免疫比浊法检测免疫球蛋白
透射免疫比浊终点法与速率法测定免疫球蛋白对比分析
/L、聚乙二醇 ４０g/L,试 剂 ２ 为 羊 抗 人 I
１００ mmo
l
gG
抗体适量、叠 氮 钠 ０．
９５g/L)及 定 标 校 准 品 (浓 度 为
６、
１２、
２０、
３０g/L),批 号 为 １９０９０４. 校 准 品 量 值 可 溯
源至IRMM ERM DA４７０ 参考物质.
１．
３ 方法
１．
３．
速率法,副波长无,加入试剂 R２ 混匀后立即测定初始
吸光度,连续 监 测 ２ mi
n 测 定 吸 光 度 变 化 率 ΔA/mi
n
计算出 浓 度. 其 余 参 数、反 应 过 程 和 校 准 方 法 同 终
检验医学与临床 ２０２１ 年第 １８ 卷增刊 Ⅰ Lab MedC
l
i
n,
２０２１,
Vo
l．
种方法测定结果比较 差 异 无 统 计 学 意 义 (
P ＞０．
０５),
有良好的相关性,见表 １.
结果(
x±s,
g/L)
方法
终点法
速率法
t
不同浓度 I
gG(
g/L)
６
１２
２０
３０
６．
１２±０．
１８ １１．
９６±０．
４８２２．
０４±３．
１７３２．
１３±６．
１２
０．
０８
＞０．
０５
P
＞０．
０５
２．
抗体相似的 球 蛋 白,能 与 相 应 抗 原 特 异 性 结 合,介 导
体 液 免 疫 作 用 [１]. 同 时,其 本 身 也 是 抗 原,具 有 免 疫
免疫透射和免疫散射比浊法测定血清免疫球蛋白及补体的比较
ｓ ｒ ｍ ａ ｌ ｓ ｅ ｕ ｓ ｍｐ ｅ ｗｅ ｅ ｒ ｍｅ ｓ ｒ ｄ ａ ｕ ｅ ｗｉ ｉ ｔ ｍｍ ｕ ｅ ｒ ｎ ｍｉ ｓｏ ａ ｄ ｍ ｍｕ ｅ ｃ ｔ ｅ ｔ ｒ ｉ ｉｙ ｙ ｅ ｋ ｎ ｈ ｎ ｔ ａ ｓ ｓ ｉ ｎ ｎ ｉ ｎ ｓ ａ ｔ ｒ ｕ ｂ ｄ ｔ ｂ Ｂ ｃ ｍａ Ｃｏ ｈｅ Ｓ ｎ ｈｒ ｎ ｕ ｒ ｙ ｃ ｏ ＩＸ ２ ０
摘要
目的： 比较免疫透射和免疫散射 比浊法测定免疫球蛋 白和补体时 的准确性、 精密度 、 偏离度及测定范 围。方法 ： 采
用 克曼 Ｉ ２ 与 ＤＥ Ａ特定蛋 白分析仪 ， ｘ一 Ｏ Ｉ Ｔ 分别以免疫透射和免疫散射 比浊法 ， 同一临床标本测定血清 中免疫球 对
蛋 白 （ Ｇ、 Ａ、 Ｍ ） 补 体 （ ３ Ｃ ） Ｉ Ｉ Ｉ 和 ｇ ｇ ｇ Ｃ 、４ 的含 量 。结 果 ： 种 仪 器 测 定 ＩＧ、ｇ ＩＭ 、 ３ 准 确 性 、 密 度 均 良好 。两 法 两 ｇ ＩＡ、ｇ Ｃ 、 精 各浓 度 值 测 定结 果 的 预 期偏 差 均 在 可接 受范 围 。结 论 ： 克曼 Ｉ 一 Ｏ 用免 疫 透 射 比浊 法 与 Ｄ Ｉ 贝 ２应 Ｘ Ｅ ＴＡ特 定 蛋 白分 析仪
应用免疫散射比浊法测定免疫球蛋 白和补体准确性 、 精密度均 比较好 ， 且散射 比浊法优于透射 比浊法。
关键 词 免疫 球 蛋 白 ； 体 ； 射 比浊 ； 射 比浊 补 透 散 Ｒ４ ６ ６ ４． ２ 文 献 标 识码 Ａ 文章 编 号 １ ０ ０ ８ （０８ ０ —０ ５ ０ ０ ４— １８ ２ ０ ）５ ６ ９— ３ 中 图分 类 号
两种免疫比浊法测定血清免疫球蛋白的结果差异探讨及解决方法
１ 试剂及校准 品 ｆ Ｉ ｍａｅ ． ２ １ ｍ ｇ 测定 ＩＧ ＩＡ、 Ｍ全 部配套 ） ｇ 、ｇ Ｉ ｇ 试剂ｆ 批号 ＩＧ Ｍ６ １０ 、 Ａ Ｍ １３ ０ ＩＭ Ｍ６ １ ２） ｇ １ ３ １ Ｉ ６ １０ 、ｇ ０ ２ ４与校准 ｇ 品ｆ 批号 Ｍ ０ ３ ８（ ６４５） 简称 Ｂ ｃ ｍ ｎ试剂１（） Ｉ ｅｋ ａ ： Ｉ Ｉ ２ Ｎ） 迈克试剂公 司 ＩＧ、 Ａ、 Ｍ定 量测定试剂盒（ ｇ Ｉ Ｉ ｇ ｇ 批号均为 ２ ０ ０ ０ ） ０ ５ ３ １， 试剂盒 自
２ 结 果
２１ 方 法 ｆ１ 射 比 浊 法 采 用 迈 克 试 剂 公 司 试 剂 ． 日立 ． １透 用
