牛血清蛋白标准曲线
5 蛋白质鉴定和误差分析
警示：这些材料所叙述的实验可能是危险的，因此需要高标准的安全训练、特殊的设备和装置，并在合适的人员监管下才能进行。
对于履行这样的安全程序和措施，你负有全部的责任和义务，并独自承担其风险。
对于所提供的任何材料的内容或其执行情况， MIT 将不负任何责任和义务，不承担任何风险。
法律提示5. 蛋白质鉴定和误差分析5.1. 初级实验要求：“牛的心脏里有什么呢？”实验技能列表：●用吸移管定量移液●吸移管校正●标准曲线制作●梯度稀释●紫外-可见（UV-Vis）分光光度计使用实验预讨论：●蛋白质鉴定装置：●吸移管：100P，1000P●洗耳球：大、小型● 8支试管● Eppendorf管和管架● UV-Vis一次性比色皿（5mL）目标：●你将拿到含有牛心细胞色素C的溶液样品，并且用Pierce公司的Coomassie® PlusProtein Assay试剂来鉴定样品中蛋白质的浓度。
注意：●你将拿到一组Eppendorf管：一个装储备液，3个装有50μL的牛心细胞色素C，以及若干用于混合溶液的空管。
还有一瓶pH为7的25mM MOPS缓冲溶液。
实验要点：吸移管的校正在实验中使用吸移管以前，首先应对它进行校正。
该步骤将决定移入液体体积的精确值。
对移液管的校正非常方便，只需吸取一定量的水，然后将它们移入一个已知重量的带盖容器，然后再称取其重量。
由于已知水的密度是 1.00g/mL，因此，进行简单的换算就可以知道吸移管的准确度。
大多数吸移管不需要修正，若要修正，一般不应该超过1μL。
Coomassie®试剂和蛋白质的反应蛋白质的检验可以通过其和Coomassie®染料形成的配合物来实现。
当染料附着在蛋白质上之后，染料的紫外吸收会从465nm移至595nm (A595)。
首先测定一系列已知浓度的牛血清蛋白(BSA)溶液在595nm处的吸光度，绘制标准曲线，然后测定未知样品在595nm处的吸光度，对比标准曲线确定样品的浓度。
牛血清蛋白标准曲线
牛血清蛋白标准曲线牛血清蛋白表1.Folin酚法定制牛血清蛋白及测定人体血清蛋白加样操作表01234567样1样2试管编号200ug/mL牛血清蛋白标准液（mL）0.000.300.400.500.600.700.800.90 1.001.00 1mol/1000mL人血清蛋白（mL）PH7.4磷酸缓冲液（mL)1.000.700.600.500.400.300.200.100.000.00 Folin酚甲（mL）以上各管均加入1.00mL，振荡均匀后，反应15min Folin 酚乙（mL）以上各管均加入 4.00mL，振荡均匀后，55℃水浴反应25minA650nm实测OD值0.0000.2380.3020.3650.4210.4850.5210.5730.4730.378 表2.Folin酚法定制牛血清蛋白标准曲线，微机数据处理表0123456试管编号标准牛血清蛋白呈色浓度（ug/mL）0.00A650nm实测OD值回归方程对应OD值线性回归方程斜率a线性回归方程截距b线性回归方程实验相关性（r）710.0013.3316.6720.0023.3326.6730.000.0000.2380.3020.3650.4210.485 0.5210.5730.0330.2220.2840.3470.4100.4730.5360.5990.018870.03298y= 0.01887x+0.032980.9934 凝血酶原时间标准曲线半定量测定纤维蛋白原含量的方法的临床应用凝血酶原时间标准曲线半定量测定纤维蛋白原含量的方法的临床应用孙彦平1杨光2(11黑龙江省鸡西市矿业集团总医院,黑龙江鸡西158100;21黑龙江省林业总医院,黑龙江150040)〔文章编号〕1002-2376(2004)02-0017-02〔中图分类号〕TH773〔文献标识码〕B〔摘要〕目的:利用Controlplasma建立一种简便、易于临床实验室开展的半定量纤维蛋白原(FiB)检测方法,并对其初步评价。
Bradford法测蛋白质浓度
