人脂肪来源间充质干细胞库的初步建立

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脂肪细胞增殖机制

脂肪细胞增殖机制一、脂肪细胞概述脂肪细胞，也称为脂肪组织，是哺乳动物体内储存脂肪的组织，主要功能是储存能量，维持体温，并具有缓冲、保护和维持内分泌等作用。

脂肪细胞主要由充满脂肪滴的细胞核和细胞质构成，其大小和数量与个体体型和脂肪量有关。

二、脂肪细胞增殖机制1. 脂肪细胞形成在胎儿和新生儿阶段，脂肪细胞来源于间充质干细胞。

此后，脂肪细胞的数目基本固定，不会因脂肪的增减而变化。

然而，一些实验表明，在特定条件下，成熟的脂肪细胞可以分裂，产生新的脂肪细胞。

2. 脂肪细胞增殖过程在正常生理状态下，脂肪细胞的增殖主要发生在胚胎发育阶段。

而在病理状态下，例如创伤或炎症反应后，某些生理信号可能导致成熟的脂肪细胞分裂并形成新的脂肪细胞。

此外，当机体处于快速生长阶段时，脂肪细胞的数量也可能增加。

三、影响脂肪细胞增殖的因素1. 激素与生长因子多种激素和生长因子参与脂肪细胞的增殖过程。

例如，胰岛素、胰高血糖素、肾上腺素和去甲肾上腺素等激素可以刺激脂肪细胞的增殖。

此外，一些生长因子如转化生长因子β（TGF-β）、成纤维细胞生长因子（FGF）和血小板衍生生长因子（PDGF）等也具有促进脂肪细胞增殖的作用。

2. 营养物质与代谢产物营养物质如葡萄糖、氨基酸和脂肪酸等可以影响脂肪细胞的增殖。

此外，一些代谢产物如乳酸、丙酮酸和氨等也可能对脂肪细胞的增殖产生影响。

3. 生物活性物质一些生物活性物质如前列腺素、白三烯和一氧化氮等可以影响脂肪细胞的增殖。

这些物质在炎症反应、氧化应激和免疫反应等过程中发挥重要作用。

四、脂肪细胞增殖机制研究的意义与前景深入了解脂肪细胞增殖机制对于肥胖症、脂肪肝等与脂肪组织异常相关的疾病具有重要意义。

通过研究脂肪细胞的增殖机制，有助于发现新的治疗靶点，为这些疾病的治疗提供新的思路和方法。

同时，对于美容行业而言，掌握脂肪细胞的增殖机制有助于开发更为安全有效的减肥方法和美容产品。

目前，基因敲除技术、基因编辑技术、蛋白质组学、代谢组学等前沿技术手段已被广泛应用于脂肪细胞增殖机制的研究。

人间充质干细胞团体标准

人间充质干细胞团体标准
一、术语和定义
1.人间充质干细胞（MSC）：一种成体干细胞，具有多向分化潜能，可分化
为脂肪、骨、软骨等细胞，并具有免疫调节功能。

2.细胞来源：MSC可从多种组织中获取，包括骨髓、脂肪、脐带血等。

3.细胞制备：通过适当的分离、培养和扩增技术，将原始组织中的MSC制备
成可用于治疗的细胞。

4.细胞表型鉴定：通过免疫表型分析技术，对MSC的表面标记进行检测，以
确定其身份和纯度。

5.细胞功能检测：对MSC的功能进行检测，包括增殖能力、分化能力、免疫
调节能力等。

6.细胞存储与运输：通过适当的存储和运输条件，保证MSC在存储和运输过
程中的活性和稳定性。

7.细胞应用指导：根据患者的具体情况和治疗需求，为医生提供MSC应用的
指导建议。

8.安全管理：制定安全管理措施，确保MSC制备和使用过程中的安全性。

9.质量管理：建立质量控制体系，确保MSC的质量和有效性。

10.标识、记录与档案管理：对MSC的制备、存储和使用过程进行记录和档案
管理，确保可追溯性。

11.培训与资质要求：对从事MSC相关工作的人员进行培训和资质认证，确保
其具备必要的专业知识和技能。

12.伦理与合规性考虑：在MSC的制备、使用和研究中遵循伦理原则和相关法
律法规的规定。

人骨髓间充质干细胞来源的脂肪细胞抑制成骨细胞分化的机制研究

人骨髓间充质干细胞来源的脂肪细胞抑制成骨细胞分化的机制研究一、本文概述随着再生医学和细胞治疗领域的快速发展，人骨髓间充质干细胞（hMSCs）已成为组织工程和细胞治疗的重要细胞来源。