７０ ６ ０全 自动 生 化 分 析 仪 进 行 测 定 ｆ１速 率 散 射 比 浊 法 采 用 ２ Ｉ ａｅ免疫 化学 系统 进 行 ｆ１ 器 精 密 度 评 价 试 验 用 一 份 正 ｍｍ ｇ ３ 仪 常 浓 度 混 合 血 清 样 本 分 别 用 两 种 方 法 完 成 ＩＧ、ｇ ＩＭ 的 ｇ Ｉ Ａ、ｇ
１１ 仪 器 Ｂ ｃｍａ — ｏｌ ｒ 司 生 产 的 Ｉ ａｅ免 疫 化 学 ． ｅｋ ｎ Ｃ ｕ ｅ 公 ｔ ｍｍ ｇ 系统 ． 日立 ７ ０ ６ ０全 自动 生化 分析 仪
双 份 平 行 测 定 ．各 自重 复 ２ ０次 ．计 算 出两 种 测 定 方 法 的均 值 、 准 差 批 内１ 标 和变 异 系 数 （ ｖ批 内１此 即批 内 精 密 度 。 ｃ ．
带 校 准 品
钟 混 匀 分 别 测 定 ２次 求 均 值 ． 共 ２ 总 ０天 得 ２ ０个 数 据 ． 同样 计 算 均 值 、 准 差 批 间１ 变 异 系 数 （ ｖ批 问１此 为 批 间精 标 和 ｃ ，
放射免疫法与免疫比浊法检测脑脊液免疫球蛋白含量比较
格林 巴利 综 合征 患 者 脑 脊 液 中 的免 疫 球 蛋 白浓 度 是确 诊格 林 巴利综 合 征 的一 项 重 要指 标 ， 效 性 高 、 确 性 强 的 有 准
临床 检验 方 法对 于临 床诊 治具 有指 导 意义 。 者通 过 两种 方 笔 法进 行检 测 ， 将本 院检 测结 果 和经 验报道 如下 ： 现 １ 资 料 与 方 法
淀物 的放射性 ， 根据 结果 制作 标 准 曲线 图。 免疫 比浊 法 ： 齐 备 ｌＧ、 Ａ、 Ｍ 试剂 盒 、 准 品 等 必 备 品 后 ， 用 Ａｒ ｙ ６ ｇ Ｉ Ｉ ｇ ｇ 校 应 ｒ ３ ０特 ａ 种 蛋 白分 析 仪 和美 国雅 培 Ａ Ｂ Ｔ ｅｏｅ 全 自动 生化 仪 ， Ｂ Ｏ ＦＡ ｒｓｔ 严格 按 照操 作说 明进 行 。
比 浊 法 线 性 范 围 高 于 放 射 免 疫 法 （。４１ ，＝ ．１ ） ｘ＝ ．６ Ｐ ００ ６ 。
２２测 量 灵 敏 度 ．
比浊法灵敏 度较放 射免 疫法 低 ， 性 范围较放 射免 疫法 宽 ， 线 根 据 两组 数据 显示 其灵 敏度 及线 性 范围 均能 满足 临床应 用 。 本
的 时 问不少 于 ２ｈ 每批 对 样 本 做双 份 测定 ， 均 值 ， ， 取 计算 批
内 、 间 、 间和总 精 密度 ， 一批 测定 均做 一次 质控日 得 出 批 天 每 。 标本 批 内变异 系 数 （ Ｖ） ２３ ， 问 Ｃ Ｃ 为 ．％ 批 Ｖ为 ３１ 天 间 Ｃ ．％， Ｖ
一
射性 标 记 的抗 原 的量 ， 而 计算 出相应 的结 果 。放 射免 疫法 从 存 在放 射 性 核 素污 染 ． 试剂 保存 期 短 ， 作 繁杂 ， 性 小 ， 操 线 要 批量 做 ， 果报 告不 及 时 ， 结 对高 浓 度标 本需 稀 释重 做 ， 但费 不 时 费力 ． 而且手 工稀 释 ， 以满 足实 验室 和 临床 的要求［ 难 ４ １ 。
免疫学实验 免疫比浊(免疫球蛋白的测定)
3 免疫胶乳比浊法
原理
选择一种大小适中，均匀一致的胶乳颗 粒，吸附抗体后，当遇到相应抗原时，则 发生凝集，单个胶乳颗粒在入射光波长之 内，光线可透过，当两个胶乳凝集时，则 使透过光减少。这种减少的程度与胶乳凝 集成正比，与抗原量成正比。
（a）带抗体的胶乳在波长之内可透过光线； （b）结合后，则形成光线衰减
2. 海德堡（heidelberger）曲线理 论
2 抗体的质量
（1）特异性高 （2）效价高 （3）亲和力高 （4）抗血清来源
3 抗原抗体反应的溶液
• pH 6.5~8.5
• 电解质 离子强度、种类（磷酸盐缓冲液）
4 增浊剂的使用
• PEG、tween-20等非离子型亲水 剂
• 作用：消除蛋白质分子周围的电子 云和水化层，促进抗原、抗体分子 靠近，结合形成大分子复合物。
（二）类型
1. 透射免疫比浊法 2. 散射免疫比浊法 3. 免疫胶乳比浊法
1 透射免疫比浊法
原理：
