病理学常用新技术原理及应用 课件
分子病理学新技术及应用
分子病理学新技术及应用随着科技的不断发展，分子病理学新技术也在不断涌现，为医学诊疗带来了不可估量的好处。
本文将介绍一些目前较为常见的分子病理学新技术，及其在医疗领域的应用。
一、基因测序技术基因测序技术是分子病理学中的一项重要技术，其原理是通过测定DNA序列，分析基因突变和表达，从而了解患者疾病的原因和发展过程。
基因测序技术目前已经广泛运用于癌症诊断和治疗中。
通过测定癌细胞中基因突变的情况，可以选择针对性治疗，并提高治愈率。
此外，基因测序技术也被应用于遗传疾病的筛查，以及对药物反应的预测等方面。
二、蛋白质芯片技术蛋白质芯片技术是指将大量蛋白质在芯片上固定，用来检测样本中蛋白质的含量和变化。
利用蛋白质芯片技术可以快速准确地检测出患者血液中的生理参数，如血糖浓度、血脂浓度、肝功能等指标。
蛋白质芯片技术在癌症患者的治疗中也有着广泛的运用。
通过检测肿瘤标志物，可以及早发现肿瘤，并对治疗方案进行优化。
此外，蛋白质芯片技术还可以用于新药的筛选和药效评估。
三、CRISPR/Cas9基因编辑技术CRISPR/Cas9技术是一种高效、准确的基因编辑技术，可以精确地对基因组进行编辑、插入或删除。
CRISPR/Cas9技术的应用领域很广，特别是在遗传疾病和肿瘤治疗上具有巨大的潜力。
CRISPR/Cas9技术可以被用于修复患有遗传缺陷的基因，如囊性纤维化等疾病。
此外，该技术还可以帮助医生发现和攻克一些肿瘤所特有的基因突变。
四、微生物组学技术微生物组学技术是指通过对体液中微生物的基因组进行分析，了解其种类、含量和作用，从而实现对感染病原体的快速检测和定位。
微生物组学技术已经在临床诊断中得到了广泛应用，成为感染病学研究的一项重要技术。
微生物组学技术可以快速地对急性感染疾病做出诊断，如细菌性脑膜炎、败血症等。
此外，微生物组学技术还可以协助医生制定针对性的抗生素治疗方案，提高治愈率。
总之，分子病理学新技术的应用已经深入到了临床医学中的各个领域，为医生提供了更为准确和精确的诊断手段，也为患者的康复带来了更大的希望。
《病理诊断技术课件》
病理诊断技术的进展与应用
1
技术创新
探讨病理诊断技术中的最新创新，如数
临床应用
2
字病理学和人工智能。
描述病理诊断技术在临床实践中的应用，
如癌症诊断和预后判断。
3
潜在挑战
讨论病理诊断技术面临的挑战，如质量
管理和标准化。
结论和要点
•
病理学在医学中发挥着重要的作用。
•
不同的病理诊断技术适用于不同的临床场景。
•
病理诊断技术的不断发展将进一步推动医学的进步。
病理诊断技术课件
医学病理学简介 - 着重介绍病理学在医学领域中的重要性和应用。概述病理
学研究的目的和方法，为后续内容铺垫。
病理学的定义和作用
1
定义
2
ห้องสมุดไป่ตู้
作用
3
实例
解释病理学的学科范围，
介绍病理学对疾病诊断、
举例说明病理学如何为医
探索病理学在医学领域中
治疗和预防的重要性。
生和患者提供有价值的信
免疫组化
分子病理学
探索通过检测抗体与组织中抗原的反应来辅助病理
介绍利用DNA和RNA分析疾病的诊断技术。
诊断的技术。
常见的病理诊断技术
组织切片检查
细胞学检查
详细描述组织切片检查的步骤和用途。
解释细胞学检查如何通过细胞形态学特征揭示
疾病信息。
染色技术
分子诊断技术
介绍各种染色技术在病理诊断中的应用。
概述分子诊断技术的原理和应用领域。
的作用。
息。
病理学的研究方法
组织学检查
细胞学检查
免疫组化
描述如何通过显微镜观察和分
介绍通过细胞学方法诊断疾病
病理学课件教学PPT
这份精美的病理学课件教学PPT将引导您深入了解病理学的世界。从病理学 概述到器官病理学，逐步掌握疾病的本质和诊断方法。
病理学概述
病理学定义
病理学的重要性
介绍病理学的定义、研究对象 和研究方法，解密疾病的奥秘。
