实验二十一可溶性总糖的测定(蒽酮比色法)
蒽酮比色法测定可溶性糖
蒽酮比色法测定可溶性糖一、原理：糖在浓硫酸作用下，可经脱水反应生成糖醛，生成的糖醛或羟甲基糖醛可与蒽酮反应生成蓝绿色糖醛衍生物，在一定范围内，颜色的深浅与糖的含量成正比。
糖类与蒽酮反应生成的有色物质，在可见光区的吸收峰为630nm，可在此波长下进行比色，故可用于糖的定量。
二、材料、仪器设备及试剂（一）材料阴干野扁桃果实（二）仪器设备分光光度计、水浴锅、具塞刻度试管、移液管、容量瓶、定性滤纸等（三）试剂浓硫酸（比重1.84）、分析纯蔗糖、分析纯蒽酮、乙酸乙酯蒽酮乙酸乙酯试剂：取分析纯蒽酮1g，溶于50ml乙酸乙酯中，贮于棕色瓶中，在黑暗中可保存数周，用时微热溶解结晶。
三、实验步骤（一）标准曲线1、1%蔗糖标准液将分析纯蔗糖在80℃下（2h）烘至恒重，精确称取1.000g，加少量水溶解，转入100ml容量瓶中，加入0.5ml浓硫酸，用蒸馏水定容至刻度。
2、100μg/L蔗糖标准液精确吸收1%蔗糖标准液1ml转入100ml容量瓶中，加水至刻度。
3、标准曲线取20ml刻度试管11支，从0-10分别编号，按下表加入溶液和水。
然后按顺序向试管中加入0.5ml蒽酮乙酸乙酯试剂和5ml浓硫酸，充分振荡，立即将试管放入沸水浴中，逐管均准确保温1min，取出后自然冷却至室温，以空白作参比，在630nm波长下测其吸光度，的数据如下：（二）可溶性糖的提取1、提取取野扁桃样品，擦净表面污物，称取果肉、果仁各5份（共10组）（详重见下表）分别放入10支刻度试管中，加5ml蒸馏水，塑料薄膜封口，于沸水中提取30min，提取液滤入25ml容量瓶，反复漂洗试管残渣，定容至刻度。
2、显色测定吸取样品提取液0.5ml于20ml刻度试管中，加蒸馏水1.5ml。
按顺序向试管中加入0.5ml蒽酮乙酸乙酯试剂和5ml浓硫酸，充分振荡，立即将试管放入沸水浴中，逐管均准确保温1min，取出后自然冷却至室温，以空白作参比，在630nm 波长下测其吸光度，结果见下表：四、结果计算从回归方程求得糖量（y ） ×提取液量（5）×稀释倍数（5）可溶性糖含量＝吸取样品液的体积（0.5）×100％样品干重（0.05）×106实验结果：野扁桃果仁可溶性糖含量＝5.74％ 野扁桃果肉可溶性糖含量＝3.54％新疆野扁桃果实糖酸含量的测定——蒽酮比色法测可溶性糖指导老师：曾斌实验指导老师：帕提曼实验学生：苏瑞（063231240）实验时间：2008年10月。
蒽酮比色法测糖.doc
蒽酮比色法测糖一目的掌握蒽酮比色法测糖的原理和方法二原理蒽酮比色法是一个快速而简便的定糖方法。
蒽酮可以与游离的已糖或多糖中的已糖基、戊糖基及已糖醛酸起反应，反应后溶液呈蓝绿色，在620nm处有最大吸收。
本法多用于测定糖原的含量，也可用于测定葡萄糖的含量。
三实验器材及试剂马铃薯干粉、可调试移液器或移液管、可见分光光度计（723型）、电子分析天平、水浴锅、电炉子蒽酮试剂：取2g蒽酮溶解到80%H2SO4中，以80%H2SO4定容到1000ml，当日配制使用。
标准葡萄糖溶液（0.1mg/ml）：100mg葡萄糖溶解到蒸馏水中，定容到1000ml备用。
葡萄糖标准溶液：称取已在80℃烘箱中烘至恒重的葡萄糖100mg，配制成500ml溶液，即得每ml含糖为200μg的标准溶液。
蒽酮试剂：称取1g经过纯化的蒽酮，溶解于1000ml稀硫酸中即得。
硫酸溶液由760m l浓硫酸（比重1.84)稀释成1000ml而成。
2g/L蒽酮试剂：溶解2g蒽酮于1L浓硫酸（98%的浓硫酸）中，当日配制使用。
四、操作1．可溶性糖的提取称取重约5g的新鲜植物叶子，于研钵中乙醚少许，仔细研磨成均匀的浆状物，倒入烧杯中，用70℃热水洗涤研钵，洗液并入烧杯中，再加蒸镏水30─40ml。
将烧杯放在水浴锅中加热，保持温度70─80℃约半小时，冷却后1滴1滴地加入饱和中性醋酸铅，以除去蛋白质，直至加入醋酸铅时不再形成白色沉淀为止。
然后将此混合物连同残渣一并洗入100ml容量瓶中，加水至刻度，充分振荡。
以干燥漏斗将滤液过滤于一干燥的三角烧瓶中，瓶中事先放有少量（约0.2─0.4g）草酸钠粉末，以除去滤液中过量的醋酸铅，使生成草酸铅沉淀，再行过滤，所得的透明滤液即为可溶性糖提取液。
学习指南2-1 植物组织中可溶性总糖的提取及蒽酮比色定糖法
植物组织中可溶性总糖的提取及蒽酮比色定糖法——学习指南
l 学习重点 1. 学习植物样本中可溶性总糖的提取方法。
2. 掌握蒽酮比色法定糖的原理和操作。
l 知识要点
蒽酮比色定糖法：糖在浓硫酸作用下，脱水生成糠醛或羟甲基糠醛，糠醛或羟甲基糠醛可与蒽酮反应生成蓝绿色糠醛衍生物，在620nm 处有最大吸收，可通过比色法进行糖的定量。
蒽酮比色法快速、简便，几乎可以测定所有的糖类物质，包括单糖、寡糖和多糖。
比色法和标准曲线制作参考《面粉中总糖和还原糖的提取及3,5-二硝基水杨酸定糖法》。