抗原抗体在一定缓冲液中形成免疫复合物 (IC)，当光线透过反应溶液时，由于溶液内复 合物粒子对光线的反射和吸收，引起透射光减 少，免疫复合物量越多，透射光越少，即光线 吸收越多，可用吸光度表示。吸光度和复合物 的量成正比，当抗体量固定时，与待检抗原量 成正比。用抗原标准品建立标准曲线，可测出 待检抗原含量。
•
样本管吸光度
• 浓度＝————————×校准液浓度（g/L）
•
校管吸光度
• 结果及讨论
– 检测报告 – 检测意义
实验二、免疫浊度测定 ——免疫球蛋白检测
实验步骤见说明书 IgG9.77g/L IgA1.72g/L IgM1.37g/L
沉淀反应
微生物与免疫教研室
免疫比浊法检测免疫球蛋白
材料
1.免疫球蛋白试剂A,M,G 2.免疫球蛋白试剂A,M,G校准品，蒸馏水 3.微量加样枪 4.分光光度仪
结果计算方法
样本管吸光度 Ig浓度（g/L）= 校准管浓度 × Ig校准浓度（g/L）
光通量是每单位时间到达、离开或通过曲面 的光能数量
散射比浊法
• 原理 在入射光的一定角度检测粒子发出的散 射光，散射光的强度与IC的含量呈正比。
散射比浊法测定原理
聚集形成
诱导剂
增 加 散 透 率 : 660nm 测 定 散 射 光
散射光测定
检测器 (LED) 样品
光电计 散射光强度
100 %
0%
在速率峰基础上完成的标准曲线
RATE
CONCENTRATION
方法评价：
敏感度高 快速(不必达平衡）
抗原抗体结合的动态测定，理论上测定不
受本底散射信号的影响
可检测微量样品
2.终点散射比浊法
• 原理
让抗原抗体作用一定时间，使其反应达到平衡后， 测定其IC形成的量。IC的浊度不再受时间的影响，但 反应IC聚合产生絮状沉淀之前，进行浊度测定。
免疫浊度法测定中应注意的问题 1、伪浊度的影响 伪浊度形成原因很复杂，主要是抗血清含有非特 异性的交叉反应性杂抗体成分；增浊剂浓度和反应时间 掌握不当；样品本身的浊度处理不当；试剂的污染和变 质；器材尤其是比色杯等不够清洁等因素。 2、非特异性散射光的影响 免疫浊度法经常受内源性光散射的干扰，为避免这 些非特异性光散射的影响，应用透射比浊法时需保证抗 体组分在3％以下，散射比浊法
光 源
诱 导 剂
透射比浊法测定原理
样品
光电计
滤光片 光源
透射比浊法的缺陷：
免疫比浊法
免疫比浊法的特点：
实验原理
优点
稳定性好，敏感性高(达ng/L)、精确度高，干扰因素少，结果判断更加客观、 准确。
快速、简便，结果回报时间短，便于及时将各种信息向临床反馈，又可节约 大量人力物力，利于大批量样品的处理。
能更好地避免标本之间的污染及标本对人的污染。
可利用多道计数器、测光仪，同一份样品同时测定几十种和临床有关的分析 项目，血清用量少，具有明显的应用优势。
实验 免疫比浊法检 测免疫球蛋白
免疫系
1
实验原理
2
材料和方法
3
实验结果
实验原理
免疫球蛋白（Ig）是指一类具有抗体样结构或具有抗体活性 的球蛋白，能与诱导其产生的抗原发生特异性结合，是体液免 疫应答的主要效应分子。免疫球蛋白水平增高常见于各种慢性 细菌感染，如慢性骨髓炎、慢性肺脓肿等。在多种自身免疫病、 肝脏疾病患者中可有IgG、IgA、IgM升高：在系统性红斑狼疮 患者中以IgG、IgA或IgG 、IgM升高较多见；在类风湿关节炎 中则以IgM升高为主。免疫球蛋白水平降低多见于先天性体液 免疫缺乏病、肾病综合症、吸收不良综合症、淋巴瘤、放射损 伤和免疫抑制剂治疗后等情况。
实验原理
聚乙二醇即PEG是中性、无毒且具有独特理化性质和良 好的生物相溶性的高分子聚合物，聚乙二醇具有高度的亲水 性，在水溶液中有较大的水动力学体积，并且没有免疫原性。
在免疫反应中，为增强抗原抗体反应常使用增聚剂，如34％的聚乙二醇等，利用其破坏抗原抗体的水化层，促进其靠 近反应，但如浓度不适合，高了会影响其它溶质或产生非特 异性聚集影响结果。
实验原理
血浆蛋白分析技术经历了： 试管沉淀反应、琼脂凝胶的扩散实验发展到现代免疫 分析技术，其中很重要得一类就是免疫比浊法。
免疫球蛋白MIgM测定免疫比浊法-检验科免疫室作业指导书
免疫球蛋白MIgM测定免疫比浊法1.原理分析原理是液相免疫沉淀散射比浊终点测定法。
