丙氨酸氨基转移酶(ALT)检测试剂盒(赖氏微板法)
血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性测定(改良赖氏法)
实验操作
取干净试管12支，按下表所示标号，要求各S 管和U管进行双管平行操作。先做对照管和测 定管，在30min保温期间再做空白管和标准管
1.标准曲线绘制：取试管5支，按下表操作
混匀，室温放置10分钟后，以蒸馏水调零，用 520nm波长比色，读取各管光密度。各管光密 度减去0管光密度，然后以光密度的差值为纵 坐标，各管相应的转氨酶活性单位为横坐标， 绘制标准曲线。为了方便，可将光密度相当于 转氨酶的卡门氏单位列于其后
2.酶活性的测定：取试管2支，注明测定管及对照管，
在测定前将底物液在37摄氏度水浴中预温5分钟，再按下表操作
混匀，室温放置10分钟后，以蒸馏水调零，用 520nm波长比色，读取光密度，用测定管的光 密度减去对照管的光密度查标准曲线，即得到 待测血清中所含ALT的酶的活性。 参考值：5~25卡门氏单位
临床意义
ALT（GPT)广泛存在于机体各种组织中，但 在肝细胞中含量最多，当肝脏有病变，特别是 急性肝炎及肝细胞坏死是，血清中ALT活性显 著升高。在肝癌、肝硬变以及胆道疾病时，此 酶活性也可或轻度增高。另外，其他脏器或组 织的疾病，该酶活性也升高。
注意事项
1.不同血清对照管光密度基本相同，因此，同一批标本制作2~3个血清 对照管求其平均值即可，亦可用空白管代替对照管。对超过正常的标本 进行复查时，每份标本均应作对照管。 2.严重脂血症、黄疸或溶血的血清都能引起测定管OD值增加，因此，检 查此类标本时，应做血清对照管。 3.赖氏法标准曲线只到97卡门氏单位，其线性关系良好。超过此活力的 标本，应将血清稀释后再测定，结果乘以稀释倍数。 4.ALT底物液与2，4-二硝基苯肼液配置要准确，每次测定时空白管的 OD值上下波动不应超过0.015.如超出此范围应检查试剂及仪器等方面的 问题。 5.除了丙酮酸与2，4-二硝基苯肼再碱性溶液中能成腙外，α -酮戊酸亦 能与2，4-二硝基苯肼产生苯腙，两种苯腙的吸光度在520nm处有较大 差异，因此超过一定范围时，该方法所绘制的标准曲线呈抛物线。
ALT丙氨酸氨基转移酶检测试剂盒(速率法)产品说明书
丙氨酸氨基转移酶检测试剂盒（速率法）说明书[产品名称] 通用名称: 丙氨酸氨基转移酶检测试剂盒（速率法）英文名称:L-Alanine Aminotransferase Assay Kit（ALT）[包装规格]2×200Tests；2×400Tests；R1:4×60ml、R2:4×15ml；R1:4×80ml、R2:4×20 ml；R1:4×120ml、R2:2×60ml；R1:8×40ml、R2:2×40ml；R1:4×50ml、R2:2×25 ml；R1:2×40ml、R2:2×10ml；R1:4×50ml、R2:4×25ml。
[预期用途] 用于体外定量检测人血清中的丙氨酸氨基转移酶的活力。
[检验原理]ALTL-丙氨酸 +α-酮戊二酸丙酮酸+ L-谷氨酸LDH丙酮酸 + NADH + H+ L-乳酸 + NAD+ + H2O[主要组成成份]由试剂R1和试剂R2组成。
试剂R1：三羟甲基氨基甲烷（Tris）缓冲液、乳酸脱氢酶（LDH）、L-丙氨酸、α-酮戊二酸；试剂R2：三羟甲基氨基甲烷（Tris）缓冲液、还原型辅酶（NADH）。
[储存条件及有效期] 试剂在2℃～8℃无腐蚀性气体中避光储存，若无污染，可稳定至失效期。
有效期12个月。
开瓶后2℃～8℃可稳定30天。
备注：生产日期及失效日期见外盒或瓶标签。
[适用仪器]日立7170、奥林巴斯AU640、贝克曼LX-20全自动生化分析仪。
[样本要求]使用新鲜的无溶血血清，血清不宜反复冻融，以免影响酶活性。
[检验方法]（1）双试剂无需配制，直接使用。
（2）试验条件：样本（S）：15 µl试剂1(R1) ：200 µl 试剂2（R2）：50 µl温度：37 ℃测定类型：速率法主波长：340 nm 副波长：405 nm 反应方向：下降方法：先将样本与R1混合，37 ℃5分钟后加入R2试剂，然后测定加入R2后2分钟至4分钟之△A/min 。
生化试剂sop
丙氨酸氨基转移酶测定试剂（ALT）（酶法）1. 检测原理本试剂采用国际临床化学联合会（IFCC）推荐方法：丙氨酸+α-酮戊二酸−−→−ALT丙酮酸+L-谷氨酸丙酮酸+NADH+H+−−→−LDH L-乳酸+NAD++H2ONADH氧化成NAD+引起340nm处吸光度的下降，下降速率与样品中ALT活性成正比。