l 试剂 1. 0.1mg/ml 标准葡萄糖溶液。
2. 蒽酮试剂。
l 材料
新鲜植物叶片
l 仪器
电子天平、研钵、电磁炉、旋涡混合仪、循环水泵、抽滤瓶、紫外可见分光光度计 l 操作
l 注意事项
1. 蒽酮试剂中硫酸的浓度为80%，由于蒽酮不溶于水，因此测定样品中含水量不能多，试管应干燥无水，否则蒽酮会在测定液中析出而影响测定。
2. 蒽酮试剂
中有浓硫酸，操作时要小心，注意安全。
可溶性糖的测定（蒽酮比色法）
可溶性糖的测定——蒽酮比色法原理：可溶性糖与浓硫酸反应生成羟甲基糠醛，其与蒽酮生黄绿或蓝绿的糠醛衍生物，该物质在630nm(620)处有最大吸收峰，其浓度与可溶性糖的含量成正比。
试验用品：电子天平、分光光度计、恒温水浴锅、1mL，2mL，5mL 移液管各一支、容量瓶（根据需稀释倍数选择25或50mL）、10mL 刻度试管或离心管、试管架（别用胶的）、指型管（大一点的便于震荡混匀液体）、漏斗、滤纸、洗瓶试验药品：蒽酮、乙酸乙酯、分析纯蔗糖、浓硫酸（优级纯或分析纯）、蒸馏水试验样品：玉米叶（干样）标液及标曲配制：蒽酮-乙酸乙酯试剂：称取分析纯蒽酮1g溶于50mL乙酸乙酯中，贮于棕色瓶，至于黑暗中保存，如有结晶析出可加热溶解。
1%蔗糖标准液：精确称取1.000g分析纯蔗糖加少量蒸馏水溶解后转入100mL容量瓶中，加0.5mL浓硫酸，用蒸馏水定容至刻度线；100mg/L蔗糖标准液：精确吸取1%蔗糖标准液1mL，加入100mL容量瓶，加水至刻度线。
标曲：项目管号0 1 2 3 4 5各管中蔗糖含量（ug) 0 20 40 60 80 100 100mg/L蔗糖液（ml）0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 蒸馏水（ml） 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 蒽酮乙酸乙酯试剂（ml）0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5浓硫酸（ml） 5 5 5 5 5 5 吸光度A630样品测定：称取0.05g样品于干燥的10mL刻度试管中，加蒸馏水10mL后放入水浴锅内沸水浴30min，再过滤到50mL容量瓶内混匀。
取干燥的指型管分别加入1.5mL蒸馏水、0.5mL蒽酮乙酸乙酯试剂、0.5mL样品溶液和5mL浓硫酸快速震荡摇匀后冷至室温比色（摇匀后反应10min左右可放入冷水中冷却）。
结果计算：可溶性糖含量=Mx×V×D×100V1×W×103Mx：标准溶液查得的糖含量（ug）V ：样品总体积（mL）V1：测定时的取用体积（mL）D ：稀释倍数（mg）103：样品重量单位由mg换算成ug的倍数。
总糖的测定蒽酮比色方法
总糖测定——蒽酮比色法一、原理：单糖类遇浓硫酸时，脱水生成糠醛衍生物，后者可与蒽酮缩合成蓝绿色的化合物，当含糖量在20～200mg/L范围内时，其呈色强度与溶液中糖的含量成正比，故可比色定量。
二、试剂：1、10～100ppm葡萄糖系列标准溶液：称取1.0000g葡萄糖，用水定容至1000ml，从中吸取1、2、4、6、8、10ml分别移入100ml容量瓶中，用水定容，即得浓度为10、20、40、60、80、100ppm（ug/ml）葡萄糖系列标准溶液。
2、0.1%蒽酮溶液：称取0.1g蒽酮，溶于100ml72%硫酸中，贮存于棕色瓶中，于0～4℃下存放。
3、72%硫酸溶液。
三、测定方法：（一）样品处理：称取适量样品，用100ml水转移至250ml容量瓶，慢慢加入5ml乙酸锌和5ml亚铁氰化钾，沸水浴5～10min，定容，静置至上清，过滤。
根据估计含糖量，去滤液进行稀释，使糖含量在20～80mg/L范围内。
（二）测定吸取系列标准溶液、样品溶液（含糖20～80ppm）、蒸馏水（空白）各2ml，分别加入具塞比色管中，沿管壁各加入蒽酮试剂10ml，立即摇匀，放入沸水浴中准确加热10min，取出，迅速冷却至室温，在暗处放置10min，用1cm比色杯，以零管调仪器零点，在620nm波长下测定吸光度，绘制标准曲线。
根据样品溶液的吸光度查标准曲线，得糖含量。
四、结果计算：总糖（以葡萄糖计，%）=c×稀释倍数×10-4式中：c：从标准曲线查得的糖浓度，ppm（ug/ml）；10-4：将ppm换算为%的系数五、说明与讨论1、该法是微量法，适合于含微量碳水化合物的样品，具有灵敏度高，试剂用量少等优点。
2、该法按操作的不同可分为几种，主要差别于蒽酮试剂中硫酸的浓度（66～95%），取样量（1～5ml）、蒽酮试剂用量（5～20ml）、沸水浴中反应时间（6～15min）和显色时间（10～30min）。
这几个操作条件之间是有联系的，不能随意改变其中任何一个，否则将影响分析结果。
实验 植物可溶性糖测定
～注意事项～
蒽酮试剂含有浓硫酸，使用时应该小心
离心时要平衡 在蒽酮反应前稀释样品10-20倍