探索病理学在医学领域中的重 要作用，揭示病理学与临床诊 断之间的紧密关联。
病理学家的日常工作
描绘病理学家的日常工作，详 述疾病诊断过程中的关键角色。
组织学基础知识
细胞学
深入了解细胞的结构、功能 和特点，为研究疾病的起源 和发展打下基础。
细胞组织学
介绍不同类型的细胞组织， 包括上皮组织、结缔组织和 神经组织。
器官组织学
探索不同器官的组织结构和 功能，以及与疾病相关的病 理变化。
探索与炎症和愈合相关的疾病，如慢性炎症和 瘢痕形成。
免疫反应与病理学
免疫系统基础
免疫反应机制
介绍免疫系统的组成结构和功 能，以及不同类型的免疫细胞。
探索免疫反应的机理和调节， 包括细胞免疫和体液免疫。
免疫相关疾病
详述与免疫系统功能紊乱相关 的疾病，如自身免疫疾病和免 疫缺陷病。
肿瘤的发生和发展
肿瘤生物学
介绍肿瘤的基本概念、不 同类型和生长方式，了解 肿瘤的发生机制。
肿瘤的转移和复发
揭示肿瘤的转移路径和触 发因素，以及复发的机制 和预防措施。
肿瘤治疗
探索肿瘤治疗的策略和方 法，包括手术、放疗和化 疗。
器官病理学——心脏与血管病理学
1
心脏病理学
了解心脏病的分类和病理特点，如冠
血管病理学
2
心病和心力衰竭。
细胞结构与功能
1
细胞器
2
医学课件 《病理学》精品课程授课ppt课件全篇
肝脂肪变性
苏丹Ⅲ染色
②心肌脂变 虎斑心〔tigroid heart〕 心肌脂肪浸润 〔myocardial fatty infiltration〕 脂肪心〔fatty heart〕
虎 斑 心
心 肌 脂 肪 浸 润
3、玻璃样变性=透明变性=“玻变〞 〔hyaline~〕 (1)概念 (2)部位或分类 ①细胞内玻变 概念 举例
脂肪肝〔fatty liver〕
C、肝脂变机制 a、病因→线粒体受损→ATP↓→脂 肪 酸β氧化↓→脂质蓄积 b、病因→细胞、组织结构破坏→脂 蛋 白崩解→脂质淅出、蓄积 c、原料缺乏、细胞受损→脂蛋白合成 ↓ →脂质蓄积 d、中性脂肪合成过多→脂质蓄积
肝脂肪变性
肝脂肪变性〔切面〕
肝脂肪变性
二、增生〔hyperplasia〕 1、概念
2、分类 3、说明前列腺增生三、萎缩atrophy〕 (一) 概念
〔二) 病变
〔三) 几个概念 1 ． 假 性 肥 大 (pseudohypertrophy〕 2．发育不全〔hypoplasia〕 不发育〔agenesis〕 3．退化〔atrophy〕 4．Simonds综合征
干 酪 样 坏 死
干酪样坏死
b、坏疽（gangrene） 概念
机制 分类
干性坏疽（dry gangrene） 形成原因、特点、部位
湿性坏疽 （ moist～） 气性坏疽 （ gas～）
湿 性 坏 疽
②液化性坏死〔liquefactive ～〕 A、概念 B、部位:肺脓肿 阿米巴肝脓肿 *脂肪坏死 *钙皂〔calcium saponification〕
局部血循、N支配、电离辐射
二、骨折愈合 〔bone fracture healing〕
临床病理知识及病理学常用新技术
一.大纲要求掌握临床病理检查的种类及目的；掌握临床病理检查的的流程及注意事项；.熟悉病理学常用新技术的原理及应用二.基本内容（一）.基本概念1. 活体组织检查（biopsy）：简称“活检”，从活体身上的病变或可疑病变处采取小块组织作病理检查，以明确病变的性质。
2. 冰冻切片快速诊断(frozen sextion) ：用不经固定的新鲜标本，快速冷冻至-18度以下，进行切片、HE染色，一般在20～30min内完成定性诊断。
3. 细胞学检查（cytology）：通过对患者病变部位脱落、刮取和穿刺抽取的细胞进行病理形态学的观察，并作出定性诊断。
目前主要用于肿瘤的诊断，判断有无肿瘤细胞，是良性或恶性。
也用于某些内部器官炎症性疾病的诊断和激素水平的判定等。
