化学发光免疫分析

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化学发光免疫分析原理

化学发光免疫分析原理化学发光免疫分析（Chemiluminescence Immunoassay，CLIA）是一种基于化学发光原理的免疫分析技术，它结合了免疫学和化学发光技术的优势，具有高灵敏度、高特异性和广泛的应用前景。

本文将从化学发光原理、免疫分析方法和应用领域等方面对化学发光免疫分析原理进行介绍。

化学发光原理。

化学发光是指在化学反应中产生的光。

化学发光反应的基本原理是两种或两种以上的物质在一定条件下发生反应，通过激发态的分子或离子产生的能量转移到基态的分子或离子上，从而产生光。

化学发光反应是一种放热反应，通常需要一种催化剂来促进反应的进行。

在化学发光免疫分析中，化学发光物质通常被标记在抗体或抗原上，当靶分子与标记的抗体或抗原结合时，激发化学发光反应，产生光信号。

免疫分析方法。

化学发光免疫分析是一种基于免疫学原理的分析方法，它利用抗体与抗原特异性结合的原理，通过检测免疫复合物的形成来定量或半定量地测定样品中的靶分子。

在化学发光免疫分析中，通常使用化学发光仪器来检测化学发光信号的强度，进而确定样品中靶分子的浓度。

与传统的免疫分析方法相比，化学发光免疫分析具有灵敏度高、特异性强、操作简便、快速等优点，因此在临床诊断、药物检测、环境监测等领域得到了广泛的应用。

应用领域。

化学发光免疫分析技术在临床诊断、药物检测、环境监测等领域有着广泛的应用。

在临床诊断中，化学发光免疫分析可以用于检测肿瘤标志物、感染性疾病标志物、内分泌激素等，具有高灵敏度和高特异性，可以帮助医生进行早期诊断和疾病监测。

在药物检测中，化学发光免疫分析可以用于药物代谢产物的检测和药物浓度的监测，有助于指导临床用药。

在环境监测中，化学发光免疫分析可以用于检测水质、空气质量、土壤污染等，具有快速、准确的优势。

总结。

化学发光免疫分析是一种灵敏度高、特异性强的免疫分析技术，具有广泛的应用前景。

通过对化学发光原理、免疫分析方法和应用领域的介绍，我们可以更好地理解化学发光免疫分析的原理和特点，为其在临床诊断、药物检测、环境监测等领域的应用提供理论基础和技术支持。

化学发光免疫分析

糖尿病
Albumin C-peptide Insulin
唐氏筛查
PAPP-A free βHCG HCG＋β AFP
心肌标志
骨标志
肝纤维
CK-MB
ß-Crosslaps
LN
Digoxin
25-(OH) Vit. D
HA
Digitoxin
Intact PTH
PIIINP
Myoglobin
Intact PTH
试剂有效期长有效期可长达1年以上，放射免疫分析由
于放射性同位素的衰变，一般有效期只有一个月，而酶免的底物贮存性差，都无法与化学发光相比，有效期长可以降低使用成本，利于推广应用。
梦想——之以恒、真正为实现纳米科技事业的梦想而奋斗！
3 化学发光免疫分析的优越性
➢ 中国免疫诊断现状
中国
国际（欧美为主）
种类
方法
检测原理
酶联免疫
酶与样本反应，依据颜色变化程度确定结果
免疫化学发光
诊断
将抗原抗体同样本结合，由磁珠捕捉反应物，加入发光促进剂加大反应发光速度与强度，进而诊断
根据镧系元素螯合物发光特点，用时间分辨技术测时间分辨荧光
量荧光，检测波长和时间两个参数进行信号分辨
分子诊断
PCR 基因芯片
DNA高温变成单链，低温互补配对链合成
激发态ν
的中间体。这种激发态中间体，当其回到稳定的基态时，可同时发射出
光子。利用发光信号测量仪器即可测量光量子产额，该光量子产额与样
品中的待测物质的量成正比。由此可以建立标准曲线并计算样品中待测
能量
h.ν
物质的含量。
基态ν0 梦想——之以恒、真正为实现纳米科技事业的梦想而奋斗！

化学发光免疫分析

化学发光免疫分析化学发光免疫分析篇一：化学发光免疫分析方法化学发光是在常温下由化学反应产生的光的发射。

其发光机理是：反应体系中的某些物质分子，如反应物、中间体或者荧光物质吸收了反应释放的能量而由基态跃迁到激发态，当中间体由激发态回到基态时会释放等能级的光子，对光子进行测定而实现定量分析。