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四、操作步骤
1.可溶性糖的提取 称取0.5g的新鲜植物叶片，于研钵中加 80%酒精4ml，仔细研磨成匀浆，倒入离心管 内，置于80℃水浴中不断搅拌30min，离心 10分钟(5000转/min)，收集上清液于10ml的 刻度试管中，其残渣加2ml80%酒精重复提1次， 合 并 上 清 液 。 在 上 清 液 中 加 0.5g 活 性 炭 ， 80℃水浴脱色30min，定容至10ml，过滤后 取滤液(稀释10倍或20倍后)测定。
植物组织中可溶性糖含量的测定
பைடு நூலகம்
一、实验目的
学习可溶性糖测定的蒽酮比色法
二、实验原理
植物在个体发育的各个时期，代谢活动也发
生相应的变化，碳水化合物的代谢也不例外， 其含量也随之发生变化。了解可溶性糖含量 的变化，在生理上和实践上都有重要的意义。 本实验采用蒽酮比色法测定可溶性糖的含量。 糖在硫酸的作用下生成糠醛，糠醛再与蒽酮 作用，形成一种绿色的络合物。在低浓度时， 625nm的OD值与糖含量成正相关。该实验方法 简便，但没有专一性，对于绝大部分的碳水 化合物都能与蒽酮反应，产生颜色。
试剂（ml) 1
葡萄糖标准液 80%酒精 蒽酮-硫酸试剂
管号 2 3 4 5 6 7
0
0.15 0.3 0.45 0.6 0.75 0.9
1.0 0.85 0.7 0.55 0.4 0.25 0.1 5 5
30
5
60
5
90
5
120
5
150
5
180
葡萄糖浓度（ul/ml)0
蒽酮硫酸法测定总糖
苯酚硫酸法和蒽酮硫酸法测总糖的方法及步骤2011-07-15 11:45:19| 分类：默认分类|字号订阅植物体内的碳素营养状况以及农产品的品质性状，常以可溶性糖和淀粉的含量作为重要指标，本实验学习几种定量测定可溶性糖和淀粉的方法。
（一）苯酚法测定可溶性糖【实验原理】植物体内的可溶性糖主要是指能溶于水及乙醇的单糖和寡聚糖。
苯酚法测定可溶性糖的原理是：糖在浓硫酸作用下，脱水生成的糠醛或羟甲基糠醛能与苯酚缩合成一种橙红色化合物，在10－100mg范围内其颜色深浅与糖的含量成正比，且在485nm波长下有最大吸收峰，故可用比色法在此波长下测定。
苯酚法可用于甲基化的糖、戊糖和多聚糖的测定，方法简单，灵敏度高，实验时基本不受蛋白质存在的影响，并且产生的颜色稳定160min以上。
【实验仪器及试剂】1．仪器：分光光度计、电炉、铝锅、20mL刻度试管、刻度吸管、记号笔、吸水纸适量。
2．试剂：（1）90％苯酚溶液：称取90g苯酚（AR），加蒸馏水10mL溶解，在室温下可保存数月。
（2）9％苯酚溶液：取3mL 90％苯酚溶液，加蒸馏水至30mL，现配现用。
（3）浓硫酸（比重1.84）。
（4）1％蔗糖标准液：将分析纯蔗糖在80℃下烘至恒重，精确称取1.000g。
加少量水溶解，移入100mL容量瓶中，加入0.5mL浓硫酸，用蒸馏水定容至刻度。
（5）100ug/L蔗糖标准液：精确吸取1％蔗糖标准液1mL加入100mL容量瓶中，加水定容。
【实验步骤】1．标准曲线的制作：取20mL刻度试管11支，从0－10分别编号，按表27－1加入溶液和水，然后按顺序向试管内加入1mL 9％苯酚溶液，摇匀，再从管液正面以5－20s。
加入5 mL浓硫酸，摇匀。
比色液总体积为8 mL，在恒温下放置30min。
显色。
然后以空白为参比，在485nm波长下比色测定，以糖含量为横坐标，光密度为纵坐标，绘制标准曲线，求出标准直线方程。
2．可溶性糖的提取取新鲜植物叶片，擦净表面污物，剪碎混匀，称取0.10－0.30g，共3份，分别放入3支刻度试管中，加入5-10mL 蒸馏水，塑料薄膜封口，于沸水中提取30min （提取2次），提取液过滤入25mL容量瓶中，反复冲洗试管及残渣，定容至刻度。
实验二十一 可溶性总糖的测定(地衣酚 硫酸法)
植物样品可溶性糖（%）=（查曲线所得糖量（ｕｇ）*稀释倍数）*100/（样重 （g）*106）
注意事项 1.该法操作简便，可广泛用于测定糖蛋白中总糖含量。 2.氨基酸存在可导致颜色降低。大量的色氨酸存在也可导致一些误差，但对中性糖的测 定结果是可靠的。 3.如果样品中含有较多葡萄糖，加热时间应延长至 45 分钟，因为葡萄糖显色较慢。
操作步骤 1.制作甘露糖标准曲线：取 7 支试管，编号，分别加 100ｕｇ/ml 甘露糖标准液 0、0.5、 1.0、1.5、2.0、2.5、3.0ml，再各加蒸馏水 3.0、2.5、2.0、1.5、1.0、0.5、0ml 补足至 3.0ml，各管加 8.5ml 冷却到 4℃的地衣酚—硫酸试剂，管口各加一玻璃球，将试管放入 80℃水浴中加热 15 分钟。取出后流动水冷却，505nm 比色（以 0 管调零）。 2.可溶性糖样品液显色：将实验三十四制备（或其他材料提取）的可溶性糖样品适量（约 含糖 50~200ｕｇ）加入试管，加蒸馏水补至 3.0ml，再加 8.5ml 冷的地衣酚—硫酸试剂， 同标准曲线制作一样处理。冷却后 505nm 比色。
