(完整版)微生物的接种技术
微生物接种方法详解
微生物接种方法详解一、平板划线分离法平板划线分离法:是指把混杂在一起的微生物或同一微生物群体中的不同细胞用接种环在平板培养基表面，通过分区划线稀释而得到较多独立分布的单个细胞，经培养后生长繁殖成单菌落，通常把这种单菌落当作待分离微生物的纯种。
有时这种单菌落并非都由单个细胞繁殖而来的，故必须反复分离多次才可得到纯种。
其原理是将微生物样品在固体培养基表面多次作“由点到线”稀释而达到分离目的的。
为方便划线，一般培养基不宜太薄，每皿约倾倒20ml培养基，培养基应厚薄均匀，平板表面光滑。
划线分离主要有分区划线法和连续划线法两种分区划线法是将平板分四区，故又称四分区划线法。
划线时每次将平板转动60~70°划线，每换一次角度，应将接种环上的菌烧死后，再通过上次划线处划线；另一种连续划线法是从平板边缘一点开始，连续作波浪式划线直到平板的另一端为止，当中不需灼烧接种环上的菌。
1）连续划线法将琼脂平皿半开盖倒置于培养箱内至无冷凝水，接种环于酒精灯外焰烧至红透，接种棒也要充分灼烧，最后再集中烧接种环至红。
轻轻摇匀待接种试管，左手手心托待接种试管底侧部，右手执接种环，右手小指拔下试管塞，于酒精灯附近将接种环伸进试管，稍候，再插入待接接种液中，蘸一下，取满一环，抽出、烧塞、盖盖、放回试管架。
或将接种环通过稍打开皿盖的缝隙伸入平板，在平板边缘空白处接触一下使接种环冷却，然后以无菌操作接种环直接取平板上待分离纯化的菌落。
于靠近酒精灯处打开平皿盖约30°，右手将环伸进平皿，将菌种点种在平板边缘一处，轻轻涂布于琼脂培养基边缘，抽出接种环，盖上平皿盖，然后将接种环上多余的培养液在火焰中灼烧，打开平皿盖约30°伸入接种环，待接种环冷却后，再与接种液处轻轻接触，开始在平板表面轻巧滑动划线，接种环不要嵌入培养基内划破培养基，线条要平行密集，充分利用平板表面积，注意勿使前后两条线重叠，划线完毕，关上皿盖。
灼烧接种环，待冷却后放置接种架上。
微生物常用的接种方法
微生物常用的接种方法微生物接种是微生物学实验中的一项重要步骤，它可以使微生物在实验室中进行培养和繁殖，为微生物学研究提供了基础条件。
接种方法的选择对于微生物的培养和实验结果至关重要，下面将介绍微生物常用的接种方法。
一、平板接种法。
平板接种法是微生物学实验中最常用的一种接种方法。
首先将琼脂平板加热至液态状态，然后将所需接种的微生物悬液均匀地倒在琼脂平板表面，用接种棒均匀涂抹，使微生物均匀分布在琼脂平板表面。
接种后将琼脂平板放置在恒温培养箱中进行培养，待微生物形成菌落后进行观察和实验。
二、液体培养基接种法。
液体培养基接种法适用于需要大量培养微生物的实验。
首先将所需的液体培养基倒入培养瓶中，然后将微生物接种悬液加入培养瓶中，用接种棒均匀搅拌使微生物均匀分布在培养基中。
接种后将培养瓶放置在恒温摇床上进行培养，待微生物培养达到所需数量后进行后续实验。
三、斜面接种法。
斜面接种法适用于需要进行纯培养的微生物。
首先将琼脂斜面培养基倾斜放置，等琼脂凝固后将微生物接种在斜面上并均匀涂抹，使微生物均匀分布在斜面上。
接种后将琼脂斜面培养基放置在恒温培养箱中进行培养，待微生物形成菌落后进行观察和纯培养。
四、深层接种法。
深层接种法适用于需要进行微生物氧气需求的实验。
首先将所需的琼脂深层培养基加热至液态状态，然后将微生物接种悬液倒入琼脂深层培养基中并均匀混合，接种后将琼脂深层培养基倒入培养瓶中，待琼脂凝固后放置在恒温培养箱中进行培养，待微生物培养达到所需数量后进行后续实验。
以上就是微生物常用的接种方法，不同的实验需要选择合适的接种方法来保证实验结果的准确性和可靠性。
希望本文所介绍的接种方法能够帮助到需要进行微生物学实验的研究人员，提高实验效率和准确性。
微生物接种方法
微生物接种方法微生物接种是生物实验中的一项基本技术，也是各种微生物检测和研究中不可缺少的步骤。
本文将介绍一些常见的微生物接种方法，包括平板划线法、斜面接种法、液体培养基接种法和穿刺接种法等。
平板划线法是一种常用的微生物接种方法，其目的是将菌种纯化，得到单一的菌落。
该方法通过在固体培养基上划线，使菌种在培养基上繁殖并形成菌落。
