基因工程实验(答案)
基因工程(李立家)小题目及答案
基因工程试题及答案1.标记（探针）（已知一个克隆在质粒载体上的500bpDNA 外源片段，请设计并用3种标记方法方案来对这个外源片段进行标记。
带有能检测的标记物的DNA或RNA叫探针。
使DNA或RNA带有可检测的标记物的过程叫探针标记。
1）切口平移标记: 控制DNaseI的浓度，就可以在双链DNA分子的一条链的有限位置上打开切口，形成3-OH 末端（这条链即成为引物）。
DNA聚合酶I把一个带有标记物的dNTP就加在这引物的3-OH末端，而它的5-3的核酸外切酶活性将切除5-单核苷酸，同时依次添加新的核苷酸到3一侧，其结果使切口沿着DNA平移，这就叫切口平移（Nick translation)2）随机引物标记: 能与任何DNA配对互补的一小段DNA序列叫随机引物。
DNA聚合酶klenow大片段能在随机引物的引导下以带有标记物的dNTP为原料合成新的与模板DNA互补的探针。
3) PCR标记: 针对目的片段，设计好引物，以标记号的dNTP为原料合成新的与模板DNA互补的探针4）末端核苷酸转移法:P32和多核苷酸激酶在5’端标记DNA或RNA。
先用碱性磷酸酶处理去除DNA 5’的磷酸基团，多核苷酸激酶用于对缺乏5'-磷酸的DNA 或合成接头进行磷酸化,同时可对末端进行标记。
补充：1）常用的标记物包括：P32的同位素标记；荧光探针标记的dNTP；生物素；地高辛2）应用：定性（是否转入该基因）；定量（含量的高低）；定位；成分（配对的程度、是否同源）2.PCR技术（试述PCR技术的基本原理，如果想通过PCR技术从一个生物基因组中扩增一个约500bp的基因片段，再和载体连接克隆，然后转入大肠杆菌中，请描述其克隆过程（包括检测）。
）（1）PCR的概念：又称为聚合酶链反应,能在体外特异快速扩增DNA片段。
组成：DNA单链模板、引物和DNA聚合酶（包括缓冲液）（2）PCR技术的原理PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。
基因工程习题
基因工程习题及参考答案02工具酶部分——限制性内切核酸酶一、填空题1．严格地说限制性内切核酸酶(restriction endonuclease)是指已被证明是的酶。
基因工程中把那些具有识别的内切核酸酶统称为限制性内切核酸酶。
2．年Luria 和Human 在T 偶数噬菌体对大肠杆菌感染实验中首次发现了细菌的现象。
3．1970 年，Smith 和Wilcox 从流感嗜血杆菌中分离到一种限制酶，能够特异性的切割DNA，这个酶后来被命名为，这是第一个分离到的Ⅱ类限制性内切核酸酶。
4．通过比较用不同组合的限制性内切核酸酶处理某一特定基因区域所得到的不同大小的片段，可以构建显示该区域各限制性内切核酸酶切点相互位置的。
5．Ⅱ类限制性内切核酸酶分子量较小．一般在20~40kDa，通常由亚基所组成。
它们的作用底物为双链DNA，极少数Ⅱ类酶也可作用于单链DNA，或DNA／RNA 杂合双链。
这类酶的专一性强，它不仅对酶切点邻近的两个碱基有严格要求，而且对更远的碱基也有要求，因此，Ⅱ类酶既具有专一性，也具有专一性，一般在识别序列内切割。
切割的方式有，产生末端的DNA 片段或的DNA片段。
作用时需要作辅助因子，但不需要和。
6．完全的回文序列具有两个基本的特点，就是：(1)(2) 。
7．Ⅱ类限制性内切核酸酶一般识别个碱基，也有识别多序列的限制性内切核酸酶。
根据对限制性内切核酸酶识别序列的分析，限制性内切核酸酶识别序列具有倾向，即它们在识别序列中含量较高。
8．EcoK 是I 类限制性内切核酸酶，分子组成是α2 β2 γ，分子量300kDa。
在这些亚基中，α亚基具有作用；β亚基具有的活性；γ亚基的作用则是。
9．个体之间DNA 限制性片段长度的差异叫。
10．限制性内切核酸酶是按属名和种名相结合的原则命名的，第一个大写字母取自，第二、第三两个字母取自，第四个字母则用表示。
11．限制性内切核酸酶Acy I 识别的序列是5’—GRCGYG-3’，其中R ，Y 。
基因工程复习(含答案)
基因工程复习题一、名词解释：（10～20%）基因工程基因工程工具酶限制性内切酶限制性内切酶得Star活性PCR引物PCR扩增平台期DNA芯片基因组文库cDNA文库转化限制与修饰系统原位杂交：将细胞或组织得核酸固定保持在原来得位置上，然后用探针与之杂交得一种核酸分子杂交技术，该方法可较好地反映目得基因在细胞或组织中得分布与表达变化。
粘性末端：双链DNA被限制性内切酶切割后，形成得两条链错开几个碱基，而不就是平齐得末端。
Northern印迹杂交：将RNA进行变性电泳后，再转移到固相支持物上与探针杂交得一种核酸分子杂交技术，可用于检测目得基因得转录水平。
转位：一个或一组基因片段从基因组得一个位置转移到另一个位置得现象。
基因工程：在体外，用酶学方法将各种来源得DNA与载体DNA连接成为重组DNA，继而通过转化与筛选得到含有目得基因得宿主细胞，最后进行扩增得到大量相同重组DNA分子得过程称为基因工程，又称基因克隆、DNA克隆与重组DNA等。
目得基因：基因工程中，那些被感兴趣得、被选作研究对象得基因就叫作目得基因。
连接器：人工合成得一段含有某些酶切位点寡核苷酸片段，连接到目得基因得两端，便于基因重组中得切割与连接。
转化：受体细胞被导入外源DNA并使其生物性状发生改变得过程。
停滞效应：PCR中后期，随着目得DNA扩展产物逐渐积累，酶得催化反应趋于饱与，DNA 扩增产物得增加减慢，进入相对稳定状态，即为停滞效应，又称平台期。
逆转录PCR：以mRNA为原始模板进行得PCR反应。
PCR: 即聚合酶链式反应。
在模板，引物，4种dNTP与耐热DNA聚合酶存在得条件下，特异性地扩增位于两段已知序列之间得DNA区段地酶促合成反应。
α-互补（α-complementation）：指在M13噬菌体DNA或PUC质粒序列中，插入了lac启动子-操纵子基因序列以及编码β-半乳糖苷酶N-端145个氨基酸得核苷酸序列（又称α-肽），该序列不能产生有活性得β-半乳糖苷酶。
基因工程实验(答案)
——凯1.简述本学期从基因组DNA提取到重组质粒鉴定的实验流程（实验题目的总结）答：①基因组DNA的提取；②PCR扩增目的基因；③凝胶电泳分离纯化PCR扩增的DNA片段以及DNA的体外连接；④重组质粒的转化及转化子的筛选；⑤重组质粒的抽提；⑥重组质粒的酶切鉴定。
2.如何正确使用微量移液器（自己写的）答：①选取合适量程的移液器；②根据取液量设定量程；③安装（吸液）枪头；④按至第一档，将枪头垂直伸入液面下适当位置吸液；⑤按至第二档将液体打入容器；⑥弃掉枪头；⑦将量程调至最大，放回原处。
3.在琼脂糖凝胶电泳点样时，DNA通常和什么试剂混匀，其主要成分和作用是什么答：loading Buffer。
主要成分为溴酚蓝，二甲苯青和甘油。
溴酚蓝和二甲苯青起指示作用；甘油加大样品密度，从而沉降于点样孔中，以免浮出。
4.简述制作1%的琼脂糖凝胶电泳的操作步骤。