一、实验目的配制一组浓度分别为ml ，ml，ml ，ml ，ml，0 mg/ml的牛血清蛋白（BSA）溶液，测定这组溶液的吸光度，得到蛋白质浓度对吸光度的一条标准曲线。
测定未知蛋白质浓度样品的吸光度，根据标准曲线得到蛋白质的浓度。
二、实验原理考马斯亮蓝（CBB）测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。
考马斯亮蓝在游离状态下呈红色，最大光吸收在488nm；当它与蛋白质结合后变为青色，蛋白质—色素结合物在595nm波长下有最大光吸收。
其光吸收值与蛋白质含量成正比，因此可用于蛋白质的定量测定。
蛋白质与考马斯亮蓝结合在2min左右的时间内达到平衡，完成反应十分迅速；其结合物在室温下1h内保持稳定。
该法试剂配制简单，操作简便快捷，反应非常灵敏，灵敏度比Lowry法还高4倍，可测定微克级蛋白质含量，测定蛋白质浓度范围为0～1 000μg/ml，是一种常用的微量蛋白质快速测定方法。
三、实验过程1．准备所需的药品和仪器。
2．计算所需配制的溶液的量。
先配制1 mg/ml的牛血清蛋白（BSA）母液，再往母液中加入磷酸缓冲溶液（PBS）配制一组浓度分别为ml ，ml，ml ，ml ，ml的BSA溶液，再将这组溶液稀释10倍，得到一组浓度分别为ml ，ml，ml ，ml ，ml的BSA溶液。
计算第一步稀释各组需要的BSA溶液及PBS溶液的体积。
3．具体操作过程。
用天平称量1.00g牛血清蛋白（BSA），溶于去离子水中，配成100ml的溶液，溶液的浓度为10mg/ml。
用移液枪分别取100ul，80ul，60ul，40ul，20ul的BSA 溶液，置于的EP管中，再分别加入900ul，920ul，940ul，960ul，980ul的磷酸缓冲溶液（PBS）配成1ml的溶液，震荡使溶液混合均匀。
得到一组浓度分别为ml ，ml，ml ，ml ，ml的BSA溶液。
移液枪分别移取100ul刚配好的一组BSA溶液，置于的EP管中，各加入900ul 的PBS溶液，震荡使溶液混合均匀。
考马斯亮蓝G-250标准曲线法测定蛋白含量
考马斯亮蓝G-250标准曲线法测定蛋白含量实验目的：学习和掌握考马斯亮蓝G-250 测定蛋白质含量的原理和方法。
实验原理：考马斯亮蓝G-250（Coomassie brilliant blue G-250）测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。
考马斯亮蓝G-250 在游离状态下呈红色，最大光吸收在488nm；当它与蛋白质结合后变为青色，蛋白质-色素结合物在595nm 波长下有最大光吸收。
其光吸收值与蛋白质含量成正比，因此可用于蛋白质的定量测定。
蛋白质与考马斯亮蓝G-250 结合在2min 左右的时间内达到平衡，完成反应十分迅速；其结合物在室温下1h 内保持稳定。
该法是1976年Bradford 建立，试剂配制简单，操作简便快捷，反应非常灵敏，灵敏度比Lowry 法还高4 倍，可测定微克级蛋白质含量，测定蛋白质浓度范围为0～1 000μg／mL，是一种常用的微量蛋白质快速测定方法。
材料、主要仪器和试剂1．实验材料新鲜绿豆芽2．主要仪器（1）分析天平、台式天平（2）刻度吸管（3）具塞试管、试管架（4）研钵（5）离心机、离心管（6）烧杯、量筒（7）微量取样器（8）分光光度计3．试剂（1）牛血清白蛋白标准溶液的配制：准确称取100mg 牛血清白蛋白，溶于100mL 蒸馏水中，即为1 000μg／mL 的原液。
（2）蛋白试剂考马斯亮蓝G-250 的配制：称取100mg 考马斯亮蓝G-250，溶于50mL90％乙醇中，加入85％（W／V）的磷酸100mL，最后用蒸馏水定容到1 000mL。
此溶液在常温下可放置一个月。
（3）乙醇（4）磷酸（85％）四、操作步骤1．标准曲线制作（1）0~100μg／mL 标准曲线的制作：取6 支10mL 干净的具塞试管，按表1 取样。
盖塞后，将各试管中溶液纵向倒转混合，放置2min 后用1cm 光经的比色杯在595nm 波长下比色，记录各管测定的光密度OD595nm，并做标准曲线。