具体步骤如下：(1)将固体培养基灭菌后倒入培养皿中，待凝固后加入适量菌液。
(2)用接种环取适量菌液，在培养皿表面划线。
(3)将培养皿放入适宜的温度下培养，观察菌落的生长情况。
(4)根据需要重复划线操作，直至得到单一的菌落。
斜面接种法是一种常用的微生物接种方法，其目的是将菌种接种到斜面培养基上，以便于观察和保存。
该方法通过将菌液加入到灭菌后的斜面培养基中，使菌种在斜面上繁殖并形成菌落。
具体步骤如下：(1)将斜面培养基灭菌后放置在实验台上，用无菌操作法加入适量菌液。
(2)将接种环放入菌液中沾取少量菌种，然后在斜面培养基上划线接种。
(3)将培养皿放入适宜的温度下培养，观察菌落的生长情况。
(4)根据需要重复划线操作，直至得到单一的菌落。
液体培养基接种法是一种常用的微生物接种方法，其目的是将菌种接种到液体培养基中，以便于微生物的生长和繁殖。
该方法通过将菌液加入到灭菌后的液体培养基中，使菌种在液体培养基中繁殖并形成微生物。
具体步骤如下：(1)将液体培养基灭菌后倒入试管中，加入适量菌液。
(2)用摇床或其他设备将试管中的培养基混合均匀。
(3)将试管放入适宜的温度下培养，观察微生物的生长情况。
微生物接种技术是生物工程中一项重要的技术，广泛应用于生物制品制造、环境生物治理、医学诊断等领域。
本文将介绍微生物接种技术的基本原理、应用场景以及发展前景。
微生物接种技术是指将目的微生物通过一定的方式引入到培养基或发酵系统中，使其在特定的环境下生长繁殖，以达到特定的生物制品或环境治理的目的。
该技术的主要环节包括菌种选择、接种量确定、接种方法选择和培养条件控制等。
微生物接种操作方法
微生物接种操作方法
微生物接种操作方法一般包括以下步骤：
1.准备培养基：按照培养菌种的需求准备合适的培养基。
通常需要将培养基均匀地倒入培养皿中，待其凝固。
2.选择菌株：在无菌操作的情况下，选择一株菌株接种。
菌株需要在一个菌液培养基中培养，直到其成长到一定程度。
3.适当稀释：在接种前，应依据所需菌群数量，将培养基适当稀释一些（通常是1000倍），以防菌群增长过快的情况。
4.接种：接种时，取适量菌株，用烧杯、披露环或接种针等工具将微生物接种于培养基上。
5.培养：将培养皿放置在适宜的培养条件下，如适宜的温度、湿度和氧气等，等待菌群的生长。
6.观察：观察微生物的生长情况，并根据其形态特征、生长速度、代谢特征等进行鉴定。
7.保存：根据需要，将不同种类的微生物进行保存。
常见的方法包括低温保存、
冷冻保存或干燥保存等。
注意事项：
1.选择适宜的培养基，以保证微生物的生长和繁殖。
2.操作时应严格无菌，防止其它微生物污染。
3.在接种前，应对培养皿、烧杯等工具进行高温、紫外线或化学消毒处理。
4.尽量减少接种时对培养基的破坏和干扰，以保证生长情况的准确观察。
5.保存时应先进行初步鉴定，以免与其它菌群混淆。
保存时选用适宜的保存条件。
微生物的接种技术
（二）穿刺接种
用接种针挑取菌种（针必须挺直），自培养基的 中心垂直地刺入半固体培养基中，直至接近管底， 但不要穿透，然后沿原穿刺线将针拔出，塞上试管 塞，烧灼接种针。
五、实验结果 1、待接种菌种培养长出后，看划线是否标准 2、观察穿刺接种生长状态 六、思考题 1、什么是无菌操作 2、接种时应注意的问题有哪些
实验七 微生物的接种技术
Hale Waihona Puke 一、实验目的熟悉微生物的无菌接种技术和方法
二、实验原理
微生物接种是将一种微生物移接到另一灭过菌 的新鲜培养基中，使其繁殖生长的过程。
方法有：斜面接种、液体接种、平板接种、穿 刺接种等。
无菌操作：培养基灭菌后，用灭过菌的无菌工 具将含菌材料接种于灭菌培养基上的过程。
三、实验材料 1、菌种：大肠杆菌（Ec） 2、培养基：营养琼脂斜面培养基、
4、右手拿接种环通过火焰烧灼灭菌，在火焰边用 右手的手掌边缘和小指/小指和无名指分别夹持 试管帽，将其取出，并迅速烧灼管口。
5、将灭菌的接种环伸入菌种试管内，先将环接触试 管 内壁或未长菌的培养基，达到冷却的目的，然后再 挑取少许菌苔。将接种环退出菌种试管，迅速伸入 待接种的斜面试管，用环在斜面上自试管底部向上 端轻轻地划直线，勿将培养基划破，也不要使环接 触管壁或管口。