（题目有歧义）答：①取琼脂粉置于锥形瓶，量取50ml 1×TBE溶液于瓶中，微波炉加热至琼脂溶解；②将移胶板放入胶室中，选取合适梳子垂直安插在移胶板上方，待琼脂降温至55℃下后，缓慢导入该胶室里；③量取合适量1×TBE溶液导入洗净的电泳槽，并正确插好电泳线；④等凝胶凝固后，将梳子垂直拔出；⑤点样；⑥轻放移胶板至电泳槽的合适位置；⑦打开电泳仪的开关，调好参数，开始电泳；⑧一定时间后，停止电泳，取出凝胶板，然后经BE染色放入成像系统显色、观察。
5.琼脂糖凝胶电泳中DNA分子迁移率受哪些因素的影响（实验书P75）答：①样品DNA的大小和构象；②琼脂糖浓度；③电泳电场；④温度；⑤缓冲液；⑥嵌入染料的存在与否；6.在使用苯酚进行DNA抽提时应注意什么（实验书P31）答：注意不要吸取中间的变性蛋白质层。
7.在基因组DNA提取过程中常用酚、氯仿、异戊醇试剂，它们各有什么作用答：酚——是蛋白质变性，抑制DNA酶的降解作用；氯仿——除去脂类，同时加速有机相与水相的分层；异戊醇——降低表面张力，从而减少气泡的产生。
高考复习：人教版高中生物选修三现代生物技术专题一《基因工程》经典例题创新应用训练含答案解析
高中生物选修三现代生物技术专题全套教学案含单元检测专题一基因工程本专题包括基因工程的发展过程；DNA重组技术的基本工具；基因工程的基本操作程序；基因工程的应用；蛋白质工程的崛起等部分。
b5E2RGbCAP基因工程是一门20世纪70年代以来新兴的生物科学与工程技术相结合的科学。
也叫DNA重组技术。
它是按照人类的意愿，将某种基因有计划地转移到另一种生物中去的新技术。
现已成为生命科学中发展最快、最前沿的学科，有关生物工程的内容，己成为近几年生物高考的热点内容。
其中基因工程的操作工具和基因工程操作的基本步骤以及基因工程的成果及应用前景将是近年命题的新热点plEanqFDPw基因工程操作的三种基本工具，四项基本操作程序等内容将成为考查学生分析综合问题能力的材料；另外，针对生物工程在医药、食品、农林等高新技术产业中的应用，运用有关的生物知识指导生产和实践，对有关的生产方案、生产过程进行分析、综合评价，这也是高考的另一热点。
有关基因工程的备考，今后高考中可能涉及到本考题的热点问题，有如下几个方面：DXDiTa9E3d1•基因工程的基本步骤：目的基因的获取、基因表达运载体的构建、将目的基因导入受体细胞、目的基因表达的检测与鉴定几个步骤。
RTCrpUDGiT2•转基因技术的应用：（1）转基因动植物，如抗虫、抗病、抗逆、抗除草剂，抗倒伏的植物；产肉、产蛋量高、生长快、耐粗饲料的动物；此外，转基因动物为人类异体器官移植提供了可能。
（2）基因药物：如人造胰岛素、人造生长激素、溶血栓的尿激酶原等。
（3）基因治疗：美国对复合型免疫缺陷症的治疗；糖尿病的治疗：许多科学家希望利用基因工程手段将正常的合成胰岛素基因导入患者体内，并准确表达，以此来修复或替代失去正常功能的胰岛B细胞，从而维持机体血糖平衡。
（4）利用遗传工程培养转基因固氮绿色植物的展望。
地球上的固氮途径有三条：生物固氮、工业固氮、高能固氮。
其中，生物固氮是植物可利用氮的主要来源。
基因工程实验
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五、实验注意事项
1 用微波煮胶时，胶液的量不应超过三角瓶容量的 1/3，否则易溢出
2 煮好的胶应冷却至50℃左右时再倒，以免制胶板变 形，并减少漏胶的机会
加入等体积的氯仿， 12000rpm，离心5分钟，取上清
加入1/10体积的3MNaAc，加2倍体积的预冷的无水乙 醇，混匀。
置于-70℃冰箱约10min以上或者-20℃冰箱30min至 数个小时
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12000rpm离心15分钟（4℃），倒掉酒精，离心几秒，
用移液枪尽可能除去酒精
用0.5ml70 %酒精洗DNA沉淀一次，离心2分钟，倒掉 酒精
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当加入中性缓冲液调和时，变性的质粒 DNA又恢复到原来的构型，而染色体DNA 不能复性，它们之间交联形成不溶性网状 结构，并与细胞碎片、蛋白质、SDS等结 合沉淀下来。
通过离心沉淀，细胞碎片、染色体DNA 及大部分蛋白质等可被除去，而质粒DNA 及小分子量的RNA则留在上清液中。混杂 的RNA可用RNaseA消除。再用酚／氯仿 处理，可除残留蛋白质
真核生物的基因组DNA为双螺旋结构，在在碱性溶 液中，双链DNA氢键断裂，双螺旋结构遭破坏而发生 变形，而基因组DNA分子量相对较大，在碱性PH条 件下其线性的大分子量基因组DNA不能复性，而形成 缠连的网状结构与蛋白质等共沉淀。
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2 异丙醇和无水乙醇对核酸沉淀的优缺点 答：异丙醇和乙醇都能与与任意比例的水相混合。异 丙醇比较疏水，能很更好地沉淀核酸，乙醇可以去 盐，它比异丙醇更亲水，所以能去掉一些盐离子。 异丙醇沉淀量多，但杂质也多，增加了后续实 验风险。其优点为：所需容积小且速度快，适用于 浓度低，而体积大的DNA样品的沉淀。一般不需要 在低温条件下长时间放置。缺点为：易使盐类（如 NaCl、蔗糖）与DNA共沉淀；在DNA沉淀中异丙 醇难以挥发除去 乙醇是沉淀DNA乙醇是首选的有机溶剂，对盐 类沉淀少，DNA沉淀中所含的衡量乙醇易蒸发去处， 不影响以后的实验。在适当的盐浓度下，2倍样品 容积的95％乙醇可有效沉淀DNA。其缺点是总体积 较大。需在-20放置很长时间，30分钟-1小时，同 时DNA微溶于乙醇，使用乙醇沉淀会使部分DNA溶 解损失
高考生物《基因工程》真题练习含答案
高考生物《基因工程》真题练习含答案1．[2024·山东卷]关于“DNA的粗提取与鉴定”实验，下列说法正确的是()A．整个提取过程中可以不使用离心机B．研磨液在4 ℃冰箱中放置几分钟后，应充分摇匀再倒入烧杯中C．鉴定过程中DNA双螺旋结构不发生改变D．仅设置一个对照组不能排除二苯胺加热后可能变蓝的干扰答案：A解析：研磨后，可以将研磨液过滤到烧杯中，在4 ℃冰箱中放置几分钟后，再取上清液，可以不使用离心机，A正确，B错误。
鉴定过程中的沸水浴加热可使DNA双螺旋结构发生改变，C错误。
该实验中，为排除二苯胺加热后可能变蓝对实验结果造成干扰，可设置加二苯胺不加DNA的对照组，D错误。
2．[2023·新课标卷]某同学拟用限制酶(酶1、酶2、酶3和酶4)、DNA连接酶为工具，将目的基因(两端含相应限制酶的识别序列和切割位点)和质粒进行切割、连接，以构建重组表达载体。
限制酶的切割位点如图所示。