抗血清用缓冲液稀释后加到一份病人血清中，经过孵育后可以测定抗原抗体复合物产生的散射光。
散射光结果和血清中的IgM浓度成正比。
标本采集：标本采集前病人准备：受检者空腹标本种类：血清或血浆标本要求：取被检者静脉血2ml，室温放置不超过4小时，分离血清备用。
标本储存：待测标本在2-8℃存放不超过24小时，-20℃不超过三个月，-70℃长期保存。
避免反复冻融。
标本运输：室温运输标本拒收标准：细菌污染、溶血、脂血不能作测定。
试剂6.1试剂名称：免疫球蛋白M检测试剂盒6.2试剂生产厂家：芬兰Orion诊断试剂公司6.3包装规格：60Test/kit6.4试剂盒组成：缓冲液30ml空白缓冲液30ml抗血清试剂0.5ml定标液0.5ml磁卡1张仪器设备：仪器名称：OrionTurboxRplus特定蛋白分析仪仪器厂家：芬兰Orion集团公司仪器型号：Turboxplus8.操作步骤：8.1试剂配制：8.1.1抗血清应用液准备：吸取500ul抗血清加到反应缓冲液中，轻轻混匀，应用液2-8℃可保存12个星期。
8.1.2空白缓冲液：液体待用。
8.1.3定标液：用0.9%NaCL进行1：51稀释。
定标液根据IFCC提供的材料CRM470进行标定。
8.2收集与处理样品：样品用0.9%Nacl进行1：51稀释。
8.3为每一份样本测定准备一份样品空白，同样，为定标液另外准备一份定标液空白。
8.4准备两份定标液测定（定标完成后，标准曲线数据存储在磁卡内。
下次检测如使用同批试剂，可以不必做定标而直接使用磁卡上的定标信息）。
8.6轻轻摇动混匀，室温18-25℃放置30±5分钟。
8.7仪器测试步骤：参见TurboxR特定蛋白分析仪作业指导书。
9.结果计算：仪器直接计算并打印结果。
临床意义：IgM是分子量最大的免疫球蛋白，是一种高效能抗体、能固定补体，具有溶菌、抑菌、中和病毒作用。
免疫散射比浊法和免疫透射比浊法测定免疫球蛋白结果比较
免疫散射比浊法和免疫透射比浊法测定免疫球蛋白结果比较刘少华;邓文平;李燕【摘要】目的探讨免疫透射比浊法和免疫散射比浊法测定免疫球蛋白(Ig)水平的关系.方法用免疫透射比浊法和免疫散射比浊法检测252例健康体检人群的血清Ig,同时测定IgG高、低值水平,分析两种方法测定结果之间的关系.结果健康体检人群中血清IgG水平免疫透射比浊法[(11.46±4.92)g/L]测定与免疫散射比浊法[(11.85±3.72)g/L]测定相比,差异无统计学意义(P>0.05);免疫透射比浊法IgM[(1.51±1.06)g/L],免疫散射比浊法IgM[(1.60±0.91)g/L]和免疫透射比浊法IgA[(2.08±1.51)g/L],免疫散射比浊法IgA[(2.15±1.19)g/L]水平差异均无统计学意义(P>0.01).高、低值IgG用两种方法均可以测定.结论了解免疫功能水平时,测定Ig用免疫透射比浊法和免疫散射比浊法均可,但免疫散射比浊法更有利于病情的监测.%Objective To compare transmission turbidity and scatter turbidity method on measuration of serum immunoglobulin (Ig) levels. Methods Serum Ig concentration was measured by transmission turbidity and scatter turbidity method in 252 healthy people. The high level and low level of IgG were also measured. The relationship between the two methods was analyzed. Results The results showed that the levels ofIgG[(11. 46 ±4. 92)g/L,(11. 85 ± 3. 72)g/L] ,IgM[(l. 51 ± 1. 