牛肉膏蛋白胨半固体培养基 3、器材：接种环、接种针、酒精灯
四、操作步骤
（一）斜面接种
1、在斜面试管上，用记号笔写上 将接种的菌名、日期和接种者；
2、点燃煤气灯；
3、将菌种试管和待接种的斜面试 管，用大拇指和食指、中指、无 名指握在左手中，并将中指夹在 两试管之间，使斜面向上，成水 平状态，在火焰边用右手松动试 管塞，以利于接种时拔出。
微生物的接种技术
引言：微生物的接种技术是一种利用活体微生物来改变或影响其宿主环境以达到某种特定目的的方法。
它在农业、医疗、环境保护等领域中有着广泛的应用。
本文将详细介绍微生物的接种技术的原理、分类以及在不同领域中的应用。
概述：微生物的接种技术是通过将特定的微生物引入特定的环境中，从而影响宿主环境中的生物群落，并达到改变环境的目的。
接种技术的成功与否取决于合适的微生物选择、适当的接种方法和适宜的环境条件。
正文：一、微生物接种技术的原理1.1接种微生物的目的和原因1.2微生物的选择原则1.3接种微生物的策略二、微生物接种技术的分类2.1入侵性接种技术2.2非入侵性接种技术2.3增强型接种技术2.4保护性接种技术2.5组合接种技术三、农业领域中的微生物接种技术应用3.1有益微生物的接种3.2有害微生物的控制3.3好氧微生物的应用3.4厌氧微生物的应用3.5接种微生物的途径与技术四、医疗领域中的微生物接种技术应用4.1微生物解毒剂的应用4.2高效微生物生产技术的应用4.3微生物酶的应用4.4微生物制剂的应用4.5微生物植入技术的应用五、环境保护领域中的微生物接种技术应用5.1污水处理中的微生物接种技术5.2土壤修复中的微生物接种技术5.3水质净化中的微生物接种技术5.4生态系统修复中的微生物接种技术5.5环境监测与评估中的微生物接种技术总结：微生物的接种技术是一种重要的生物技术手段，可以在农业、医疗、环境保护等领域中发挥重要作用。
它有助于改善宿主环境、增强微生物活性和促进生态平衡。
在应用微生物接种技术时，需注意选择适宜的微生物菌种、合适的接种方法以及适当的环境条件，以达到最佳的效果。
(完整版)微生物的接种技术
微生物的接种技术1 目的1.1学习掌握微生物的几种接种技术1.2 建立无菌操作的概念，掌握无菌操作的基本环节2 实验说明将微生物的培养物或含有微生物的样品移植到培养基上的操作技术称之为接种。
接种是微生物实验及科学研究中的一项最基本的操作技术。
无论微生物的分离、培养、纯化或鉴定以及有关微生物的形态观察及生理研究都必须进行接种。
接种的关键是要严格的进行无菌操作，如操作不慎引起污染，则实验结果就不可靠，影响下一步工作的进行。
3 实验器材3.1 器械和用品酒精灯，玻璃铅笔，火柴，试管架、接种环、接种针、接种钩、滴管、移液管、三角型接种棒等接种工具。
3.2 菌种和培养基菌种：大肠杆菌（Escherichia coli），金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）。
培养基：普通琼脂斜面和平板,营养肉汤,普通琼脂高层(直立柱)。
4 实验流程斜面接种法→液体接种法→固体接种法→穿刺接种法。
5 操作步骤5.1 斜面接种法斜面接种法主要用于接种纯菌，使其增殖后用以鉴定或保存菌种。
通常先从平板培养基上挑取分离的单个菌落，或挑取斜面，肉汤中的纯培养物接种到斜面培养基上。
操作应在无菌室、接种柜或超净工作台上进行，先点燃酒精灯。
将菌种斜面培养基(简称菌种管)与待接种的新鲜斜面培养基(简称接种管)持在左手拇指、食指、中指及无名指之间，菌种管在前，接种管在后，斜面向上管口对齐，应斜持试管呈45～0度角，并能清楚地看到两个试管的斜面，注意不要持成水平，以免管底凝集水浸湿培养基表面。
以右手在火焰旁转动两管棉塞，使其松动，以便接种时易于取出。
右手持接种环柄，将接种环垂直放在火焰上灼烧。
镍铬丝部分（环和丝）必须烧红，以达到灭菌目的，然后将除手柄部分的金属杆全用火焰灼烧一遍，尤其是接镍铬丝的螺口部分，要彻底灼烧以免灭菌不彻底。
用右手的小指和手掌之间及无名指和小指之间拨出试管棉塞，将试管口在火焰上通过，以杀灭可能沾污的微生物。
微生物接种的方法
微生物接种的方法
微生物接种是将有益微生物引入特定环境中的过程，以增强环境的功能或改善环境的质量。