这些细胞具有多向分化潜能，可以分化为成骨细胞、脂肪细胞、软骨细胞等多种细胞类型。

然而，在分化过程中，hMSCs往往倾向于向一种特定的细胞类型分化，而忽视了其他潜在的分化方向。

因此，了解hMSCs分化过程的调控机制，尤其是如何调控其向脂肪细胞和成骨细胞的分化，对于优化组织工程和细胞治疗的效果具有重要意义。

本文旨在深入研究人骨髓间充质干细胞来源的脂肪细胞抑制成骨细胞分化的机制。

我们将首先概述hMSCs的基本生物学特性以及其在体内外的分化潜能。

接着，我们将重点探讨脂肪细胞和成骨细胞分化过程中的关键信号通路和转录因子，并分析它们之间的相互作用和调控关系。

我们还将利用体外实验模型，研究脂肪细胞对成骨细胞分化的直接影响，以及潜在的调控分子和信号通路。

通过本文的研究，我们期望能够深入理解hMSCs分化过程中的调控机制，为优化组织工程和细胞治疗提供新的思路和策略。

我们也期望这些研究成果能够为相关领域的学者和从业者提供有价值的参考和借鉴。

二、材料与方法人骨髓间充质干细胞（hMSCs）从健康的志愿者骨髓中分离并经过标准流程进行培养和鉴定。

所有志愿者在参与研究前都签署了知情同意书，且研究过程符合伦理委员会的规定。

成骨诱导培养基、脂肪诱导培养基、RT-PCR试剂盒、Western Blot 试剂盒、细胞增殖和分化检测试剂盒等。

细胞培养箱、倒置显微镜、实时定量PCR仪、凝胶成像系统、Western Blot电泳及转膜设备、流式细胞仪等。

hMSCs在标准条件下进行培养，待细胞达到80%融合度时，分别用成骨诱导培养基和脂肪诱导培养基进行诱导分化，观察细胞分化情况。

收集不同诱导时间点的细胞，提取总RNA，反转录为cDNA，然后进行实时定量PCR，检测成骨和脂肪分化相关基因的表达情况。

脂肪间充质干细胞定义

脂肪间充质干细胞定义
脂肪间充质干细胞（Adipose-Derived Mesenchymal Stem Cells，ADSCs）是一类具有自我更新能力和多向分化潜能的细胞，它们来源于人体脂肪组织。

这些细胞在特定的诱导条件下，可以分化成多种细胞类型，如脂肪细胞、骨细胞、软骨细胞、心肌细胞、神经细胞和内皮细胞等。

因此，脂肪间充质干细胞在再生医学、组织工程和细胞治疗等领域具有广泛的应用前景。

脂肪间充质干细胞的主要特点包括：1）易于获取，来源丰富，可从人体脂肪组织中提取；2）具有较强的增殖能力和多向分化潜能；3）免疫原性低，不会引起明显的免疫排斥反应；4）具有抗炎、抗凋亡和促进组织修复的能力。

在医学应用方面，脂肪间充质干细胞已被用于治疗多种疾病，如心血管疾病、糖尿病、神经系统疾病、自身免疫性疾病和皮肤损伤等。

通过将这些细胞移植到患者体内，可以促进受损组织的修复和再生，从而改善疾病症状。

然而，脂肪间充质干细胞的应用仍面临一些挑战和限制，如细胞分化机制尚未完全阐明、细胞来源和质量的不稳定性、以及移植后的细胞存活和分化等问题。

因此，未来需要进一步深入研究脂肪间充质干细胞的生物学特性和分化机制，以优化细胞培养和移植技术，提高其在医学应用中的疗效和安全性。

总之，脂肪间充质干细胞作为一种具有广泛应用前景的细胞类型，在再生医学和细胞治疗等领域发挥着重要作用。

随着科学技术的不断进步和研究的深入，相信这些细胞将在未来为人类健康事业做出更大的贡献。

脂肪间充质干细胞提取方法

脂肪间充质干细胞提取方法脂肪间充质干细胞（adipose-derived mesenchymal stem cells，ADMSCs）是一种广泛存在于人体脂肪组织中的多潜能干细胞。

由于其易于获取、丰富来源以及多向分化潜能等优势，ADMSCs在再生医学和组织工程领域备受关注。

提取脂肪间充质干细胞的方法有多种，常用的包括机械消化法、酶消化法以及分离培养法。

本文将对这些方法进行介绍和比较。

1. 机械消化法机械消化法是一种较为简单直接的提取脂肪间充质干细胞的方法。

首先，将脂肪组织从捐赠者身体中获取，并去除血管和结缔组织。

然后，使用机械切割或研磨的方法将脂肪组织分解成小块。

接下来，使用胶原酶等酶类物质对脂肪组织进行消化。

最后，通过离心等方法将脂肪间充质干细胞与其他细胞分离开来。

2. 酶消化法酶消化法是一种常用的提取脂肪间充质干细胞的方法。

首先，将脂肪组织从捐赠者身体中获取，并去除血管和结缔组织。

然后，使用胰蛋白酶等酶类物质对脂肪组织进行消化。

消化过程中，酶能溶解脂肪细胞膜，并释放出脂肪间充质干细胞。

最后，通过离心等方法将脂肪间充质干细胞与其他细胞分离开来。

3. 分离培养法分离培养法是一种较为复杂但效果较好的提取脂肪间充质干细胞的方法。

首先，将脂肪组织从捐赠者身体中获取，并去除血管和结缔组织。

然后，将脂肪组织切成小块，并加入胶原酶等酶类物质进行消化。

消化后，将细胞悬液进行离心分离，得到含有脂肪间充质干细胞的细胞沉淀。

接下来，将细胞沉淀进行过滤和洗涤，去除其他细胞和残留酶类物质。

最后，将脂肪间充质干细胞进行培养，促进其增殖和分化。

以上提取方法各有优劣。

机械消化法操作简单，但提取效率较低，且存在细胞破损的风险；酶消化法提取效率较高，但对酶的质量和浓度要求较高，且酶消化过程可能影响细胞活力；分离培养法提取效率较高，且可以得到纯度较高的脂肪间充质干细胞，但操作复杂且耗时较长。