06)g/L,(l. 60 ± 0.91)g/L] and IgA [(2. 08± 1. 51)g/L, (2. 15 ± 1. 19)g/L] had no significant difference in healthy people(P>0. 05) measured by transmission turbidity and scatter turbidity method. High and low level of IgG can detect by transmission turbidity and scatter turbidity method. Conclusion Transmission turbidity and scatter turbidity method can both be used fordetermination of IgG, while immune scatter turbidity method could be beneficial for evaluation of the disease condition.【期刊名称】《重庆医学》【年(卷),期】2012(041)020【总页数】2页(P2034-2035)【关键词】散射测浊法和比浊法;免疫球蛋白【作者】刘少华;邓文平;李燕【作者单位】重庆市涪陵中心医院检验科,408000;重庆市涪陵中心医院检验科,408000;重庆市涪陵中心医院检验科,408000【正文语种】中文人体免疫球蛋白(Ig)测定，是检查人体免疫功能状态最直接而简单的方法，只有选择好的检测方法才能保证检验结果的准确性。
免疫比浊法PPT
异性聚集影响结果。
免疫比浊法的特点：
实验原理
优点
稳定性好，敏感性高(达ng/L)、精确度高，干扰因素少，结果判断更加客观、 准确。
快速、简便，结果回报时间短，便于及时将各种信息向临床反馈，又可节约 大量人力物力，利于大批量样品的处理。
空白管
+蒸馏水 （10mL）
校准管 +IgX试剂 37℃ （1mL） 5min
+校准品 （10mL）
混匀 37℃,10min
OD340
样本管
+样品血清 （10mL）
结果计算方法：
实验结果
样本管吸光度 Ig浓度（g/L）×= Ig校准浓度（g/L）
校准管吸光度 IgA：1.72 g/L IgG：9.77 g/L IgM，除非放置较长时间 。
如要形成较大的的复合物，抗原抗体量应较大。
实验材料
1.免疫球蛋白A,M,G（IgA, IgM, IgG）测定试剂 2.免疫球蛋白A,M,G （IgA, IgM, IgG）校准品，蒸馏水，
血清样本 3.微量加样枪、试管 4.分光光度仪、水浴箱
实验方法
实验 免疫比浊法检 测免疫球蛋白
免疫系
1
实验原理
2
材料和方法
3
实验结果
实验原理
免疫球蛋白（Ig）是指一类具有抗体样结构或具有抗体活性的 球蛋白，能与诱导其产生的抗原发生特异性结合，是体液免疫 应答的主要效应分子。免疫球蛋白水平增高常见于各种慢性细 菌感染，如慢性骨髓炎、慢性肺脓肿等。在多种自身免疫病、 肝脏疾病患者中可有IgG、IgA、IgM升高：在系统性红斑狼疮 患者中以IgG、IgA或IgG 、IgM升高较多见；在类风湿关节炎 中则以IgM升高为主。免疫球蛋白水平降低多见于先天性体液 免疫缺乏病、肾病综合症、吸收不良综合症、淋巴瘤、放射损
实验1 免疫比浊法检测免疫球蛋白
实验原理
合适比例的抗原抗体形成的免疫复合物，在PEG的作用下形成微粒，使 样品的浊度发生变化
可用分光光度仪测量反应液体的浊度。当抗体浓度固定，样品的浊度与 其中所含有的抗原量成正比。
由于免疫复合物的形成有时限变化。当抗原抗体相遇后立即结合成小复 合物，几分钟到几小时才形成可见的复合物，这种速度太慢，加入聚合 剂（或促聚剂）可加速大的免疫复合物形成。
散 射光
θ
检测器
散射比浊的优点是灵敏度、精密度均较高，检测快速。 其缺点是需特定的分析仪器，试剂价格高。
实验材料
免疫球蛋白A,G试剂 免疫球蛋白A、G校准品（Mix），蒸馏水 微量加样枪、EP管 分光光度仪、水浴箱
IgG R1 250μL