2．标本采集与处理2.1 受检者的准备：病人空腹12h，不饮酒24h后采集血样。
体检对象抽血前应有两周的的正常状况记录。
注意有无应用影响测试项目的药物。
此外，对于体检者，采血的季节都应做相关记录，因为样本中各项目的含量有季节性变动，为了前后比较应在每年同一季节检验。
应嘱体检对象在抽血前24小时内不做剧烈运动。
2.2 静脉采血：除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。
体位影响水分在血管内外的分布，会影响测试项目的浓度。
在采血前至少应静坐5分钟，一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1分钟，穿刺成功后立即松开止血带。
2.3 抗凝剂：血浆使用肝素或EDTA（1mg/mL）作为抗凝剂2.4 标本的处理和储存：1血标本室温放置30min～45min后离心分离血清，置洁净试管加盖低温保存。
2标本在2-8℃可稳定3天，避免溶血。
3．试剂3.1 试剂及配套品：3.1.1试剂：本科使用重庆中元生物技术有限公司ALT试剂盒，为液体双试剂，各组分如下：试剂R1：Tris缓冲液NADH 100mmol/L 0.3mmol/L试剂R2：Tris缓冲液100mmol/Lα-酮戊二酸85mmol/LL-丙氨酸 800mmol/LLDH ≥8.5kU/L不同批号试剂盒中各组份不能互换。
3.1.2配套品：无配套品。
3.2 试剂的稳定性：1.原包装试剂储存在2-8℃至标签所示失效日期。
试剂的有效期为12个月。
2.试剂开瓶后，在仪器中至少可保存30天4：校准4.1校准血清：朗道复合校准品4.2校准方式：使用去离子水与校准血清两点定标。
赖氏法实验报告
1. 掌握赖氏法测定血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）活性的原理和方法。
2. 学会操作赖氏法测定ALT活性的实验步骤。
3. 熟悉ALT测定的临床应用及注意事项。
二、实验原理赖氏法是一种常用的酶偶联速率法，用于测定血清中ALT活性。
该方法利用ALT催化L-丙氨酸和α-酮戊二酸在磷酸盐缓冲液中进行反应，生成L-丙酮酸和α-酮戊二酸，同时NADH被氧化为NAD+。
在特定波长下，NADH的吸光度与ALT活性呈线性关系，通过测定吸光度变化，计算出ALT活性。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：（1）血清样本（2）赖氏法ALT测定试剂盒（3）磷酸盐缓冲液（4）L-丙氨酸（5）α-酮戊二酸（6）NADH（7）NAD+（8）分光光度计2. 实验仪器：（1）恒温水浴箱（2）移液器（3）离心机（4）微量滴定板1. 样本处理：取血清样本，按照试剂盒说明书进行稀释。
2. 标准曲线制备：（1）取6个微量滴定板，分别加入不同浓度的标准ALT溶液。
（2）向每个板中加入一定量的磷酸盐缓冲液，混匀。
（3）加入一定量的L-丙氨酸和α-酮戊二酸，混匀。
（4）将滴定板放入恒温水浴箱中，设定反应时间。
（5）反应结束后，加入一定量的NADH和NAD+，混匀。
（6）在特定波长下测定吸光度，以ALT浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
3. 样本测定：（1）按照标准曲线制备的步骤，向微量滴定板中加入血清样本。
（2）按照标准曲线制备的步骤，进行反应和测定吸光度。
（3）根据标准曲线，计算血清样本的ALT活性。
五、结果与分析1. 标准曲线制备：根据标准曲线，得出线性方程为y=0.0068x+0.0015，其中y为吸光度，x为ALT浓度。
2. 样本测定：根据标准曲线，计算血清样本的ALT活性为40 U/L。
六、讨论1. 赖氏法测定ALT活性的原理和步骤简单，操作方便，准确度高。
2. 实验过程中，要注意反应时间的控制，以保证反应充分进行。
3. 标准曲线的制备是实验的关键环节，要确保标准曲线的线性关系良好。
丙氨酸氨基转移酶测定方法操作规程
丙氨酸氨基转移酶（ALT）测定方法操作规程【产品名称】通用名称：丙氨酸氨基转移酶（ALT）测定试剂盒（IFCC法）【预期用途】该试剂盒采用IFCC法，用于体外定量测定人血清或肝素血浆中丙氨酸氨基转移酶的活力。
【检验原理】在ALT催化下，从丙氨酸转移到2个氨基到α-酮戊二酸上，生成产物谷氨酸和丙酮酸。
后者通过乳酸脱氢酶催化下转变成乳酸，在340nm波长条件下检测到NADH吸光度下降速率，与ALT的活力成比例。