4. 苏木素－伊红染色（HE染色）：被称为常规染色方法，能较好地显示组织结构和细胞形态，可用于观察、描述正常和病变组织的形态学。
而且HE切片可较长时间保存，因而是生物学和医学领域中最基本也是应用最广泛的染色方法。
染色结果：细胞核呈蓝色，胞质、肌肉、结缔组织、红细胞和嗜伊红颗粒呈不同程度的红色。
钙盐和微生物也可染成蓝色或蓝紫色5. 组织化学技术（histochemistry technique）：又称特殊染色，其基本原理是利用病变组织内某些物质的化学特性，用特殊染料将它们显示出来，从而协助鉴别HE染片内不易区别的病变或物质。
6. 免疫组织化学(immunohistochemistry)：根据抗原抗体特异性结合的免疫学原理，将预先制备的特异性抗体加在组织切片上，使之与相应的抗原结合。
特异性抗体通过某种方式连结辣根过氧化酶或碱性磷酸酶。
显色剂在酶的作用下氧化沉淀，将抗体所检测的抗原在组织切片上显示出来。
7. 生物芯片技术(biochip technique)：是将大量具有生物识别功能的分子或生物样品有序的点阵排列在支持物上并与标记的检测分子同时反应或杂交，通过放射自显影、荧光扫描、化学发光或酶标显示可获得大量有用的生物信息的新技术。
《组织病理技术》课件
采用适当的固定液和保存方法，优化 染色流程，使用防脱片胶，提高制片 质量。
新技术的应用与展望
新技术
数字化病理技术、人工智能辅助诊断、 组织芯片技术。
VS
展望
数字化病理技术将使病理诊断更加便捷和 准确；人工智能辅助诊断能够提高诊断效 率和准确性；组织芯片技术可用于药物筛 选和疾病模型研究。
组织病理技术的伦理与法规问题
组织病理技术的发展历程
19世纪初
随着显微镜的发明和应用 ，人们开始对组织结构和 细胞形态进行研究。
20世纪初
石蜡切片技术的出现，使 得组织病理技术更加标准 化和规范化。
20世纪末至今
随着科技的不断进步和应 用，组织病理技术不断发 展和完善，应用领域也更 加广泛。
02
组织病理技术的基本原理
组织样本的获取与处理
。
恶性程度评估
组织病理技术可以评估肿瘤的恶性 程度，判断肿瘤的侵袭性和转移风 险，为制定治疗方案提供依据。
预后判断
通过组织病理技术对肿瘤的病理特 征进行分析，可以预测患者的预后 情况，帮助医生制定后续治疗方案 。
移植组织鉴定
组织匹配
在器官移植中，组织病理技术用 于检测供体和受体之间的组织匹 配程度，确保移植组织的兼容性
根据处理方法的不同，组织病理 技术可以分为石蜡切片技术和冷 冻切片技术等。
组织病理技术的应用领域
01
02
03
临床病理诊断
通过组织病理技术对病变 组织进行观察和分析，为 临床医生提供准确的病理 诊断。
药物筛选
利用组织病理技术观察药 物对病变组织的影响，为 新药研发提供实验依据。
毒理学研究
通过组织病理技术观察化 学物质对组织结构和细胞 形态的影响，评估其毒性 和安全性。
分子病理学常用研究技术原理及应用
结缔组织染色
网状纤维染色
是网状结缔组织内的一种纤维，纤细而有分支，直径约0.2~1mm，无弹 性，穿行于细胞体之间，共同构成网状支架。HE染色不易辩识，用银氨 溶液浸染能使纤维变成黑色，故称嗜银纤维
主要分布在淋巴组织、骨髓、扁桃体、胸腺、基底膜、 血管（特别是毛细血管）、脾窦、肝窦、肌纤维周围、 神经纤维、脂肪细胞周围及肺泡等
弹力纤维染色的应用
弹力纤维增生：原发性或继发性高血压的小动 脉、皮肤弹力纤维瘤、老年弹力纤维增生症、心 内膜弹力纤维增生症、乳腺癌的弹力纤维增生等。 弹力纤维断裂、崩解：老年性肺气肿、主动脉 粥样硬化、梅毒性主动脉炎、皮肤环状肉芽肿等。
肌肉组织染色
A.V.G法、Mallory三色染色法、Gomori多色染色法、Gomori氏改良多 色染色法、铁苏木素法、偶氮桃红染色法、横纹肌的组织块染色法、苏 木素碱性品红苦味酸法、酸性复红光绿染色法、酸性复红染色法、CVAF染色法和变色酸2R亮绿染色法等