最新[牛血清蛋白标准曲线]考马斯亮蓝法标准曲线
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最新[牛血清蛋白标准曲线]考马斯亮蓝法标准曲线牛血清蛋白表1.Folin酚法定制牛血清蛋白及测定人体血清蛋白加样操作表01234567样1样2试管编号200ug/mL牛血清蛋白标准液（mL）0.000.300.400.500.600.700.800.90 1.001.00 1mol/1000mL人血清蛋白（mL）PH7.4磷酸缓冲液（mL)1.000.700.600.500.400.300.200.100.000.00 Folin酚甲（mL）以上各管均加入1.00mL，振荡均匀后，反应15min Folin酚乙（mL）以上各管均加入4.00mL，振荡均匀后，55℃水浴反应25minA650nm实测OD值0.0000.2380.3020.3650.4210.4850.5210.5730.4730.378 表2.Folin酚法定制牛血清蛋白标准曲线，微机数据处理表0123456试管编号标准牛血清蛋白呈色浓度（ug/mL）0.00A650nm实测OD值回归方程对应OD值线性回归方程斜率a 线性回归方程截距b线性回归方程实验相关性（r）710.0013.3316.6720.0023.3326.6730.000.0000.2380.3020.3 650.4210.4850.5210.5730.0330.2220.2840.3470.4100.4730. 5360.5990.018870.03298y=0.01887x+0.032980.9934 凝血酶原时间标准曲线半定量测定纤维蛋白原含量的方法的临床应用凝血酶原时间标准曲线半定量测定纤维蛋白原含量的方法的临床应用孙彦平1 杨光2(11黑龙江省鸡西市矿业集团总医院,黑龙江鸡西158100;21黑龙江省林业总医院,黑龙江150040)〔文章编号〕1002-2376(2004)02-0017-02 〔中图分类号〕TH773 〔文献标识码〕B 〔摘要〕目的:利用Controlplasma建立一种简便、易于临床实验室开展的半定量纤维蛋白原(FiB)检测方法,并对其初步评价。
Brford法测蛋白质浓度
B r f o r d法测蛋白质浓度 Prepared on 24 November 2020Bradford法测蛋白质浓度一、实验目的配制一组浓度分别为ml ，ml，ml ，ml ，ml，0 mg/ml的牛血清蛋白（BSA）溶液，测定这组溶液的吸光度，得到蛋白质浓度对吸光度的一条标准曲线。
测定未知蛋白质浓度样品的吸光度，根据标准曲线得到蛋白质的浓度。
二、实验原理考马斯亮蓝（CBB）测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。
考马斯亮蓝在游离状态下呈红色，最大光吸收在488nm；当它与蛋白质结合后变为青色，蛋白质—色素结合物在595nm波长下有最大光吸收。
其光吸收值与蛋白质含量成正比，因此可用于蛋白质的定量测定。
蛋白质与考马斯亮蓝结合在2min左右的时间内达到平衡，完成反应十分迅速；其结合物在室温下1h内保持稳定。
该法试剂配制简单，操作简便快捷，反应非常灵敏，灵敏度比Lowry法还高4倍，可测定微克级蛋白质含量，测定蛋白质浓度范围为0～1 000μg/ml，是一种常用的微量蛋白质快速测定方法。
三、实验过程1．准备所需的药品和仪器。
2．计算所需配制的溶液的量。
先配制1 mg/ml的牛血清蛋白（BSA）母液，再往母液中加入磷酸缓冲溶液（PBS）配制一组浓度分别为ml ，ml，ml ，ml ，ml的BSA溶液，再将这组溶液稀释10倍，得到一组浓度分别为ml ，ml，ml ，ml ，ml的BSA溶液。
计算第一步稀释各组需要的BSA溶液及PBS溶液的体积。
3．具体操作过程。
用天平称量1.00g牛血清蛋白（BSA），溶于去离子水中，配成100ml的溶液，溶液的浓度为10mg/ml。