为了获得高质量的脂肪间充质干细胞，提取过程中的无菌操作非常重要。

喜格干细胞库建设之操作规范

《人间充质干细胞库建设与管理规范》DB33/T2030—2017SICOLAB干细胞库建设之操作规范范围：人间充质干细胞库、胎盘组织造血干细胞库的建设、操作规范、质量管理的基本方法。

适用：人间充质干细胞库、胎盘组织造血干细胞库建设与管理。

一、概要1、符合GB/T22278要求，并严格按照标准和规范执行；2、制定相应标准和管理规范（样本采集、运输、接收、分离、培养、冻存和复苏等涉及干细胞操作所有过程）；3、人组织样本采集由专业的医护人员完成，样本制备由经过专业培训的人员完成。

二、样本采集场所1、洁净手术室（无菌采集）：人组织样本。

2、无洁净级别要求：人月经血样本、乳牙样本（并保持个人基本卫生）。

3、Ⅱ级洁净手术室要求：新生儿脐带、胎盘、骨髓样本。

4、Ⅲ级洁净手术室要求：脂肪组织样本。

三、样本采集方法1、新生儿脐带来源间充质干细胞①胎儿分娩后，在距胎儿脐部5cm至8cm处，用止血钳分别夹住脐带上下两端，消毒剂消毒脐带。

②用消毒剪刀于两钳中间断脐，截取至少15cm无针孔的脐带置于无菌采集瓶中，同时加入保存液以浸没脐带组织。

贴条形码作为唯一标识。

③脐带的两端需要用手术线结扎。

2、新生儿胎盘来源间充质干细胞或造血干细胞①胎儿娩出后，待胎盘与母体完全分离，用生理盐水充分清洗胎盘，再用75%医用酒精快速冲洗表面。

②迅速将胎盘放入胎盘采集盒，再加入保存液予以全部浸没。

③采集盒密闭包装，并贴上条形码作为唯一标识。

3、人脂肪来源间充质干细胞①脂肪组织采集过程由整形科医生实施，需制定抽脂方案和术前术后的防感染措施。

②行脂肪抽吸术时应尽可能保证抽脂过程无菌，采集完毕转移至采集瓶中，确保密封，并贴上条形码作为唯一标识。

4、人骨髓来源间充质干细胞①骨髓组织采集前应联系负责骨髓采集医师，制定骨髓穿刺方案和术前术后的防感染措施。

②行骨髓穿刺术，抽取骨髓液，即时转移至无菌采集瓶中保存，确保密封，并贴上条形码作为唯一标识。

5、人子宫内膜来源间充质干细胞①组织来源：手术切除成年女性子宫内膜增厚组织或子宫内膜异位组织，置于采集液中保存，并贴上条形码作为唯一标识。

临床级人体组织来源间充质干细胞质量控制管理规范

DB32/T3544-2019临床级人体组织来源间充质干细胞质量控制管理规范1范围本标准规定了临床级人体组织来源间充质干细胞制备的基本要求、操作规范和质量控制。

本标准适用于临床级人体组织来源间充质干细胞的样本采集、制备、冻存、复苏与质量控制。

2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。

凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB3095环境空气质量标准GB19489-2008实验室生物安全通用要求GB50073-2001洁净厂房设计规范GB50346实验室建筑技术规范GB50591洁净室施工及验收规范WHO实验室生物安全手册（第三版）药品生产质量管理规范（卫生部令第79号）中华人民共和国药典（2015年版）干细胞制剂质量控制及临床前研究指导原则(试行)（国卫办科教发﹝2015〕46号）T11/CSSCR001-2017干细胞通用要求（中国细胞生物学学会-干细胞生物学分会团体标准）3术语和定义下列术语和定义适用于本标准。

3.1临床级人间充质干细胞clinical grade human mesenchymal stem cells符合质量要求，可用于临床研究和应用的人多种组织来源（脐带血、脐带、胎盘、子宫内膜、脂肪、牙齿、骨髓等组织）间充质干细胞。

3.2伦理审查委员会ethical review committee负责对科学研究中涉及的伦理道德问题进行评估和审查的专门组织。

3.3科学审查委员会scientific review committeeDB32/T3544-2019负责对生物样本采集和使用的方案进行科学性审查的专门组织。

3.4生物安全委员会institutional biosafety committee负责制定生物安全政策和安全操作规范的专门组织。

3.5知情同意informed consent具有完全民事行为能力的自然人在重复获取信息并准确理解其内容后，作出接受或不接受样本采集的决定，此决定不受恐吓、利诱或其他不当行为的影响。