组织取材
固定
不固定
包埋 冻存（不提倡）
冻存
冰冻切片
HE染色 特殊染色
IHC ISH 电镜
蛋白质、核酸提取 固定
不固定
分子生物学实验 -20℃保存 IF/IHC/ISH
细胞标本一般处理流程
活细胞
细胞爬片
细胞离心涂片 细胞培养
固定
形态学 IHC ISH
离心后包埋制片
冻存 Protein/DNA/RNA 分子生物学
显微切割技术的特点
细微：微米、纳米级切割 原位：所取材料定位清楚 同质：所取材料在一定层次上相同 结合：与其他实验技术结合
显微切割本身不能对样品 进行研究，必须同其他实 验技术结合，其切割目标 完全取决于研究目的
病理学常用技术的原理及应用_病理学课件
积，包括长度、阔度、高度（厘米），实质性肿瘤量
直径，浅表部的肿瘤应注意其与皮肤的关系，是否凸 出皮面，与皮肤有无粘连，四周有无正常的皮肤组织。 注意肿瘤的质地（硬实、中等、软）各处的坚实 度是否一致，有无与周围组织粘连的情况。
• •
切面应暴露肿瘤的最大面积，以便较全面观察肿瘤内
部，巨型肿瘤应多作平行切面；
关的病理检查，应与旧片做对比。观察完毕后要提出
•
• 染色各步骤所需的时间，常受温度、切片厚度等影响。可根 据镜下观察所见酌予调整，但对组织化学反应（尤其是酶）， 其时间、温度等因素务必恒定，且应做对照片。染液着色力 显著减退时应更新，染色反应不正常，应检查染液及试剂是 否失效或误用；
• 染色过程中，勿使切片干燥，以免影响细胞状态。染色完毕 后用显微镜检查染色结果，是否符合要求，并核对标本种类、 号码、数量是否无误； • 火棉胶切片除可做常规染色外，尚可做常用特殊染色及PAS、 DNA、RNA等主要组织化学染色。卡红（Carmine）使火棉胶着 色，含此染料的染色效果不佳。
石蜡包埋
• 包埋时先将融蜡倾入模型，然后以钝头热镊夹取组
织块，使病灶或指定面向下（包埋分层次的组织在
蜡中安放平正。注意防止混杂组织号码小条埋入
蜡块一侧；
•
•
蜡稍凝后，即移入冷水中加速凝固；
蜡块的大小，以在组织周围包有1~2mm之蜡为宜。
蜡块做成正方形或长0方形，以便切片。
石蜡切片法
• • • • 将切片刀装在持刀座上，刀刃与蜡块表面呈50夹角。调整后勿任意变动； 将蜡块固定于持蜡器上，并调整蜡块与刀至适当位臵； 移动刀座或持蜡器，使蜡块与刀刃接触，旋紧刀座； 以右手匀速旋转机轮，到组织已全部切出，或所需的部分已切出。微小组 织应注意勿修切过多。调节厚薄器到4～6um，继续切片，除特殊要求者， 一般勿切过厚； 以小镊取完整无划痕、厚薄均匀的切片，将其放入温水中，使展平无折， 每一蜡块多切数个切面，选择较好的切片裱于载玻片上。需要多个不同水 平切面时，应多选切片。水浴温度以低于蜡熔点10~12℃上下为宜； 裱片时使切片玻片之间无气泡，切片的位臵应端正，裱成后随即在玻片上 写上号码； 将切片放在烘片板或温箱中烘干； 有特殊要求者应按要求切片。
病理学研究中常用的分子生物学基本技术及其应用 ppt课件
• 2. 液相杂交 （solution hybridization ）
• • • • • • • • • 所参加反应的两条核酸链都游离在溶液中 (1)吸附杂交方法 HAP（羟基磷灰石）吸附杂交方法(DNA:DNA) 亲和吸附杂交方法 (DNA:RNA) 生物素标记DNA探针 酰化亲和素包被固相支持物 用特异性抗DNA-RNA杂交物的酶标单克隆抗 体与固相支持物上的杂交物反应 酶显色
基因扩增或在转录水平上研究基因表达
ppt课件
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• 原位杂交的探针 单链DNA • 双链DNA • RNA 探针
• 基本方法 (RNA 杂交为例) • A.杂交前准备
