相色谱并不可能的。
高效液相色谱法的仪器设备费用昂贵， 操作严格，这是它的主要缺点。
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二、流程及主要部件
1.流程
高压输液系统 —— 进样系统 —— 分离系统—— 检测系统 —— 数据处理系统
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7/24/2020
Agilent 1100 LC的主要部件
2.主要部件
(1) 高压输液系统
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(2) 梯度淋洗装置
外梯度: 利用两台高压输液泵，
将两种不同极性的溶剂按一 定的比例送入梯度混合室， 混合后进入色谱柱。
内梯度: 一台高压泵, 通过比例
调节阀,将两种或多种不同 极性的溶剂按一定的比例抽 入高压泵中混合中为高压力工作状态，通常使用耐高压的六 通阀进样装置，也可配备自动进样装置。
③ 液相色谱通常在室温下操作，较低的温度， 一般有利于色谱分离条件的选择，而气相色谱一 般都在较高温度下进行的。
早期通过在担体上涂渍一薄层固定液制备固定相, 现多为化学键合固定相，即用化学反应的方法通过化学键 将固定液结合在担体表面。
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3. 离子交换色谱
固定相为离子交换树脂，流动相为无机酸或无机碱 的水溶液。各种离子根据它们与树脂上的交换基团的交 换能力的不同而得到分离。
（2）由于液体的扩散性比气体的小105倍，因此，
溶质在液相中的传质速率慢，而在气相色谱中 气体的传质速率要快得多。
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（3）液相色谱能完成难度较高的分离工作
①气相色谱的流动相载气是色谱惰性的，而在 液相色谱中流动相液体也与固定相争夺样品分子， 为提高选择性增加了一个因素。
②液相色谱固定相类型多，作为分析时选择余 地大；而气相色谱并不可能的。
高效液相色谱法的仪器设备费用昂贵， 操作严格，这是它的主要缺点。
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二、流程及主要部件
1.流程
高压输液系统 —— 进样系统 —— 分离系统—— 检测系统 —— 数据处理系统
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Agilent 1100 LC的主要部件
2.主要部件
(1) 高压输液系统
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(2) 梯度淋洗装置
外梯度: 利用两台高压输液泵，
将两种不同极性的溶剂按一 定的比例送入梯度混合室， 混合后进入色谱柱。
内梯度: 一台高压泵, 通过比例
调节阀,将两种或多种不同 极性的溶剂按一定的比例抽 入高压泵中混合中为高压力工作状态，通常使用耐高压的六 通阀进样装置，也可配备自动进样装置。
③ 液相色谱通常在室温下操作，较低的温度， 一般有利于色谱分离条件的选择，而气相色谱一 般都在较高温度下进行的。
液相色谱法ppt课件
二、液相色谱分离原理及分类 和气相色谱一样，液相色谱分离系统也由两相——固定
相和流动相组成。液相色谱的固定相可以是吸附剂、化学键 合固定相（或在惰性载体表面涂上一层液膜）、离子交换树 脂或多孔性凝胶；流动相是各种溶剂。被分离混合物由流动 相液体推动进入色谱柱。根据各组分在固定相及流动相中的 吸附能力、分配系数、离子交换作用或分子尺寸大小的差异 进行分离。色谱分离的实质是样品分子（以下称溶质）与溶
分子筛及聚酰胺等。非极性吸附剂最常见的是活性炭。 极性吸附剂可进一步分为酸性吸附剂和碱性吸附剂。酸性
吸附剂包括硅胶和硅酸镁等，碱性吸附剂有氧化铝、氧化
21
第四节 液—固色谱法
镁和聚酰胺等。酸性吸附剂适于分离碱，如脂肪胺和芳香胺。 碱性吸附剂则适于分离酸性溶质，如酚、羧和吡咯衍生物等。
各种吸附剂中，最常用的吸附剂是硅胶，其次是氧化铝。
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第一节 概 述
等，作为分析时选择余地大；而气相色谱并不可 能的。
③ 液相色谱通常在室温下操作，较低的温度，一般 有利于色谱分离条件的选择。 （3）由于液体的扩散性比气体的小105倍，因此，溶质 在液相中的传质速率慢，柱外效应就显得特别重要；而 在气相色谱中，柱外区域扩张可以忽略不计。 （4）液相色谱中制备样品简单，回收样品也比较容易， 而且回收是定量的，适合于大量制备。但液相色谱尚缺 乏通用的检测器，仪器比较复杂，价格昂贵。在实际应 用中，这两种色谱技术是互相补充的。
所用的固定相柱效低，分析周期长。而现代液相色谱法引用 了气相色谱的理论，流动相改为高压输送（最高输送压力可 达4.9107Pa）;谱（每米塔板数可达几 万或几十万）；同时柱后连有高灵敏度的检测器，可对流
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第一节 概 述
出物进行连续检测。因此，高效液相色谱具有分析速度快、 分离效能高、自动化等特点。所以人们称它为高压、高速、 高效或现代液相色谱法。
相和流动相组成。液相色谱的固定相可以是吸附剂、化学键 合固定相（或在惰性载体表面涂上一层液膜）、离子交换树 脂或多孔性凝胶；流动相是各种溶剂。被分离混合物由流动 相液体推动进入色谱柱。根据各组分在固定相及流动相中的 吸附能力、分配系数、离子交换作用或分子尺寸大小的差异 进行分离。色谱分离的实质是样品分子（以下称溶质）与溶
分子筛及聚酰胺等。非极性吸附剂最常见的是活性炭。 极性吸附剂可进一步分为酸性吸附剂和碱性吸附剂。酸性
吸附剂包括硅胶和硅酸镁等，碱性吸附剂有氧化铝、氧化
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第四节 液—固色谱法
镁和聚酰胺等。酸性吸附剂适于分离碱，如脂肪胺和芳香胺。 碱性吸附剂则适于分离酸性溶质，如酚、羧和吡咯衍生物等。
各种吸附剂中，最常用的吸附剂是硅胶，其次是氧化铝。
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第一节 概 述
等，作为分析时选择余地大；而气相色谱并不可 能的。
③ 液相色谱通常在室温下操作，较低的温度，一般 有利于色谱分离条件的选择。 （3）由于液体的扩散性比气体的小105倍，因此，溶质 在液相中的传质速率慢，柱外效应就显得特别重要；而 在气相色谱中，柱外区域扩张可以忽略不计。 （4）液相色谱中制备样品简单，回收样品也比较容易， 而且回收是定量的，适合于大量制备。但液相色谱尚缺 乏通用的检测器，仪器比较复杂，价格昂贵。在实际应 用中，这两种色谱技术是互相补充的。
所用的固定相柱效低，分析周期长。而现代液相色谱法引用 了气相色谱的理论，流动相改为高压输送（最高输送压力可 达4.9107Pa）;谱（每米塔板数可达几 万或几十万）；同时柱后连有高灵敏度的检测器，可对流
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第一节 概 述
出物进行连续检测。因此，高效液相色谱具有分析速度快、 分离效能高、自动化等特点。所以人们称它为高压、高速、 高效或现代液相色谱法。