下列重组表达载体构建方案合理且效率最高的是()A．质粒和目的基因都用酶3切割，用E.coli DNA连接酶连接B．质粒用酶3切割、目的基因用酶1切割，用T4 DNA连接酶连接C．质粒和目的基因都用酶1和酶2切割，用T4 DNA连接酶连接D．质粒和目的基因都用酶2和酶4切割，用E.coli DNA连接酶连接答案：C解析：只用一种限制酶切割质粒和目的基因，会使质粒和目的基因发生自身环化或者使目的基因在质粒中反向连接，A错误；用酶1切割目的基因，产生的是黏性末端，用酶3切割质粒，产生的是平末端，无法连接，B错误；质粒和目的基因都用酶1和酶2切割后，可使用T4 DNA连接酶连接，使目的基因定向插到质粒中，C正确；酶2和酶4切割后产生的黏性末端相同，易导致目的基因和质粒自身环化或者使目的基因在质粒中反向连接，并且用酶4切割会破坏标记基因，D错误。
3.[2023·浙江6月]某研究小组利用转基因技术，将绿色荧光蛋白基因(GFP)整合到野生型小鼠Gata3基因一端，如图甲所示。
基因工程测试题(附解析)
基因工程测试题（附解析）一、基础题点练1．(2019·徐州模拟)已知限制性内切酶Xma Ⅰ和Sma Ⅰ的识别序列分别为C CCGGG 和CCC GGG。
有关这两种酶及应用的叙述，错误的是()A．这两种酶作用的底物都是双链DNAB．DNA 中出现这两种酶识别序列的几率不同C．Xma Ⅰ切割DNA 形成的黏性末端是—GGCCD．使用这两种酶时需注意控制反应温度、时间等解析：选B 限制酶作用的底物是双链DNA 分子；这两种限制酶作用的核苷酸序列相同，所以这两种识别序列在DNA 中出现的的几率相同；根据碱基互补配对原则，CCCGGG 的互补链是GGGCCC，并根据Xma Ⅰ的切割位点可知，切割后的黏性末端是—CCGG；温度能影响酶的活性，所以使用酶时需要注意控制反应温度和时间等。
2．如图表示的是三种黏性末端，下列说法正确的是( ) ↓↓A．图中所示黏性末端是由同种限制酶切割形成B．若图甲中的G 碱基处发生突变，限制酶可能无法识别该切割位点C．图中所示黏性末端是限制酶断开氢键形成D．目前常用的运载体有质粒、噬菌体和动植物病毒等几类原核生物GAATTC 解析：选B 产生甲黏性末端的限制酶的识别序列为CTTAAG =====，产生乙黏性末端的限制酶CAATTG CTTAAG 的识别序列为GTTAAC =====，产生丙黏性末端的限制酶的识别序列为GAATTC =====，可见甲、乙、丙黏性末端是由3种限制酶作用产生的；限制酶具有专一性，能够识别双链DNA 分子的某种特定核苷酸序列，如果甲中的G 发生突变，限制酶可能无法识别该切割位点；图中所示黏性末端是限制酶断开磷酸二酯键形成的；质粒是环状DNA 分子，噬菌体和动植物病毒都没有细胞结构，它们都不属于原核生物。
3．下列关于蛋白质工程的叙述，错误的是()A．蛋白质工程的基础是基因工程B．蛋白质工程遵循的原理包括中心法则C．蛋白质工程是在分子水平上对蛋白质分子直接进行操作，定向改变分子的结构D．蛋白质工程能产生出自然界中不曾存在过的新型蛋白质分子解析：选C 蛋白质工程是通过基因修饰或基因合成对现有蛋白质进行改造，或合成新的蛋白质，故蛋白质工程的基础是基因工程；蛋白质工程遵循的原理包括中心法则；蛋白质工程是通过改造基因来实现对蛋白质分子的改造的；蛋白质工程能产生出自然界中不曾存在过的新型蛋白质分子。
基因工程答案
1.PCR反应的引物有何种要求?PCR引物设计时需注意哪些方面？ (15 分)PCR (Polymerase Chain Reaction)是聚合酶链式反应的简称。
PCR反应对引物的要求是：1.浓度一般为0.1〜0.5^mol/L,浓度过高会引起错配和非特异扩增，浓度过低则得不到产物或产量过低。
2.引物长度一般18〜30个碱基，引物过长或过短都会降低特异性。
3.3’末端一定要与模板DNA配对，末位碱基最好选用C、Go4.引物G+C约占45〜55%，碱基应尽量随机分布，避免嘧啶或嘌吟堆积，两引物之间不应有互补链存在，不能与非目的扩增区有同源性。
注意事项：1.引物最好在模板cDNA的保守区内设计。
DNA序列的保守区是通过物种间相似序列的比较确定的。
在NCBI上搜索不同物种的同一基因，通过序列分析软件(比如DNAman)比对(Alignment)，各基因相同的序列就是该基因的保守区。
2.引物长度一般在18~30碱基之间。
引物长度(primer length)常用的是18-27 bp，但不应大于38,因为过长会导致其延伸温度大于74°C，不适于Taq DNA聚合酶进行反应。
3.引物GC含量在45〜55%之间，Tm值最好接近72C。
GC含量(composition)过高或过低都不利于引发反应。
上下游引物的GC含量不能相差太大。
另外，上下游引物的Tm值(melting temperature)是寡核苷酸的解链温度，即在一定盐浓度条件下，50%寡核苷酸双链解链的温度。
有效启动温度，一般高于Tm值5~10C。
若按公式Tm= 4 (G+C) +2 (A+T)估计引物的Tm 值，则有效引物的Tm为55~80C，其Tm值最好接近72C以使复性条件最佳。
4.引物3’端要避开密码子的第3位。
如扩增编码区域，引物3’端不要终止于密码子的第3位，因密码子的第3位易发生简并，会影响扩增的特异性与效率。
5.引物3’端不能选择A，最好选择To引物3’端错配时，不同碱基引发效率存在着很大的差异，当末位的碱基为A时，即使在错配的情况下，也能有引发链的合成，而当末位链为T时，错配的引发效率大大降低，G、C错配的引发效率介于A、T之间，所以3’端最好选择To6.碱基要随机分布。
课时作业36 基因工程(含答案详解)
因进入酵母菌细胞内，并且在其细胞内维持稳定和表达的过程，称为 转化 。在
表达过程中，启动子需与 RNA 聚合酶 识别和结合，从而驱动转录过程。
(3)在体液免疫过程中，白细胞介素是由 T 淋巴 细胞分泌的，为了能成功
表达出白细胞介素，不使用细菌，而使用酵母菌细胞作为受体细胞，可能原因
是 细菌细胞中无内质网和高尔基体等加工白细胞介素的细胞器
据图回答下列问题：
(1)在该实验中为构建基因表达载体，用 Sac Ⅰ、Xba Ⅰ切下 CBFl 基因后，对质 粒载体进行切割的限制酶是 Sac Ⅰ、Xba Ⅰ ，理由是 用 相 同 限 制 酶 切 割 来
源不同的 DNA 后，可产生相同的末端
。
(2) 连 接 CBFl 基 因 到 该 质 粒 载 体 后 ， 作 为 基 因 表 达 载 体 的 组 成 还 必 须 有 启动子和终止子 。将重组质粒导入香蕉细胞最常用的方法是 农杆菌转化法 。
6．(2021·河南洛阳联考)回答下列与基因工程相关的问题： (1)自然界中原核生物容易受到外源 DNA 的入侵，但依然可以达到保护自身的目 的，这为人们寻找 限制酶 (答基因工程的操作工具)提供了启示。质粒作为基因 工程的载体，应具备的基本条件：能够自我复制、具有标记基因和一个至多 个 限制酶切割位点 。 (2)利用 PCR 技术扩增蜘蛛丝基因前，需根据目的基因的核苷酸序列设计 2 种引 物，进行 PCR 时需加热至 90～95 ℃，然后冷却至 55～60 ℃，此操作的目的 是 将 DNA 解链，然后使引物结合到互补 DNA 链上 。