以下是常见的微生物接种方法：
1. 直接接种：将纯培养的微生物直接添加到目标环境中。
这种方法适用于培养基或液体介质中的微生物，如将有益菌种接种到土壤、水体或发酵罐中。
2. 转入接种：将微生物从一个环境转移到另一个环境中。
这种方法常用于土壤接种，其中可以将已经具有有益功能的土壤转移到不具备相应功能的土壤中。
3. 合成接种：将多种微生物株混合起来接种到目标环境中。
合成接种可以利用多种有益微生物的协同作用，提高目标环境的功能。
4. 母婴传递：将某种微生物从母体传递给新生的个体。
这种方法常用于将有益微生物从母体动物传递给幼崽，从而建立幼崽的肠道菌群。
5. 物种共培养：将两种或多种有互利共生关系的微生物一起培养。
这种方法可用于培养共生菌群，如某些根瘤菌与植物根系的联合培养。
以上是一些常见的微生物接种方法，具体的接种方法会根据实际应用的需求和环境条件的不同而有所差异。
微生物常用的接种方法
微生物常用的接种方法微生物的接种方法主要分为直接接种和间接接种两种。
1. 直接接种：直接将微生物菌株接种到所需培养基或宿主中，常见的直接接种方法包括：刷涂法、滴液法、插管法、点刺法等。
刷涂法：将微生物菌株涂布在培养基表面，常用在固体培养基上。
先将培养基倒在无菌平板上，然后用无菌棉签挑取微生物菌株，涂布在培养基表面。
然后，用无菌铂丝将涂布的微生物菌株均匀划开，使其均匀分布在培养基上。
滴液法：将微生物菌株滴加到培养基上，常用于液体培养基。
将所需培养基倒入无菌试管中，然后用移液器吸取微生物菌株悬液，滴入试管中的培养基。
插管法：适用于需要氧气的微生物。
首先将无菌棉球塞入试管底部，然后用被接种菌株液体湿润棉球，最后将试管加盖并放入适宜的环境进行培养。
点刺法：适用于菌落计数。
选取已培养的纯菌落，用精细铂丝在无菌培养基上点刺菌落，再迅速涂布在培养基上。
2. 间接接种：首先将微生物菌株培养增殖至一定量或特定状态，然后将培养液接种到所需培养基或宿主中。
常见的间接接种方法包括：液体传代接种、平板传代接种和传代接种。
液体传代接种：将微生物初代培养液添加至新的液体培养基中进行传代培养。
首先取少量初代培养液，转移到新的培养基中，然后逐渐增加培养基的体积，直至达到所需的培养体积。
平板传代接种：将微生物初代培养液均匀涂布在培养基表面，待菌落生长后，挑取单个菌落接种到新的培养基或药敏试验板中。
传代接种：通过逐步培养，将微生物菌株传代至新的培养条件。
首先从原始菌株中选取少量接种到培养基中，经过一段时间的培养后，再从这些培养物中选取一部分接种到新的培养条件中，如改变培养基成分、温度等，以适应新的培养条件。
微生物的接种方法不仅影响菌落生长、菌株纯度和培养效率，也直接影响到后续实验的结果准确性。
因此，在进行微生物实验时，需要根据实验的目的和要求选择合适的接种方法，并严格遵守无菌操作的规范，以保证实验结果的可靠性。
微生物学实验中接种技术
微生物学实验中接种技术接种技术是微生物学试验中最常用的基本操作技术，接种就是利用接种工具在无菌条件下将培养物往新的培养基上移植。
(一)接种工具常用的接种工具有接种针、接种环、接种铲、涂布棒等。
接种细菌或酵母菌用接种环或接种针，接种环(或接种针)有一次性的塑料材质的，已灭菌可挺直用法，也有铂金或镍铬合金的。
假如用法金属材质的，用法前后均应在火焰上彻底灼烧灭菌，灭菌时右手持接种环(或接种针)的木柄或塑料柄，将金属部分竖立于火焰中，慢慢下移使金属环(或接种针)烧红，并将接种环(或接种针)和柄之间的金属棒也通过火焰数次。
取菌时，必需待接种环(或接种针)冷却后方可用法。
接种某些不易和培养基分别的放线菌和真菌时，有时用接种钩或接种铲。
用涂布法在琼脂平板上分别单个菌落时需用涂布棒。
常用的接种工具见图4-1。
图4-1 常用的接种工具a.接种针b.接种环c.接种钩d.接种护e.移液管f.滴管g.涂布棒h.微量取液器 (二)常用的接种办法按照目的不同，可分离采纳接种环、接种针、移液管等举行斜面培养基接种、液体培养基接种和半固体培养基穿刺接种等。
1.斜面培养基接种将微生物从一个斜面培养基接种至另一个斜面培养基上的办法，称为斜面培养基接种。