人类间充质干细胞库建设与管理规范

5.2 实验室设施与设备
5.2.1 空调与通风系统
5.2.1.1 通风系统应符合 GB/T 18883 的规定，气流由“清洁”空间向“污染”空间流动，最大限度减少室内回流与涡流。 5.2.1.2 人类间充质干细胞库实验室空调系统应符合 GB 19489-2008 的规定，有足够的温度和湿度控制能力，实验室各个区域的温度与湿度应控制在规定范围内。
5.2.2 照明系统
人类间充质干细胞库的照明系统应符合 GB 19489-2008 的规定，干细胞库及实验室的核心工作区的照度不低于 350 勒克斯，其它区域不低于 200 勒克斯。
5.2.3 备用电源
3 术语和定义
1
SZDB/Z 126—2015
下列术语和定义适用于本指导性技术文件： 3.1
干细胞库 stem cell bank 用于储存不同来源干细胞的专门机构。 3.2 样本 specimen 在特定时间从受试者或捐献者中采集的器官、组织等标本。 3.3 接收区 receiving zone 样本到达时用于初步检查、清点接收或样本转移前进行包装、清点的缓冲区域。 3.4 冷藏区 refrigerated storage zone 为样本提供冷藏储存环境（2 ℃～8 ℃）或冷藏设备（温度为2 ℃～8 ℃）的区域。 3.5 冷冻区 frozen storage zone 为样本提供0 ℃以下储存环境或设备的区域。根据低温程度的不同，可分为普通低温冷冻储存区（–4℃低温设备区）、超低温冷冻储存区（–86 ℃低温设备区）、深低温冷冻储存区（–135 ℃以下低温设备区）。 3.6 细胞制备 cell preparation 细胞样本经过一系列规范处理达到入库标准的过程。 3.7 质量控制 quality control 为达到入库质量要求所采取的操作技术和活动。 3.8 样本编码 sample coding 根据编码规则对样本进行编号的过程。 3.9 细胞分离 cell isolation 从机体组织或器官中分离出单个细胞的过程。

间充质干细胞成脂成骨分化实验方法学开发思路和流程

间充质干细胞成脂成骨分化实验方法学开发思路和流程干细胞是一种具有自我更新能力和多潜能分化的细胞，可以分化成为各种类型的细胞，包括脂肪细胞和骨细胞。

间充质干细胞（MSCs）是一种重要的干细胞类型，它们存在于各种组织中，如骨髓、脂肪组织和胎盘组织等。

间充质干细胞成脂成骨分化的实验方法学开发，是生物医学研究中一个重要的课题。

本文将从方法学开发的思路和流程入手，对间充质干细胞成脂成骨分化实验方法学进行探讨。

一、研究背景间充质干细胞成脂成骨分化是指间充质干细胞在一定的诱导条件下分化为脂肪细胞或骨细胞的过程，这一过程在细胞生物学和再生医学领域具有重要意义。

成脂成骨分化的研究有助于深入了解骨质疏松症、骨折愈合和脂肪代谢等疾病的发病机制，同时也为干细胞治疗提供了理论基础。

因此，开发一套可靠的实验方法学对于间充质干细胞成脂成骨分化研究至关重要。

1.确定分化诱导条件间充质干细胞在体外培养时，可通过添加不同的生长因子、细胞因子或药物来诱导其分化为脂肪细胞或骨细胞。

因此，确定最佳的分化诱导条件是方法学开发的第一步。

此过程需要考虑到诱导因子的种类、浓度、培养时间等因素，以及不同来源的间充质干细胞在分化过程中的差异性。

2.确定评价指标分化过程中，需要通过一系列的生物化学和分子生物学方法来评价间充质干细胞的脂肪细胞或骨细胞特征。

这些评价指标包括脂肪细胞的油红O染色、脂肪球形成实验，以及骨细胞的矿化实验、ALP染色等。

确定合适的评价指标对于评估分化效果至关重要。

3.确定实验方案在确定了分化诱导条件和评价指标后，需要制定详细的实验方案。

包括细胞的处理方法、诱导条件的优化、实验的时间节点等，以便后续实验的顺利进行。

1.间充质干细胞的提取和培养首先需要从适当的组织中分离和提取间充质干细胞，并进行细胞培养。

这一步需要注意细胞的纯度和活性，以保证后续实验的准确性。

2.分化诱导实验将培养好的间充质干细胞分别进行脂肪和骨分化诱导实验，根据预先确定的诱导条件进行处理。

脂肪组织来源的干细胞提取、制备及储存质量管理专家共识

脂肪组织来源的干细胞提取、制备及储存质量管理专家共识脂肪组织来源的干细胞(adipose tissue-derived stromal/stem cells，ASCs)是从脂肪组织中分离提取得到的，具有取材容易、对机体损伤小、体内储备量大、体外可大规模培养、可多向分化等优点。

ASCs在人体修复重建、免疫调节及组织再生等方面的应用成为近年来干细胞研究的重要内容，也是组织工程及再生医学的研究热点。

大量研究表明，自体脂肪组织移植到软组织缺损部位后，其中40%~60%会被吸收，自体脂肪组织结合ASCs移植，能明显减少自体脂肪组织移植的吸收、液化、坏死及纤维化等情况发生，有利于构建具有生物学结构和功能的脂肪组织。

同时，利用脂肪组织可以进行大规模的ASCs提取、制备、储存，为再生医学提供种子细胞。

目前，国内外尚缺乏ASCs提取、分离、制备及储存的标准和质量管理规范，导致各制备机构或研究应用机构之间无法进行统一评估和交流，严重制约了ASCs在皮肤软组织修复重建等相关领域的发展。

为了建立安全、规范、稳定、可追溯的行业共识、指南及标准，从源头保证ASCs的提取、制备、储存的高质性和安全性，中国医药生物技术协会皮肤软组织修复与重建技术分会联合从事细胞制备和存储、皮肤软组织修复重建、分子生物学及整形和美容外科等多学科的专家，参照中国医药生物技术协会《细胞库质量管理规范》及《干细胞制剂制备质量管理自律规范》，组织起草脂肪组织采集及ASCs制备、检测、储存的标准和质量管理专家共识，旨在促进ASCs在皮肤软组织修复重建技术等领域研究成果的转化，进一步促进多学科的交流和发展。