用移液枪分别取100ul，80ul，60ul，40ul，20ul 的BSA溶液，置于的EP管中，再分别加入900ul，920ul，940ul，960ul，980ul的磷酸缓冲溶液（PBS）配成1ml的溶液，震荡使溶液混合均匀。
得到一组浓度分别为ml ，ml，ml ，ml ，ml的BSA溶液。
蛋白质测定常用的几种方法
I. 紫外分光光度法测定蛋白质的含量一、实验目的掌握紫外分光光度法测定蛋白质的含量的方法。
二、实验原理蛋白质分子中存在含有共轭双键的酪氨酸和色氨酸，使蛋白质对280nm的光波具有最大吸收值，在一定的范围内，蛋白质溶液的吸光值与其浓度成正比，可作定量测定。
该法操作简单、快捷，并且测定的样品可以回收，低浓度盐类不干扰测定，故在蛋白质和酶的生化制备中广泛被采用。
但此方法存在以下缺点：1．当待测的蛋白质中酪氨酸和色氨酸残基含量差别较大是会产生一定的误差，故该法适用于测定与标准蛋白质氨基酸组成相似的样品。
2．若样品中含有其他在280nm吸收的物质如核酸等化合物，就会出现较大的干扰。
但核酸的吸收高峰在260nm，因此分别测定280nm和260nm两处的光吸收值，通过计算可以适当的消除核酸对于测定蛋白质浓度的干扰作用。
但因为不同的蛋白质和核酸的紫外吸收是不同的，虽经校正，测定结果还存在着一定的误差。
三、实验器材1．紫外分光光度计2．移液管3．试管及试管架4．石英比色皿四、材料与试剂1．标准蛋白质溶液：准确称取经凯氏定氮校正的牛血清清蛋白，配制成浓度为1mg/mL的溶液。
2．待测蛋白溶液：酪蛋白稀释溶液，使其浓度在标准曲线范围内。
五、操作方法1．标准曲线的制作按表1加入试剂。
表1 标准曲线的制作度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制出血清蛋白的标准曲线。
2．未知样品的测定取待测蛋白质溶液1mL，加入3mL蒸馏水，在280nm下测定其吸光度值。
并从标准曲线上查出待测蛋白质的浓度。
II. Bradford法测定蛋白质的含量一、实验目的学习考马斯亮蓝G-250染色法测定蛋白质的原理和方法。
二、实验原理1976年Bradford建立了用考马斯亮蓝G-250与蛋白质结合的原理，迅速而准确的定量蛋白质的方法。
染料与蛋白质结合后引起染料最大吸收光的改变，从465nm变为595nm。
蛋白质-染料复合物具有高的消光系数，因此大大提高了蛋白质测定的灵敏度（最低检出量为1μg）。
牛血清蛋白标准品消光系数 概述及解释说明
牛血清蛋白标准品消光系数概述及解释说明1. 引言1.1 概述本文旨在论述牛血清蛋白标准品消光系数的相关知识以及其重要性与意义。
牛血清蛋白作为一种常用的生物分子，其消光系数主要用于描述其在特定条件下对入射光的吸收情况。
了解和研究牛血清蛋白标准品消光系数不仅可以帮助我们更好地理解和应用这一生物分子，在生物医学研究、药物研发等领域也具有广泛的应用前景。
1.2 文章结构本文将按照以下结构展开内容：引言部分旨在引起读者对牛血清蛋白标准品消光系数的关注，并介绍文章的目录结构。
第二部分探讨了牛血清蛋白标准品及其消光系数的意义与重要性，包括对标准品的介绍以及消光系数在科学研究中的作用。
第三部分详细阐述了测量牛血清蛋白标准品消光系数所采用的方法，包括紫外-可见吸收光谱法、聚二甲基硅氧烷凝胶过滤色谱法和荧光光谱法。
第四部分探讨了影响牛血清蛋白标准品消光系数的因素，并对其进行解释和说明，包括标准溶液浓度与测定结果关系的解析，pH值对消光系数的影响分析以及温度对消光系数的影响分析。
最后，在结论部分总结主要观点，并展望未来对该领域的研究方向。
1.3 目的本文旨在全面介绍牛血清蛋白标准品消光系数的相关知识，提高读者对该主题的理解和认识。
通过详细阐述牛血清蛋白标准品消光系数的定义、测量方法及其影响因素等内容，希望能够增进读者对这一领域的知识储备，并为未来相关研究提供一定参考。
2. 牛血清蛋白标准品消光系数的意义与重要性2.1 牛血清蛋白标准品介绍牛血清蛋白标准品是一种常用的实验试剂，在生物科学领域中扮演着重要的角色。