L-ALT丙酮酸+ L-谷氨酸+LDH L-乳酸+NAD++H2O【主要组成成份】R1：Tris缓冲液150mmol/LL-丙氨酸750 mmol/L乳酸脱氢酶（LDH） 1200U/LNADH 0.4mmol/LR2：α-酮戊二酸90mmol/LNADH 0.9mmol/L*不同批号试剂盒各组分请勿混用。
【储存条件与有效期】未开启的试剂盒在2℃~8℃保存有效期为一年。
试剂开瓶后应避光保存，在2℃~8℃可稳定28天。
试剂不可冰冻。
【适用仪器】迈瑞BS系列全自动生化分析仪、日立7180型全自动生化分析仪、日立7060型全自动生化分析仪、日立7600P自动生化分析仪、奥林巴斯AU400型全自动生化分析仪、奥林巴斯AU2700型全自动生化分析仪、贝克曼库尔特AU680型全自动生化分析仪。
若需自动生化分析仪应用参数，请随时和公司联系。
建议用户在不同仪器上使用本产品时，根据实验室情况进行验证。
【样本要求】新鲜血清或肝素血浆样本，采集后及时测定，应避免污染。
【检验方法】试剂准备R1：即用液体试剂R2：即用液体试剂测定条件波长340nm温度37℃分析类型动力学法反应方向下降反应操作步骤* ΔA/min=ΔA/min样本管—ΔA/min空白管* 试剂和样本量可根据不同生化分析仪要求按比例适当增减。
校准校准品类型S1：生理盐水S2：迈瑞配套校准品推荐进行2点线性校准校准周期和要求（包括但不限于以下情况）更换试剂批号时仪器关键零部件更换时室内质控失效时质控每批样品检测时，建议使用迈瑞公司提供的配套质控品进行内部质量控制。
谷丙转氨酶（ALTGPT）测定程序（赖氏法）
谷丙转氨酶测定程序(赖氏法)一、原理与意义：谷丙转氨酶(ALT/GPT)在37℃及PH7.4条件下，作用于丙氨酸及ɑ-酮戊二酸组成的底物，生成丙酮酸及谷氨酸。
反应30 min后(固定时间)加入2，4－二硝基苯肼(DNPH)盐酸溶液，即中止反应，同时DNPH与酮酸中羰基加成，生成丙酮酸苯腙。
苯腙在碱性条件下呈红棕色，于505 nm测定吸光值并计算酶活力。
根据ALT活力的高低来反映肝脏细胞损伤的程度。
二、试剂及其配制：1.谷丙转氨酶基质液：4 ℃冰箱保存。
2.2,4-二硝基苯肼(DNPH)液：室温避光保存。
3. 4 mol/LNaOH：用时加蒸馏水稀释至0.4 mol/L，室温保存。
4. 2 mol/ml丙酮酸钠标准液，室温保存。
5.0.1 mol/L磷酸盐缓冲液，4 ℃冰箱保存。
三、仪器设备：离心机、7 ml离心管、移液器、分光光度计、玻璃比色杯、水浴锅、玻璃棒、冰箱、烧杯、量筒等。
四、操作步骤：1、血清制备：采集全血，室温放置1～2 h，3000 r×15 min离心取上清，待测。
2、血清ALT的测定：表1 血清ALT的测定加样顺序(ml)测定管对照管血清0.1基质液（37 ℃已预热5 min）0.5 0.5混匀后，37 ℃水浴30 min2，4－二硝基苯肼液0.5 0.5血清0.1混匀后，37 ℃水浴20 min0.4 mol/L NaOH 5 5混匀,室温放置5 min，505 nm波长，蒸馏水调零，测各管吸光度，测定管吸光度减去对照管吸光度的差值，查标准曲线，求得相应ALT/GPT活力单位。
五、结果计算与评价表2 标准曲线加样顺序0 1 2 3 4 50.1mol/L磷酸盐缓冲液(ml) 0.10 0.10 0.10 0.10 0.10 0.102µmol/ml丙酮酸钠标准液(ml) 0 0.05 0.10 0.15 0.20 0.25谷丙转氨酶基质液(ml) 0.50 0.45 0.40 0.35 0.30 0.252，4－二硝基苯肼液(ml) 0.50 0.50 0.50 0.50 0.50 0.50混匀后，37 ℃水浴20 min0.4 mol/L NaOH 5 5ALT标准曲线图六、注意事项：1.酶活力超过150单位时，用盐水稀释血清后重测。
血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)测定(赖氏法)
授课对象：06级检验1-5班课时：2学时血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）测定（赖氏法）目标：1.掌握赖氏法测血清ALT的原理及注意事项2.掌握试剂的配制熟练地制作标准曲线3.规范地进行ALT测定4.了解血清ALT测定的临床意义实验用品：配制试剂用的各种器皿（烧杯、容量瓶、电炉、分析天平等）、37℃水浴箱、721型风光光度计、坐标纸等原理：丙氨酸和α-酮戊二酸在血ALT的作用下生成丙酮酸及谷氨酸，在酶反应达到规定时间时，加入2.4-二硝基苯肼-盐酸溶液以终止反应。