IgA RI 150μL
对照/标准品/
样本 2 μL
混
匀
37
医学免疫学实验
上海医学院免疫学系
2016-3-9
INSTITUTE FOR IMMUNOBIOLOGY DEPARTMENTOF IMMUNOLOGY
实验室注意事项：
实验安全
戴手套操作，注意试剂不要溅到眼里嘴里，有问题及时和老师沟通。
实验卫生
实验结束后学生收拾桌面，物归原处，移液器调回最大量程。值日生打 扫卫生，装好枪头，收拾垃圾，（垃圾扔在走廊西侧垃圾桶内）。
℃
水
浴
5
对照/标准品/ 分
样本 3 μL
钟
IgG R2 85μL 混
匀 37 ℃ 水 浴 5 IgA R2 分 50μL 钟
检测 OD700
试剂1（R1）： Tris缓冲液 20mmol/l 聚乙二醇-6000 4% 试剂2（R2）： Tris缓冲液 20mmol/l 羊抗人IgA/G抗体
免疫球蛋白GIgG测定免疫比浊法-检验科免疫室作业指导书
免疫球蛋白GIgG测定免疫比浊法原理分析原理是液相免疫沉淀散射比浊终点测定法。
抗血清用缓冲液稀释后加到一份病人血清中，经过孵育后可以测定抗原抗体复合物产生的散射光。
散射光结果和血清中的IgG浓度成正比。
2.标本采集：标本采集前病人准备：受检者空腹。
标本种类：血清或血浆。
标本要求：取被检者静脉血2ml，室温放置不超过4小时，分离血清备用。
3.标本储存：待测标本在2-8℃存放不超过24小时，-20℃不超过三个月，-70℃长期保存。
避免反复冻融。
标本运输：室温运输。
标本拒收标准：细菌污染、溶血、脂血不能作测定。
试剂6.1试剂名称：免疫球蛋白G检测试剂盒6.2试剂生产厂家：芬兰Orion诊断试剂公司6.3包装规格：60Test/kit6.4试剂盒组成：缓冲液30ml空白缓冲液30ml抗血清试剂0.5ml定标液0.5ml磁卡1张仪器设备：7.1仪器名称：OrionTurboxRplus特定蛋白分析仪7.2仪器厂家：芬兰Orion集团公司7.3仪器型号：Turboxplus操作步骤：试剂配制：8.1.1抗血清应用液准备：吸取500ul抗血清加到反应缓冲液中，轻轻混匀，应用液2-8℃可保存12个星期。
8.1.2空白缓冲液：液体待用。
8.1.3定标液：用0.9%NaCL进行1：51稀释。
定标液根据IFCC提供的材料CRM470进行标定。
收集与处理样品：样品用0.9%Nacl进行1：51稀释。
为每一份样本测定准备一份样品空白，同样，为定标液另外准备一份定标液空白。
准备两份定标液测定（定标完成后，标准曲线数据存储在磁卡内。
下次检测如使用同批试剂，可以不必做定标而直接使用磁卡上的定标信息）。
如下准备各比色管：轻轻摇动混匀，室温18-25℃放置30±5分钟。
仪器测试步骤：参见TurboxR特定蛋白分析仪作业指导书。
结果计算：仪器直接计算并打印结果。
临床意义：IgG是血清中抗细菌、抗病毒、抗毒素的主要抗体。
巨噬细胞、中性粒细胞表面具有IgGFc受体，可增强对细菌等物质的吞噬能力。
ISO15189S免疫球蛋白G(IgG)测定(免疫比浊法)
定标液
空白
定标液
测定
样品
空白
样品
测定
样品
定标液
空白缓冲液
抗血清应用液
—
20ul
500ul
—
—
20ul
—
500ul
20ul
—
500ul
—
20ul
—
—
500ul
8.6轻轻摇动混匀，室温18-25℃放置30±5分钟。
8.7仪器测试步骤：参见TurboxR特定蛋白分析仪作业指导书。
9.结果计算：仪器直接计算并打印结果。
1.原理
分析原理是液相免疫沉淀散射比浊终点测定法。抗血清用缓冲液稀释后加到一份病人血清中，经过孵育后可以测定抗原抗体复合物产生的散射光。散射光结果和血清中的IgG浓度成正比。
2.标本采集：
2.1标本采集前病人准备：受检者空腹。
2.2标本种类：血清或血浆。
2.3标本要求：取被检者静脉血2ml，室温放置不超过4小时，分离血清备用。
10.临床意义：IgG是血清中抗细菌、抗病毒、抗毒素的主要抗体。巨噬细胞、中性粒细胞表面具有IgGFc受体，可增强对细菌等物质的吞噬能力。K细胞也含有IgGFc受体，可引起K细胞的ADCC作用。IgG是唯一能通过胎盘的免疫球蛋白。对新生儿出生数周内的抗感染起重要作用。