它通常用于校准分析仪器和评估测量结果的准确性。
牛血清蛋白标准品可作为一种参照物质，用于比较和量化其他样品中蛋白质的含量。
2.2 消光系数的定义与作用消光系数是描述溶液对电磁辐射吸收程度的参数。
在牛血清蛋白标准品中，消光系数被用来确定样品在特定波长下吸光度与浓度之间的关系。
通过测量吸光度并利用标准回归曲线，可以计算出未知样品中蛋白质的浓度。
蛋白质标准曲线的制作
是一种常用的微量蛋白质快速测定方法。 关键词：马斯亮蓝测定考马斯亮蓝 G-250CoomassiebrilliantblueG-250
蛋白质含量
一、目的 学习和掌握考马斯亮蓝 G-250 测定蛋白质含量的原理和方法。 二、原理 考马斯亮蓝 G- 250（Coomassie brilliant blue G-250）测定蛋白质 含量属于染料结合法的一种。考马斯亮蓝 G-250 在游离状态下呈红 色，最大光吸收在 488nm；当它与蛋白质结合后变为青色，蛋白质色素结合物在 595nm 波长下有最大光吸收。其光吸收值与蛋白质含 量成正比，因此可用于蛋白质的定量测定。蛋白质与考马斯亮蓝 G250 结合在 2min 左右的时间内达到平衡，完成反应十分迅速；其结 合物在室温下 1h 内保持稳定。该法是 1976 年 Bradford 建立，试 剂配制简单，操作简便快捷，反应非常灵敏，灵敏度比 Lowry 法还 高 4 倍，可测定微克级蛋白质含量，测定蛋白质浓度范围为 0～1 0
（2）0~1 000μg／mL 标准曲线的制作：另取 6 支 10mL 具塞试管， 按表 2 取样。其余步骤同（1）操作，做出蛋白质浓度为 0~1 000μ g／mL 的标准曲线。 表 2 高浓度标准曲线制作
2．样品提取液中蛋白质浓度的测定 （1）待测样品制备：称取新鲜绿豆芽下胚轴 2g 放入研钵中，加 2 mL 蒸馏水研磨成匀浆，转移到离心管中，再用 6mL 蒸馏水分次洗 涤研钵，洗涤液收集于同一离心管中，放置 0.5~1h 以充分提取，然 后在 4 000r/min 离心 20min，弃去沉淀，上清液转入 10mL 容量瓶， 并以蒸馏水定容至刻度，即得待测样品提取液。 （2）测定：另取 2 支 10mL 具塞试管，按下表取样。吸取提取液 0. 1mL（做一重复），放入具塞刻度试管中，加入 5mL 考马斯亮蓝 G -250 蛋白试剂，充分混合，放置 2min 后用 1cm 光径比色杯在 59 5nm 下比色，记录光密度 OD595nm，并通过标准曲线查得待测样品 提取液中蛋白质的含量 X（μg）。以标准曲线 1 号试管做空白。
Bradford法测蛋白质浓度
Bradford法测蛋白质浓度一、实验目的配制一组浓度分别为0.10mg/ml ，0.08mg/ml，0.06mg/ml ，0.04mg/ml ，0.02mg/ml，0 mg/ml 的牛血清蛋白（BSA）溶液，测定这组溶液的吸光度，得到蛋白质浓度对吸光度的一条标准曲线。
测定未知蛋白质浓度样品的吸光度，根据标准曲线得到蛋白质的浓度。
二、实验原理考马斯亮蓝（CBB）测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。
考马斯亮蓝在游离状态下呈红色，最大光吸收在488nm；当它与蛋白质结合后变为青色，蛋白质—色素结合物在595nm波长下有最大该法试EP管中，再分别加入900ul，920ul，940ul，960ul，980ul的磷酸缓冲溶液（PBS）配成1ml的溶液，震荡使溶液混合均匀。
得到一组浓度分别为1.0mg/ml ，0.8mg/ml，0.6mg/ml ，0.4mg/ml ，0.2mg/ml 的BSA溶液。
移液枪分别移取100ul刚配好的一组BSA溶液，置于1.5ml的EP管中，各加入900ul的PBS 溶液，震荡使溶液混合均匀。
得到一组浓度分别为0.10 mg/ml ，0.08mg/ml，0.06mg/ml ，0.04mg/ml ，0.02mg/ml的BSA溶液。
另外量取1ml的PBS溶液（BSA溶液浓度为0 mg/ml）作对照试验。