解析：本题考查基因工程的有关知识。根据“八氢番茄红素合酶(其基因用 psy 表示) 和胡萝卜素脱饱和酶(其基因用 crtl 表示)参与 β－胡萝卜素的合成”可知，重组质粒中的 目的基因含有 psy 和 crtl，A 正确；构建重组质粒需要限制酶、DNA 连接酶，不需要核酸 酶，B 错误；可通过基因枪法、花粉管通道法将目的基因导入水稻受体细胞，C 错误；PCR 技术可扩增特定基因，但要检测目的基因是否表达应该用抗原—抗体杂交法，D 错误。
第18讲 基因工程(练习)(解析版)
第18讲基因工程目录01 基因工程101 基因工程1．（不定项）聚合酶链式反应（PCR）是一种体外扩增DNA片段的技术。
某DNA片段的PCR反应程序如图所示。
下列叙述错误的是（）A．预变性可促进模板DNA边解旋边复制B．退火是让解旋状态模板DNA恢复双螺旋C．延伸结束后，新片段中的引物将被切除D．终延伸可使目的基因的扩增更加充分【答案】ABC【分析】PCR过程为①变性，当温度超过90①时，氢键断裂，双链DNA解聚为单链；①复性，当温度降低到50①左右时，两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合；①延伸，温度上升到72①左右时，溶液中的四种脱氧核苷酸在耐高温的DNA聚合酶的作用下，根据碱基互补配对原则合成新的DNA链。
【详解】A、预变性的目的是破坏DNA中可能存在的较难破坏的复杂二级结构，使DNA充分变性，A错误；B、退火是让两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合，B错误；C、延伸结束后，新片段中不会切除引物，C错误；D、终延伸过程是为了让引物完全延伸并让单链产物完全复性形成双链结构，可使目的基因的扩增更加充分，D正确。
故选ABC。
2．R型细菌生长至一定阶段会分泌感受态因子，诱导感受态特异蛋白质的表达；使细胞表面的DNA结合蛋白及核酸酶裸露，具有与DNA结合的活性。
S型细菌中控制荚膜形成的S基因吸附在R型细菌上即可整合到R型细菌的基因组中，完成转化。
据此解释格里菲思实验中只有少数R型细菌发生转化的原因，错误的是（）A．S基因只有从加热杀死的S型细菌中释放出来才能促成R型细菌的转化B．只有少数的S基因可吸附在R型细菌上，完成部分R型细菌的转化C．蛋白质和DNA对高温的耐受力不同是导致蛋白质不是转化因子的原因D．R型细菌的转化与S基因的数量、R型细菌的状态有关【答案】A【详解】A、S基因从获得S型细菌中释放出来也能促成R型细菌的转化，A错误；B、因为R型细菌只有进入感受态才相对比较容易接受外源基因，而即使进入了感受态，也会受到外源基因大小等各种因素的影响，从而只有少数的S基因可吸附在R型细菌上，完成部分R型细菌的转化，B正确；C、蛋白质空间结构不稳定容易受到高温等因素的影响而变性，DNA空间结构为双螺旋结构较稳定；蛋白质和DNA对高温的耐受力不同是导致蛋白质不是转化因子的原因，C正确；D、转化效率受外源基因大小、数量、细菌密度及生长状况等因素的影响，故R型细菌的转化与S基因的数量、R型细菌的状态有关，D正确。
(整理)基因工程答案
基因工程试题答案选择题有多选项，需要同学们自己确定对错，只有几道是多选。
一、单项选择题（共计150题）1.因研究重组DNA技术而获得诺贝尔奖的科学家是( c )(a)A.Kornberg(b)W.Gilbert(c)P.Berg(d)B.McClintock2.第一个作为重组DNA载体的质粒是( c )(a)pBR322(b)ColEl(c)pSCl01(d)pUCl83.关于宿主控制的限制修饰现象的本质，下列描述中只有( b )不太恰当。
(a)由作用于同一DNA序列的两种酶构成(b)这一系统中的核酸酶都是Ⅱ类限制性内切核酸酶(c)这一系统中的修饰酶主要是通过甲基化作用对DNA进行修饰(d)不同的宿主系统具有不同的限制-修饰系统4.Ⅱ型限制性内切核酸酶：( b )(a)有内切核酸酶和甲基化酶活性且经常识别回文序列(b)仅有内切核酸酶活性，甲基化酶活性由另外一种酶提供(c)限制性识别非甲基化的核苷酸序列(d)有外切核酸酶和甲基化酶活性(e)仅有外切核酸酶活性，甲基化酶活性由另外一种酶提供5.下面有关限制酶的叙述哪些是正确的?( bde，c待定)(a)限制酶是外切酶而不是内切酶(b)限制酶在特异序列(识别位点)对DNA进行切割(c)同一种限制酶切割DNA时留下的末端序列总是相同的（星活性怎么办？？？不确定）(d)一些限制酶在识别位点内稍有不同的点切割双链DNA，产生黏末端(e)一些限制酶在识别位点内相同的位置切割双链DNA，产生平末端6.第一个被分离的Ⅱ类酶是：( c )(a)EcoK(b)HindⅢ(c)HindⅡ(d)EcoB7.在下列进行DNA部分酶切的条件中，控制哪一项最好：( b )(a)反应时间(b)酶量(c)反应体积(d)酶反应的温度8.在下列试剂中，那一种可以螯合Ca2+离子?( d )(a)EDTA (b)柠檬酸钠(c)SDS (d)EGTA9.在下列工具酶中，那一种可以被EGTA抑制活性?( d )(a)S1单链核酸酶(b)末端转移酶(c)碱性磷酸酶(d)Bal 31核酸酶（钙离子依赖酶）10.限制性内切核酸酶可以特异性地识别：( b )(a)双链DNA的特定碱基对(b)双链DNA的特定碱基序列(c)特定的三联密码(d)以上都正确11.限制性核酸内切酶切割DNA后产生：aA.5′磷酸基和3′羟基基团的末端B.5′磷酸基和3′磷酸基团的末端C.5′羟基和3′羟基基团的末端D.3′磷酸基和5′羟基基团的末端E.以上都不是12. cDNA是指：aA.经逆转录合成的与RNA互补的单链DNAB.经逆转录合成的与DNA互补的单链RNAC.经逆转录合成的与DNA互补的DNAD.经转录合成的与DNA互补的RNAE.经转录合成的与DNA互补的DNA13.有关质粒的描述错误的是：eA.小型环状双链DNAB.小的只有2-3 kb，大的可达数百kbC.能在宿主细胞能自主复制D.多数带有一些抗药性基因E.只有一个限制性核酸内切酶位点14.可识别并切割特异DNA序列的称：bA.非限制性核酸外切酶B.限制性核酸内切酶C.限制性核酸外切酶D.非限制性核酸内切酶E.DNA酶（DNase）15.对基因载体的描述，下列哪个不正确：A.都可以转入宿主细胞B.都有限制性核酸内切酶的识别位点C.都可以连接目的基因D.都是环状双链DNA分子E.都有筛选标志16.在已知某一序列信息的情况下，获取该目的基因最快捷的方法是：A.基因组文库法B.化学合成法C.cDNA文库法D.PCR法(需要有目的片段才行)E.序列测定17.在重组DNA技术领域所说的分子克隆是指：A.建立多克隆抗体B.建立单克隆抗体C.有性繁殖DNAD.无性繁殖DNAE.构建重组DNA分子18.下列哪种方法不能作为表达载体导入真核宿主的方法：A.电穿孔B.磷酸钙转染C.脂质体转染D.氯化钙转染E.显微注射19.表达人类蛋白质的最理想的细胞体系是：A.酵母表达体系B.原核表达体系C.E.coli表达体系D.昆虫表达体系E.哺乳类细胞表达体系20.某一生物的基因组是指：A.该生物整套遗传信息B.该生物可转录基因C.该生物非转录部分D.该生物特定的遗传信息E.该生物可表达的基因21.下列不是细菌基因转移与重组方式的是：A.接合B.转化C.转导D.细胞融合（真核）E.转换22. Ti质粒：( )(a)可从农杆菌转到植物细胞中(b)作为双链DNA被转移(c)在植物中导致肿瘤(d)介导冠瘿碱的合成，作为细菌的营养物和植物的生长激素(e)需要细菌的vir基因帮助转移(f)在植物细胞中作为染色体外质粒23.黏粒(cosmid)是一种人工建造的载体，( )(a)它具有COS位点，因而可进行体外包装(b)它具有质粒DNA的复制特性(c)进入受体细胞后，可引起裂解反应(d)进入受体细胞后，可引起溶源化反应24.有两种确定核酸中核苷酸序列的方法：化学序列分析法(Maxam-Glbert)和酶学序列分析法(Sanger)。