实验二十一 可溶性总糖的测定（地衣酚—硫酸法）
目的要求 学习另一种测定可溶性总糖的方法—地衣酚—硫酸色法。
实验原理 可溶性糖经无机酸处理脱水产生糠醛（戊糖）或糠醛衍生物（如羟甲基糠醛）（己糖）， 生成物能与酚类化合物缩合成有色物质。通常使用硫酸，常用的酚有地衣酚（又名苔黑 酚）、间—苯二酚、ａ-萘酚等。
思考题 样品显色过程中，试管口为何加盖玻璃球？
蒽酮比色法测总糖
蒽酮比色法测总糖实验五总糖的测定——蒽酮比色法一、目的：1.掌握蒽酮法测定可溶性糖含量的原理和方法。
2.学习植物可溶性糖的一种提取方法。
二、原理：糖类在较高温度下可被浓硫酸作用而脱水生成糠醛或羟甲基糖醛后，与蒽酮(C14H10O)脱水缩合，形成糠醛的衍生物，呈蓝绿色。
该物质在620 nm处有最大吸收，在150 µg/ml范围内，其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。
这一方法有很高的灵敏度，糖含量在30 µg左右就能进行测定，所以可做为微量测糖之用。
一般样品少的情况下，采用这一方法比较合适。
三、仪器、试剂和材料1.仪器：电热恒温水浴锅，分光光度计，电子天平，容量瓶，刻度吸管等2.试剂：(1)葡萄糖标准液：l00 µg/ml(2)浓硫酸(3)蒽酮试剂：0.2 g蒽酮溶于100 ml浓 H2SO4中。
当日配制使用。
3.材料：甜糜秸秆四、操作步骤1.葡萄糖标准曲线的制作取7支大试管，按下表数据配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液：在每支试管中立即加入蒽酮试剂4.0m1，迅速浸于冰水浴中冷却，各管加完后一起浸于沸水浴中，管口加盖，以防蒸发。
自水浴重新煮沸起，准确煮沸l0 min取出，用冰浴冷却至室温，在620 nm波长下以第一管为空白，迅速测其余各管吸光值。
以标准葡萄糖含量（µg）为横坐标，以吸光值为纵坐标，作出标准曲线。
2.植物样品中可溶性糖的提取：将样品剪碎至2 mm以下，105 ºC烘干至恒重，精确称取1~5 g，置于50 ml三角瓶中，加沸水25 m1，加盖，超声提取10 min，冷却后过滤（抽滤），残渣用沸蒸馏水反复洗涤并过滤（抽滤），滤液收集在50 m1容量瓶中，定容至刻度，得提取液。
3.稀释：吸取提取液2 m1，置于另一50 m1容量瓶中，以蒸馏水稀释定容，摇匀。
4.测定吸取1 ml已稀释的提取液于试管中，加入4.O ml蒽酮试剂，平行三份；空白管以等量蒸馏水取代提取液。
总糖的测定蒽酮比色方法
总糖测定——蒽酮比色法一、原理：单糖类遇浓硫酸时，脱水生成糠醛衍生物，后者可与蒽酮缩合成蓝绿色的化合物，当含糖量在20～200mg/L范围内时，其呈色强度与溶液中糖的含量成正比，故可比色定量。
二、试剂：1、10～100ppm葡萄糖系列标准溶液：称取1.0000g葡萄糖，用水定容至1000ml，从中吸取1、2、4、6、8、10ml分别移入100ml容量瓶中，用水定容，即得浓度为10、20、40、60、80、100ppm（ug/ml）葡萄糖系列标准溶液。
2、0.1%蒽酮溶液：称取0.1g蒽酮，溶于100ml72%硫酸中，贮存于棕色瓶中，于0～4℃下存放。
3、72%硫酸溶液。
三、测定方法：（一）样品处理：称取适量样品，用100ml水转移至250ml容量瓶，慢慢加入5ml乙酸锌和5ml亚铁氰化钾，沸水浴5～10min，定容，静置至上清，过滤。
根据估计含糖量，去滤液进行稀释，使糖含量在20～80mg/L范围内。
（二）测定吸取系列标准溶液、样品溶液（含糖20～80ppm）、蒸馏水（空白）各2ml，分别加入具塞比色管中，沿管壁各加入蒽酮试剂10ml，立即摇匀，放入沸水浴中准确加热10min，取出，迅速冷却至室温，在暗处放置10min，用1cm比色杯，以零管调仪器零点，在620nm波长下测定吸光度，绘制标准曲线。
根据样品溶液的吸光度查标准曲线，得糖含量。
四、结果计算：总糖（以葡萄糖计，%）=c×稀释倍数×10-4式中：c：从标准曲线查得的糖浓度，ppm（ug/ml）；10-4：将ppm换算为%的系数五、说明与讨论1、该法是微量法，适合于含微量碳水化合物的样品，具有灵敏度高，试剂用量少等优点。
2、该法按操作的不同可分为几种，主要差别于蒽酮试剂中硫酸的浓度（66～95%），取样量（1～5ml）、蒽酮试剂用量（5～20ml）、沸水浴中反应时间（6～15min）和显色时间（10～30min）。
这几个操作条件之间是有联系的，不能随意改变其中任何一个，否则将影响分析结果。
植物体内可溶性糖含量的测定
植物体内可溶性糖含量的测定——蒽酮法一、实验目的1.了解蒽酮法测定可溶性糖含量的原理2.掌握分光光度计的使用二、实验背景糖类物质是构成植物体的重要组成成分之一也是新陈代谢的主要原料和贮存物质。