1 脂肪组织采集1.1 脂肪组织采集机构要求脂肪组织的采集工作应在取得《医疗机构执业许可证》的医疗机构中实施。

采集人员应持医师或者护士执业证书，经过相应的专业技术培训。

采集机构应具有完整的标准化操作规程(standard operation procedure，SOP)，并备有采集过程中的应急预案。

人脂肪来源间充质干细胞的制备及其质量检验方法

人脂肪来源间充质干细胞的制备及其质量检验方法陈冲;闫俊灵;李梁;徐潇;丁红;汤苏阳【摘要】目的：研究人脂肪来源间充质干细胞（human adipose-derived stem cells，hADSCs）的制备及其质量检验方法，为临床研究提供安全合格的干细胞。

方法取50例人吸脂术抽取的脂肪，剪碎，用胰酶和胶原酶消化、分离、培养，并按照《干细胞制剂质量控制及临床前研究指导原则》对其进行细胞形态、数量、活率、无菌、支原体、人源特定病毒及猪源病毒、内毒素、免疫抑制活性、分化能力、免疫表型等检测及染色体核型。

结果50例hADSCs；细菌、内毒素检测阴性，无内外源致病菌；干细胞免疫表型检测CD90、CD105表达阳性，阳性率＞95％，CD34、CD45和HLA-DR表达阴性，阳性率＜2％；具有成骨、成脂分化潜能；能抑制异体淋巴细胞的增殖。

间充质干细胞活性冻存前≥92％，冻存复苏后≥82％。

结论按照本工艺及标准制备的hADSCs符合质量控制标准，为同类干细胞制备及其检定过程标准化提供了试验依据。

%Objective To study the human adipose derived mesenchymal stem cells in vitro amplification and quality inspec-tion methods and provide safe and qualified stem cells for clinical research .Methods Fifty human source liposuctioned fat , sheared, underwent trypsin and collagenase digestion , separation, culture, and according to the “stem cell-based medicinal product quality con-trol of pre clinical research guidi ng principle” to detect the cell morphology , quantity, live rate, sterilization, mycoplasma, human source specific virus and swine virus , endotoxin , immunosuppressive activity , differentiation ability , immunophenotype detection and chromosome karyotype .Results Human adipose derived mesenchymal stem cell activity beforecryopreservation is ≥92%, after re-vival≥82%;bacteria and endotoxin test negative , no internal and external source pathogenic bacteria;stem cell immunophenotype de-tection of CD90, CD105 positive, the positiverate >95%, CD34, CD45 and HLA-DR negative expression , the positive rate <2%;with osteogenic and adipogenic differentiation proficiency ,it can inhibit the proliferation of allogeneic lymphocytes .Conclusions The preparation process and the standard of human adipose derived mesenchymal stem cell line according to the quality control standardof“stem cell-based medicinal product quality control of pre clinical research guiding principle ”, it provides the experimental basis for the similar stem cell preparation and standardizing verification process .【期刊名称】《武警医学》【年(卷),期】2015(000)002【总页数】5页(P170-174)【关键词】脂肪干细胞;间充质干细胞;质量控制;免疫表型;分化潜能;染色体核型分析【作者】陈冲;闫俊灵;李梁;徐潇;丁红;汤苏阳【作者单位】100039 北京，武警总医院皮肤再生医学科;100039 北京，武警总医院皮肤再生医学科;100039 北京，武警总医院皮肤再生医学科;100039 北京，武警总医院皮肤再生医学科;100039 北京，武警总医院皮肤再生医学科;100039 北京，武警总医院皮肤再生医学科【正文语种】中文【中图分类】R329.2人脂肪来源间充质干细胞(human adipose-derived stem cells, hADSCs)，是从脂肪组织中分离获得的一种具有自我更新及多向分化潜能的干细胞[1]，是极具前景的组织工程和基因治疗的种子细胞。

脂肪来源的间充质干细胞及外囊泡促成骨分化的研究进展

1672V ol.40 No.12 Dec. 2020上海交通大学学报（医学版）JOURNAL OF SHANGHAI JIAO TONG UNIVERSITY (MEDICAL SCIENCE )综述近年来，我国骨质疏松症患病率逐渐攀升。

一项最新研究[1]显示，我国骨质疏松症的总患病率为13%，总人数已超过1.78亿。

老年人是骨质疏松症的重点人群，自1982年起，我国65岁以上老年人占人口比重不断升高，2019年我国65岁以上老年人占人口比重已达到12.6%[2]。

预计到2050年，我国骨质疏松症或骨密度低的患者将达到2.12亿[1]。

骨质疏松症使得骨质脆性增加、易于骨折，导致患者的生活水平急剧下降。

利用脂肪来源的间充质干细胞（adipose-derived mesenchymal stem cells ，ADMSCs ）诱导成为成骨细胞治疗骨质疏松症是医学研究的新方向[1]。