智慧树答案基因工程原理知到课后答案章节测试2022年
第一章1.基因工程发展过程中技术上的三个重大发现（）。
答案:限制性内切酶和DNA连接酶的发现;载体的使用;逆转录酶及抗性标记的发现2.世界上第一个成功的基因工程实验是使用的是什么的DNA（）。
答案:λ噬菌体的DNA;猿猴病毒SV40DNA3.成功导入外源基因就意味着基因工程实验的成功。
（）答案:错4.基因工程的两个基本特点是分子水平上的操作和细胞水平上的表达。
( )答案:对5.孟德尔是现代遗传学的奠基人，他发现了基因的连锁和互换定律。
（）答案:错第二章1.PCR在循环几次时才会出现两个引物之间的目的片段（）。
答案:3;2.PCR反应中，所设计的引物长度一般为（）。
答案:16-30bp3.RACE技术可用于（）。
答案:扩增基因末端序列4.DNA提取时，使DNA沉淀的物质是（）。
答案:酒精5.为了防止RNA降解，所用的枪头管子等均需用（）处理。
答案:DEPC水第三章1.Klenow酶于DNA聚合酶相比前者丧失了（）。
答案:5’–3’ 外切酶活性2.下列对逆转录酶描述正确的是（）。
答案:RNA指导的DNA聚合酶3.Ⅱ型限制性核酸内切酶有内切酶和甲基化酶两种酶活性且经常识别回文序列。
（）答案:错4.为了防止DNA的自我环化可用碱性磷酸酶除去DNA分子中的5’-磷酸集团。
（）答案:对5.大多数大肠杆菌中存在的三种位点特异性的DNA甲基化酶（）。
答案:DNA胞嘧啶甲基化酶;EcoK I甲基化酶;DNA腺嘌呤甲基化酶dam第四章1.下列哪种克隆载体对外源DNA的容载量最大（）。
答案:酵母人工染色体YAC2.噬菌体载体能承载较大的外源DNA的片段，甚至大于自身大小的DNA片段。
（）答案:对3.柯斯质粒进入受体细胞后，可引起溶源化反应。
（）答案:错4.根据质粒在宿主细胞中的拷贝数的多少可以分为严紧控制型质粒和松弛控制性质粒。
（）答案:对5.在利用LacZ失活得到显色反应筛选法中，IPTG的作用是（）。
答案:诱导宿主α肽的合成第五章1.在cDNA技术中，所形成的发夹环可用（）去除。
基因工程练习题（附答案）
基因⼯程练习题（附答案）基因⼯程练习题1、在基因⼯程中使⽤的限制性核酸内切酶，其作⽤是( )A、将⽬的基因从染⾊体上切割出来B、识别并切割特定的DNA核苷酸序列C、将⽬的基因与运载体结合D、将⽬的基因导⼊受体细胞2、基因⼯程中常⽤细菌等原核⽣物作受体细胞的原因不包括( )A、繁殖速度快B、遗传物质相对较少C、多为单细胞，操作简便D、DNA为单链，变异少3、基因⼯程是DNA分⼦⽔平的操作，下列有关基因⼯程的叙述中，错误的是( )A、限制酶只⽤于切割获取⽬的基因B、载体与⽬的基因可以⽤同⼀种限制酶处理C、基因⼯程所⽤的⼯具酶是限制酶，DNA连接酶D、带有⽬的基因的载体是否进⼊受体细胞需检测4、运⽤现代⽣物技术，将苏云⾦芽孢杆菌的抗⾍基因整合到棉花细胞中，为检测实验是否成功，最⽅便的⽅法是检测棉花植株是否有( )A、抗⾍基因B、抗⾍基因产物C、新的细胞核D、相应性状5、转基因动物转基因时的受体细胞是( )A、受精卵B、精细胞C、卵细胞D、体细胞6、基因⼯程中常见的载体是( )A、质体B、染⾊体C、质粒D、线粒体7、⽔母发光蛋⽩由236个氨基酸构成，其中Asp、Gly、Ser构成发光环，现已将这种蛋⽩质的基因作为⽣物转基因的标记，在转基因技术中，这种蛋⽩质的作⽤是( ) A、促使⽬的基因导⼊宿主细胞中B、促使⽬的基因在宿主细胞中复制C、使⽬的基因容易被检测出来D、使⽬的基因容易成功表达8、运⽤现代⽣物技术的育种⽅法，将抗菜青⾍的Bt基因转移到优质油菜中，培育出转基因抗⾍的油菜品种，这⼀品种在⽣长过程中能产⽣特异的杀⾍蛋⽩质，对菜青⾍有显著抗性，能⼤⼤减轻菜青⾍对油菜的危害，提⾼油菜产量，减少农药使⽤，据以上信息，下列叙述正确的是( )A、Bt基因的化学成分是蛋⽩质B、Bt基因中有菜青⾍的遗传物质C、转基因抗⾍油菜能产⽣杀⾍蛋⽩是由于具有Bt基因D、转基因抗⾍油菜产⽣的杀⾍蛋⽩是⽆机物9、⼈的糖蛋⽩必须经内质⽹和⾼尔基体进⼀步加⼯合成，通过转基因技术，可以使⼈的糖蛋⽩基因得以表达的受体细胞是( )A、⼤肠杆菌B、酵母菌C、T噬菌体 D、质粒DNA410、不属于质粒被选为基因运载体的理由是（）A．能复制 B.有多个限制酶切点C．具有标记基因D．它是环状DNA11．下列关于各种酶作⽤的叙述，不正确的是（）A．DNA连接酶能使不同脱氧核苷酸的磷酸与脱氧核糖连接B．RNA聚合酶能与基因的特定位点结合，催化遗传信息的转录C．⼀种DNA限制酶能识别多种核苷酸序列，切割出多种⽬的基因D．胰蛋⽩酶能作⽤于离体的动物组织，使其分散成单个细胞12、治疗⽩化病、苯丙酮尿症等⼈类遗传疾病的根本途径是A、⼝服化学药物B、注射化学药物C、利⽤辐射或药物诱发致病基因突变D、采取基因疗法13．下列与基因⼯程⽆关的是( )A、培养利⽤“⼯程菌”⽣产胰岛素B、基因治疗C、产⽣⼈胰岛素的⼤肠杆菌D、杂交育种14.基因⼯程的设计施⼯是在什么⽔平上进⾏的 ( )A.细胞B.细胞器C. 原⼦D.分⼦15．⼈胰岛细胞能产⽣胰岛素，但不能产⽣⾎红蛋⽩，据此推测胰岛细胞中（）A．只有胰岛素基因B．⽐⼈受精卵的基因要少C．既有胰岛素基因，也有⾎红蛋⽩基因和其他基因D．有胰岛素基因和其他基因，但没有⾎红蛋⽩基因16、能够使植物体表达动物蛋⽩的育种⽅法是（）A、单倍体育种B、杂交育种C、基因⼯程育种D、多倍体育种17、要彻底治疗⽩化病必须采⽤（）A．基因治疗 B．医学⼿术C．射线照射 D．⼀般药物18、下列哪项不是基因⼯程中经常使⽤的⽤来运载⽬的基因的载体（）A、细菌质粒B、噬菌体C、动植物病毒D、细菌核区的DNA19、在基因⼯程中，作为基因运输⼯具的运载体，下列特征除哪项外，都是运载体必须具备的条件（）A、能够在宿主细胞中复制，并稳定地保存B、具有多个限制酶切点C、必须是细菌的质粒或噬菌体D、具有某些标记基因20、1993年，我国科学⼯作者培育成的抗棉铃⾍的转基因抗⾍棉，其抗⾍基因的来源（）A.普通棉花的基因突变B.棉铃⾍变异形成的致死基因C.寄⽣在棉铃⾍体内的线⾍D.苏云⾦芽孢杆菌体内的抗⾍基因21．正确表⽰基因操作“四步曲”的是（）①提取⽬的基因②⽬的基因导⼊受体细胞③⽬的基因与运载体的结合④⽬的基因的检测和表达A.①②③④B.④①③②C.①③②④D.③①②④22．现有⼀长度为1000碱基对（bp）的DNA分⼦，⽤限制性核酸内切酶EcoRI酶切后得到的DNA分⼦仍是1000bp，⽤KpnI单独酶切得到400bp和600bp两种长度的DNA分⼦，⽤EcoRI、KpnI同时酶切后得到200bp和600bp两种长度的DNA分⼦。