不同载培条件不同成熟度都可以影响水果、蔬菜中糖类的含量。
因此对水果、蔬菜中可溶性糖的测定可以了解和鉴定水果、蔬菜品质的高低。
三、实验原理总糖是指样品中的还原单糖及在本法测定条件下能水解成还原单糖的蔗糖、麦芽糖和可部分水解为葡萄糖的淀粉。
蒽酮比色法是测定样品中总糖量的一个灵敏、快速、简便的方法。
其原理是糖类在较高温度下被硫酸作用脱水生成糠醛或糖醛衍生物后与蒽酮(C14HoO)缩合成蓝色化合物。
溶液含博量在每mL 150 pg以内，与蔥酮反应生成的颜色深浅与糖量成正比。
蒽酮不仅能与单糖也能与双糖、糊精、淀粉等直接起作用,样品不必经过水解。
四、材料、仪器及试剂1.材料：苹果2.仪器：分光光度计恒温水箱试管漏斗容量瓶试管架研钵刀片3.试剂：蒽酮试剂(称取100 mg蒽酮溶于100 mL 98%硫酸溶液(A.R)中）葡萄糖标准溶液(100 μg)/mL(精确称取100 mg干燥葡萄糖,用蒸馏水定容至1000 mL）。
样品溶液（可自选待测物制成样品溶液。
eg：称取0.1g苹果剪碎置于研钵中加入少量蒸馏水研磨成匀浆然后转入20ml刻度试管中用10ml蒸馏水分次洗涤研钵洗液一并转入刻度试管中。
置沸水浴中加盖煮沸10分钟冷却后过滤滤液收集于100ml容量瓶中用蒸馏水定容至刻度摇匀备用。
）四、实验方法1.葡萄糖标准曲线的制作：取七支干燥洁净的试管编号后，按下表操作。
编号123456700.100.200.300.400.600.80葡萄糖标准液(100ug/ml)H2O 1.00.900.800.700.600.400.20蒽酮试剂10101010101010每管加人葡萄糖标准液和水后立即混匀，迅速置于冰浴中，传各管都加人蒽酮试剂后，同时置于沸水浴中，准确加热7分钟，立即取出置冰浴中迅速冷却。
总糖的测定-蒽酮比色法
总糖的测定-蒽酮⽐⾊法植物组织中总糖和还原糖含量的测定（蒽酮⽐⾊法）2010-5-24⼀、实验⽬的掌握蒽酮⽐⾊法测定总糖和还原糖含量的原理和⽅法，学会正确使⽤分光光度计。
⼆、实验原理游离的⼰糖或多糖中的⼰糖基、戊糠醛及⼰糖醛酸在浓硫酸的作⽤下脱⽔⽣成糠醛衍⽣物，糠醛衍⽣物与蒽酮缩合成蓝⾊的化合物，在620nm处有最⼤吸收，在⼀定糖浓度范围内（200ug/ml），溶液吸光度值与糖溶液的浓度成线性关系。
⽤酸将植物组织中没有还原性的多糖和寡糖彻底⽔解成具有还原性的单糖，或直接提取植物组织中的还原糖，即可对植物组织中的总糖和还原糖进⾏定量测定。
三、实验材料1．可见分光光度计、电⼦天平(1/100)、粉碎机、⽔浴锅、电炉。
2．研钵、量筒、三⾓烧瓶、烧杯、容量瓶、玻璃漏⽃、试管1.5cm×15cm、刻度吸管、胶头滴管、pH试纸、坐标纸。
3．植物原料，如银⽿、⽊⽿、菜叶等。
四、实验试剂1．蒽酮试剂：取2g蒽酮溶于l000ml体积分数为80％的硫酸中，当⽇配制使⽤。
2．标准葡萄糖溶液(0.1mg／m1)：称取100mg葡萄糖，溶于蒸馏⽔并稀释⾄1 000ml（可滴加⼏滴甲苯作防腐剂）。
3．6mol／L HCl溶液：50ml盐酸，加⽔⾄100ml。
4．10％NaOH溶液：称取10g NaOH固体，溶于蒸馏⽔并稀释⾄100ml。
五、操作步骤1．葡萄糖标准曲线的绘制取⼲净试管6⽀，按下表进⾏操作。
以吸光度为纵坐标，各标准液浓度(mg／m1)为横坐标做图。
2．样品中还原糖的提取和测定称取植物原料⼲粉0.1～0.5g，加⽔约3ml，在研钵中磨成匀浆，转⼊三⾓烧瓶中，并⽤约30ml的蒸馏⽔冲洗研钵2～3次，洗出液也转⼊三⾓烧瓶中。
于50℃⽔浴中保温半⼩时（使还原糖浸出），取出，冷却后定容⾄100ml。
过滤，取lml滤液进⾏还原糖的测定：吸取lml总糖类溶液置试管中，浸于冰浴中冷却，再加⼊4ml蒽酮试剂，沸⽔浴中准确加热10min，取出⽤⾃来⽔冷却后⽐⾊，其他条件与做标准曲线相同，测得的吸光度值由标准曲线查算出样品液的糖含量。
总糖的测定-蒽酮比色法
实验一总糖的测定-蒽酮比色法一、实验目的（1）学习蒽酮比色定糖法的原理和方法。
（2）学习723型分光光度计的原理和操作方法。
二、实验原理总糖是指样品中的还原糖及在本法测定条件下水解成还原单糖的蔗糖、麦芽糖和可部分水解为葡萄糖的淀粉。
蒽酮比色法是测定样品中总糖量的一个灵敏、快速、简便的方法。
其原理是糖类在较高温度下被硫酸作用脱水生成糠醛或糠醛衍生物后与蒽酮（C14H10O）缩合成蓝色化合物。
溶液含糖量在每毫升150微克以内，与蒽酮反应生成的颜色深浅与糖量成正比。
蒽酮不仅能与单糖也能与双糖、糊精、淀粉等直接起作用，样品不必经过水解。
三、实验材料、器材与试剂1、材料白薯。
2、器材（1）试管（或具塞试管）及试管架；（2）吸量管；（3）沸水浴；（4）冰浴；（5）723型分光光度计。
2、试剂（1）蒽酮试剂：称取100mg蒽酮溶于100mL98%硫酸溶液（A.R）中，用时配制。
