人类性染色质小体的制备和观察
合集下载
相关主题
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
实验二
人类性染色质小体（巴氏小体） 的制备与观察
一、目的
1，掌握人类x小体（巴氏小体）玻片标本 制作方法。 2，观察识别巴氏小体形态特征及所在部位， 鉴定个体的性别。
二、原理
巴氏小体又称X小体：正常女性，位于间期细胞 核中，紧贴核膜内缘，大小约1～1.5 um，呈现 三角或椭圆形小体，数量为x染色体数减一。巴氏 小体是由于女性两个X染色体中的一个失活形成 的。 具有两个（或以上）X染色体的细胞中，不活化 的X染色体所浓缩形成的紧密结构。 它会依附在细胞核边缘的核膜内侧，虽然此染色 体上的小部份区域能保持着活跃的状态，但大多 数的基因都是不会表现的。只有位于性腺之细胞 内的巴尔氏体在进行减数分裂时会再度活化。
染色、制片：滴加染液，室温10min（勿干）， 后在95%的酒精中分色1-3分钟，在无水乙醇中继 续分色两次，每次1分钟。最后用二甲苯透明两次， 每次约3分钟加盖玻片。
Lyon的剂量补偿学说认为：女性有两个X染色体， 但所表达的绝大部分遗传物质与只有1个X染色体 的男性是一样多的。
这是因为女性的X染色体中只有1个保持活性，而 另一个是晚复制的，没有活性。该Hale Waihona Puke Baidu活的染色体 在形态学上呈异染色体，即DNA螺旋压的很紧， 染色深而致密，称之为巴氏小体。
三、实验材料
口腔粘膜细胞，毛根鞘细胞，显微镜，载 玻片，盖玻片，牙签，吸管，固定液（乙 醇:冰醋酸＝3:1），乙醇，二甲苯，卡宝品 红染液
四、实验步骤
1）取材 口腔粘膜细胞：受检者清水漱口数次，用 洁净牙签从女性口腔两侧刮取粘膜，原位 刮2～3次，第1次舍去，第2，3次分别涂于 干净载玻片上。
发根细胞：拔取女性带有毛囊的头发（约 2cm），置于载玻片上。
箭头所示为巴氏小体（女性细胞[左]中存在，男性细胞[右]中没有）
六、注意事项
1．在实验中取材时应该注意安全； 2．如果用毛囊细胞进行试验，采样前应清 洗头发，因出油后拔取毛发时不易带出毛 囊细胞。
步骤
取材：受检者清水漱口数次，用洁净牙签 从女性口腔两侧刮取粘膜，原位刮2～3次， 第1次舍去，第2，3次分别涂于干净载玻片 上。 固定：口腔粘膜细胞加入新配置的固定液 （95%乙醇:冰醋酸＝3:1），固定30min （固定液勿干）以上，空气干燥。
2）固定 口腔粘膜细胞加入新配置的固定液（95% 乙醇:冰醋酸＝3:1），固定30min以上，空 气干燥。
2）固定 毛囊细胞-拔取一根毛根比较大的毛发，在一张干 净的载玻片中央滴一滴45%的醋酸，静置约5分钟， 待毛根稍软后，用镊子尖把外层毛囊的组织细胞 轻轻刮下，弃去毛干。将细胞用解剖针在载玻片 上均匀摊平，并在空气中晾干。 实验改进意见：拿起上述发根的梢部，将其上毛 囊细胞轻轻蹭于另一干净载片上即可达到转移的 目的。（若用刀片或镊子将毛囊细胞刮下，可造 成细胞的堆积，同样会出现多层细胞的现象。1根 发根的毛囊细胞可以转移到3-4张载片上，以达到 充分利用实验材料的目的。观察时又可以看到清 晰的单层涂布细胞，便于观察统计。）
3）染色、制片 滴加染液，室温10min（勿干）； 在95%的酒精中分色1-3分钟； 在无水乙醇中继续分色两次，每次1分钟 用二甲苯透明两次，每次约3分钟； 加盖玻片，压片。
巴氏小体为女性细胞中所特有的染色体结构，是1条X染 色体呈异固缩状态所形成，各实验室所统计的观察率不尽 相同，从30％一50％不等，有些实验室中在男性的细胞 中发现X小体有2%的出现率，但小体结构不规范、典型。 巴氏小体常位于核膜内侧。直径为1μm左右，其形状有微 凸形、三角形、卵形、短棒形和双球形等。观察时需注意 巴氏小体与细胞的比例。 正常女性细胞中仅可观察到1个巴氏小体，而正常男性细 胞中无巴氏小体或仅在个别细胞中有不典型的巴氏小体存 在。