ADMSCs 可以通过旁分泌功能，分泌一些生物活性分子，为组织修复建立良好的微环境，促进新生血管的形成和伤口愈合，并且减少组织的炎症反应。

ADMSCs 也可分泌促进血管生成和抗凋亡潜能的生长因子，如转化生长因子（transforming growth factor ，TGF ）、胰岛素样生长因子（insulin growth factor ，IGF ）、血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor ，VEGF ）、肝细胞生长因子（hepatocyte growth factor ，HGF ）[3]和骨形态发生蛋白（bone morphogenetic protein ，BMP ）家族BMP-2、BMP-7等[4]。

ADMSCs 来源丰富，通过脂肪抽吸术易于获得，无免疫排斥。

平均每300 mL 脂肪组织可获得108个细胞，每克动物脂肪可获得5 000个成纤维集落形成单位（colony forming unit-fibroblast ，CFU-F ）[5]。

人脂肪间充质干细胞的原代培养及体外成骨成脂诱导分化

人脂肪间充质干细胞的原代培养及体外成骨成脂诱导分化闵敏;张雪静;马红;许辉;李遇梅【摘要】目的:建立体外分离培养获得人脂肪间充质干细胞(human adipose-derived mesenchymal stem cells,hADSCs)的方法,并观察其形态、免疫表型、生物学特性.初步探讨其体外成骨过程中出现成脂现象的原因及机制.方法:剖宫产手术获得腹部皮下脂肪,0.15％Ⅰ型胶原酶消化法获得人脂肪间充质干细胞并进行体外培养.行MTT细胞增殖实验绘制增殖曲线,使用流式细胞及细胞免疫荧光技术检测细胞表面抗原,行成骨成脂分化鉴定其分化潜能.通过RT-PCR技术检测成骨成脂过程中过氧化物酶体增殖物激活受体γ-2 (peroxisome proliferator activated receptorγ-2,PPARγ-2)和骨桥蛋白mRNA表达情况.结果:通过分离培养,获得了大量旋涡状生长的人脂肪间充质干细胞.MTT法显示细胞增殖能力强.流式细胞鉴定结果显示,CD29、CD73、CD105、CD166高表达,CD31、CD34、CD45、HLA-DR 低表达.细胞免疫荧光结果与之相符.hADSCs在特定诱导条件下,具有成骨成脂分化潜能.在成骨分化过程中同时伴有成脂发生.RT-PCR结果显示,与对照组相比,成脂诱导组PPARγ-2 mRNA有时间依赖性递增表达,差异具有统计学意义(P＜0.01).与对照组相比,成骨诱导组骨桥蛋白,PPARγ-2 mRNA均有时间依赖性递增表达,差异具有统计学意义(P＜0.01).结论:建立了一种分离培养hADSCs简单可靠的方法.获得的细胞具有贴壁生长、增殖活性强、干细胞表型以及多向分化等特征.hADSCs体外成骨过程中,三酰甘油的形成对成骨具有一定的促进作用.%Objective:To establish the isolation and culture method of human adipose-derived mesenchymal stem cells (hADSCs) derived from human adipose in vitro,so as to explore their morphology,identify cell surface markers,observe biological properties,and discuss the possible causes and mechanism ofthe phenomenon of hADSCs' osteogenic differentiation accompanying with synthesis of triglycerides.Methods:Human adipose tissue were obtained from abdominal operation.The hADSCs were isolated from human adipose tissue by 0.15％ collagenase digesting.The cells were applied to do the experiments:MTT method,flowcytometry,immunofluorescence.Its differentiation potential was proved by osteogenic and adipogenic differentiation.The osteogenic and adipogenic related genes:PPARγ-2,osteopontin expression were detected by real-time fluorescent quantitative PCR technique.Results:After isolation and culture,we obtained a large amount of hADSCs,which grew like swirls.MTT revealed high capability for and proliferation.The flow cytometry showed CD29 +,CD31-,CD34-,CD45-,CD73 +,CD105 +,CD166 +,HLA-DR-,which fit the results of immuno fluorescence.Moreover,these cells could be functionally induced into adipocytes and osteoblasts in the presence of appropriate conditioned media.During osteogenic differentiation,we found it accompanying with the synthesis of triglycerides.RT-PCR results proved that during the differention process,osteogenic and adipogenic related genes began to be expressed gradually,which had statistically significant(P ＜0.01).Conclusion:Highly efficient isolation and cultivation methods for hADSCs have been developed.They are a kind of mesenchymal cells with great application prospect,which characterized with adherent growth,high proliferation,stem cell phenotype and multipotent differentiation.During vitro osteogenic differentiation,the triglyceride formation has a certain role in promoting osteogenesis.【期刊名称】《江苏大学学报（医学版）》【年(卷),期】2013(023)003【总页数】6页(P185-190)【关键词】人脂肪间充质干细胞;鉴定;成骨分化;成脂分化【作者】闵敏;张雪静;马红;许辉;李遇梅【作者单位】江苏大学附属医院皮肤科,江苏镇江212001;镇江市第二人民医院皮肤科,江苏镇江212002;江苏大学附属医院皮肤科,江苏镇江212001;江苏大学附属医院皮肤科,江苏镇江212001;江苏大学附属医院皮肤科,江苏镇江212001【正文语种】中文【中图分类】R329.2对于间充质干细胞的研究，最初的对象是骨髓间充质干细胞，并且已经形成了成熟的分离培养方法［1］。

