艾滋病试验记录表格

艾滋病试验记录表格

-标准化文件发布号：（9456-EUATWK-MWUB-WUNN-INNUL-DDQTY-KII

附件1 河北省初筛实验室HIV抗体检测标本登记表

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附件2 河北省初筛中心实验室HIV抗体检测接收标本登记表

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附件3 HIV抗体检测试验记录

编号

实验步骤：

1.样品、试剂、酶标板条室温平衡分钟。

2.取条板条，放在板架上，撕去板条上的封条。

3.在所有板孔中加入100µL的样品稀释液，包括要做质控的板孔。

4.在确定的板孔中加入50µL的标本或质控。设3个阴性对照和1个HIV1阳性对

照、1个HIV2阳性对照。在加入标本之后加入质控，并填写加样顺序表(见下表)。

5.在微板上盖上贴膜，洗板前撕去贴膜，37℃孵育60分钟。

6.在进行孵育的过程中，准备以下试剂：

（1）洗液（1:25）：浓磷酸盐缓冲液 ml，加蒸馏水 ml 。

（2）TMB底物液（1:1）：TMB ml，尿过氧化物 ml。（临用前配制）

（3）1M硫酸：取浓硫酸（98%浓硫酸相当于18M），加蒸馏水 ml。

7.磷酸盐缓冲液浸泡板孔60秒，洗板机洗板，洗6次。

8.每孔加入100µLTMB底物液，不要混匀或振荡，弃去多余的TMB底物液。

9.室温℃环境中孵育30分钟，闭光显色。

10.每孔加入100µL 1M硫酸，终止反应。

11.在450nm和620nm双波长读取每孔的吸光度，并打印结果。

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结果分析：

4

呈阳性反应，需复检；其余均为阴性反应。

河北省性病艾滋病预防监测中心

HIV抗体检测试验记录编号

实验步骤：

1．样品、试剂、酶标板条室温平衡30分钟。

2．将酶联反应板从密封袋中取出，取下条板条，放在板架上。按顺序编号，设一个空白对照孔，两个阳性对照孔，两个阴性对照孔。

3．每孔加入50µl样品稀释液，取阳性对照和阴性对照分别充分混匀后各50µl加入对照孔中，空白对照孔只加样品稀释液，其余每个孔加待检血清50µl，（要先加样品，后加对照）轻轻振荡，充分混匀。并填写加样顺序表(见表)。

4．用不干胶封片封盖反应板，置37℃温育30分钟。

5．温育期间配制洗涤液：取20×洗涤液 ml，加蒸馏水 ml。

6．撕去贴膜，用洗涤液洗5次，然后在吸水纸上拍干。

7．除空白孔外每孔加酶标抗原100µl，用不干胶片封盖反应板。37℃温育30分钟。8. 洗板5次(同步骤6)，拍干。

9．每孔加显色剂A50µl ，显色剂B50µl，轻轻振荡后置37℃暗处显色10分钟，每孔加终止剂50µl。

10．选择酶标仪450nm和620 nm双波长测定，用空白孔调零点，测定各孔的吸光度。并打印结果。

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呈阳性反应，需复检；其余均为阴性反应。

河北省性病艾滋病预防监测中心

HIV抗体检测试验记录编号

实验步骤：

1．将试剂盒、样本室温平衡30分钟；

2．取条板条，固定于支架，按顺序编号，设2个空白对照，3个阴性对照和2个HIV阳性对照。空白对照孔不加样品和酶结合物，只加底物和终止液。在确定的板孔中加入100µL的标本或质控（要先加样品，后加对照）。并填写加样顺序表(见表)；

3．覆盖粘胶纸，置37℃孵育60分钟；

4．按1：25的比例稀释洗涤液，取 ml洗涤液，加入 ml蒸馏水；

5．取出已孵育完毕的反应板，弃去粘胶纸，吸干板内液体；

6．将洗涤液注满每孔(约300µl／孔)，吸干，反复5次，在干净纱布上将板拍干；

7．每孔加酶结合物1OOµl，取新粘胶纸覆盖反应板，置37℃孵育30分钟；

8．洗涤同步骤5、6；

9．每孔加入底物缓冲液50µl、TMB50µl，混匀，置37℃显色lO分钟；

10．加终止液50µl振荡反应板5秒钟，使之充分混匀；

11．在酶标读数仪中，取波长450nm(建议使用双波长酶标仪比色，参考波长630nm), 以空白对照孔校零，读取每孔吸收值(加终止液后，务必在15分钟内

读数完毕)。

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6

结果分析：

呈阳性反应，需复检；其余均为阴性反应。

附件4

HIV抗体检测试验记录编号

实验步骤：

12.样品、试剂、酶标板条室温平衡15- 30 分钟。

13.取条板条，放在板架上，撕去板条上的封条。

14.在每孔中加入100µl酶标试剂，空白孔除外。

15.在确定的板孔中加入20µl的标本或阴阳性对照，震荡混匀。设1个空白对照，

3个阴性对照和2个HIV 阳性对照，并填写加样顺序表(见下表)。

16.在微板上盖上贴膜（洗板前撕去贴膜），37℃孵育60分钟。

17.配制洗涤液，取10Ⅹ浓缩洗涤液 ml，加去离子水 ml（1:10稀释）备用。

18.磷酸盐缓冲液浸泡板孔60秒，洗板机洗板，每孔6次（程序已编号）。

19.每孔加入显色剂A、B各50µl，轻轻振荡混匀。

20.封板膜封板后37℃闭光显色30分钟。

21.每孔加入100µl终止液，轻轻振荡混匀，终止反应。

22.在450nm和620nm双波长读取每孔的吸光度，并打印结果。

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