• 固定 尽快予以冷冻/固定 • 培养细胞、新鲜组织、石蜡包埋组织均可进行原位杂交 • 通常石蜡包埋信号低于冰冻切片
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• 玻片处理 • 增强组织通透性和探针穿透性 • 稀释的酸去垢剂（detergent）或清洗剂Triton X 100 • 某些消化酶 • 应掌握其用量及孵育时间
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ppt课件
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• 应用
• • • • 临床应用 应用非常广泛 研究应用 肿瘤中染色体异常 基因图谱绘制 确定基因在染色体上的顺序
• (6)其它杂交方法 • A. 差异杂交（differential hybridization ）
• B. cDNA 微 点 阵 杂 交 （ cDNA microarray hybridization ） • C. 寡核苷酸微点阵杂交 （oligonucleotide microarray hybridization ） •
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•
• 同一物质在不同时期的形态变化 •
• (4) 蛋白质
《病理学新技术》课件
利用免疫学方法检测自身抗体，如类风湿因子、抗核抗体等，辅助自身免疫性疾病的诊断。
02
组织病理学诊断
对病变组织进行病理学检查，观察炎症细胞浸润、组织损伤等特征，为自身免疫性疾病的诊断提供依据。
药物疗效评估
01
通过病理学检查观察药物治疗前后病变组织的变化，评估药物的疗效和作用机制。
毒理学研究
随着科技的不断发展，病理学新技术也在不断创新和突破。未来，我们期待更多的新技术能够应用于临床实践，为疾病的诊断和治疗提供更多、更好的选择。
虽然病理学新技术在不断发展，但仍面临着许多挑战和问题。例如，如何提高技术的准确性和稳定性、如何降低成本和提高普及率等。为了更好地应用这些技术，我们需要不断探索和解决这些问题，推动病理学新技术的不断完善和发展。
总结词
03
CHAPTER
病理学新技术在临床诊断中的应用
利用生物芯片、蛋白质组学等技术检测肿瘤细胞分泌或脱落的物质，如肿瘤标志物、癌基因等，辅助肿瘤的诊断和鉴别诊断。
肿瘤标志物检测
通过基因测序等技术检测肿瘤细胞的基因突变，如EGFR、KRAS等基因突变，有助于肺癌、结直肠癌等肿瘤的诊断和用药指导。
精准医学可以为患者提供个体化预防，根据患者的基因、生活习惯、环境因素等多方面进行分析，预测疾病的发生风险，并提供相应的预防措施。
精准医学还可以为患者提供免疫治疗，通过调节患者的免疫系统来对抗疾病，提高治愈率和生存率。
精准医学可以为患者提供靶向治疗，针对特定的基因变异或蛋白质标记物进行治疗，提高治疗效果和减少副作用。
基因突变检测
高通量测序技术可以检测基因突变，从而对疾病的病因、发病机制和药物反应等方面进行深入研究。
肿瘤基因检测
通过高通量测序技术，可以检测肿瘤细胞的基因变异，为肿瘤的诊断和治疗提供依据。
17-病理学常用技术的原理及应用
第十七章病理学常用技术的原理及应用第一节大体与组织和细胞病理学技术(一)大体观察主要运用肉眼或辅以放大镜、量尺和磅秤等工具．对大体标本的病变性状(形状、大小、重量、色泽、质地、界限、表面及切面形态、与周围组织和器官的关系等)进行细致地剖检、观察、测量、取材和记录，必要时可摄影留作资料。
大体观察不仅是病理医师的基本功和正确病理诊断的第一步。
也是医学生学习病理学的主要方法之一。
(二)组织病理学观察将肉眼确定为病变的组织取材后，以福尔马林(fOmlahn，甲醛)溶液固定和石蜡包埋制成切片，经不同的方法染色后用光学显微镜观察。