化学发光免疫分析方法是将化学发光与免疫反应相结合的产物，因化学发光具有荧光的特异性，但与荧光产生需要激发光不同，化学发光由化学反应产生光强度，并不需要激发光，从而避免了荧光分析中激发光杂散光的影响。

化学发光免疫分析包含了免疫化学反应和化学发光反应两个部分。

免疫分析系统是将化学发光物质或酶标记在抗原或抗体上，经过抗原与抗体特异性反应形成抗原－抗体免疫复合物。

化学发光分析系统是在免疫反应结束后，加入氧化剂或酶的发光底物，化学发光物质经氧化剂的氧化后，形成一个处于激发态的中间体，会发射光子释放能量以回到稳定的基态，发光强度可以利用发光信号测量仪器进行检测。

待测物质浓度因为与发光强度成一定的关系而实现检测目的。

一、化学发光免疫分析方法的类别化学发光免疫分析法根据标记物的不同可分为3 大类，即化学发光免疫分析、化学发光酶免疫分析和电化学发光免疫分析法。

（一）化学发光免疫分析化学发光免疫分析是用化学发光剂直接标记抗体或抗原的一类免疫测定方法。

目前常见的标记物主要为鲁米诺类和吖啶酯类化学发光剂。

1. 鲁米诺类标记的化学发光免疫分析。

鲁米诺类物质的发光为氧化反应发光。

在碱性溶液中，鲁米诺可被许多氧化剂氧化发光，其中H2O2最为常用。

因发光反应速度较慢，需添加某些酶类或无机催化剂。

酶类主要是辣根过氧化物酶（HRP），无机类包括O3、卤素及Fe3+、Cu2+、Co2+和它们的配合物。

鲁米诺在碱性溶液下可在催化剂作用下，被H2O2等氧化剂氧化成3－氨基邻苯二酸的激发态中间体，当其回到基态时发出光子。

鲁米诺的发光光子产率约为0.01，最大发射波长为425 nm。

化学发光免疫标记分析技术(基本原理)

简化操作
优化技术操作流程，降低对专业人员的依赖，提高检测的便捷性和普及性。
开发新型标记物
研究开发更多种类的化学发光标记物，拓展该技术的应用范围，满足更多不同检测需求。
感谢您的观看
THANKS
放射免疫标记技术
利用放射性核素标记抗体或抗原，通过放射性信号检测，常用的有放射免疫分析法。
化学发光免疫标记技术
利用化学发光物质标记抗体或抗原，通过化学发光信号检测，常用的有化学发光免疫分析法。
免疫标记技术的原理
抗原-抗体反应
信号放大
免疫标记技术的基本原理是抗原和抗体之间的特异性结合反应。标记物（抗体或抗原）与待测样本中的目标抗原或抗体结合，形成标记的抗原-抗体复合物。
02
化学发光反应原理
化学发光反应的分类
偶合反应
01
通过两个化学反应的偶合，将化学能转变为光能。
氧化还原反应
02
通过电子的得失，将化学能转变为光能。
化学发光复合反应
03
通过化学反应将能量传递给另一物质，使其激发并发出光子。
化学发光反应的机制
激发态的形成
反应物吸收能量后跃迁至激发态。
能量传递与光子的发射
抗体标记
抗体选择
选择与目标抗原特异性结合的抗体，确保抗体的纯度和特异性。
抗体标记技术
采用荧光染料、酶、同位素等标记抗体，以便后续检测和信号放大。
标记效率与质量控制
对标记后的抗体进行质量评估和控制，确保标记效率和稳定性。
免疫反应
1 2
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ加样
将待测样本、标记抗体和抗原加入反应体系中，进行免疫反应。
激发态的反应物将能量传递给另一物质，使其跃迁至激发态并释放光子。