斜面培养基接种主要用于接种纯菌，使其增殖后用以鉴定或保存菌种，操作办法如下： (1)左手持菌种管与培养基管，斜面皆向上，菌种管在外侧，右手用拿毛笔的姿态持接种环，将铂丝与欲进入试管的柄部通过火焰灭菌。
(2)右手的小指与掌心夹下培养基管的棉塞，第四指与小指夹下菌种管棉塞，管口通过火焰。
(3)接种环伸入菌种管，蘸取少许菌种。
(4)接种环伸入培养基管，在斜面上蜿蜓划线，或者划直线。
注重沾有菌种的接种环不行碰管口与其他地方。
(5)管口再通过火焰，并将棉塞塞于本来的试管。
(6)接种环灭菌。
2.液体培养基接种液体培养基接种基本上与斜面培养基接种法相同，不同之处是，将挑取的菌种移种至液体培养基管中时，斜持试管，将菌涂于液面处管壁上，试管竖立以后菌种即在液体内。
接种微生物的方法
接种微生物的方法
接种微生物的方法包括以下几种：
1. 培养基接种法：将待接种的微生物菌种移植到培养基表面或内部，通过培养基提供的营养物质和环境条件，使微生物得以生长和繁殖。
2. 涂布法：用棉签、铁圈或称量匙等将微生物菌种涂布在培养基表面，使其均匀分布，然后进行培养。
3. 针刺法：用接种针或注射针直接将微生物菌液注射到培养基内部，然后进行培养。
4. 对数稀释法：将微生物菌液按一定比例稀释后，取适量的稀释液接种到培养基上，使其逐渐稀释，从而得到不同浓度的微生物菌液。
5. 冲洗法：用适量的无菌液体（如生理盐水或培养基）冲洗微生物落或菌液，收集其中的微生物细胞，并将其转移至培养基上进行培养。
需要注意的是，以上方法只是常见的微生物接种方法，不同微生物可能需要采用不同的接种方法，具体操作要根据具体微生物的特性和实验要求来确定。
另外，在操作时一定要保持无菌状态，避免外部细菌或其他微生物的污染。
微生物接种技术
实验八微生物无菌接种技术一、实验原理微生物接种就是在无菌条件下，用接种工具（针、环）从一支原菌种中挑取少许菌体，接入到另一支新的培养基上扩大培养的技术。
要想得到大量的菌种，适应生产、科研和教学要求，就要进行微生物的接种，扩大菌种数量。
接种因使用不同容器、不同的培养基，达到不同的目的，而有不同的接种方法，但它们的基本要求是相同的。
通常接种都应在空气经过消毒灭菌的接种室或接种箱或超净工作台内完成。
二、实验步骤1.斜面接种（1）左手夹住试管（2）灼烧接种环（3）拔出棉塞，夹在小指、无名指上，管口过火（4）取菌、接种，接种后在火焰上方迅速塞好棉塞（5）写好标签（菌种名、日期、接种者姓名），贴于斜面正上方前端约1cm处.（6）于37度培养箱中培养24小时。
（全班统一装入一保鲜袋）（7）一星期后观察分离效果，拍照，分析结果2.平板培养基（平板）制备（1）将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上，右手拿装有培养基的锥形瓶，左手拔出棉塞。
（2）右手拿锥形瓶，使瓶口迅速通过火焰。
（3）用左手的拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，右手将锥形瓶中的培养基（约10到20ml）倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖。
（4）等待平板冷却凝固。
3.涂布平板法（以小组为单位，对混合菌菌悬液进行涂布分离）(1)用75%酒精或0.01%新洁而灭擦洗双手,进行消毒处理。
（2）将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中。
(3) 取少量菌液滴加到培养基表面。
（4）将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃尽后，冷却8~10s。
（5）用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面，涂布时可转动培养皿，使菌液分布均匀。
（6）将接种好的平板在皿底做好标记。
（7）涂布分离的平板全班一起放入保鲜袋中，37度培养箱中倒置培养24h。
（8）一星期后以小组为单位观察分离效果，拍照，分析结果4.划线分离：从污染平板中纯化细菌菌落（每人1个平板）(1)用75%酒精或0.01%新洁而灭擦洗双手,进行消毒处理。