通过分析、综合病变特点，作出疾病的病理诊断。
组织切片最常用的染色方法是苏木素一伊红(}~ematoxylin antl eosin，HE)染色。
迄今，这种传统的方法仍然是诊断和研究疾病最基本和最常用的方法。
若仍不能做出诊断或需要进一步研究时，则可辅以一些特殊染色、免疫组化和其他观察技术。
(三)细胞病理学观察通过采集病变处的细胞，涂片染色后进行观察、诊断。
细胞的来源可以是运用各种采集器在口腔、食管、鼻咽部、女性生殖道等病变部位直接采集的脱落细胞，也可以是自然分泌物(如痰、乳腺溢液、前列腺液)、体液(胸腹腔积液、心包积液和脑积液)及排泄物(如尿)中的细胞，以及通过内镜采集的细胞或用细针直接穿刺病变部位(如乳腺、甲状腺、前列腺、淋巴结、胰腺、肝、肾等)，即细针穿刺(fine neecUe aspiI-ation，FNlA)所吸取的细胞。
细胞学检查除了用于病人外，还用于肿瘤的普查。
该方法设备简单，操作简便，病人痛苦少易于接受，但最后确定是否为恶性病变尚需进一步经活检证实。
此外，细胞学检查还可用于对激素水平的测定(如阴道脱落细胞涂片)及为细胞培养和DNA提取’等提供标本。
第二节组织化学与免疫组织化学技术(一)组织化学(histochemistry)一般称为特殊染色，通过应用某些能与组织或细胞的化学成分进行特异性结合的显色试剂．定位地显示病变组织、细胞的特殊化学成分(如蛋白质、酶类、核酸、糖类、脂类等)，同时又能保存组织原有的形态改变，达到形态与代谢的结合。
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第一节 组织与细胞化学检查
组织与细胞化学检查（Histochemistry and cytochemistry examination）是研究组织与细胞显微结构和超微结构的化 学组成及其定位的科学。主要研究对象是生物大分子（如 核酸、蛋白质、酶、多糖和脂类等）在细胞内的结构和功 能活动中的分布与变化以及亚细胞组分和细胞器在整个生 命活动中的作用等。
• 病理学技术包括传统病理学技术和现代新技术。有人 体病理学技术和实验病理学技术，二者相互渗透，互 为促进，传统的福尔马林固定、石蜡切片、HE染色是 病理学的基本技术，已广泛应用于基础和临床病理学 工作。根据科研的发展，临床病理学的需要，又不断 产生新的技术。作为当代的医学生，要适应技术的发 展进步、了解病理学研究和临床实践中的一些新技术 是必不可少的。现介绍一些新技术方法，供同学们在 以后的学习工作中参考。
图 GFAP阳性神经胶质细胞
图 体外神经胶质细胞培养免疫组化GFAPபைடு நூலகம்性
二、免疫组织化学技术的主要步骤与常用 标记物
（一）主要步骤
1．提取抗原(免疫原Immuno-gen); 2．用免疫原免疫动物(兔)制备抗血清(多克隆抗体) 或免疫动
物(鼠)后，用杂交瘤技术制备单克隆抗体； 3．纯化抗体； 4．抗体标记组织切片； 5．染色反应； 6．观察结果。
ＳＡＢＣ法：(StreptAvidin Biotin-peroxidase Complex) ２．将链霉亲和素和生物素先连结起来，则称：
ＬＳＡＢ法：labelled StreptAvidin-Biotin ３．用链霉素抗生物素蛋白连结辣根过氧化物酶，则为：
2．荧光素 指在高能量光波的激发下能产生荧光的物质。常用 的 有 异 硫 氰 酸 荧 光 素 （ FITC ） 、 四 甲 基 异 硫 氰 酸 罗 达 明 （TRITC）。
3．生物素 其与卵白素的亲和力明显高于抗原抗体的结合力。
4．金属标记物 如铁蛋白和胶体金。多用于免疫电镜。
三．常用免疫组织化学染色方法
第十八章 病理学常用新技术 原理及应用
汕大医学院病理教研室 苏敏 教授