化学发光免疫分析技术

• 化学发光免疫分析仪是通过检测患者血清内待测物质从而对人体进行免疫分析的医学检验仪器。将定量的患者血清和辣根过氧化物（HRP）加入到固相包被有抗体的白色不透明微孔板中，血清中的待测分子与辣根过氧化物酶的结合物和固相载体上的抗体特异性结合。分离洗涤未反应的游离成分。然后，加入鲁米诺Luminol发光底液，利用化学反应释放的自由能激发中间体，从基态回到激发态，能量以光子的形式释放。此时，将微孔板置入分析仪内，通过仪器内部的三维传动系统，依次由光子计数器读出各孔的光子数。样品中的待测分子浓度根据标准品建立的数学模型进行定量分析。最后，打印数据报告，以辅助临床诊断。
血清FT3和FT4降低： ⑴甲减病人两者皆下降，但轻型甲减、甲减初期多以FT4下降为主；⑵低T3综合征仅有FT3下降； ⑶某些药物，如苯妥英钠、多巴胺、糖皮质激素也可使FT3和FT4降低。
• T3、T4均升高：高TBG血症、甲亢、甲状腺激素不敏感综合征。
化学发光免疫分析
一、化学发光免疫技术的概念二、化学发光免疫分析基本原理三、化学发光免疫分析的类型四、临床应用五、发展与展望
一、化学发光免疫技术的概念
化学发光免疫技术：化学发光分析是根据化学反应统与免疫反应相结合，用化学发光相关的物质标记抗体或抗原，与待测的抗原或抗体反应后，经过分离游离态的化学发光标记物，加入化学发光系统的其它相关物产生化学发光，进行抗原或抗体的定量或定性检测。
磁微粒模式图
特点 – 抗原和抗体结合与未结合部分的易分离
Y
3.2、化学发光酶免疫分析
化学发光酶免疫分析（chemiluminescence enzyme immunoassay，CLEIA）是用参与催化某一化学发光反应的酶如辣根过氧化物酶（HRP）或碱性磷酸酶(ALP)来标记抗原或抗体，在与待测标本中相应的抗原(抗体)发生免疫反应后，形成固相包被抗体-待测抗原-酶标记抗体复合物，经洗涤后，加入底物 (发光剂)，酶催化和分解底物发光，由光量子阅读系统接收，光电倍增管将光信号转变为电信号并加以放大，再把它们传送至计算机数据处理系统，计算出测定物的浓度。

化学发光标记免疫分析法

525nm处的 FITC发光信号降低
不同IgG浓度下CRET免疫传感器的荧光光谱。IgG浓度分别为：0 (a), 0.5 (b), 1 (c),1.5 (d), 2 (e), 2.5 (f), 3 (g), 3.5 (h), 及4 nM (i)。插入的曲线为荧光强度比率（R=I425/I525）随浓度变化曲线
01 吖啶酯 Add your texts here
02 三联吡啶钌
03 鲁米诺及其衍生物 04 AMPPD
化学发光剂
吖啶酯:在碱性条件下被H2O2氧化时,发出波长为470nm 的光，具有很高的发光效率，其激发态产物N-甲基吖啶酮是该发光反应体系的发光体。
化学发光剂
三联吡啶钌: [RU(bpy)3]2+是电化学发光剂，它和电子供体三丙胺（TPA）在阳电极表面可同时失去一个电子而发生氧化反应。
化学发光剂
电化学发光剂反应原理
化学发光剂
鲁米诺:化学名称为3-氨基邻苯二甲酰肼鲁米诺发光原理
化学发光剂
AMPPD:化学名称为 3-(2-螺旋金刚烷)-4-甲氧基-4-(3-磷氧酰)-苯基-1,2-二氧环乙烷二钠盐
AMPPD发光原理
标记技术
发光物标记酶标记元素标记
标记技术：将
化学发光剂的分子与某些分子结合，直接或间接地测定待测组分。通过分析被标记物来完成对待测组分的测定
人体免疫球蛋白A检测
化学发光夹心法检测lgA装置：多毛细管玻璃板的微孔示意图
化学发光免疫分析检测IgA过程
化学发光强度和lgA浓度的关系
人体免疫球蛋白A检测集束板与96孔板检测lgA的比较
冲洗后
（2）加入碱（pH>10）
发光