（2）葡萄糖标准溶液（100μg/mL）:精确称取100mg干燥葡萄糖，用蒸馏水定容至1000mL。
（3）样品溶液：称取500g市售白薯，洗净切碎后用多功能食品加工机磨成浆，4层纱布压滤、弃滤液留渣，将渣放入烘箱内80℃～85℃烘干后，再用植物粉碎机（微型）研细，过筛区100目筛下物为待测样品。
（也可用市售红薯面粉代替）取样品在烘箱内150烘干，恒重后，精确称取1～5g，置于锥形瓶中，加入80mL沸蒸馏水，放入沸水浴。
不时摇动，提取半小时。
取出立即过滤，残渣用沸蒸馏水反复洗涤并过滤，合并滤液。
冷却至室温，用蒸馏水定容至100mL。
四、实验方法(1)制作标准曲线取7支干燥洁净的试管，编号后按下表操作。
每管加入葡萄糖标准液和谁后立即混匀，迅速置于冰浴中，待各管都加入蒽酮试剂后，同时置于沸水浴中，准确加热7分钟，立即取出置于冰浴中迅速冷却。
待各管溶液达室温后，用1cm厚度的比色皿，以第一管为空白，在620nm处迅速测其余各管的光吸收值。
然后以第2～7管溶液含糖量μg数为横坐标，吸光度（A620nm）为纵坐标，画出含糖量与A620nm 的相关标准曲线。
总糖的测定实验报告
总糖的测定实验报告一、实验目的总糖是指样品中还原糖和非还原糖的总和。
本次实验的目的是掌握总糖测定的原理和方法，学会使用相关仪器和试剂进行准确的测定，并通过实验数据的处理和分析，得出样品中总糖的含量。
二、实验原理总糖的测定通常采用蒽酮比色法。
糖类在浓硫酸的作用下，可脱水生成糠醛或羟甲基糠醛，生成的糠醛或羟甲基糠醛可与蒽酮反应生成蓝绿色复合物。
在一定范围内，颜色的深浅与糖的含量成正比，通过比色法可以测定出样品中总糖的含量。
三、实验仪器与试剂1、仪器分光光度计恒温水浴锅电子天平容量瓶（100ml、50ml、25ml）移液器移液管（1ml、2ml、5ml、10ml）具塞刻度试管（25ml）玻璃棒漏斗滤纸2、试剂蒽酮试剂：称取 02g 蒽酮溶于 100ml 浓硫酸中，当日配制使用。
葡萄糖标准溶液（100μg/ml）：准确称取 01g 无水葡萄糖，用蒸馏水溶解并定容至 1000ml。
样品溶液：将待测样品经过适当处理后，制成一定浓度的溶液。
四、实验步骤1、葡萄糖标准曲线的绘制取 6 支 25ml 具塞刻度试管，分别编号为 0、1、2、3、4、5。
按表 1 加入葡萄糖标准溶液和蒸馏水。
｜试管编号|0|1|2|3|4|5|｜｜｜｜｜｜｜｜｜葡萄糖标准溶液（ml）｜0|02|04|06|08|10|｜蒸馏水（ml）｜10|08|06|04|02|0|｜葡萄糖含量（μg）｜0|20|40|60|80|100|向各试管中迅速加入 5ml 蒽酮试剂，摇匀后立即放入沸水浴中加热10min，取出后用流水冷却至室温，在 620nm 波长下，以 0 号管为空白对照，测定各管的吸光度值。
以葡萄糖含量为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。
2、样品溶液的制备称取适量的样品，经过粉碎、研磨等处理后，用蒸馏水溶解并定容至一定体积。
若样品溶液中含有较多杂质，可先用滤纸过滤。
3、样品溶液的测定吸取 1ml 样品溶液于 25ml 具塞刻度试管中，加入 4ml 蒸馏水，再迅速加入 5ml 蒽酮试剂，摇匀后立即放入沸水浴中加热 10min，取出后用流水冷却至室温。
蒽酮法测定可溶性糖
植物组织中可溶性糖含量测定植物体内的碳素营养状况以及农产品的品质性状，常以可溶性糖和淀粉的含量作为重要指标，本实验学习几种定量测定可溶性糖和淀粉的方法。
（一）苯酚法测定可溶性糖【实验原理】植物体内的可溶性糖主要是指能溶于水及乙醇的单糖和寡聚糖。
苯酚法测定可溶性糖的原理是：糖在浓硫酸作用下，脱水生成的糠醛或羟甲基糠醛能与苯酚缩合成一种橙红色化合物，在10－100mg范围内其颜色深浅与糖的含量成正比，且在485nm波长下有最大吸收峰，故可用比色法在此波长下测定。
苯酚法可用于甲基化的糖、戊糖和多聚糖的测定，方法简单，灵敏度高，实验时基本不受蛋白质存在的影响，并且产生的颜色稳定160min以上。
【实验仪器及试剂】1．仪器：分光光度计、电炉、铝锅、20mL刻度试管、刻度吸管、记号笔、吸水纸适量。
2．试剂：（1）90％苯酚溶液：称取90g苯酚（AR），加蒸馏水10mL溶解，在室温下可保存数月。
（2）9％苯酚溶液：取3mL 90％苯酚溶液，加蒸馏水至30mL，现配现用。
（3）浓硫酸（比重1.84）。
（4）1％蔗糖标准液：将分析纯蔗糖在80℃下烘至恒重，精确称取1.000g。
加少量水溶解，移入100mL 容量瓶中，加入0.5mL浓硫酸，用蒸馏水定容至刻度。
（5）100ug/L蔗糖标准液：精确吸取1％蔗糖标准液1mL加入100mL容量瓶中，加水定容。
【实验步骤】1．标准曲线的制作：取20mL刻度试管11支，从0－10分别编号，按表27－1加入溶液和水，然后按顺序向试管内加入1mL 9％苯酚溶液，摇匀，再从管液正面以 5－20s。