(完整)高中生物选修3第一章基因工程习题及答案
高中生物选修3第一章基因工程习题1. SARS 病毒能引起非典型肺炎，医生在治疗实践中发现，非典病人治愈后，其血清可用于治疗其他非典病人。
有三位科学家分别从三个不同的方面进行了研究，其研究的方向如下图所示。
请根据下图回答：SARS 病毒 [丙的研究] 抽取血清 蛋白质X[乙的研究] 注射 注射灭活或 培养 非典病人B 治愈的病人B 非典病人D减毒处理动物实验 健康人C 健康人C 健康人C 治愈的病人D（1）从免疫学的角度看，SARS 病毒对于人来讲属于 ，治愈的病人A 的血清中因为含有 ，所以可用来治疗“非典”病人B 。
（2）甲的研究中，所合成或生产的蛋白质X 是 ，它可以通过化学的方法合成，也可以通过生物学方法—— 技术生产。
（3）乙的研究目的主要是制造出 以保护易感人群。
图中使健康人C 获得抵抗“非典”病毒能力的过程，属于免疫学应用中的 免疫。
（4）图中丙主要研究不同国家和地区SARS 病毒的异同，再按照免疫学原理，为研究一种或多种 提供科学依据。
2. 聚合酶链式反应(PCR 技术)是在实验室中以少量样品DNA 制备大量DNA 的生化技术，反应系统中包括微量样品DNA 、DNA 聚合酶、引物、足量的4种脱氧核苷酸及ATP 等。
反应中新合成的DNA 又可以作为下一轮反应的模板，故DNA 数以指数方式扩增，其简要过程如右图所示。
（1）某个DNA 样品有1000个脱氧核苷酸，已知它的一条单链上碱基A:G:T:C=1:2:3:4，则经过PCR 仪五次循环后，将产生 个DNA 分子，其中需要提供胸腺嘧啶脱氧核苷酸的数量至少是 个。
（2）分别以不同生物的DNA 样品为模板合成的各个新DNA 之间存在差异，这些差异是。
（3）请指出PCR 技术与转录过程的三个不同之处：① 。
② 。
③ 。
3. 逆转录病毒的遗传物质RNA 能逆转录生成DNA ，并进一步整合到宿主细胞的某条染色体中。
用逆转录病毒作为运载体可用于基因治疗和培育转基因动物等。
高考生物专题复习《基因工程》含答案
高考生物专题复习《基因工程》【考点梳理.逐个击破】一、基因工程的操作工具1．限制性核酸内切酶(简称限制酶)(1)来源：主要是从原核生物中分离纯化出来的。
(2)作用：识别双链DNA 分子的某种特定的核苷酸序列并切开特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键。
(3)结果：产生黏性末端或平末端。
2．DNA 连接酶3．载体(1)作用：携带外源DNA 片段进入受体细胞。
(2)种类：质粒、λ噬菌体的衍生物、动植物病毒等。
(3)条件⎩⎪⎨⎪⎧能自我复制有一个至多个限制酶切割位点有特殊的标记基因二、基因工程的基本操作程序 1．目的基因的获取(1)目的基因：主要是指编码蛋白质的基因，也可以是具有调控作用的因子。
(2)获取方法⎩⎪⎨⎪⎧从基因文库中获取利用PCR 技术扩增通过化学方法人工合成2．基因表达载体的构建 (1)构建基因表达载体的目的①使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代。
②使目的基因能够表达和发挥作用。
(2)基因表达载体的组成：目的基因、启动子、终止子及标记基因等。
3．目的基因导入受体细胞微生物细胞感受态细胞法(Ca2＋处理法)4．目的基因的检测与鉴定检测目的检测方法判断标准目的基因是否插入转基因生物的DNA DNA分子杂交技术是否出现杂交带目的基因是否转录出了mRNA 分子杂交技术是否出现杂交带目的基因是否翻译出蛋白质抗原—抗体杂交技术是否出现杂交带个体水平的检测如抗虫、抗病的接种实验是否表现出相应的特性三、基因工程的应用及蛋白质工程1．基因工程的应用(1)动物基因工程：提高动物生长速度从而提高产品产量；改善畜产品品质；用转基因动物生产药物；用转基因动物作器官移植的供体等。
(2)植物基因工程：培育抗虫转基因植物(如抗虫棉)、抗病转基因植物(如转基因烟草)和抗逆转基因植物(如抗寒番茄)；利用转基因改良植物的品质(如新花色矮牵牛)。
2．基因诊断与基因治疗(1)基因诊断：又称为DNA诊断，是采用基因检测的方法来判断患者是否出现了基因异常或携带病原体。
基因工程章末检测附答案
章末检测1．下列有关人胰岛素基因表达载体的叙述，正确的是()A．表达载体中的胰岛素基因可通过人肝细胞mRNA反转录获得B．表达载体的复制和胰岛素基因的表达均启动于复制原(起)点C．借助抗生素抗性基因可将含胰岛素基因的受体细胞筛选出来D．启动子和终止密码子均在胰岛素基因的转录中起作用2．某科学家从细菌中分离出耐高温淀粉酶(Amy)基因a，通过基因工程的方法，将基因a 与载体结合后导入马铃薯植株中，经检测发现Amy在成熟块茎细胞中存在。
下列有关这一过程的叙述不正确的是()A．获取基因a的限制酶的作用部位是图中的①B．连接基因a与载体的DNA连接酶的作用部位是图中的②C．基因a进入马铃薯细胞后，可随马铃薯DNA分子的复制而复制，传给子代细胞D．通过该技术人类实现了定向改造马铃薯的遗传性状3．以下甲、乙两图表示从细菌细胞中获取目的基因的两种方法，以下说法中错误的是()A．甲方法可建立该细菌的基因组文库B．乙方法可建立该细菌的cDNA文库C．甲方法要以脱氧核苷酸为原料D．乙方法需要逆转录酶参与4．在判断抗虫基因是否成功转入棉花基因组的方法中，不属于分子检测的是()A．观察害虫吃棉叶是否死亡B．检测目的基因片段与DNA探针能否形成杂交带C．检测目的基因转录形成的mRNA与DNA探针能否形成杂交带D．检测目的基因表达产物蛋白质能否与特定抗体形成杂交带5．右图表示细胞膜上乙酰胆碱(一种神经递质)受体基因的克隆技术操作过程，下列相关分析中正确的是()A．获得该mRNA的最佳材料是受精卵B．构建基因表达载体最可能使用的载体是大肠杆菌C．完成过程①②必不可少的酶分别是逆转录酶、DNA聚合酶D．探针筛选的目的是淘汰被感染的细菌，获得未被感染的细菌6．应用基因工程技术诊断疾病的过程中，必须使用基因探针才能达到检测疾病的目的。