化学发光免疫分析原理

化学发光免疫分析原理
化学发光免疫分析是一种常用的生物分析技术，其原理是利用化学发光反应检测目标分析物。

该技术主要应用于生命科学研究、临床诊断和药物研发等领域。

化学发光免疫分析的步骤如下：
1. 样品处理：将待测样品进行处理，通常包括样品的稀释、蛋白质提取、核酸提取等步骤，以满足后续分析的要求。

2. 特异性结合：将待测样品与特异性抗体结合，这是化学发光免疫分析的关键步骤。

特异性抗体能够与目标分析物结合，形成抗原-抗体复合物。

3. 化学发光：在抗原-抗体复合物形成后，加入一种化学发光底物，底物与复合物发生化学反应，生成激发态分子或产生紫外、可见光等发光物质。

4. 光学检测：利用光学检测系统，测量发光信号的强度或荧光信号的荧光强度。

一般情况下，强度与待测样品中目标分析物的含量成正比。

化学发光免疫分析的优点是灵敏度高、特异性强，且能够同时分析多个目标分析物。

它在临床诊断中广泛应用，例如检测某些疾病标志物、药物浓度和病原微生物等。

此外，化学发光免疫分析还可用于药物研发中的蛋白质相互作用研究、基因表达分析等。

总之，化学发光免疫分析是一种重要的生物分析技术，通过特异性抗体与荧光底物的配对应用，实现对目标分析物的定量检测，具有灵敏度高、特异性强和多重分析的优势。

化学发光免疫分析

化学发光免疫分析化学发光免疫分析，也称为化学发光法或发光免疫测定法，是一种高灵敏度和高特异性的生物分析技术。

它结合了免疫学、生物学和化学的原理，利用特异性抗体与其抗原（或其他生物分子）相互作用，通过化学反应使其辐射出光信号，从而定量地检测目标物质的存在和含量。

一、化学发光免疫分析原理化学发光免疫分析原理基于化学发光原理和免疫学原理。

化学发光原理就是将化学反应的能量通过光子的辐射转换为光的能量。

免疫学原理是利用特异性免疫反应来识别和区分不同的抗原或抗体。

化学发光免疫分析技术的基本步骤如下：1.选择特异性的抗体与目标物质的结合；2.引入辐射源激活化学发光前体（例如，过氧化物或二氧化硫酞）；3.目标物质与抗体发生结合后，释放了辐射源激活前体，使其进一步分解并产生化学发光；4.测定样品中的荧光强度，用于定量分析目标物质的存在和含量。

化学发光免疫分析发出的荧光信号对于抗原-抗体的结合非常敏感和特异。

比较常见的荧光标记物包括酶（如辣根过氧化物酶和碱性磷酸酶）、荧光染料（如荧光素和荧光素衍生物）、金纳米粒子等。

二、化学发光免疫分析的应用化学发光免疫分析的应用涉及生物分子、环境污染、中药等领域。

下面将从这些不同应用领域来介绍化学发光免疫分析技术的具体应用。

1.生物分子分析生物分子分析是化学发光免疫分析技术的主要应用领域之一。

常见的生物分子包括蛋白质、核酸、糖等。

如免疫荧光分析技术可以快速、准确地分析细胞表面分子、内部生物分子和变态反应特异性IgE。

同时，化学发光免疫分析技术可以用于患者体液中的特定免疫球蛋白或蛋白质的定量检测。

2.环境污染分析环境污染分析是化学发光免疫分析技术的另一个主要应用领域。

通过测量土壤、水、空气等样品中的污染物含量，可以快速精准地确定其存在和含量。

化学发光免疫分析技术可用于检测重金属、有机污染物、致癌物等。

该技术不仅检测灵敏，而且简便易行。

3.中药分析中药分析中常用的技术包括高效液相色谱法、气相色谱法、电化学法等。

基于化学发光测定仪的免疫分析方法研究

基于化学发光测定仪的免疫分析方法研究引言：免疫分析是一种广泛应用于生物医学领域的重要技术，它可以用于检测、诊断和治疗多种疾病。

而化学发光测定仪则是免疫分析中常用的设备之一，其灵敏度高、分析速度快、操作简便、无毒副作用等特点使得它成为了研究人员的首选工具。

本文将介绍基于化学发光测定仪的免疫分析方法的研究进展，以及其在生物医学领域中的应用。

一、化学发光测定仪的原理与结构化学发光测定仪是一种能够测定化学发光强度的专用设备，其基本原理是通过化学反应产生发光信号，并通过探测器测量其发光强度。

化学发光反应常见的有酶促化学发光、化学激发发光以及荧光共振能量转移等多种机制。

一般来说，化学发光测定仪主要由发光部件、光学系统、信号检测系统和控制系统四部分组成。

其中，发光部件包括发光底物、酶标记物以及反应物等，光学系统主要包括发光室、滤光片和光电转换部件等，信号检测系统则主要是用于接收和处理发光信号的光电模块，而控制系统则用于控制设备的运行和参数设置。

二、基于化学发光测定仪的免疫分析方法研究进展1. 化学发光免疫分析方法的优势相较于传统的免疫分析方法，基于化学发光测定仪的免疫分析方法具有以下优势：首先，灵敏度高。