实验微生物接种技术
实验微生物接种技术一、实验实训目的学习微生物工作的基本接种方法，建立“无菌“概念”，掌握无菌操作技术。
二、实验实训材料1．菌种大肠杆菌斜面菌种。
2．器材牛肉膏蛋白胨琼脂斜面培养基、接种环（针）、酒精灯、酒精棉球。
三、实验实训内容及方法（一）无菌操作菌种分离或移接工作应在无菌环境中进行，接种室、接种箱或超净工作台是常用的接种环境。
用前先清洁好卫生，再进行消毒处理。
可用紫外线灯。
操作者的手应先用肥皂洗净，再用酒精棉球消毒；整个操作过程都要靠近酒精灯火焰；接种工具在用前和用后必须在灯焰上灭菌；棉塞不得乱放，操作中只能夹在手上；不能有跑、跳等力度大的动作，以免引起空气大振动而增加染菌机会。
（二）接种方法1．接种前，需在待接种试管上贴好标签，注明菌名及接种日期。
接种最好在无菌室或无菌箱内进行，若无此条件，可在较清洁密闭的室内进行。
室内应事先消毒，桌面要清洁，除去灰尘和杂物。
2.点燃酒精灯，灯焰周围约1～2cm处的空间为无菌区，所以在酒精灯灯焰旁进行无菌操作法接种，可避免杂菌污染。
3.将菌种及接种用的斜面培养基（即两支斜面试管）同时握在左手中，使中指位于两试管之间。
管内斜面向上，两试管管口相互平行，两支试管处于接近水平位置，用右手的小指、无名指及手掌在火焰旁同时拔去两支试管的棉塞，并使管口在火焰上通过，以烧死试管口的杂菌。
随后把管口移至火焰近旁约1-2cm 处。
4.右手拿接种环，先垂直、后水平方向把接种环放在火焰上灼烧。
凡是需进入试管的杆部分均应通过火焰灼烧，下端的环须烧红，以彻底灭菌。
灼烧时，应把环放在酒精灯之外焰（氧化焰）上，因外焰温度高，易于烧红。
5.将烧过的接种环伸入菌种管内，先使环接触斜面上端的培养基或试管壁，使接种环充分冷却，待培养基不再被接种环融化时，即可将接种环伸向斜面中部蘸取少量菌体，然后小心地将接种环从试管内抽出。
注意不能让环接触管壁和管口。
取出后，接种环不能通过火焰，在火焰旁抽出并迅速伸入新培养基斜面管内，在斜面下1/5处，由下至上轻轻划线。
微生物的无菌操作及接种
202X
2、常用的接种方法
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连续划 ※划线 线法 接种
2、常用的接种方法
用接种针从菌种斜面上挑取少量菌体并把它穿刺到固体或半固体的深层培养基中的接种方法。
○ 用于厌气性细菌培养、检查细菌的运动能力、保藏菌种。 ○ 只适宜于细菌和酵母的接种培养
穿刺接种
2、常用的接种 方法
穿刺接种
斜面接种
三．接种：
四．接种:
○ 在火焰旁迅速将沾有菌种的接种环伸入待接斜面管。 从斜面培养基底部向上作“Z”形来回密集划线，勿划 破培养基。
○ 有时也可用接种针仅在斜面培养基的中央拉一条直线 作斜面接种，直线接种可观察不同菌种的生长特点。
斜面接种
3）接种：
七．塞管塞： 取出接种环，灼烧试管口，并在火焰旁将管塞旋上。不要用试管去迎 棉塞，以免试管在移动时纳入不洁空气。
殖动态。
无菌环境 的要求与 保持
2、超净工作台
超净工作台是为实验 室工作提供无菌操作 环境的设施，以保护 实验免受外部环境的 影响，同时为外部环 境提供某些程度的保 护以防污染并保护操 作者。
原理：超净工作台的 洁净环境是在特定的 空间内，洁净空气(进 滤空气)按设定的方向 流动而形成的。以气 流方向来分，现有的 超净工作台可分为垂 直式，由内向外式以 及侧向式。
八
七
六
五四
三
二一
接 穿 透 培 养 基 ？
． 穿 刺 接 种 时 能 否
放 ？
． 种 时
，
为
何
要
尽
包 括 哪 些 内 容 ？
． 验 操 作 过 程 的 无
备 工 作 ？
． 进 入 无 菌
室
实验3-微生物接种技术
实验三微生物接种技术一、实验目的1、掌握无菌操作在微生物接种过程中的重要性。
2、掌握几种常用的微生物接种方法。
3、掌握微生物微生物扩大繁殖的基本方法。
4、认识微生物接种工具二、实验原理微生物接种技术是生物科学研究中最基本的操作技术。
由于实验目的、培养基种类及容器等不同，所用接种方法不同，如斜面接种、液体接种、固体接种和穿刺接种等，以获得生长良好的纯种微生物。