人脂肪来源的间充质干细胞的生物学研究

【关键词】间质干细胞；组织工程；种子细胞
Ｂｏｏｉａａｕｅｆｕｎａｉｓ— ｅｉｅｄｅｅｔｔｏｌｅｌＸＵｕ，ＢＡｕ－ｅＧＯＺｕ，ｉｌｇｃｌｅｔｒｓｏｍａｄｐｅｄｒｄａｈｒｎｒｍａｌｆｈｏｖｓｃｓＥＪｒｌＹｎｆｉＵｅｊｎｔＮ．Ｕｅ－ｏｄ，Ｉｉｈａ－ｈ．ｈｅｏｄＨｏｉｌｆＳａｘＭｅｉｏＵｉｅｉ，ａｕｎ０００，ｈｎＡＯａＣｕｎｓｉＴｅＳｃｎｓｔｈｎｄｌｎｖｒｔＴｉａ３０１Ｃｉａｏｐａｏｃｓｙｙ［ｓａｔＯｊｃｉｅＴｘｌｒｔｅｍｅｏｓｆｒｓｌｉｎｕｕｅｏｕｎａｉｏｅｄｒｅｄｅｎＡｂｔｃ】ｂｅｔｏｅｐｏｅｈｔｄｏｏｔｎａｄｃｌｒｆｍａｄｐｓ— ｅｖｄａｈｒｔｒｖｈｉａｏｃｈｉｅｓｏａｃｉｈＤＳｆｍａｉｏｅｔｓｅ，ｎｂｅｖｈｒｈｌｙｃｔｙａｃｎｅｌｕｆｅａｔｅｓｆｔｍｌｅｓ（ＡＡ）ｒｄｐｓｓｓａｄｔｏｓｒｅｔｅｍｏｐｏｇ，ｙｄｎｍｉａｄｃｌｓｒｃｎｉｎｒｌｏｉｕｏｏｏｓａｇｏ
占很大比例；间充质干细胞表面抗原Ｃ２、Ｄ４随着传代表达逐渐增高，Ｄ９Ｃ４不表达内皮细胞标志Ｃ３，Ｄ１造血干细胞标志Ｃ３Ｄ４随细胞培养时间延长表达逐渐降低。结论强的增殖能力．表达干细胞表面标志。通过酶消化法可从人脂肪中获取间充质干细胞，具有很

脂肪细胞综述

脂肪细胞及其细胞因子研究进展摘要：近期的科学研究显示：脂肪组织不仅是一个被动的储存能量的器官，它还是一个调节机体内分泌、能量代谢及炎症的内分泌器官。

脂肪组织可以分泌多种激素和细胞因子，这些分泌蛋白通称为脂肪细胞因子。

脂肪细胞因子是脂肪细胞产生的生物活性物质, 它们能参与人体其他组织的生物功能。

目前已知的脂肪细胞因子有: 肿瘤坏死因子(TNF2A) , 纤溶酶原激活物抑制剂( PAI) 21, 白介素26 ( IL26) ,瘦素(Leptin) , 血管紧张素原( Angiotensinogen) ,脂联素( adiponectin) , 抵抗素( resistin) 等。

近年发现的脂肪细胞因子-脂联素( adiponectin),脂肪细胞因子chemerin，视黄醇结合蛋白(RBP)4等等，本文将对以上脂肪细胞因子做相关性分析，简单介绍其对脂肪细胞的影响及研究进展。

关键词：脂肪细胞；细胞因子；研究进展Abstract: recent scientific research suggests that: adipose tissue is not only a passive storing energy, organ, it was a regulate the endocrine, energy metabolism and inflammation of the endocrine organs. Adipose tissue can secrete a variety of hormone and cytokines, these secrete proteins are generally called "adipose cell factors. Fat cells factor is fat cells to produce the biological activity material, they can participate in the rest of the human body organization of biological function. Present known fat cell factors include: tumor necrosis factor (TNF2A), fibrinolytic enzyme inhibitors (original activation content PAI interleukin 26 (21), IL26), Leptin (Leptin), Angiotensinogen (Angiotensinogen), adiponectin (adiponectin), resist hormone (resistin) etc. Recent discovery of fat cells factor - adiponectin (adiponectin), fat cells factor chemerin, retinol combined with seeral ribosomal proteins, RBPS 4, etc, the paper will be on the above adipose cell factors do, and briefly introduces the correlation analysis of the influence of fat cells are reviewed.Keywords: fat cells, Cell factors; Research progress一.脂肪细胞（adipocyte;fat cell）脂肪细胞在分子细胞生物学中的定义是脂肪组织的间充质细胞，是含有大的充满液态脂质的膜泡，每个成人体内大约含有300亿个白色脂肪，功能是将能量以脂肪细胞的形式储存起来。

人脂肪间充质干细胞系说明书

传代周期：3-5天传代比例：1:2—1:3换液频率：传代时
气相：空气，95%；二氧化碳，5%温度：37℃
冻存液
人间充质干细胞培养液80%，FBS10%，DMSO 10%
细胞说明
正常的人脂肪间充质干细胞，具备分化成脂肪、成骨和软骨的能力。CD29、CD44、CD73、CD90、CD105、CD166表达阳性；CD14、CD31、CD34、CD45表达阴性。
细胞总数/每支
106
体积/每支
500µl
传代方法
0.05%Trypsin-EDTA消化后按1:2—1:3比例或5000个细胞/cm2进行传代，待CSP number
SCSP-404
细胞名称
人脂肪间充质干细胞系
英文名称
Adipose-Derived Mesenchymal Stem Cells
细胞描述
脂肪来源，间充质干细胞
物种
人，女性
细胞来源
ATCC
ATCC货号
PCS-500-011
培养液配方
（1）间充质干细胞基础培养基485 ml (ATCC货号PCS-500-030)（2）间充质干细胞生长试剂盒一个(ATCC货号PCS-500-040）