化学发光技术的灵敏度远高于其他光谱测量技术，能够检测到极低浓度的分析物；其次，分析速度快。

化学发光反应通常具有较快的反应速度，因此可以在较短的时间内完成分析；第三，操作简便。

化学发光测定仪操作简单，无需复杂的实验操作，适用于高通量的实验需求；第四，无毒副作用。

与其他测量技术相比，化学发光测定仪不需要有害荧光染料或放射性同位素，对样品及环境无毒副作用。

2. 基于化学发光测定仪的免疫分析方法在疾病诊断中的应用基于化学发光测定仪的免疫分析方法在疾病诊断中具有广泛的应用前景。

以往，传统的免疫分析方法往往需要复杂的实验操作以及较长的分析时间，限制了其在临床实践中的应用。

而基于化学发光测定仪的免疫分析方法则可以快速、准确地检测出疾病标志物，有助于早期诊断和治疗。

化学发光技术在免疫分析中的应用案例

化学发光技术在免疫分析中的应用案例简介：化学发光技术是一种基于化学反应产生可见光的分析技术，广泛应用于生命科学、药物研发和临床诊断等领域。

本文将通过几个实际案例，探讨化学发光技术在免疫分析中的应用。

案例一：免疫发光法检测甲状腺功能甲状腺功能异常对人体健康有重要影响，因此准确测量甲状腺激素水平是临床诊断的关键。

传统方法使用辐射同位素来测量，但存在成本高、操作复杂等问题。

化学发光技术的应用为解决这些问题提供了新的选择。

该应用案例中，通过免疫发光法测量血清中的三碘甲状腺原氨酸(T3)和四碘甲状腺原氨酸(T4)的浓度。

首先，利用特定抗体与待测物结合形成免疫复合物；然后使用该免疫复合物激发化学发光物质；最后，通过检测化学发光物质的发光强度来判断甲状腺功能是否正常。

相比传统方法，免疫发光工艺更安全、灵敏度更高，且无需放射性物质。

该技术的出现大大简化了甲状腺功能测试的流程，提高了诊断的准确性。

案例二：化学发光免疫分析在癌症检测中的应用癌症早期诊断对治疗和预后有重要意义。

化学发光免疫分析技术的应用为癌症的早期筛查和确诊提供了新的方法。

以乳腺癌为例，化学发光免疫分析技术可以测量血清中肿瘤标志物Ca 15-3的浓度。

Ca 15-3是乳腺癌的常用指标，其浓度水平与肿瘤的大小和进展程度密切相关。

通过测量Ca 15-3的浓度，可以辅助医生进行乳腺癌的筛查和监测治疗效果。

此外，化学发光免疫分析技术还可以应用于其他类型的癌症检测，如肺癌、胃癌等。

通过测量血清中特定的肿瘤标志物，可以帮助医生评估癌症的早期风险及其进展情况，提供更精确的治疗方案。

案例三：药物免疫性检测药物免疫性检测是化学发光技术的又一个重要应用领域。

通过检测血清中特定药物的浓度，可以评估药物的吸收、代谢和排泄情况，为药物治疗提供指导。

以抗生素检测为例，化学发光技术可以测量血清中抗生素的浓度。

随着抗生素的广泛使用，耐药性成为严重的公共卫生问题。

通过检测血清中抗生素的浓度，可以判断患者是否在合适的剂量下使用抗生素，避免耐药性的产生。

化学发光免疫分析

化学发光免疫分析化学发光免疫分析化学发光免疫分析（chemiluminescence immunoassay，CLIA）在近十年来得到了很大发展，与微离子发光酶免疫分析(microparticle luminescence immunoassay, MLIA)、生物发光免疫分析(bioluminescence immunoassay, BLIA)、增强化学发光分析(enhanced chemiluminescence, EC)和电化学发光分析(electrochemical luminescence, ECL)等相比，以其灵敏度高（可达10-18mol）、检测速度快、操作简便、所用试剂对人体无危害的优点，成为非放射性免疫分析技术中最具有发展前途的方法之一。

（一）化学发光免疫分析的基本原理化学发光指化学反应引起的发光现象，当物质吸收化学反应过程中释放的化学能之后，能使自身分子受激发而发光；如在生物体中产生此种能源来自生物活体的发光现象，称为生物发光；若产生发光信号的能量来源于电激发，如从多环芳烃的自由基阴离子上除去一个电子，往往产生激发状态的中间物质，当其回到基态时，将产生光辐射，此种发光称为电化学发光。

