蛋白结合率相关知识

蛋白结合率相关知识

血浆蛋白结合率：药物与血浆蛋白结合的程度，即血液中与蛋白结合的药物占总药量的百分数。

血浆蛋白结合率为可逆性疏松结合，结合型药物分子量增大，不能跨膜转运、代谢和排泄，并暂时失去药理活性，某些药物可在血浆蛋白结合部位上发生竞争排挤现象。药物分子与血浆蛋白结合的特点（和药物与受体蛋白结合情况相似）：具有饱和性与可逆性、结合物无活性、有竞争置换现象。

药物进入循环后，有两种形式：

结合型药物：药物与血浆蛋白结合。

特点：

（1）暂时失去药理活性。

（2）体积增大，不易通过血管壁，暂时“储存”于血液中。

意义：结合型药物起着类似药库的作用。药物进入相应组织后也与组织蛋白发生结合，也起到药库作用，影响药物作用和作用维持时间长短，一般蛋白结合率高的药物体内消除慢，作用维持时间长。

游离型药物：未被血浆蛋白结合的药物。

特点：能透过生物膜，进入到相应的组织或靶器官，产生效应或进行代谢与排泄。

药物与血浆蛋白结合方式：

酸性药物与白蛋白结合：华法林、非甾体抗炎药、磺胺类药物主要与血浆白蛋白结合，三环类抗抑郁药、氯丙嗪也与白蛋白结合。

碱性药物与α1-糖蛋白结合：β-糖蛋白和α-酸性糖蛋白虽然量比白蛋白少很多，但在癌症、关节炎、心肌梗死等疾病中可增高，能与奎宁结合。

特点：

（1）可逆性

药物与血浆蛋白的结合是可逆的，极少数是共价结合（如烷化剂）。

药物在血液中转运时，结合型与游离型药物快速达到动态平衡。游离型药物→透过生物膜→血液中游离型药物浓度降低→结合型药物，释出游离型药物。

（2）饱和性

血浆中蛋白有一定的量，与药物的结合有限，因此，药物与血浆蛋白结合具有饱和性。

当药物浓度大于血浆蛋白结合能力时→饱和→游离型药物急剧增加→毒性反应。

某些病理情况下，血浆蛋白过少（如肝硬化、慢性肾炎）、变质（如尿毒症）→药物与血浆蛋白结合减少→毒性反应。有些药物在老年人中呈现较强的药理效应，与老年人的血浆蛋白减少有关。

（3）竞争性

两种药物→竞争结合同一蛋白→置换→游离型药物浓度增加→导致中毒。

如：保泰松→结合型双香豆素→游离型→浓度增加→出血倾向。

与内源性代谢物竞争与血浆蛋白结合，如磺胺药→置换胆红素→新生儿核黄疸症。

此外，注射白蛋白可与药物结合而影响疗效。

血浆蛋白与药物结合时，血浆蛋白在体内的各种作用暂时消失，但是与药物分离之后，血浆蛋白各种性质基本不变，继续发挥原来的作用。

血浆蛋白结合率的测定

1、实验目的

测定磺胺嘧啶钠在不同动物体内的血浆蛋白结合率。

2、实验原理

将蛋白置于一个隔室内，用半透膜将此隔室与另一隔室隔开。蛋白等大分子不能通过此半透膜，但系统中游离配基可自由通过。当达到平衡时半透膜两侧自由配基的浓度相等。若系统中自由配基的总量已知，测定不含蛋白隔室中自由配基的浓度，即可推算与蛋白结合的配基量。

具有游离氨基的磺胺药在酸性介质中与亚硝酸发生重氮化反应

后，可与N-(1萘基）乙二胺产生偶合反应生成紫红色偶氮染料，与经过同样处理的磺胺药标准液比较，用721分光光度计比色法测出组织中和不同时间的血液中磺胺嘧啶浓度。

由于亚硝酸不稳定，在实验中，用三氯醋酸与亚硝酸钠反应制的得。

剩余的过量亚硝酸影响测定，用氨基磺酸胺分解除去。

3、实验材料

1、实验动物

兔子一只。

2、设备与器械

712分光光度计、管状半透膜（周长5cm，长约12cm）、丝线、广口瓶、移液器。

3、药物与试剂

10%磺胺嘧啶钠注射液

15%三氯醋酸溶液

0.1%亚硝酸钠溶液

0.5%氨基磺酸胺溶液

0.1%二盐酸N-（1萘基）-乙二胺溶液

磺胺嘧啶钠贮存标准液

磺胺嘧啶钠应用标准液

4、试验方法

1、试剂的制备

0.1%二盐酸N-（1萘基）-乙二胺溶液：0.5 g溶于95 %乙醇约400 mL中，再用乙醇稀释至500ml，棕色瓶于冰箱中保存透析液（PBS）：pH7.4的 0.02M 磷酸盐缓冲液，内含0.15M NaCl 磺胺嘧啶钠应用标准液：10%磺胺嘧啶钠注射液3.75μl溶于约80ml3%三氯醋酸溶液再定容于100ml容量瓶中备用

2、血浆制备

兔心脏采血，肝素抗凝，以3000rpm离心10min，取上清液即为血浆。

3、透析

将管状半透膜一端折叠，用纱线扎紧，保留结扎线段10cm左右，以调节袋内外液面在同一水平，加血浆样品 2.0ml于上述半透膜袋内，并扎紧口袋另一端，袋口不得污染血浆。将两端扎紧的半透膜置于盛有9.75ml透析液的30ml广口瓶中，用袋两端线段调节袋内外液面，加0.05mg/ml的磺胺嘧啶钠溶液0.5ml于各瓶袋外透析液中。置广口瓶于冰箱中，平衡透析约60h左右。吸出袋外透析液少许，加等量磺基水杨酸试剂，无浑浊，说明无血浆蛋白漏出。取出半透膜，用滤纸吸干袋外壁透析液，小心解开透析袋，使袋内血浆流入干净试管。

4、用重氮化-偶合比色法测定袋内外溶液中磺胺药浓度。

取袋内外溶液各0.5ml，加水15.5ml；加15%三氯醋酸4ml，混匀，静置2min，过滤，取试管3支，各加入滤液5mL，为测定管；取

试管3支，加入空白对照液5mL，为空白管；取试管3支，加入应用标准液5mL，为标准管，在以上各管中各加入0.1%亚硝酸钠溶液0.5mL，混匀，放置3min，各加入0.5%氨基磺酸胺溶液0.5mL，混匀，放置2min ，各加入0.1%二盐酸N-（1萘基）-乙二胺溶液2.5mL，充分混匀，放置10min，用721分光光度计在550nm波长处比色：以空白管校正光密度到0点，读取标准管和测定管光密度，并用公式计算：

测定管光密度

游离磺胺药含量（mg%）= ——————×应用标准液浓度×样品稀释倍数

标准管光密度

5、计算血浆蛋白结合率。

Dt - Df

fb= --------------×100%

Dt

fb：血浆蛋白结合率；

Dt：血药总浓度（透析袋内血浆药物浓度）；

Df：游离药物浓度（透析袋外缓冲液中药物浓度）

五、实验结果

1、结果记录