这里的基因探针是指()A．用于检测疾病的医疗器械B．用放射性同位素或荧光分子等标记的DNA分子C．合成β－珠蛋白的DNAD．合成苯丙氨酸羟化酶的DNA片段7．下列关于蛋白质工程的叙述，正确的是()A．将一种生物的基因转移到另一种生物体内，使生物表现出新的性状B．干扰素是动物体内的一种蛋白质，可用于治疗病毒的感染和癌症C．由于赖氨酸抑制天冬氨酸激酶和二氢吡啶二羧酸合成酶的活性，所以赖氨酸产量难以提高D．蛋白质工程能产生自然界已有的蛋白质8．下图表示一项重要的生物技术，对图中物质a、b、c、d的描述，正确的是()A．通常情况下，a与d需要用同一种限制酶进行切割B．b能识别特定的核苷酸序列，并将A与T之间的氢键切开C．c连接双链间的A和T，使黏性末端处碱基互补配对D．b代表的是限制性核酸内切酶，c代表的是RNA聚合酶9．下列关于限制酶的叙述中，错误的是()A．它能在特殊位点切割DNA分子B．同一种限制酶切割不同的DNA产生的黏性末端能够很好地进行碱基配对C．它能任意切割DNA，从而产生大量DNA片段D．每一种限制酶只能识别特定的核苷酸序列10．现有一长度为1 000碱基对(bp)的DNA分子，用限制性核酸内切酶Eco RⅠ单独酶切后得到的DNA分子仍是1 000 bp，用KpnⅠ单独酶切得到400 bp和600 bp两种长度的DNA 分子，用Eco RⅠ、KpnⅠ同时酶切后得到200 bp和600 bp两种长度的DNA分子。
基因工程实验
实验一从植物中提取DNA【实验目的】1、掌握提取DNA的技术及原理2、学习DNA提取的方法【实验原理】首先研磨粉碎的植物组织在LP缓冲液裂解完全，基因组DNA被释放出来。
在加入DA缓冲液沉淀后，去除大部分杂质。
然后，由于加入的P Binding缓冲液中适当的盐分及pH值得作用下，DNA被特异吸附于Biospin膜上。
通过洗涤，可将蛋白质等残留的杂质去除。
最后使用Elution Buffer将DNA从膜上洗脱下来，从而获得基因组DNA。
【实验材料】自己采取某种植物的叶子1. 实验试剂植物DNA提取试剂盒【实验操作】1.剪取约0.2-0.5g叶片于冷研钵后，迅速倒入液氮用玻棒研磨成为粉末，分装到1.5ml的离心管中。
2.加入450μl LP缓冲液，并混合均匀。
3.于65℃环境下温浴15分钟，温浴中可间或震荡离心管2-3次，然后移出。
4.加入150μlDA缓冲液，混合均匀后于冰浴中放置5分钟。
5.将混合物全部转移至Shredder spin colum，于离心机中3分钟。
6. 将滤液转移至一个新的1.5ml离心管。
7. 加750μl P Binding缓冲液，并混合均匀。
8. 将混合液转移至Spin column。
于离心机离心1分钟，弃去接液管中的液体。
9. 向Spin column中加入500μl的G Binding Buffer。
离心30秒，弃去接液管中液体。
10. 向Spin column中加入600μl的Wash Buffer。
离心30秒，弃去接液管中液体。
11. 重复步骤10一次。
12. 再次将Spin column离心1分钟，并将Spin column 转移至一个新的1.5ml离心管中。
13. 向Spin column中加入100μl的 Elution Buffer，并于室温温育1分钟。
离心1分钟，取离心管中的液体含有DNA。
实验二 PCR扩增 DNA【实验目的】1、掌握 PCR扩增 DNA的技术及原理2、学习 PCR扩增仪的使用【实验原理】聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）是一种体外 DNA扩增技术，1985年由 Mullis 等人创立。
（整理）基因工程试验.
（整理）基因⼯程试验.基因⼯程实验流程实验⼀丹参总DNA的提取实验⽬的：掌握从植物或动物的组织（细胞）中抽提DNA的⽅法。
实验材料：丹参叶⽚实验器材：台式离⼼机，恒温⽔浴锅，电泳仪，研钵和杵，离⼼管，微量移液器，枪头实验步骤：第⼀次使⽤前请先在漂洗液WB和结合液PQ中加⼊指定量的⽆⽔⼄醇，充分混匀，加⼊后请及时在⽅框打钩标记已加⼊⼄醇，以免多次加⼊!取所需适量裂解液PL放置在65℃预热，使⽤前加⼊β-巯基⼄醇到终浓度2%。
1.取适量植物组织（新鲜组织100mg 或⼲重组织30 mg）在研钵中加⼊液氮充分碾磨成细粉。
2.转移细粉到⼀个1.5ml离⼼管，不要解冻，加600µl 65℃预热的裂解液PL (确认已加⼊β-巯基⼄醇⾄2%)，剧烈涡旋振荡混匀，⽤⼤⼝径枪头轻柔吹打帮助裂解。
如果组织裂解困难，可根据需要加⼀个轻柔匀浆10秒的步骤帮助裂解。
3.65℃⽔浴20-60分钟，在⽔浴过程中颠倒离⼼管以混合样品数次。
可选如果组织⼲燥或者产量低，可以适当延长⽔浴时间。
如RNA残留多，可在⽔浴前加⼊6µlRNA酶（20mg/ml）。
4.加⼊700µl氯仿/异戊醇（体积⽐24：1混合），颠倒充分混匀⼏分钟（或者涡旋混匀），13,000rpm 离⼼5分钟。
若提取的植物组织富含多糖多酚，可以在第4步前⽤等体积酚/氯仿（1：1）抽提⼀遍。
5.⼩⼼吸取上清到⼀个新的1.5ml离⼼管，注意不要吸到界⾯物质。
如上清⽐较浑浊，则需要重复步骤4⼀遍，直到得到透亮上清。
6.较精确估算上清量，加⼊1.5倍体积结合液PQ （请先检查是否已加⼊⽆⽔⼄醇!）后⽴刻涡旋，充分混匀。
此时可能出现沉淀，但不影响实验结果。
7.将上⼀步所得混合物（包括可能出现的沉淀）加⼊⼀个吸附柱AC中，（吸附柱放- 5 - ⼊收集管中）13,000rpm离⼼30秒，倒掉收集管中的废液（先加700µl离⼼，弃废液，再加⼊剩余的溶液，再次离⼼）。
《基因工程》练习
《基因工程》练习一、选择题1．关于“DNA的粗提取与鉴定”实验，下列说法正确的是（）A．整个提取过程中可以不使用离心机B．研磨液在4℃冰箱中放置几分钟后，应充分摇匀再倒入烧杯中C．鉴定过程中DNA双螺旋结构不发生改变D．仅设置一个对照组不能排除二苯胺加热后可能变蓝的干扰2．如图表示构建重组质粒和筛选含人胰岛素原基因的细菌的过程，其中I和II表示抗性基因，①—⑦表示过程，其它数字表示菌落。
下列有关叙述正确的是（）（注：⑦过程表示用灭菌绒布从含氨苄青霉素培养基中蘸取菌种，再按到含四环素培养基中培养）A．①②只能用同一种限制性核酸内切酶进行切割B．I表示抗氨苄青霉素基因，II表示抗四环素基因C．3、5菌落是筛选出的含有人胰岛素原基因的细菌D．该基因工程成功的标志是细菌合成具有生物活性的胰岛素3．用XhoI和SalI两种限制性核酸内切酶分别处理同一DNA片段（限制酶在对应切点一定能切开），酶切位点及酶切产物分离结果如图。
下列叙述错误的是（）A．图1中两种酶识别的核苷酸序列不同B．图1中酶催化反应的化学键是氢键C．图2中②可能是用Xho I处理得到的酶切产物D．用XhoI和SalI同时处理该DNA，电泳后得到6种产物4．下列关于“DNA的粗提取和鉴定”实验的叙述中，正确的是()A．用鸡血作为材料，原因是鸡血红细胞有细胞核，其他动物红细胞没有细胞核B．用不同浓度的NaCl溶液进行DNA粗提取，原因是DNA在其中溶解度不同C．用酒精进行提纯，原因是DNA溶于酒精，蛋白质不溶于酒精D．用二苯胺试剂进行鉴定，原因是DNA溶液中加入二苯胺试剂即呈蓝色5．菊花是一种双子叶植物，易感桃蚜而影响植物生长。
某科研团队获得了转GNA基因（表达产物能有效抑制桃蚜生长）菊花，流程如图所示。
下列相关叙述错误的是（）A．过程a、b分别表示逆转录和PCR，可获得大量GNA基因B．图中用到的Ti质粒是取自土壤中农杆菌的一种天然质粒C．图中c过程需要将GNA基因插入到Ti质粒的T-DNA中D．通过桃蚜接种实验可以检测图中菊花植株对桃蚜的抗性6．PCR 技术不仅可用于基础研究，还适用于日常的临床诊断、法医学调查和农业生物技术研究。