化学发光反应所发出的光的强度依赖于化学发光反应的速度，而反应速度又依赖于反应物的浓度。

因此，通过检测化学发光强度可以直接测定反应物的浓度，从而进行物质的定性和定量分析。

化学发光与荧光的根本区别是形成激发态分子的激发能源不同。

荧光是发光物质吸收了激发光后使分子产生发射光，化学发光是化学反应过程中所产生的化学能使分子激发产生的发射光。

因此，化学发光反应中反应过程必须产生足够的激发能是产生发光效应的重要条件。

（二）化学发光兔疫分析中的标记物质化学发光免疫分析所使用的标记物根据其参与的化学反应不同，可分为三类：①直接参与发光反应的标记物；②以催化作用或能量传递参与发光反应的酶标记物；③以能量传递参与氧化反应的非酶标记物。

化学发光免疫分析技术

化学发光免疫分析技术化学发光免疫分析技术（Chemiluminescence Immunoassay，简称CLIA）是一种用于检测物质浓度的生化分析技术。

该技术利用免疫反应，在荧光底物的作用下产生可见光发射，从而实现对物质的检测和定量分析。

化学发光免疫分析技术的基本原理是将待测物与对应的抗原或抗体结合，形成免疫复合物。

然后，将荧光标记的抗体或抗原加入到体系中，与免疫复合物结合。

接下来，加入荧光底物，在适当的条件下，底物被激活，产生化学反应，释放出能量，从而形成荧光。

荧光信号可以通过荧光仪进行检测和定量分析。

荧光仪通过光电倍增管等装置将荧光信号转化为电信号，经过控制和处理，最终得到物质的浓度。

化学发光免疫分析技术的优势在于其灵敏度高。

由于发光底物的特殊性质，即使在低浓度下，也能产生明显的发光信号。

此外，化学发光免疫分析技术的特异性强，能够准确识别目标物质，避免误判。

另外，与其他传统的免疫分析方法相比，化学发光免疫分析技术反应速度快，可以在较短的时间内得到结果。

此外，操作简单，无需复杂的设备和技术，具有很高的实用性。

化学发光免疫分析技术在医学诊断中有着广泛的应用。

比如，可以用于检测血清中肿瘤标志物的浓度，从而实现早期诊断和预测疾病进展的风险。

此外，化学发光免疫分析技术还可以应用于感染性疾病的快速诊断，如艾滋病、结核病等。

此外，化学发光免疫分析技术还被广泛应用于生物制药工业中的药物分析。

在食品安全领域，也可以利用化学发光免疫分析技术检测食品中的有害物质，从而保障食品的质量安全。

总之，化学发光免疫分析技术是一种灵敏、特异、操作简单的生化分析技术。

在医学诊断、药物检测、食品安全检测等领域有着广泛的应用前景。

随着技术的不断发展和创新，化学发光免疫分析技术将进一步完善，并在更多的领域发挥重要的作用。

第五章化学发光免疫分析

二、化学发光效率
化学发光效率决定于生成激发态产物分子的化学激发效率（φCE）和激发态分子的发射效率（φEM）。化学发光反应的发光效率、光辐射的能量大小以及光谱范围，完全由发光物质的性质
所决定，每一个发光反应都具有其特征性的化学
发光光谱和不同的化学发光效率。
第二节
化学发光剂和标记技术
一、化学发光剂
能，生成激发态氧化型荧光素，它在回复基态时
多余的能量以光子的形式释放出来。
生活中常见的化学发光现象
一、化学发光
化学发光（chemiluminescence）是指伴随化学反应过程所产生的光的发射现象。某些物质(发光剂) 在化学反应时，吸收了反应过程中所产生的化学能，使反应的产物分子或反应的中间态分子中的电子跃迁到激发态，当电子从激发态回复到基态时，以发
小结
• 发光是指分子或原子中的电子吸收能量后，由基态跃迁到激发态，然后再返回到基态，并释放光子的过程。化学发光是吸收了化学反应过程中所产生的化学能使分子激发而发光。化学发光免疫分析是将化学发光与免疫反应相结合，用于检测微量抗原或抗体的标记免疫分析技术，分为直接化学发光免疫分析，化学发光酶免疫分析和电化学发光免疫分析。
反应0-5分钟发光底物仪器检测
发光免疫分析基本操作步骤（二步法）
待测样品包被抗体或抗原的反应管反应30-60分钟标记抗体或抗原
洗涤去除未结合的反应物
反应30-60分钟洗涤去除未结合的反应物
反应0-5分钟发光底物仪器检测
化学发光免疫分析的优点
1、灵敏度高：这是CLIA关键的优越性，其灵敏度可达 10-16/-21mol/L（RIA为10-12mol/L）。又如化学发光底物（如AMPPD）可检测出的碱性磷酸酶的浓度比显色底物要灵敏5х105倍。

化学发光免疫标记分析技术(基本原理)