加入5 mL浓硫酸，摇匀。
比色液总体积为8 mL，在恒温下放置30min。
显色。
然后以空白为参比，在485nm波长下比色测定，以糖含量为横坐标，光密度为纵坐标，绘制标准曲线，求出标准直线方程。
2．可溶性糖的提取取新鲜植物叶片，擦净表面污物，剪碎混匀，称取0.10－0.30g，共3份，分别放入3支刻度试管中，加入5-10mL 蒸馏水，塑料薄膜封口，于沸水中提取30min（提取2次），提取液过滤入25mL容量瓶中，反复冲洗试管及残渣，定容至刻度。
蒽酮比色法测可溶性糖
蒽酮比色法测可溶性糖一、实验目的1.1学习分光光度法的基本原理1.2学习对水果中糖含量进行测定的方法二、实验原理2.1分光光度法基本原理物质对光吸收的定量关系很早就受到了科学家的注意并进行了研究。
皮埃尔·布格（Pierre Bouguer）和约翰·海因里希·朗伯（Johann Heinrich Lambert）分别在1729年和1760年阐明了物质对光的吸收程度和吸收介质厚度之间的关系；1852年奥古斯特·比尔（August Beer）又提出光的吸收程度和吸光物质浓度也具有类似关系，两者结合起来就得到有关光吸收的基本定律——布格－朗伯－比尔定律，简称比尔－朗伯定律。
溶液中的物质在光的照射激发下，产生对光的吸收效应，不同的物质具有各自选择性的吸收光谱，因此，当某单色光通过溶液时，能量会被吸收而减弱，光能量减弱的程度和物质浓度有一定比例关系，即符合于比色原理——比尔定律。
朗伯-比尔定律：A=lg(1/T)=KbcA：为吸光度；T：为透射比,是投射光强度比上入射光强度；K: 摩尔吸收系数。
它与吸收物质的性质及入射光的波长λ有关；c：为吸光物质的浓度；b：为吸收层厚度；物理意义：是当一束平行单色光垂直通过某一均匀非散射的西光物质时,起其吸光度A与吸光物质的浓度c及吸收层厚度b 成正比。
2.2蒽酮比色法原理蒽酮比色法是一个快速而简便的定糖方法。
蒽酮可以和游离的己糖或多糖中的己糖基，戊醛糖及己糖醛酸反应，反应后溶液呈蓝绿色，在620nm处有最大吸收。
蒽酮可与其他一些糖类发生反应，但显现的颜色不同。
当样品中存有含较多色氨酸的蛋白质时，反应不稳定，呈现红色。
对于特定的糖类，反应较稳定。
本法多用于测定糖原含量，亦可用于测定葡萄糖含量。
三、实验试剂3.1蒽酮试剂：取0.2g蒽酮溶于100mL 80%(V/V)硫酸中，硫酸当日配制使用；3.2标准葡萄糖溶液(0.1mg/mL)：可滴加几滴甲苯作防腐剂；3.3糖样品溶液四、实验操作步骤4.1制作标准曲线：取干试管5支，依次加入标准糖溶液0mL，0.1mL，0.2mL，0.4mL，0.8mL并依次用蒸馏水补足体积到1mL，各管均加入蒽酮试剂4mL，震摇混匀。
实验8可溶性总糖的测定蒽酮法
实验8-可溶性总糖的测定(蒽酮法) 蒽酮法是一种常用的测定可溶性总糖的方法，其基本原理是糖类在强酸环境中与蒽酮反应生成蓝色化合物，该化合物的吸光度与糖含量成正比，因此可以通过测定吸光度来计算糖含量。
下面我们来详细了解一下实验步骤和注意事项。
一、实验原理蒽酮法测定可溶性总糖的原理是糖类在强酸环境中与蒽酮反应生成蓝色化合物，该化合物的吸光度与糖含量成正比。
在一定的范围内，溶液的吸光度与糖含量成正比，因此可以通过测定吸光度来计算糖含量。
该方法的优点是灵敏度高、准确性好、操作简单、干扰因素少。
二、实验步骤1.准备试剂和仪器试剂：蒸馏水、葡萄糖标准溶液（已知浓度）、待测溶液、蒽酮、浓硫酸。
仪器：电子天平、电热恒温水浴锅、分光光度计、容量瓶、移液管、试管、滴管、冰块等。
2.配制工作曲线（1）用移液管吸取葡萄糖标准溶液100μL，将其加入10个试管中。
（2）用移液管分别吸取蒸馏水1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0、10.0mL，分别加入上述试管中，并加入蒸馏水至总体积为10mL。
（3）向每个试管中加入1.0mL蒽酮溶液，迅速混匀。
（4）向每个试管中加入浓硫酸5.0mL，迅速混匀。
（5）将试管放置在冰水浴中静置10min，使反应完全。
（6）从冰水浴中取出试管，在室温下放置10min，使溶液温度恢复到室温。
（7）用分光光度计测定各试管中溶液的吸光度（波长为625nm）。
（8）以吸光度为纵坐标，葡萄糖浓度为横坐标绘制工作曲线。
3.测定待测溶液的浓度（1）用移液管吸取待测溶液100μL，将其加入试管中。
（2）向试管中加入蒸馏水至总体积为10mL。
（3）按照步骤2.3~2.7进行操作，测定待测溶液的吸光度。
（4）根据工作曲线查得待测溶液的浓度。
4.计算待测溶液中可溶性总糖的含量可溶性总糖含量（mg/mL）= 查得浓度× 稀释倍数三、注意事项1.实验过程中要避免阳光直射，以免影响实验结果。
蒽酮硫酸法测定总糖