外泌体在皮肤科医学和美容应用进展完整版

外泌体在皮肤科医学和美容应用进展完整版背景外泌体是细胞外囊泡的一个子集，由所有类型细胞释放，理论上在细胞间通讯中发挥着至关重要的作用。

外泌体的直径范围为40-160 nm，根据其细胞来源，含有多种遗传物质，包括DNA、RNA、mRNA、代谢物、蛋白质和脂质。

鉴于细胞间通讯是通过外泌体交换细胞成分而促进的，因此它们的应用可能对疾病病理学和基于外泌体的治疗产生重要影响。

我们对当前外泌体在医学（和皮肤）疾病和医疗美容中的应用进行了全面回顾。

方法在PubMed 上进行了文献检索，回顾了外泌体及其在医学和美容领域的应用。

结果虽然外泌体在医疗和美容皮肤病治疗中的治疗应用前景广阔，但同样重要的是要注意，大多数将外泌体作为治疗的研究都是在临床前模型中进行的，因此强调需要进行进一步的研究和临床试验。

与外泌体相关的美学应用更重要的一点是，在撰写本文时，在美国，外泌体只能局部应用，而不是注射到皮肤中，世界上其他国家也是如此。

结论需要进行更多的研究和临床试验来评估外泌体的安全性以及在医学和美容领域应用的疗效和安全性。

1 简介外泌体是细胞外囊泡的主要亚型之一，对细胞间通讯很重要。

释放后，通过称为胞吐作用的过程，外泌体穿过细胞外液，直到到达靶细胞。

重要的是，鉴于外泌体本身由质膜衍生的磷脂双层组成，包膜可以防止其内容物降解。

这使得将囊泡内容物从一个细胞安全地远距离运输到另一个细胞成为可能。

到达靶细胞后，外泌体通过胞吞作用进入细胞，最终使得外泌体的内容物释放到细胞的胞浆中。

因此，外泌体能够有效改变其靶标的细胞生理学。

尽管这一过程正在积极研究中，但理论上外泌体介导的反应可以在疾病病理学和预防中发挥作用。

据报道，干细胞分泌的外泌体可以为多种疾病提供保护。

图2显示了正在评估外泌体潜在使用领域的疾病列表。

间充质干细胞衍生的外泌体在心血管疾病模型中具有心脏保护作用。

更具体地说，我们发现，在小鼠和猪的心肌缺血/再灌注损伤模型中，静脉注射干细胞来源的外泌体可将梗塞面积减少50%-60%，保护心脏功能，并减少氧化应激。

脂肪源性间充质干细胞研究新进展

齐冠呜综述，庭树审校杨
［要］作为一种多能干细胞，肪来源间充质干细胞与骨髓源性问充质干细胞具有相似的形态学及生物学特性，一定诱摘脂在导条件作用下可以定向分化为中胚层及内、胚层组织；且，肪源性问充质干细胞具有易获得、伤小等特点，细胞治疗及组外并脂创在织工程方面具有广泛应用前景。
ｍｅｈｙａｓｅｅｌｉｏｒｏｌｙａｏｌｇｙ，ａｄｈａｈｂｉｔｆｄｒｃｉｎｃｍｌｔｍｃｌｎｍｐｈｏｇｎｄｂｉｏｎｓｔｅａｌｙｏｉｅｔｏｎａｆｅｅｉｔｏｎｔｈｅａｌｔｅｒｌｙｅｓＴｈｅａ — ｉｌｆｒｎｔａｉｏｔｌｈｒｅｇｅｍａｒ．ｄｉｄｉｏｓ — ｒｖｅｅｅｈｙａｌｓｅｃｌｃｄｂｈｒｅｔｄｃｎｎｉｎｔｙｗｉｈｓｉｈｔｒｗｏｕｎｐｅｄｅｉｄｍｓｎｃｍｔｍｅｌｏｕｌｅａｖｓｅｏｖｅｅｌｔｌｇｅｄ，ａｄａｒａｏｓｃｎｃｌｈａｎｈｓａｂｏｄｐｒｐｅｔｉｅｌｅｒｐｙｔ
ｍｅｃｙｌｔｍｅｌＢｎｈｍａｅｃｌ，ＤＭＳ）最近，个研究小组先后从脂ｓＣｓ；几
ＨＬ — Ｒ（）行检测，果所分离的细胞９表达Ｃ３及ＡＤ一进结ＯＤ１＋Ｃ４＋抗原，Ｄ４获得了纯度较高的ＭＳ＿。Ｃｓ］９然而，ＭＳｓＢＭＳｓ表面标记并不完全相同，ＡＤＣ与ＤＣ的通过免疫荧光和流式细胞仪检测方法发现，Ｄ９Ｃ４ｄ和Ｃ０即Ｄ１６（血管细胞黏附分子一ｖｓｕａｅｌｄｅｉｌｕｅＶＣａｃ１ｃｌａｈｓｎｍｏｅｌ，ＡＭ）ｒｏｃ是