11.参考范围：7-15g/L
12.质量控制：建议使用厂家或临检中心提供的免疫球蛋白G质控液和临床标本同时检测，结果必须在控制范围内。
15.2当要丢弃包括所有的实验材料和试剂时，须经121℃一个小时的高压灭菌。
15.3定标液中的含有来源于人血清的材料，已经测定HCV、HBsAg和HIV抗体阴性，应仍然视为传染源。
免疫球蛋白G(IgG)测定标准操作程序SOP文件
定标频率：A试剂批号更换
B由质控结果决定
ABCD医院
生化实验室
文件编号：
ABCD-SOP-04-44
免疫球蛋白G（IgG）测定
版序：ABCD
页码：第2页，共3页
4.3质控物
来源：Precinorm protein (罗氏蛋白正常值质控)
Precipath protein (罗氏蛋白病理值质控)
4.2校准物
来源：ROCHE配套校准物，符合WHO标准，CRM470,具体如下：
S1：0.9％的NaCl
S2-6:Preciset Serum protein
批特异的定标液的靶值乘以下列的转换因子，用来计算定标曲线。
S2:0.10
S3:0.25
S4:0.50
S5：1.00
S6:2.00
贮存条件：校准物在2-8℃保存可保存至有效期。
3标本
血清及肝素-Li、Na-肝素或EDTA抗凝血浆,处理方法见标本处理程序。
稳定性：20-25℃3个月
4-8℃3个月
-20℃6个月
4试剂
4.1试剂
来源：ROCHE配套试剂（详见试剂说明书）。
贮存条件及稳定性：未打开试剂盒：2－8℃储存至效期末
R1：打开后机上稳定90天
R2：打开后机上稳定90天
准备：直接使用。
IgG是再次免疫应答的主要抗体，具有吞噬调理作用、中和毒素作用、中和病毒作用及激活补体经典途径。IgG是唯一可以通过胎盘的免疫球蛋白，并且对胎儿及新生儿有保护作用。婴儿在6个月左右建立免疫系统，在18个月左右达到成人水平。
多克隆IgG水平的升高见于系统性红斑狼疮、慢性肝炎及传染性疾病中。单克隆IgG水平的升高见于骨髓瘤。
免疫球蛋白的定量检测方法
免疫球蛋白的定量检测方法免疫球蛋白（Immunoglobulin，Ig）是一类高度特异性的抗体分子，是机体免疫系统中的重要组成部分。
它们能够识别并结合抗原，参与体内外的免疫应答，并发挥抗体介导的免疫效应。
由于免疫球蛋白的重要性，准确地定量测定免疫球蛋白的水平对于诊断和监测许多疾病非常关键。
免疫学原理免疫球蛋白的定量检测方法基于免疫学原理，通过特异性抗体与待测的免疫球蛋白发生特异性结合反应，从而定量测定免疫球蛋白的浓度。
在典型的定量检测方法中，首先要选择特异性的抗体。
对于免疫球蛋白的检测，通常使用与特定免疫球蛋白亚类（例如IgG、IgM、IgA）结合的抗体。
这些抗体会与待测的免疫球蛋白发生特异性结合，而与其他免疫球蛋白亚类没有或有很弱的结合能力。
免疫球蛋白的定量检测方法免疫球蛋白的定量检测方法主要包括免疫比浊法、免疫电泳法和免疫透析法等。
免疫比浊法免疫比浊法是最常用的免疫球蛋白定量方法之一。
它利用免疫反应生成的免疫复合物会导致液体浑浊的特性，通过比较免疫复合物和标准溶液的浑浊程度可以推测出免疫球蛋白的浓度。
利用这个原理，可以通过比色法、比度法或比重法进行免疫比浊定量。
免疫电泳法免疫电泳法是一种将免疫反应与电泳相结合的方法。
在免疫电泳的过程中，将待测的免疫球蛋白与特异性抗体结合，然后经过电泳分离。
通过在凝胶上形成特定的免疫球蛋白带，就能够对免疫球蛋白进行定性和定量分析。
免疫透析法免疫透析法是通过利用半透膜将大分子量的抗原或抗体与待测免疫球蛋白分离的方法。
待测免疫球蛋白通过半透膜与特异性抗体进行反应，然后通过透析膜分离。
通过测定分离后的物质的浓度，可以定量测定免疫球蛋白的浓度。
应用领域免疫球蛋白的定量检测方法在临床医学和科研中具有广泛的应用。
在临床医学中，免疫球蛋白的定量检测方法常用于免疫系统疾病的诊断和治疗监测，例如免疫缺陷病、自身免疫病等。