苯酚硫酸法和蒽酮硫酸法测总糖的方法及步骤2011-07-15 11:45:19| 分类：默认分类|字号订阅植物体内的碳素营养状况以及农产品的品质性状，常以可溶性糖和淀粉的含量作为重要指标，本实验学习几种定量测定可溶性糖和淀粉的方法。
（一）苯酚法测定可溶性糖【实验原理】植物体内的可溶性糖主要是指能溶于水及乙醇的单糖和寡聚糖。
苯酚法测定可溶性糖的原理是：糖在浓硫酸作用下，脱水生成的糠醛或羟甲基糠醛能与苯酚缩合成一种橙红色化合物，在10－100mg范围内其颜色深浅与糖的含量成正比，且在485nm波长下有最大吸收峰，故可用比色法在此波长下测定。
苯酚法可用于甲基化的糖、戊糖和多聚糖的测定，方法简单，灵敏度高，实验时基本不受蛋白质存在的影响，并且产生的颜色稳定160min以上。
【实验仪器及试剂】1．仪器：分光光度计、电炉、铝锅、20mL刻度试管、刻度吸管、记号笔、吸水纸适量。
2．试剂：（1）90％苯酚溶液：称取90g苯酚（AR），加蒸馏水10mL溶解，在室温下可保存数月。
（2）9％苯酚溶液：取3mL 90％苯酚溶液，加蒸馏水至30mL，现配现用。
（3）浓硫酸（比重1.84）。
（4）1％蔗糖标准液：将分析纯蔗糖在80℃下烘至恒重，精确称取1.000g。
加少量水溶解，移入100mL容量瓶中，加入0.5mL浓硫酸，用蒸馏水定容至刻度。
（5）100ug/L蔗糖标准液：精确吸取1％蔗糖标准液1mL加入100mL容量瓶中，加水定容。
【实验步骤】1．标准曲线的制作：取20mL刻度试管11支，从0－10分别编号，按表27－1加入溶液和水，然后按顺序向试管内加入1mL 9％苯酚溶液，摇匀，再从管液正面以5－20s。
加入5 mL浓硫酸，摇匀。
比色液总体积为8 mL，在恒温下放置30min。
显色。
然后以空白为参比，在485nm波长下比色测定，以糖含量为横坐标，光密度为纵坐标，绘制标准曲线，求出标准直线方程。
2．可溶性糖的提取取新鲜植物叶片，擦净表面污物，剪碎混匀，称取0.10－0.30g，共3份，分别放入3支刻度试管中，加入5-10mL 蒸馏水，塑料薄膜封口，于沸水中提取30min （提取2次），提取液过滤入25mL容量瓶中，反复冲洗试管及残渣，定容至刻度。
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实验二十一可溶性总糖的测定（蒽酮比色法）
一、目的
掌握蒽酮法测定可溶性糖含量的原理和方法。
二、原理强酸可使糖类脱水生成糠醛，生成的糠醛或羟甲基糖醛与蒽酮脱水缩合，形成糠醛的衍生物，呈蓝绿色，该物质在620 nm 处有最大吸收. 在10 -100ug 范围内其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。
这一方法有很高的灵敏度，糖含量在30ug 左右就能进行测定，所以可做为微量测糖之用。
一般样品少的情况下，采用这一方法比较合适。
三、仪器、试剂和材料
1 . 仪器
（1）分光光度计
（2 ）电子顶载天平
（3 ）三角瓶：50m1 X 1
（4 ）大试管：9 支
（5）试管架，试管夹
（6 ）漏斗，漏斗架
（7 ）容量瓶：50rnl X 2
（8 ）刻度吸管：1m1X3 ，2m1X1 ，5mlX1
（9 ）水浴锅
2 . 试剂
（1）葡萄糖标准液：l00ug/ml
（2 ）浓硫酸
（3）蒽酮试剂:0.2g 蒽酮溶于100 ml 浓H2SO4 中当日配制使用。
3 . 材料小麦分蘖节。
四、操作步骤
1. 葡萄糖标准曲线的制作
取7支大试管，按下表数据配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液:
在每支试管中立即加入蒽酮试剂 4.0m1 ，迅速浸于冰水浴中冷却，各管加完后一起浸于沸水浴中，管口加盖玻璃球，以防蒸发。
自水浴重新煮沸起，准确煮沸lOmin 取出，用流水冷却，室温放置10min ，在620 nm波长下比色。
以标准葡萄糖含量（ug）作横坐标，以吸光值作纵坐标，作岀标准曲线。
2. 植物样品中可溶性糖的提取
将小麦分蘖节剪碎至2mm以下，准确称取lg,放入50m1三角瓶中，加沸水25m1，在水浴中加盖煮沸10min，冷却后过滤，滤液收集在50m1容量瓶中，定容至刻度。
吸取提取液2m1，置另一50m1容量瓶
中，以蒸馏水稀释定容，摇匀测定。
3 .测定
吸取lml已稀释的提取液于大试管中，加入 4.0ml蒽酮试剂，以下操作同标准曲线制作。
比色波长
620nm，记录吸光度，在标准曲线上查出葡萄糖的含量（ug ）。
查表所得糖含量（ug ）乂稀释倍数
五、结果处理
查表所得糖含量Cug）乂稀释倍数心
植物样品含糖壘（%）=：
样品重（町xm% X10°
六、注意事项
1 .该显色反应非常灵敏，溶液中切勿混入纸屑及尘埃。
2 . H 2 SO 4 要用高纯度的。
3. 不同糖类与蒽酮的显色有差异，稳定性也不同。
加热、比色时间应严格掌握。
七、思考题
1.用水提取的糖类有哪些?
2 . 制作标准曲线时应注意哪些问题？。