用移液枪分别移取50ul配好的一组BSA溶液，滴加到孔板中，再分别加入200ul的考马斯亮——仅供参考蓝（CBB）。
静置10min后，用酶标仪测得这组BSA溶液的吸光度。
四、实验数据及处理测得的BSA溶液的吸光度如下：用orgin作出吸光度对BSA浓度的关系曲线。
五、实验结果分析得到的吸光度对BSA浓度的关系曲线为y=3.09x+0.6807，R2=0.9541。
可以看出吸光度—浓度——仅供参考。
蛋白质标准曲线的制作
考马斯亮蓝G-250（Coomassie brilliant blue G-250）法测定蛋白质含量考马斯亮蓝G- 250（Coomassie brilliant blue G-250）测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。
该法是1976年Bradford 建立，试剂配制简单，操作简便快捷，反应非常灵敏，灵敏度比Lowry 法还高4 倍，可测定微克级蛋白质含量，测定蛋白质浓度范围为0～1 000μg／mL，是一种常用的微量蛋白质快速测定方法。
关键词：马斯亮蓝测定考马斯亮蓝G-250CoomassiebrilliantblueG-250蛋白质含量一、目的学习和掌握考马斯亮蓝G-250 测定蛋白质含量的原理和方法。
二、原理考马斯亮蓝G- 250（Coomassie brilliant blue G-250）测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。
考马斯亮蓝G-250 在游离状态下呈红色，最大光吸收在488nm；当它与蛋白质结合后变为青色，蛋白质-色素结合物在595nm 波长下有最大光吸收。
其光吸收值与蛋白质含量成正比，因此可用于蛋白质的定量测定。
蛋白质与考马斯亮蓝G-250 结合在2min 左右的时间内达到平衡，完成反应十分迅速；其结合物在室温下1h 内保持稳定。
该法是1976年Bradford 建立，试剂配制简单，操作简便快捷，反应非常灵敏，灵敏度比Lowry 法还高4 倍，可测定微克级蛋白质含量，测定蛋白质浓度范围为0～1 000μg／mL，是一种常用的微量蛋白质快速测定方法。
二、材料、主要仪器和试剂1．实验材料新鲜绿豆芽2．主要仪器（1）分析天平、台式天平（2）刻度吸管（3）具塞试管、试管架（4）研钵（5）离心机、离心管（6）烧杯、量筒（7）微量取样器（8）分光光度计3．试剂（1）牛血清白蛋白标准溶液的配制：准确称取100mg 牛血清白蛋白，溶于100mL 蒸馏水中，即为1 000μg／mL 的原液。
牛血清蛋白标准曲线
牛血清蛋白标准曲线各位读友大家好，此文档由网络收集而来，欢迎您下载，谢谢牛血清蛋白表酚法定制牛血清蛋白及测定人体血清蛋白加样操作表01234567样1样2试管编号200ug/mL牛血清蛋白标准液1mol/1000mL人血清蛋白磷酸缓冲液以上各管均加入，振荡均匀后，反应15min Folin酚乙以上各管均加入，振荡均匀后，55℃水浴反应25minA650nm实测OD值表酚法定制牛血清蛋白标准曲线，微机数据处理表0123456试管编号标准牛血清蛋白呈色浓度A650nm实测OD值回归方程对应OD值线性回归方程斜率a线性回归方程截距b线性回归方程实验相关性=+凝血酶原时间标准曲线半定量测定纤维蛋白原含量的方法的临床应用凝血酶原时间标准曲线半定量测定纤维蛋白原含量的方法的临床应用孙彦平1杨光2(11黑龙江省鸡西市矿业集团总医院,黑龙江鸡西158100;21黑龙江省林业总医院,黑龙江150040)〔文章编号〕1002-2376(xx)02-0017-02〔中图分类号〕TH773〔文献标识码〕B〔摘要〕目的:利用Controlplasma 建立一种简便、易于临床实验室开展的半定量纤维蛋白原(FiB)检测方法,并对其初步评价。
方法:用亚硫酸钠手工法检测不同浓度FiBReferenceplasma血浆的FiB含量,用其为参比血浆,用半自动血凝仪测其PT凝固时间及吸光度,建立PT凝固时间(s)参比血浆浓度(%)的曲线1,及FiB含量(g/L)与吸光度(E)的标准曲线2。