为此，接种必须在一个无杂菌污染的环境中进行严格的无菌操作；同时，因接种方法的不同，常采用不同的接种工具，如接种针、接种环、移液管和玻璃刮铲等。
三、实验器材主要仪器及设备无菌室、超净工作台、培养箱、振荡器、接种针、接种环、接种钩、接种铲，试管固体斜面培养基、培养基平板、三角瓶液体培养基，PDA平板及斜面，牛肉膏-蛋白胨-琼脂平板、斜面培养基、牛肉膏-蛋白胨液体培养基、试管半固体培养基。
菌种大肠杆菌（Escherichia coli)、青霉(Penicillium sp．)、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae Hansen)、细黄链霉菌(Streptomyces microflavus)放线菌等。
四、操作步骤(一)斜面接种技术具体操作如下：1、贴标签接种前在试管上贴上标签，注明菌名、接种日期、接种人姓名等。
贴在距试管口径2-3厘米的位置。
2、点燃酒精灯。
3、接种用接种环将菌种移接到贴好标签的试管斜面上。
无菌操作程序简述如下：⑴手持试管将菌种和用于接种的斜面两支试管用大拇指和其他四指握在左手中、使中指位于两试管之间。
斜面向上，并使它们位于水平位置(图a)。
⑵旋松棉塞先用右手将棉塞旋松，以便接种时易于拔出。
⑶取接种环右手拿接种环在火焰将环端烧红灭菌，然后将有可能伸入试管的其余部分，均用火烧过灭菌。
⑷拔棉塞用右手的无名指、小指和手掌边先后拔出试管的棉塞，然后让试管口缓缓过火灭菌(切勿烧得过烫)，如图b、c所示。
⑸环冷却将灼烧过的接种环伸入菌种管，先使环接触没有长菌的培养基部分，使其冷却。
微生物的接种技术(斜面接种和平板接种)
2.实验说明
将微生物的培养物或含有微生物的样品移植到培养基上的操作技术称之为接种。接种是微生物实验及科学研究中的一项最基本的操作技术。无论微生物的分离、培养、纯化或鉴定以及有关微生物的形态观察及生理研究都必须进行接种。接种的关键是要严格的进行无菌操作，如操作不慎引起污染，则实验结果就不可靠，影响下一步工作的进行。
6思考题：
接种要注意哪些环节才能避免杂菌的污染？
3.实验器材
器械和用品酒精灯，火柴，试管架、接种环等接种工具
菌种和培养基菌种：
金黄色葡萄球菌；培养基：
普通xx斜面和平板
4.实验流程
准备xx斜面→斜面接种
准备xx平板→平板接种
5.操作步骤
（1）斜面接种
斜面接种是从已生长好的菌种斜面上挑取少量菌种移植至另一支新鲜斜面培养基上的一种接种方法。具体操作如下：
e.接种环冷却将灼烧过的接种环伸入菌种管，先使环接触没有长菌的培养基部分，使其冷却。
f.取菌待接种环冷却后，轻轻沾取少量菌体，然后将接种环移出菌种管，注意不要使接种环的部分碰到管壁，取出后不可使带菌接种环通过火焰。
g.接种在火焰旁迅速将沾有菌种的接种环伸入另一支待接斜面试管。从斜面培养基的底部向上部作“Z”形来回密集划线，切勿划破培养基。有时也可用接种针仅在斜面培养基的中央拉一条直线作斜面接种，直线接种可观察不同菌种的生长特点。
3.运用：
能够正确规范地完成斜面接种和平板接种
二、教材分析
1.教学重点：
斜面接种和平板接种的操作
2.教学难点：
斜面接种和平板的操作规范化
3.教学方法：
讲授法、演示法、实验法
三、教学过程
（一）复习：
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微生物的接种技术
1 目的
1.1学习掌握微生物的几种接种技术
1.2 建立无菌操作的概念，掌握无菌操作的基本环节
2 实验说明
将微生物的培养物或含有微生物的样品移植到培养基上的操作技术称之为接种。
接种是微生物实验及科学研究中的一项最基本的操作技术。
无论微生物的分离、培养、纯化或鉴定以及有关微生物的形态观察及生理研究都必须进行接种。
接种的关键是要严格的进行无菌操作，如操作不慎引起污染，则实验结果就不可靠，影响下一步工作的进行。
3 实验器材
3.1 器械和用品
酒精灯，玻璃铅笔，火柴，试管架、接种环、接种针、接种钩、滴管、移液管、三角型接种棒等接种工具。
3.2 菌种和培养基