04
化学发光免疫标记分析流程
样本准备
01
02
03
样本采集
采集待检测样本，如血液、尿液等生物样本。
样本处理
对样本进行离心、过滤等处理，以去除杂质和不必要的成分。
样本标记
将待检测的抗原或抗体与荧光物质、酶等标记物结合，以便后续检测。
加样与反应
加样
将处理后的样本加入化学发光免疫分析的反应体系中。
应用领域
临床诊断
环境监测
用于检测肿瘤标志物、激素、传染病标志物等，为疾病的早期诊断、病情监测和预后评估提供有力支持。
用于检测环境中的有害物质，如重金属、有机污染物等，为环境保护和公共卫生提供技术支持。
生物医药
用于药物研发、药代动力学研究、蛋白质组学和基因组学分析等领域，加速新药研发和生物医学研究进程。
提高特异性
针对不同目标分子开发更特异的标记物和探针，提高检测的准确性和可靠性。
多指标检测
发展多指标联检技术，实现多种生物分子的同时检测，提高检测效率和应用范围。
THANKS
感谢观看
该技术涉及多个步骤，操作相对复杂，需要专业人员操作和经验积累。
化学发光反应过程中可能产生有害的化学物质，需要采取相应的安全措施。
技术改进与发展方向
降低成本
通过研发更经济的试剂和仪器，降低化学发光免疫标记技术的成本，使其更广泛地应用于临床和科研领域。
简化操作
优化试剂和仪器设计，简化操作流程，提高检测效率，降低对专业人员的依赖。
化学发光反应的能量来源
化学发光反应的能量来源主要是化学能，即通过化学反应释放的能量。
在化学发光免疫标记分析技术中，通常使用化学能作为能量来源，通过特定的化学反应激发发光物质，使其发出可见光。

化学发光免疫分析法

化学发光免疫分析法
化学发光免疫分析法（Chemiluminescent Immunoassay，CLIA）是一种用于高
灵敏性和特异性检测抗原和抗体的分析方法。

它可以用于测定血清中和其他生物样品中的多种抗原和抗体，包括肿瘤抗原、抗生素和其他药物物质，也可用于研究免疫应答机制，因此在生物分析、临床诊断和科学研究中受到普遍的应用。

该分析法的原理是利用酶或其他生物分子介导的亲和免疫反应，一种特定的抗
原或抗体与抗原或抗体受体上的一种指定的抗体结合后，再加上一种特定的子细胞质因子，这种反应会产生化学发光。

由于这种反应发生的时间很短，后续过程不容易受到干扰，并且其发光参量也比一般的发光反应更高，因此检测结果具有高灵敏性和特异性。

CLIA结果的准确性和可靠性在生物分析的领域得到了认可，其快速、实用性、特异性和准确性为生物技术提供了更有力的保证。

它不仅普遍用于临床诊断，还可用于研究生物的抗原和抗体的交互作用，有助于更好地研究免疫应答机制和其他相关科学问题。

化学发光免疫分析

化学发光免疫分析（Chemiluminescent Immunoassay，CLIA）介绍化学发光免疫分析（CLIA）是一种测定抗原和抗体的实验方法，它是一种特殊的免疫分析，可以用来测定血清中的抗原和抗体的含量。

CLIA的原理是利用抗原和抗体之间的特异性结合，将抗原和抗体结合在一起，然后将特异性结合物添加到一种特殊的化学发光物质中，当发生反应时，特异性结合物会产生发光，并且发光的强度与抗原和抗体的含量成正比。

因此，可以根据发光的强度来测定血清中的抗原和抗体的含量。

优势CLIA的优势在于它有很高的灵敏度和特异性，可以测定血清中抗原和抗体的含量，而且结果准确可靠，可以用于诊断疾病，比如癌症、HIV感染、肝炎等疾病。

此外，CLIA的操作简单，可以在实验室中快速完成，而且它还可以用于大量样本的检测，从而节省时间和成本。

应用CLIA可以用于多种疾病的诊断，比如甲状腺机能减退症（Hypothyroidism）、甲状腺功能亢进症（Hyperthyroidism）、慢性肝病（Chronic Liver Disease）、肝炎病毒感染（Hepatitis Virus Infection）、癌症（Cancer）、HIV感染（HIV Infection）等。

此外，CLIA还可以用于检测抗生素，如青霉素、氨苄西林、头孢菌素等，以及肝素、血清素等药物的含量。

结论CLIA是一种灵敏度和特异性很高的免疫分析方法，可以用来测定血清中抗原和抗体的含量，而且可以用于多种疾病的诊断，比如癌症、HIV感染、肝炎等疾病。

此外，CLIA的操作简单，可以在实验室中快速完成，可以用于大量样本的检测，从而节省时间和成本。

因此，CLIA可以作为一种有效的免疫分析方法，为疾病的诊断提供重要的帮助。

化学发光免疫分析方法.