生成的丙酮酸与入2.4-二硝基苯肼作用，生成丙酮酸入2.4二硝基苯腙，苯腙在碱性条件下显红棕色。
根据显色之深浅，求得血清中丙氨酸氨基转移酶活力。
试剂：1. 0.1molPH7.4磷酸盐缓冲液称取磷酸氢二钠（Na2HPO4AR）11.928g,磷酸二氢钾（KH2PO4AR）2.176g，加少量蒸馏水溶解并稀释至1000mL。
2. ALP基质液称取DL丙氨酸[CHCH（NH）COOH]1.79g，α-酮戊二酸[COOH （COCOOH）29.2mg于烧杯中，加入0.1mol/L PH7.4磷酸盐缓冲液80mL,煮沸溶解后待冷，用摩尔NaOH溶液调节PH至7.4（约加入0.5ml），再用0.1mol/LPH7.4磷酸盐缓冲液稀释至100mL,混匀，加氯仿数滴，置冰箱保存数周。
3．1mmol/L2.4-二硝基苯肼溶液称取 2.4-二硝基苯肼[（NO）CHNHNH AR]19.8mg，用10mol/L HC110mL溶解，然后加蒸馏水至100mL，置棕色瓶内，冰箱保存。
4．0.4mol/L NaOH溶液。
5．2mmol/L丙酮酸标准液精确称取丙酮酸钠[CHCOCOONa AR]22.0mg于100mL容量瓶中，加0.1mol/L PH7.4磷酸盐缓冲液至刻度。
此液应新鲜配制，不得久放。
操作：血清ALT测定步骤（赖氏法）加入物（mL）R B血清0.1 0.1ALP基质液0.5 —混匀，置37o C水浴30min2.4-二硝基苯肼0.5 0.5ALP基质液—0.5混匀，置37o C水浴20min0.4mol/L NaOH 5.0 5.0将上述两管混匀，10min后，用蒸馏水调零，λ=505nm比色读取各管吸光度值，用测定管A-对照管A，查标准曲线得ALT活力单位。
丙氨酸氨基转移酶(ALT)测定试剂盒(丙氨酸底物法)产品技术要求derui
丙氨酸氨基转移酶（ALT）测定试剂盒（丙氨酸底物法）
2、性能指标
2.1外观和性状
外观和性状应符合表2要求。
表2 试剂盒内各组分的外观性状
2.2试剂空白
2.2.1试剂空白吸光度
试剂以蒸馏水为空白时，波长 340nm，光径 1.0 cm，温度 37℃，吸光度≥
1.0。
2.2.2试剂空白吸光度变化率
试剂以蒸馏水为空白时，波长 340nm，光径 1.0 cm，温度 37℃，吸光度变化率≤0.004。
2.3分析灵敏度
试剂盒测试130 U/L被测物时，吸光度变化率≥0.015。
2.4线性范围
2.4.1试剂盒在10 ~1000 U/L区间（范围）内，其回归系数r≥0.990。
2.4.2相对偏差或绝对偏差应符合表 3 要求。
表3 相对偏差或绝对偏差
2.5精密度
2.5.1试剂盒批内精密度 CV 值应≤4.0%。
2.5.2试剂盒批间相对极差（R）应≤5.0%。
2.6准确度
1
相对偏差（Bias%）应在参考物质靶值±10%以内。
2.7液体装量
试剂盒不同规格的净含量应不少于其标示量。
2。
索莱宝 谷丙转氨酶(GPT ALT)活性检测试剂盒说明书（微量法）
第 1 页，共3 页谷丙转氨酶（GPT/ALT ）活性检测试剂盒说明书微量法注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
货号：BC1555规格：100T/48S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
试剂名称规格保存条件提取液液体60 mL×1瓶4℃保存试剂一粉剂×2支4℃保存试剂二液体3.5 mL×1瓶4℃保存试剂三液体30 mL×1瓶4℃保存标准液液体1 mL×1支4℃保存溶液的配制：1、试剂一：提供1个8 mL 棕瓶；临用前取1支试剂一倒入空瓶中，用2 mL 蒸馏水溶解，再用溶液将试剂一残留试剂润洗下来；2、标准液：20 μmol /mL 丙酮酸钠。
产品说明：谷丙转氨酶又叫丙氨酸氨基转移酶（EC 2.6.1.2），GPT （EC 2.6.1.2）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，催化氨基酸和酮酸转氨基反应，在氨基酸代谢中具有重要作用。
此外，哺乳动物肝细胞GPT 活性很高，当肝细胞坏死，GPT 释放到血液中，血清GPT 活性显著增高。
因此，GPT 被世界卫生组织推荐为肝功能损害最敏感的检测指标。
GPT催化丙氨酸和α-酮戊二酸发生转氨基反应，生成丙酮酸和谷氨酸；加入2,4-二硝基苯肼溶液，不仅终止上述反应，而且与酮酸中的羰基加成，生成丙酮酸苯腙；苯腙在碱性条件下呈红棕色，可以在505nm 读取吸光值并计算酶活力。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）1、细胞或细菌的制备：先收集细胞或细菌样本到离心管内，弃上清，按照每500万细胞或细菌加入1mL 提取液，超声波破碎细胞或细菌（功率20%，超声3s ，间隔10s ，重复30次）。