人类性染色质小体（巴氏小体） 的制备与观察
一、目的
1，掌握人类x小体（巴氏小体）玻片标本 制作方法。 2，观察识别巴氏小体形态特征及所在部位， 鉴定个体的性别。
二、原理
巴氏小体又称X小体：正常女性，位于间期细胞 核中，紧贴核膜内缘，大小约1～1.5 um，呈现 三角或椭圆形小体，数量为x染色体数减一。巴氏 小体是由于女性两个X染色体中的一个失活形成 的。 具有两个（或以上）X染色体的细胞中，不活化 的X染色体所浓缩形成的紧密结构。 它会依附在细胞核边缘的核膜内侧，虽然此染色 体上的小部份区域能保持着活跃的状态，但大多 数的基因都是不会表现的。只有位于性腺之细胞 内的巴尔氏体在进行减数分裂时会再度活化。
染色、制片：滴加染液，室温10min（勿干）， 后在95%的酒精中分色1-3分钟，在无水乙醇中继 续分色两次，每次1分钟。最后用二甲苯透明两次， 每次约3分钟加盖玻片。
Lyon的剂量补偿学说认为：女性有两个X染色体， 但所表达的绝大部分遗传物质与只有1个X染色体 的男性是一样多的。
这是因为女性的X染色体中只有1个保持活性，而 另一个是晚复制的，没有活性。该Hale Waihona Puke Baidu活的染色体 在形态学上呈异染色体，即DNA螺旋压的很紧， 染色深而致密，称之为巴氏小体。
三、实验材料
口腔粘膜细胞，毛根鞘细胞，显微镜，载 玻片，盖玻片，牙签，吸管，固定液（乙 醇:冰醋酸＝3:1），乙醇，二甲苯，卡宝品 红染液
四、实验步骤
1）取材 口腔粘膜细胞：受检者清水漱口数次，用 洁净牙签从女性口腔两侧刮取粘膜，原位 刮2～3次，第1次舍去，第2，3次分别涂于 干净载玻片上。
发根细胞：拔取女性带有毛囊的头发（约 2cm），置于载玻片上。
箭头所示为巴氏小体（女性细胞[左]中存在，男性细胞[右]中没有）
六、注意事项
1．在实验中取材时应该注意安全； 2．如果用毛囊细胞进行试验，采样前应清 洗头发，因出油后拔取毛发时不易带出毛 囊细胞。
步骤
取材：受检者清水漱口数次，用洁净牙签 从女性口腔两侧刮取粘膜，原位刮2～3次， 第1次舍去，第2，3次分别涂于干净载玻片 上。 固定：口腔粘膜细胞加入新配置的固定液 （95%乙醇:冰醋酸＝3:1），固定30min （固定液勿干）以上，空气干燥。
2）固定 口腔粘膜细胞加入新配置的固定液（95% 乙醇:冰醋酸＝3:1），固定30min以上，空 气干燥。
2）固定 毛囊细胞-拔取一根毛根比较大的毛发，在一张干 净的载玻片中央滴一滴45%的醋酸，静置约5分钟， 待毛根稍软后，用镊子尖把外层毛囊的组织细胞 轻轻刮下，弃去毛干。将细胞用解剖针在载玻片 上均匀摊平，并在空气中晾干。 实验改进意见：拿起上述发根的梢部，将其上毛 囊细胞轻轻蹭于另一干净载片上即可达到转移的 目的。（若用刀片或镊子将毛囊细胞刮下，可造 成细胞的堆积，同样会出现多层细胞的现象。1根 发根的毛囊细胞可以转移到3-4张载片上，以达到 充分利用实验材料的目的。观察时又可以看到清 晰的单层涂布细胞，便于观察统计。）
3）染色、制片 滴加染液，室温10min（勿干）； 在95%的酒精中分色1-3分钟； 在无水乙醇中继续分色两次，每次1分钟 用二甲苯透明两次，每次约3分钟； 加盖玻片，压片。
巴氏小体为女性细胞中所特有的染色体结构，是1条X染 色体呈异固缩状态所形成，各实验室所统计的观察率不尽 相同，从30％一50％不等，有些实验室中在男性的细胞 中发现X小体有2%的出现率，但小体结构不规范、典型。 巴氏小体常位于核膜内侧。直径为1μm左右，其形状有微 凸形、三角形、卵形、短棒形和双球形等。观察时需注意 巴氏小体与细胞的比例。 正常女性细胞中仅可观察到1个巴氏小体，而正常男性细 胞中无巴氏小体或仅在个别细胞中有不典型的巴氏小体存 在。