菌种：大肠杆菌（Escherichia coli），金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）。
培养基：普通琼脂斜面和平板,营养肉汤,普通琼脂高层(直立柱)。
4 实验流程
斜面接种法→液体接种法→固体接种法→穿刺接种法。
5 操作步骤
5.1 斜面接种法
斜面接种法主要用于接种纯菌，使其增殖后用以鉴定或保存菌种。
通常先从平板培养基上挑取分离的单个菌落，或挑取斜面，肉汤中的纯培养物接种到斜面培养基上。
操作应在无菌室、接种柜或超净工作台上进行，先点燃酒精灯。
将菌种斜面培养基(简称菌种管)与待接种的新鲜斜面培养基(简称接种管)持在左手拇指、食指、中指及无名指之间，菌种管在前，接种管在后，斜面向上管口对齐，应斜持试管呈45～0度角，并能清楚地看到两个试管的斜面，注意不要持成水平，以免管底凝集水浸湿培养基表面。
以右手在火焰旁转动两管棉塞，使其松动，以便接种时易于取出。
右手持接种环柄，将接种环垂直放在火焰上灼烧。
镍铬丝部分（环和丝）必须烧红，以达到灭菌目的，然后将除手柄部分的金属杆全用火焰灼烧一遍，尤其是接镍铬丝的螺口部分，要彻底灼烧以免灭菌不彻底。
用右手的小指和手掌之间及无名指和小指之间拨出试管棉塞，将试管口在火焰上通过，以杀灭可能沾污的微生物。
棉塞应始终夹在手中如掉落应更换无菌棉塞。
将灼烧灭菌的接种环插入菌种管内，先接触无菌苔生长的培养基上，待冷却后再从斜面上刮取少许菌苔取出，接种环不能通过火焰，应在火焰旁迅速插入接种管。
在试管中由下往上做S形划线。
接种完毕，接种环应通过火焰抽出管口，并迅速塞上棉塞。
再重新仔细灼烧接种环后，放回原处，并塞紧棉塞。
将接种管贴好标签或用玻璃铅笔划好标记后再放入试管架，即可进行培养。
5．2 液体接种法
多用于增菌液进行增菌培养，也可用纯培养菌接种液体培养基进行生化试验，其操作方法与注意事项与斜面接种法基本相同，仅将不同点介绍如下：
由斜面培养物接种至液体培养基：用接种环从斜面上沾取少许菌苔，接至液体培养基时应在管内靠近液面试管壁上将菌苔轻轻研磨并轻轻振荡，或将接种环在液体内振摇几次即可。
如接种霉菌菌种时，若用接种环不易挑起培养物时，可用接种钩或接种铲进行。
由液体培养物接种液体培养基时，可用接种环或接种针沾取少许液体移至新液体培养基即可。
也可根据需要用吸管、滴管或注射器吸取培养液移至新液体培养基即可（图4-5）。
接种液体培养物时应特别注意勿使菌液溅在工作台上或其他器皿上，以免造成污染。
如有溅污，可用酒精棉球灼烧灭菌后，再用消毒液擦净。
凡吸过菌液的吸管或滴管，应立即放入盛有消毒液的容器内。
5.3 固体接种法
普通斜面和平板接种均属于固体接种，斜面接种法已讲了，不再赘述。
固体接种的另一种形式是接种固体曲料，进行固体发酵。
按所用菌种或种子菌来源不同可分为：
用菌液接种固体料，包括用菌苔刮洗制成的菌悬液和直接培养的种子发酵液。
接种时按无菌操作将菌液直接倒入固体料中，搅拌均匀。
但要注意接种所用水容量要计算在固体料总加水量之内，否则会使接种后含水量加大，影响培养效果。
用固体种子接种固体料。
包括用孢子粉、菌丝孢子混合种子菌或其他固体培养的种子菌。
将种子菌于无菌条件下直接倒入无菌的固体料中即可，但必须充分搅拌使之混合均匀。
一般是先把种子菌和少部分固体料混匀后再拌大堆料。
5.4 穿刺接种法
此法多用于半固体、醋酸铅、三糖铁琼脂与明胶培养基的接种，操作方法与注意事项与斜面接种法基本相同。
但必须使用笔直的接种针，而不能使用接种环。
接种柱状高层或半高层斜面培养管时，应向培养基中心穿刺，一直插到接近管底，再沿原路抽出接种针。
注意勿使接种针在培养基内左右移动，以使穿刺线整齐，便于观察生长结果。
6 结果
分别记录并描绘平板划线、斜面和半固体接种的微生物生长情况和培养特征。
7 思考
7.1 如何确定平板上某单个菌落是否为纯培养？请写出实验的主要步骤。
7.2 为什么高氏I号培养基和马丁氏培养基中要分别加入酚和链霉素？如果用牛肉膏蛋白胨培养基分离一种对青霉素具有抗性的细菌，你认为应如何做？
7.3 试述如何在接种中，贯彻无菌操作的原则?
7.4 以斜面上的菌种接种到新的斜面培养基为例说明操作方法和注意事项。
7.5试设计一个实验，从土壤中分离酵母菌并进行计数。