丙氨酸胺基转移酶测定SOP_ALT临床意义_检验科生化项目SOP
丙氨酸胺基转移酶测定SOP_ALT临床意义_检验科生化项目SOP丙氨酸胺基转移酶（Alanine Aminotransferase，ALT）是一种广泛存在于人体肝脏、心脏、肌肉、肾脏等组织中的酶，也是临床常用的生化指标之一、ALT水平的测定对于判断肝脏功能异常、诊断肝病以及监测治疗效果等方面具有重要的临床意义。
ALT测定的方法多样，其中常用的是酶促动力学法（Enzymatic Method），根据它在临床实验室中所编制的检验科生化项目SOP （Standard operating procedure），以下是一个大致的SOP描述：一、仪器与试剂准备：1.准备分光光度计、比色皿、移液器、计时器等常规实验室设备。
3.试剂室内温度要保持在15-25℃，避免试剂的高温和阳光直射。
4.准备质量控制品，用于质控测定，确保测定结果的准确性和可靠性。
二、样本准备：1.首先从病人或者健康受试者采集适量的血样，采用无抗凝剂的干管采血，保证采样时的无菌操作。
2.快速分离血清并尽快进行测定，避免搅拌和离心操作。
3.如果无法立即测定，血清应储存于-20℃以下的低温环境中，确保样本的稳定性。
4.样本在测定前应恢复至室温，并充分混匀至均匀液体。
三、操作步骤：1. 准确地取1ml标准和样本血清分别加入两个比色皿中。
2.在两个比色皿中分别加入相等的ALT试剂盒中提供的试剂，即ALT底物和ALT酶。
3.避免氧化反应的干扰，比色皿中的液体应尽快使用，并带入分光光度计中。
4.以酶反应的速率来计算ALT活性，通常使用每分钟多少个单位酶反应的方法。
5.根据试剂盒提供的标准曲线，将两个比色皿中的吸光度值与ALT标准品的吸光度值进行比较，计算出ALT的活性。
四、结果解释与质控：1.结果的单位一般为单位/升（U/L），正常成年人的ALT水平通常在10-40U/L之间。
2.高于正常范围的ALT水平常常是肝脏疾病的指示，如肝炎、肝硬化、肝癌等。
3.结果的准确性和稳定性需要进行质控，定期进行质量控制品的测定，并记录在质量控制记录簿中。
两种方法测定血清ALT的比较
两种方法测定血清ALT的比较
江伟敏;吴明虎
【期刊名称】《临床输血与检验》
【年(卷),期】2006(008)004
【摘要】血清丙氨酸氨基转氨酶（ALT）的检测采用赖氏试管法，费时、操作繁琐，不适宜大批量标本的检测。
随着全自动加样系统的应用以及新的《血站管理条例》的实施，本站以微孔赖氏法为初检方法，以微板丙酮酸氧化酶速率法为复检方法。
笔者对2005年6月份的标本2373份进行检测，结果微孔赖氏法25卡门氏单位以上59例，阳性率为2．49％；微板丙酮酸氧化酶速率法25卡门氏单位以上52例，阳性率为2．19％。
现将结果分析如下。
【总页数】1页(P319)
【作者】江伟敏;吴明虎
【作者单位】236000,安徽省阜阳市卫校;236000,安徽省阜阳市卫校
【正文语种】中文
【中图分类】R446.11
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4.血清放置一周ALT再测定的结果比较分析 [J], 康向军
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实验1 赖氏法测定血清丙氨酸氨基转移酶
实验1 赖氏法测定血清丙氨酸氨基转移酶【实验目的】掌握赖氏法测定血清丙氨酸氨基转移酶的原理和校准曲线的绘制。
熟悉丙氨酸氨基转移酶测定的临床应用。
了解固定时间法测定酶活性的特点与应用。
【原理】丙氨酸氨基转移酶（alanine aminotransferase ，ALT ，EC 2·6·1·2）催化L-丙氨酸与α-酮戊二酸间的氨基移换反应，生成α-丙酮酸和L-谷氨酸。
经30min 反应后，加入2,4-二硝基苯肼终止反应，并与反应液中的两种α-酮酸生成相应的2,4-二硝基苯腙（丙酮酸苯腙和α-酮戊二酸苯腙）。
在碱性条件下，两种苯腙的吸收光谱曲线有差别，在500nm~520nm 处差异最大，以等摩尔浓度计算，丙酮酸苯腙的呈色强度约为α-酮戊二酸苯腙的3倍。
据此可以计算出丙酮酸的生成量。
谷氨酸丙酮酸酮戊二酸丙氨酸-+-−−→−-+-L L ALT αα二硝基苯腙，二硝基苯肼，酮酸碱性条件-−−−→−-+-4242α（红棕色，λ=505nm ）【试剂与器材】1．0.1mol/L 磷酸二氢钾溶液 称取KH 2PO 4 13.61g ，溶解于蒸馏水中，加水至1 000ml ，4℃保存。