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——凯1.简述本学期从基因组DNA提取到重组质粒鉴定的实验流程？（实验题目的总结）
答：①基因组DNA的提取；②PCR扩增目的基因；③凝胶电泳分离纯化PCR扩增的DNA片段以及DNA的体外连接；④重组质粒的转化及转化子的筛选；⑤重组质粒的抽提；⑥重组质粒的酶切鉴定。
2.如何正确使用微量移液器？（自己写的）
答：①选取合适量程的移液器；②根据取液量设定量程；③安装（吸液）枪头；④按至第一档，将枪头垂直伸入液面下适当位置吸液；⑤按至第二档将液体打入容器；⑥弃掉枪头；⑦将量程调至最大，放回原处。
3.在琼脂糖凝胶电泳点样时，DNA通常和什么试剂混匀，其主要成分和作用是什么？
答：loading Buffer。
主要成分为溴酚蓝，二甲苯青和甘油。
溴酚蓝和二甲苯青起指示作用；甘油加大样品密度，从而沉降于点样孔中，以免浮出。
4.简述制作1%的琼脂糖凝胶电泳的操作步骤。
（题目有歧义）
答：①取0.5g琼脂粉置于锥形瓶，量取50ml 1×TBE溶液于瓶中，微波炉加热至琼脂溶解；
②将移胶板放入胶室中，选取合适梳子垂直安插在移胶板上方，待琼脂降温至55℃下后，缓慢导入该胶室里；③量取合适量1×TBE溶液导入洗净的电泳槽，并正确插好电泳线；④等凝胶凝固后，将梳子垂直拔出；⑤点样；⑥轻放移胶板至电泳槽的合适位置；⑦打开电泳仪的开关，调好参数，开始电泳；⑧一定时间后，停止电泳，取出凝胶板，然后经BE染色放入成像系统显色、观察。
5.琼脂糖凝胶电泳中DNA分子迁移率受哪些因素的影响？（实验书P75）
答：①样品DNA的大小和构象；②琼脂糖浓度；③电泳电场；④温度；⑤缓冲液；⑥嵌入染料的存在与否；
6.在使用苯酚进行DNA抽提时应注意什么？（实验书P31）
答：注意不要吸取中间的变性蛋白质层。
7.在基因组DNA提取过程中常用酚、氯仿、异戊醇试剂，它们各有什么作用？
答：酚——是蛋白质变性，抑制DNA酶的降解作用；氯仿——除去脂类，同时加速有机相与水相的分层；异戊醇——降低表面张力，从而减少气泡的产生。
8.提取DNA实验中，通常可选用哪些试剂沉淀DNA？
答：冷的无水乙醇，冷的异丙醇，终浓度为0.1～0.25mol/L 的NaCl
9.简述在DNA提取实验中个试剂的作用（SDS，EDTA，酚/氯仿/异戊醇、无水乙醇，70%乙醇）。
答：SDS——破坏细胞膜，解聚核蛋白；EDTA——整合金属离子，抑制DNase活性；酚/氯仿/异戊醇——见第7题；无水乙醇——沉淀DNA；70%乙醇——洗涤DNA沉淀。
10.简述PCR扩增技术的原理及各种试剂的作用（Mg2+，dNTP，引物，DNA，缓冲液，Taq
DNA聚合酶）。
答:(1)利用半保留复制的原理，以待扩增的DNA为模板，通过一系列酶在体外引物介导下，经高温变性，低温退火，适温延伸三个步骤合成特异DNA片段。
（2）Mg2+：TaqDNA聚合酶的活性需要；dNTP：作为底物；引物：作为延伸的出发点；DNA：模板；缓冲液：维持反应环境的PH值；TaqDNA聚合酶：催化DNA的合成。
11.PCR循环次数是否越多越好，为什么？
答：否。
因为PCR产物的积累存在平台效应。
12.降低退火温度，延长变性时间对PCR结果有什么影响？
答：前者会使非特异性产物增多；后者会导致酶的活性降低。
13.如果检测的PCR结果中出现很多非特异性条带，可能有哪些原因导致？
答：①引物特异性不强；②Mg2+浓度过高；③引物二聚体形成；④退火温度过低；⑤循环次数过多。
14.简述DNA片段回收纯化的原理。
（？）
答：各DNA片段的大小不同，则经琼脂糖凝胶电泳后得到了分离，收集含有DNA的凝胶部位通过溶解凝胶、使DNA与硅胶柱结合、再通过洗涤杂质、最后DNA洗脱，通过新的EP管收集等，最终得到纯化的目的。
15.为什么DNA体外连接反应反应要设在16℃？
答：因为此温度下能最大限度的发挥连接酶的活性，同时有助于维持短暂配对结构的稳定。
16.简述TA克隆试剂盒进行体外连接的原理。
（实验书P149）
答：经DNA聚合酶得到的PCR产物——双链DNA片段的末端具有一个突出“A”碱基，而T载体每条链的3’端带有一个突出“T”碱基，则其两端可以与PCR产物的两端进行正确的T--A配对，再在连接酶的催化下，即可将目的片段连接到载体上，形成重组载体。
17.简述氯化钙制备感受态细胞的原理。
（实验书P153）
答：经低温预处理的低渗CaCl2溶液处理受体细胞后，则可使细胞的通透性增大，从而极易与外源DNA相黏附并在细胞表面形成复合物。
18.重组质粒的转化方法有哪些？
答：CaCl2法，电击法，农杆菌转染法；花粉管通道法，基因枪法等。
19.当质粒加入宿主细胞进行转化，再涂布在含有Amp的LB培养基平板前，为什么要在LB 培养基上培养1h？
答：使感受态细胞复苏，同时让重组质粒在感受态细胞中适应并富集，以便于表达产物，使受体细胞具抗性能力。
20.什么情况下转化平板上会出现卫星菌落，为什么会出现卫星菌落？
答：涂布后的培养基培养时间过长。
因为载体上的抗性基因的表达产物由于培养时间过长而得到积累，使加入的抗生素失
效，从而让不含质粒的空菌落的一大量生长，故出现卫星菌落。
21.碱裂解细胞抽提质粒的基本原理是什么？
答：当菌体在NaOH和SDS溶液中裂解后，DNA和蛋白都发生变性。
当加入中和液后，由于构象上的区别，质粒DNA能较快的复性呈溶解状态，离心时留在上清液中，而染色体DNA不能复性，从而形成缠绕的网状结构并与蛋白凝聚，因离心沉淀。
22.电泳检测提取的质粒是会看到三条带，这三条带分别代表了什么？
答：最前端为超螺旋，中间为开环DNA，最后为复制中间体（即没有复制完全的两个质粒连在了一起）。
23.质粒抽提中溶液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的作用是什么？
答：溶液Ⅰ——使沉淀重新悬浮；溶液Ⅱ——让染色体DNA和质粒DNA变性；溶液Ⅲ——中和碱，使质粒DNA复性。
24.什么是限制性内切酶的星号活性？
答：在某些条件下，一种特异性识别序列的限制酶在酶切同一种DNA片段时会产生新的酶切位点而得到不同的酶解片段的酶活性。
25.细菌产生的限制性内切酶，为什么不对自己的DNA进行切割？
答：因为细菌能通过甲基化酶的甲基化作用保护自身的DNA不被相应的限制酶降解。
26.影响限制性内切酶的因素有哪些？使用工具酶时应注意什么？
答：（1）DNA样品中的污染物，如有机溶剂等；缓冲体系；温度；样品量。
（2）①酶量使用少，确认样品是否加入反应体系；②吸取各试剂时使用不同枪头，避免交叉污染；③控制反应体系中甘油量在10%以下，以防止星号活性；④保证取酶的操作在冰浴条件下进行。
操作考试：
１.制胶
２.点样电泳
３.依照给定的ＰＣＲ参数，在ＰＣＲ仪上设置程序。
４.切胶
５.超净工作台接种（切记：最后封膜）。