• 病理学的发展离不开病理技术的进步，纵观病理 学的发展史，从器官病理学、细胞病理学、超微 病理学、免疫病理学、分子病理学、远程病理学 及当今的计算机网络信息病理学。每一个发展阶 段都有新技术的革命。新技术使我们对疾病认识 更加深入切实。从大体、细胞、超微结构、分子 基因水平逐步深入，正如病理学前辈们所说：技 术是病理学之母。
既 过 氧 化 物 酶 抗 过 氧 化 物 酶 复 合 物 法 (Perixidase Antiperoxidase Complex Method,PAP) 先将过氧化物酶（HRP）免疫兔/羊/鼠，制成兔/羊/鼠抗Ｈ ＲＰ；然后再与ＨＲＰ结合，形成一个稳定的多角形结构 （PAP）。 特点：⑴ 敏感性较高；
第二节 免疫组织与细胞化学检查
一、原理与方法
免 疫 组 织 与 细 胞 化 学 检 查 （ Immunohistochemistry and immunocytochemistry examination）是从组织与细胞化学方 法衍生出来的。是在单克隆抗体技术产生后，利用免疫学原 理，将抗原抗体反应应用与组织细胞化学而进一步通过级连 放大，增加敏感性。最后用辣根过氧化物酶显色。从而定位 组织细胞中抗原（蛋白 多肽、酶）等多种基因产物的特异方 法。在病理学外检工作中可用于对不同来源，HE难以诊断的 的肿瘤进行确诊和鉴别诊断。 其基本原理是应用抗原与抗体接触后可形成“抗原－抗体复合 物”的化学反应，以检测组织或细胞内抗原（或抗体）的技 术。
细胞化学染色的原理是细胞中的化学成分和其相应的 底物呈一系列的化学反应，形成于显微镜下可见到的反 应产物。常见有：
1．孚尔根反应法（Feulgen reaction）显示DNA呈现紫红色。 2．甲绿-派郎宁法（Methyl Green-Pyronin method）显示核酸（ 甲绿染DNA呈现绿色，派郎宁染RNA呈现红色） 3．苏丹Ⅲ冰冻切片染色显示中性脂肪呈现橘红色。 4．普鲁士蓝反应显示组织中含铁血黄素。 5．过碘酸雪夫反应（Periodic acid schiffreaction, PAS）显示糖 原和其它多糖物质为紫红色。
（一）直接法
• 将荧光素(免疫荧光法)或酶直接标记在第 一抗体上，以检查相应的抗原。直接法 具有特异性强的优点，但敏感性差，耗 费抗体多。
（二）间接法
先用荧光素或酶标记第二抗体，一抗为特异 性抗体， 二抗仅有种族特异性。 特点: ⑴ 预先标好二抗，较方便；
⑵ 比直接法敏感，但仍差。
（三）PAP法与双PAP法：
⑵ 背景染色低（相对）； ⑶ 双PAP敏感性更高，但背景相对较重。
（四）ABC法：
既卵白素－生物素过氧化物酶复合物法(Avidin Biotin-peroxidase Complex,ABC) 利用卵白素与生物素特有的高度亲和力，先将生物素与酶结合形成生物素 化HRP，再以生物素化HRP与卵白素按一定比例混合，形成一个复合物； 同时先将二抗生物素化。 １．如将卵白素换成链霉亲和素，则为：
（二）常用标记物
1．酶 为最常用的标记物。作为标记的酶应具有以下条件：① 底物是特异性的，且易于显示；②酶反应产物稳定，不易 扩散；③容易获得纯酶分子且较稳定；④酶标记抗体后， 不影响两者的活性；⑤被检组织中不应存在内源性相同的 酶或其底物。常用的标记酶有辣根过氧化物酶（HRP）、 硷性磷酸酶（AKP）、葡萄糖氧化酶（GOD）等。
• 细胞化学方法能够对细胞内的各种成分进行定性、定 位、定量研究，包括悬浮胸腹水细胞、血液细胞以及 体外培养细胞均能产生同样良好的效果。目前，用细 胞化学技术所能显示的化学成分有蛋白质（显示某些 特定蛋白、某些氨基酸或功能基）、核糖核酸（RNA） 和脱氧核糖核酸（DNA）、糖类（如糖原、粘多糖和 糖脂等）、脂类（如中性脂肪、磷脂和固醇等）、酶 （包括水解酶如磷酸酶）、特异抗原（其化学本质可 能是多肽、蛋白、糖蛋白等）、无机盐和微量元素 （如铁、铜、锌、钻、镁等）。