2．0.1mol/L 磷酸氢二钠溶液 称取Na 2HPO 414.22g ，溶解于蒸馏水中，并稀释至1 000ml ，4℃保存。
3．0.1mol/L 磷酸盐缓冲液（pH7.4） 取0.1mol/L 磷酸氢二钠溶液420ml 和0.1mol/L 磷酸二氢钾溶液80ml ，混匀，即为pH7.4的磷酸盐缓冲液。
加氯仿数滴，4℃保存。
4．基质缓冲液（200mmol/L 丙氨酸/2.0mmol/L α-酮戊二酸） 精确称取DL-丙氨酸1.79g ，α-酮戊二酸29.2mg ，溶于0.1mol/L 磷酸盐缓冲液约50ml 中，用1mol/L NaOH 调pH 至7.4，再加磷酸盐缓冲液至100ml ，4℃～6℃保存，该溶液可稳定2周。
血清谷丙转氨酶活性的测定改良赖氏法
试剂二
取0.1mol/L的磷酸缓冲液50mL， 加入0.5%的溴麝香草酚蓝溶液 1.5mL，用0.1mol/L的氢氧化钠 溶液调节pH至7.4，最后加蒸馏 水至100mL。
试剂三
取0.1mol/L的磷酸缓冲液50mL， 加入4%的碳酸氢钠溶液5mL， 用0.1mol/L的氢氧化钠溶液调节
ALT催化反应
在37℃水浴中，将混合液加入含有ALT催化底物的反应体系中，启动催化反应。
NADH消耗检测
通过分光光度计在340nm波长处监测反应体系中NADH的吸光度变化，记录数据。
数据处理与结果计算
根据吸光度变化计算ALT活性，并给出结果报告。
02 实验材料
CHAPTER
试剂准备
磷酸氢二钠（Na2HPO4·12H2O）
实验过程中产生的废液应按照实验室规定正确处理，避免对环境造 成污染。
遵守实验室安全规定
实验人员应严格遵守实验室安全规定，确保实验过程的安全性。
误差控制
保证试剂质量
01
使用高质量的试剂，确保试剂的准确性和稳定性，降低误差。
标准化操作
02
实验人员应遵循标准化操作流程，避免因操作不当引起的误差。
定期校准仪器
用于配制磷酸盐缓冲液，提供反应所需的pH环境。
赖氏试剂（Reitman-Frankel reage…
由NAD+、赖氏酸和缓冲液组成，用于提供反应所需的辅酶和还原剂。
血清样本
用于测定谷丙转氨酶活性，应确保血清中无细菌污染和溶血现象。
仪器设备
分光光度计
用于测定反应过程中吸 光度的变化，进而计算 酶活性。
恒温水浴
用于维持反应温度，通 常设定在37°C。
ALT检测操作规程
ALT检测操作规程ALT（丙氨酸氨基转移酶）是一种存在于细胞质中的酶，广泛分布于人体包括肝脏、心脏、肾脏等组织中。
ALT是肝脏功能的重要指标之一，通过测量血液中ALT的活性，可以评估肝脏功能的健康程度。
本文将介绍ALT（丙氨酸氨基转移酶）检测操作规程（速率法）。
一、实验器材和试剂准备1.乙醚：用于准备昏迷鼠模型；2.丙酮：用于制备丙酮胺溶液；3.氯化二乙酸：用于制备氯化二乙酰胺试剂；4.丙酮胺：用于制备丙酮胺溶液；5.磷酸氢二钾溶液：用于制备缓冲液；6.氧化丙酮胺：用于制备氧化丙酮胺试剂；7.pH7.0缓冲液：用于制备反应体系；8.4-氨基硫代洪美酸：用于停止反应；9.甲醛：用于制备甲醛溶液；10.维生素C溶液：用于制备维生素C溶液；11.肝组织磷酸化酰胺：用于制备肝组织提取液；12.酶提取液：用于提取ALT酶。
二、实验步骤1.制备ALT酶提取物：（1）取新鲜动物（小鼠）肝脏组织15g，加入磷酸缓冲液5倍的体积；（2）放入冷冻机中，-20℃下保存12h；（3）取出，加入万能匀浆器中，对肝脏组织进行研磨；（4）将研磨后的肝脏组织加入毛细管离心管中，进行离心，1800r/min 离心10 min；（5）将提取液转入新的毛细管离心管中，再次离心，3000r/min 离心10 min；（6）将上清液收集至离心管中，取出备用。
2.制备标准曲线：（1）取6个试管，分别标记为A、B、C、D、E、F，一个空白试管用作对照；（2）分别加入0.1ml、0.2ml、0.3ml、0.4ml、0.5ml、0.6ml的ALT 酶提取液；（3）加入pH 7.0缓冲液，使总体积为2.0ml；（4）每个试管中加入0.2ml的氧化丙酮胺试剂；（5）按顺序加入2ml、0.2ml、2ml的维生素C溶液、氧化丙酮胺试剂和ALT提取液；（6）加入4-氨基硫代洪美酸停止反应，并立即搅拌均匀；（7）用甲醛溶液处理样品；（8）分别在0.1、0.2、0.3、0.4及0.5的浓度范围内，测定样品的吸光度。
丙氨酸氨基转移酶试剂盒(丙氨酸底物法)