为85.5％。Magliulo 等［20］建立了牛奶中黄曲霉毒素M1的化学发光酶
免疫分析方法，通过将黄曲霉毒素M牛血清白蛋白包被在聚丙烯板上，
通过酶标二抗在含有鲁米诺的基板上进行检测。该方法的最低检测限为
1 pg/mL，且板间板内数据的变异系数均低于9％，回收率在96％～
122％之间。 Lin 等［21］建立了农产品中黄曲霉毒素B1 的化学发光免疫分析方法。该方法线性检测范围在0.05～10 ng/g 之间，检测灵敏度为0.01 ng/g，板间及板内变异系数分别为12.2％及 10.0％。农产品中样品添加回收率在79.8％～115.4％之间。同时，将建立的分析方法与黄曲霉毒素商品化酶联免疫试剂盒进行了相关性试验，相关系数为
菌素B1 的 ELISA 方法相比，其方法灵敏度提高了10 倍。且通过样品的
添加回收率试验表明其有良好的回收率，其分析结果与ELISA 分析方法
与 HPLC 方法有良好的相关性。
Yang等［17］建立了食品中葡萄球菌肠毒素B（SEB）的碳纳米管的化
学发光免疫分析方法，通过将SEB 抗体吸附在碳纳米管表面，然后将抗
方面报道还有Perschel 等［13］通过化学发光免疫分析对原发性醛固酮
过多症（PHA）进行快速筛选， Tudorache等［14］利用磁颗粒免疫支
持液膜方法（m-ISLMA）检测唾液中的孕酮含量，Iwata 等［15］利用双
夹心化学发光免疫分析方法测定血浆中内皮素－1的含量等。关于这方
面的应用，化学发光免疫分析方法应用的最为广泛，正是在医学检测方
种生物化学领域中最新的超灵敏的碱性磷酸酶底物，其特点是反应速度
快，在很短时间内提供正确可靠的结果。在它的分子结构中有两个重要

化学发光免疫分析

化学发光免疫分析(Chemiluminescence analysis ,CLlA) 诞生于1977 年。

Halmann[1 ]等根据放射免疫分析的基本原理,将高灵敏的化学发光技术与高特异性的免疫反应结合起来,建立了化学发光免疫分析法。

CLIA 具有灵敏度高、特异性强、线性范围宽、操作简便、不需要十分昂贵的仪器设备等特点。

CLIA 应用范围较广,既可检测不同分子大小的抗原、半抗原和抗体,又可用于核酸探针的检测。

CLIA与放射免疫分析(RIA) 、荧光免疫分析( IFA) 及酶免疫分析(EIA) 相比,具有无辐射、标记物有效期长并可实现全自动化等优点。

CLIA 为兽医、医学及食品分析检测和科学研究提供了一种痕量或超痕量的非同位素免疫检测手段。

1. 化学发光免疫分析技术的基本原理化学发光免疫分析含有免疫分析和化学发光分析两个系统[2 ]。

免疫分析系统是将化学发光物质或酶作为标记物,直接标记在抗原或抗体上,经过抗原与抗体反应形成抗原-抗体免疫复合物。

化学发光分析系统是在免疫反应结束后,加入氧化剂或酶的发光底物,化学发光物质经氧化剂的氧化后,形成一个处于激发态的中间体,会发射光子释放能量以回到稳定的基态,发光强度可以利用发光信号测量仪器进行检测[3 ]。

根据化学发光标记物与发光强度的关系,可利用标准曲线计算出被测物的含量电化学发光分析技术特点最先进的分析原理专利的电化学发光分析技术（ECL）。

ECL是一种在电极表面由电化学引发的特异性化学发光反应。

包括了两个过程。

发光底物二价的三联吡啶钌及反应参与物三丙胺在电极表面失去电子而被氧化。

氧化的三丙胺失去一个H成为强还原剂，将氧化型的三价钌还原成激发态的二价钌，随即释放光子恢复为基态的发光底物。

最好的发光标记物-三联吡啶钌分子量小，结构简单。

可以标记于抗原，抗体，核酸等各种分子量，分子结构的物质。

从而具有最齐全的检测菜单。

三联吡啶钌为水溶性，且高度稳定的小分子物质。