利用标准曲线测定待检血浆FiB的含量(g/L)。
结果:血浆FiB含量与PT(s)及吸光度(E)有很好的相关性(r=01992)。
单种试剂本法测定Controlplasma血浆FiB值,重复性良好(CV现代验检学杂志第医６卷２第４２１期０１年７月ＪＭｏａｄＬＭｂｅＶ．ｏＮｏ６４Ｊｌ０・１ｄ，１，．，２ｕｙ２１１１瓶０其，ＣＣ＂和和流行病研学都究迫切要需同实不验室及同一实期到抽取时３转移至液中，氮中一２４￣２￣存的样品先在一８５Ｃ储０＂冰箱放Ｃ置夜过再转至验室不同时的血间测定脂结果准确、可比性，有因２血此测脂定必须做到标准化。
蛋白质标准标准曲线的绘制
考马斯亮蓝G-250法测定蛋白质含量定一、目的学习和掌握考马斯亮蓝G-250 测定蛋白质含量的原理和方法。
二、原理考马斯亮蓝G-250（Coomassie brilliant blue G-250）测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。
考马斯亮蓝G-250 在游离状态下呈红色，最大光吸收在488nm；当它与蛋白质结合后变为青色，蛋白质-色素结合物在595nm 波长下有最大光吸收。
其光吸收值与蛋白质含量成正比，因此可用于蛋白质的定量测定。
蛋白质与考马斯亮蓝G-250 结合在2min 左右的时间内达到平衡，完成反应十分迅速；其结合物在室温下1h 内保持稳定。
该法是1976年Bradford 建立，试剂配制简单，操作简便快捷，反应非常灵敏，灵敏度比Lowry 法还高4 倍，可测定微克级蛋白质含量，测定蛋白质浓度范围为0～1 000μg／mL，是一种常用的微量蛋白质快速测定方法。
二、材料、主要仪器和试剂1．实验材料新鲜绿豆芽2．主要仪器（1）分析天平、台式天平（2）刻度吸管（3）具塞试管、试管架（4）研钵（5）离心机、离心管（6）烧杯、量筒（7）微量取样器（8）分光光度计3．试剂（1）牛血清白蛋白标准溶液的配制：准确称取100mg 牛血清白蛋白，溶于100mL 蒸馏水中，即为1 000μg／mL 的原液。
（2）蛋白试剂考马斯亮蓝G-250 的配制：称取100mg 考马斯亮蓝G-250，溶于50mL90％乙醇中，加入85％（W／V）的磷酸100mL，最后用蒸馏水定容到1 000mL。
此溶液在常温下可放置一个月。
（3）乙醇（4）磷酸（85％）四、操作步骤1．标准曲线制作（1）0~100μg／mL 标准曲线的制作：取6 支10mL 干净的具塞试管，按表1 取样。
盖塞后，将各试管中溶液纵向倒转混合，放置2min 后用1cm 光经的比色杯在595nm 波长下比色，记录各管测定的光密度OD595nm，并做标准曲线。
表1 低浓度标准曲线制作（2）0~1 000μg／mL 标准曲线的制作：另取6 支10mL 具塞试管，按表2 取样。
蛋白质标准曲线的制作
蛋白质标准曲线的制作
蛋白质标准曲线是生物化学实验中常用的一种分析方法，能够准确测定蛋白质的浓度。
下面将介绍如何制作蛋白质标准曲线。
首先，准备一定浓度的蛋白质标准溶液。
可以选择已知浓度的蛋白标准品，按照一定比例稀释成一系列不同浓度的标准溶液。
通常会选择0、0.1、0.2、0.5、1.0等不同浓度的标准溶液。
其次，准备好实验所需的试剂和仪器。
包括蛋白质测定试剂盒、分光光度计、比色皿等。
然后，进行测定。
依次取不同浓度的蛋白标准溶液，加入蛋白质测定试剂，按照试剂盒说明书进行反应，最后使用分光光度计测定吸光度值。
接着，绘制标准曲线。
将所得吸光度值作为纵坐标，标准溶液的蛋白质浓度作为横坐标，绘制出标准曲线图。
最后，用标准曲线测定未知样品的蛋白质浓度。
取未知样品，进行同样的测定和计算，根据标准曲线的拟合方程，求出未知样品的蛋白质浓度。
蛋白质标准曲线的制作是生物化学实验中的基础工作，准确的标准曲线能够为后续的蛋白质浓度测定提供可靠的数据支持。
希望以上内容能够帮助大家更好地掌握蛋白质标准曲线的制作方法。
实验十八蛋白质标准曲线的制作内容制作测定蛋白质浓度的标准曲...