丙氨酸氨基转移酶试剂盒（丙氨酸底物法）标准化操作规程1 目的规范实验室操作，保证检验工作顺利有效进行特制定此规程。
2 授权操作人经培训且考核通过的实验室检验人员。
3 适用范围：本试剂适用于体外定量检测人血清或血浆中丙氨酸氨基转移酶（ALT）的活力。
4 检验方法本试剂反应原理采用国际临床化学联合会（IFCC）推荐的方法。
5 检验原理在丙氨酸氨基转移酶的作用下，L-丙氨酸与α-酮戊二酸反应，生成丙酮酸和L-谷氨酸。
丙酮酸被试剂中的乳酸脱氢酶（LDH）还原为L-乳酸，同时NADH 被氧化为NAD＋，使340nm处的光吸收值下降，通过监测340nm处光吸收值下降的速率，可以测定丙氨酸氨基转移酶活力。
样品中内源性丙酮酸的干扰可由试剂中LDH在反应延迟时间内消除，不会干扰测定。
ALTL-丙氨酸+α-酮戊二酸丙酮酸+L-谷氨酸LDH丙酮酸+NADH L-乳酸+NAD+6 检验标本要求6.1 样本为血清。
6.2 不得使用溶血或被污染的样本。
6.3 样本在2℃~8℃条件下可保存7天、室温条件下可保存1天。
7 试剂及配套品7.1试剂来源长春迪瑞医疗科技股份有限公司丙氨酸氨基转移酶试剂盒7.2试剂组成7.3试剂的稳定性与贮存：7.3.1 试剂在2℃~8℃条件下，干燥、避光、密封贮存，有效期为18个月。
7.3.2 试剂开封后在2℃~8℃条件下可稳定30天，试剂不可冷冻。
7.3.3 反应液在2℃~8℃可稳定30天。
7.4试剂的变质指示：若试剂混浊，或在340 nm处试剂空白吸光度值低于1.000A 时，不能使用。
8 实验仪器及性能指标8.1实验仪器迪瑞CS系列全自动生化分析仪8.2试剂性能指标8.2.1 空白吸光度：A≥1.000。
8.2.2 空白吸光度变化率：︱△A︱/min≤0.002/min。
8.2.3 分析灵敏度：测试1U/L被测物时，吸光度变化率（△A/min）＜-0.0001。
8.2.4 线性范围：4U/L～1000U/L；线性相关系数r≥0.9900；[4，200]U/L范围内，线性绝对偏差应不超过±40U/L；（200，1000]范围内，线性相对偏差不超过±15％。
波音特生物科技(南京)有限公司 血清丙氨酸氨基转移酶检测试剂盒(ALT)使用说明书（酶学速率法）
酶学速率法波音特生物科技（南京）有限公司PO IN TE BIO TEC H(N ANJ ING ) C O., LTD.血清丙氨酸氨基转移酶检测试剂盒(ALT)使用说明书（酶学速率法）【产品名称】通用名称：血 清 丙 氨 酸 氨 基 转 移 酶 检 测 试 剂 盒) 英文名称： The Serum ALT Reagent Kit 【包装规格】 型号 规格通用型 240ml （R1:4×48ml + R2:1×48ml ） 通用型 255ml （R1:3×68ml + R2: 3×17ml ） 通用型360ml （R1:3×96ml + R2:3×24ml ）【预期用途】本试剂盒用于测定人血清或血浆中ALT 的含量。
【检验原理】OH NAD L H NADH L L LDH ALT2+− → +− → −−++乳酸＋丙酮酸＋谷氨酸丙酮酸＋酮戊二酸丙酮酸＋α上述偶联反应中，还原性辅酶Ⅰ(NADH)的氧化速度与标本ALT 活性成正比。
NADH 在340nm 处有特异性吸收率，因而可通过监测NADH 吸光度的下降速率来计算出ALT 的活力。
【主要组成成份】 试 剂成 份 含 量 Tris 缓冲液60mmol/L NADH 0.18mmol/L L-丙氨酸 500mmol/L R 1LDH 600U/L a-酮戊二酸15mmol/L 丙氨酸 500mmol/L R 2稳定剂和防腐剂【储存条件及有效期】本试剂盒在2~8℃避光保存，防止冷冻，可稳定12个月； 开启后在2~8℃避光保存可稳定30天。
【适用仪器】本试剂通用型适用于日立7170/7180/7080/7600 /7060/7150 /7 020;奥林巴斯AU400/640/7200/5400; Abbott Aeroset 2000/C 8000;SHIMADZU CL7200/7300/8000；东芝40FR/120FR/200FR;迈瑞BS-300；利霸；Beckman CX/LX;DADE Behring AR/RxL/X –Pand 。
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丙氨酸氨基转移酶(ALT)检测试剂盒(赖氏微板法)
简介：
Leagene 丙氨酸氨基转移酶(ALT)检测试剂盒(赖氏微板法)其检测原理是丙氨酸氨基转移酶催化丙氨酸与α-酮戊二酸之间的氨基转移反应，在ALT 催化下，其反应公式如下：
L-丙氨酸+α-酮戊二酸→丙酮酸+L-谷氨酸。
二硝基苯肼与α-酮酸反应，生成相应的二硝基苯腙，在碱性条件下，二硝基苯腙的吸收光谱有差异，通过酶标仪检测在500-520nm 处差异最大，以等摩尔浓度计算出丙酮酸的生成量，进而计算酶的活性。
组成：
操作步骤(仅供参考)：
1、 准备样品：
①_x0001_ 血浆、血清样品：血浆、血清按照常规方法制备，可以直接用于本试剂盒的
测定，-20℃保存1个月有效，用于ALT/GPT 的检测。
②_x0001_ 细胞或组织样品：取恰当细胞或组织进行匀浆，低速离心取上清，-20℃保存
1个月有效，用于ALT/GPT 的检测。
③_x0001_ (选做)样品准备完毕后可以用BCA 蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度，以便
于后续计算单位蛋白重量组织或细胞内的ALT/GPT 含量。
2、 制作ALT 标准曲线：取适量的丙酮酸标准(100mmol/L)，按丙酮酸标准(100mmol/L)：
丙酮酸标准稀释液=1：49的比例混合，即为丙酮酸标准工作液-丙酮酸标准(2mmol/L)，按下表制备标准曲线。
最好设定平行检测管，求平均值。
编号 名称
TE0121 100T Storage
试剂(A): 丙酮酸标准(100mmol/L) 1ml 4℃ 避光 试剂(B): 丙酮酸标准稀释液 2ml RT 试剂(C): 标准对照液 2ml 4℃ 试剂(D): ALT assay buffer 3ml -20℃ 避光 试剂(E): 二硝基苯肼显色液 3ml 4℃ 避光 试剂(F): ALT 显色基液 25ml
RT 使用说明书
1份
加入物
0 1 2 3 4 丙酮酸标准(2mmol/L)(μl)
2
4
6
8
标准对照液(μl) 4 4 4 4 4
ALT assay buffer(μl)(37℃提前孵育5min) 20 18 16 14 12
相当于ALT/GPT(卡门单位) 0 28 57 97 150 混匀，向各管中加入二硝基苯肼显色液20μl，混匀，37℃孵育20min后，加入ALT 显色基液200μl，混匀。
室温放置5min，分光光度计505nm处，以蒸馏水调零，读取各孔吸光度。
各孔吸光度均减去”0”号管吸光度，所得吸光度差值(纵坐标)与对应的卡门酶活力单位(横坐标)作图。
注意：Leagene标准品检测参考值在0.25-0.8之间，由于检测仪器、操作手法等条件的不同，参考值范围会有波动。
3、ALT酶促反应：按照下表设置对照孔、测定孔，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免
产生气泡。
如果样品中的酶活性过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。
加入物(μl) 对照孔测定孔待测样品(如血清等) 4 4
ALT assay buffer −20
混匀，37℃水浴孵育30min。
ALT assay buffer(37℃提前孵育5min) 20 −
二硝基苯肼显色液20 20
混匀，37℃水浴孵育20min。
ALT显色基液200 200
4、ALT检测：混匀，室温放置5min。
酶标仪505nm处检测吸光度，以蒸馏水调零，读
取各孔吸光度值。
计算：
以标准孔活力单位为横坐标，以吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。
测定孔吸光度减去对照孔吸光度后，从标准曲线查得ALT活力单位。
参考范围：成年健康人血清ALT：5-25卡门单位/ml
注意事项：
1、二硝基苯肼显色液溶解以后，如果仍然有结晶析出，应弃用。
2、由于赖氏法的特点，在绘制标准曲线时每个点最好做三管的重复测定，求出各标准管
的吸光度均值，减去“0”号管吸光度均值后，对照赖氏单位绘制标准曲线。
3、严重黄疸、脂血或溶血的血清，可能会引起测定管吸光度增高，因此检测该类样本时
应做自身血清标本对照。
4、当样本的酶活力大于150卡门单位时，应将样本进行5-10倍稀释后再行测定。
5、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期：6个月有效。
相关：
编号名称
CA0005 氨苄青霉素溶液(Ampicillin,50mg/ml)
DH0006 苏木素伊红(HE)染色液
NR0003 Lezol(总RNA提取试剂)
PE0018 SDS-PAGE凝胶配制试剂盒
TE0002 碱性磷酸酶(ALP)检测试剂盒(PNP微板法)。