PART C 酶工程实验实验十八蛋白质标准曲线的制作一、实验目的和内容目的: 学习考马斯亮蓝（Coomassie Brilliant Blue）法测定蛋白质浓度的原理和方法内容：制作测定蛋白质浓度的标准曲线。
制作标准曲线是生物检测分析的一项基本技术。
一般用分光光度法测物质的含量，先要制作标准曲线，然后根据标准曲线查出所测物质的含量。
考马斯亮蓝法测定蛋白质浓度，是利用蛋白质―染料结合的原理，定量的测定微量蛋白浓度的快速、灵敏的方法。
考马斯亮蓝G－250存在着两种不同的颜色形式，红色和蓝色。
它和蛋白质通过范德华力结合，在一定蛋白质浓度范围内，蛋白质和染料结合符合比尔定律（Beer’s law）。
此染料与蛋白质结合后颜色有红色形式和蓝色形式，最大光吸收由465nm变成595nm，通过测定595nm吸光度可测定蛋白质的含量。
另外，反应体系中呈现的颜色变化主要是G-250分子间疏水相互作用形成的聚集体聚集程度不同引起的。
单体形式表现为蓝色，单体和聚集体共存时表现为绿色，全为聚集体形式呈现为棕红色。
影响因素主要为溶液体系中磷酸、乙醇、NaCl的含量。
染料复合物具有很高的消光系数，使得在测定蛋白质浓度时灵敏度很高，在测定溶液中含蛋白质5µL/mL时就有0.275光吸收值的变化，比Lowry法灵敏4倍，测定范围为10－100µg蛋白质，微量测定法测定范围是1－10µg蛋白质。
此反应重复性好，精确度高，线性关系好。
标准曲线在蛋白质浓度较大时稍有弯曲，这是由于染料本身的两种颜色形式光谱有重叠，试剂背景值随更多染料与蛋白质结合而不断降低，但直线弯曲程度很轻，不影响测定。
此方法干扰物少，研究表明：NaCl，KCl，MgCl2，乙醇，（NH4）2SO4无干扰。
强碱缓冲液在测定中有一些颜色干扰，这可以用适当的缓冲液对照扣除其影响。
Tris，乙酸，2―巯基乙醇，蔗糖，甘油，EDTA及微量的去污剂如Triton X―100，SDS，玻璃去污剂有少量颜色干扰，用适当的缓冲液对照很容易除掉。
考马斯亮蓝标准曲线制作
标准曲线制作—考马斯亮蓝法测蛋白质含量一、标准曲线一般用分光光度法测物质的含量，先要制作标准曲线，然后根据标准曲线查出所测物质的含量。
因此，制作标准曲线是生物检测分析的一项基本技术。
二、蛋白质含量测定方法1、凯氏定氮法2、双缩脲法3、Folin-酚试剂法4、紫外吸收法5、考马斯亮蓝法三、考马斯亮蓝法测定蛋白质含量—标准曲线制作（一）、试剂：1、考马斯亮蓝试剂：考马斯亮蓝G—250 100mg溶于50ml 95%乙醇，加入100ml 85% H3PO4，雍蒸馏水稀释至1000ml,滤纸过滤。
最终试剂中含0.01%（W/V）考马斯亮蓝G—250,4.7%（W/V）乙醇，8.5%（W/V）H3PO4。
2、标准蛋白质溶液：纯的牛血清血蛋白，预先经微量凯氏定氮法测定蛋白氮含量，根据其纯度同0.15mol/LNaCl （0.9%NaCl）配制成100ug/ml蛋白溶液。
（二）、器材：1、722S型分光光度计使用及原理（）。
2、移液管使用（）。
（三）、标准曲线制作：1、2、以A595nm为纵坐标，标准蛋白含量为横坐标（六个点为10ug、20 ug、30 ug、40 ug、50 ug、60 ug），在坐标轴上绘制标准曲线。
1）、利用标准曲线查出回归方程。
2）、用公式计算回归方程。
3）、或用origin作图，测出回归线性方程。
即A595nm=a×X( )+6一般相关系数应过0.999以上，至少2个9以上。
4）、绘图时近两使点在一条直线上，在直线上的点应该在直线两侧。
（四）、蛋白质含量的测定：样品即所测蛋白质含量样品（含量应处理在所测范围内），依照操作步骤1操作，测出样品的A595nm，然后利用标准曲线或回归方程求出样品蛋白质含量。
一般被测样品的A595nm值在0.1—0.05之间，所以上述样品如果A595nm值太大，可以稀释后再测A595nm值，然后再计算。
（五）、注意事项：1、玻璃仪器要洗涤干净。
2、取量要准确。