此外，免疫球蛋白的定量检测也可用于感染病的检测与诊断，例如HIV、COVID-19等。
免疫球蛋白G(IgG) 免疫比浊法
项目免疫球蛋白G（IgG）方法免疫比浊法目录1．检测原理2．标本采集与处理2.1 受检者的准备2.2 静脉采血2.3 抗凝剂2.4 标本处理3．试剂3.1 试剂3.2 校准血清3.3 试剂与校准血清的稳定性4．仪器5．操作6．计算7．操作性能7.1 精密度7.2 准确度7.3 灵敏度7.4 可报告范围7.5 特异性7.6 干扰8．参考值9．临床意义附录A: 参数1. 检测原理405nm样本中IGG + 试剂中的IGG抗体-----------------大分子免疫复合物在405nm监测生成的复合物的浊度变化，与样本中IGG含量成正比。
2. 标本采集与处理2.1 受检者的准备：病人空腹12h，不饮酒24h后采集血样。
体检对象抽血前应有两周的的正常状况记录。
注意有无应用影响测试项目的药物。
此外，对于体检者，采血的季节都应做相关记录，因为样本中各项目的含量有季节性变动，为了前后比较应在每年同一季节检验。
应嘱体检对象在抽血前24小时内不做剧烈运动。
2.2 静脉采血：除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。
体位影响水分在血管内外的分布，会影响测试项目的浓度。
在采血前至少应静坐5分钟，一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1分钟，穿刺成功后立即松开止血带。
2.3 抗凝剂：不使用抗凝剂。
2.4 标本处理：血标本室温放置30min～45min后离心分离血清，在两小时内检测完毕；如两小时内不能检测完毕，将离心分离血清置洁净试管加盖2-8℃保存。
3．试剂3.1 试剂：R1：PEG4 缓冲液：包含高分子强化剂的磷酸盐缓冲液。
含有0.095%的叠氮化钠。
R2：IgG抗血清，含0.095%的叠氮化钠。
3.2：校准血清使用湖南永和阳光科技有限责任公司提供的多项免疫类标准液。
其中包含免疫球蛋白G的定值。
校准频次：全点定标：试剂换批号使用时或质控结果超过规定的2SD范围，需要全点定标。
3.3 试剂与校准血清的稳定性：原包装试剂储存在2-8℃至标签所示失效日期。
免疫比浊法检测免疫球蛋白
随着技术的进步，免疫比浊法的检测过程将更加自动化和标准化，提高检测效率和准确 性。
多项目联合检测
未来免疫比浊法有望与其他免疫分析方法联合使用，实现多项目同时检测，提高诊断效 率。源自未来发展趋势及新技术应用前景
• 拓展应用领域：随着对免疫球蛋白研究的深入，免疫比浊 法的应用领域将进一步拓展，如疾病预后评估、免疫治疗 监测等。
力。
质评样本处理
02
按照质评计划要求处理质评样本，确保结果的准确性和可比性
。
结果分析与反馈
03
对室间质评结果进行认真分析，及时发现问题并采取改进措施
。
问题分析与解决策略
问题识别
通过室内质控和室间质评结果 分析，识别存在的问题。
原因分析
针对问题进行深入的原因分析 ，包括试剂、仪器、操作等方 面。
改进措施
影响。
06
总结与展望
免疫比浊法检测免疫球蛋白优势与局限性
灵敏度高
免疫比浊法能够检测到非常低浓度的 免疫球蛋白，具有较高的灵敏度。
特异性强
该方法使用的抗体具有高度的特异性 ，能够准确识别并定量目标免疫球蛋 白。
免疫比浊法检测免疫球蛋白优势与局限性
• 操作简便：免疫比浊法检测步骤相对简单 ，易于自动化和标准化，适用于大规模样 本检测。
分为血清型和分泌型两 种。血清型IgA主要存在 于血液中，而分泌型IgA 主要分布于呼吸道、消 化道等黏膜表面，是黏 膜免疫的主要抗体。
正常血清中含量极低， 主要参与I型超敏反应和 抗寄生虫免疫。当机体 发生过敏反应时，血清 中IgE水平会显著升高。
主要存在于B淋巴细胞表 面，作为B细胞分化发育 成熟的标志。在血清中 含量很低，其功能尚不 完全清楚。
免疫比浊法检测免疫球蛋白
诱导剂
增 加 散 透 率 : 660nm 测 定 散 射 光
散射光测定
检测器 (LED) 样品
光电计 100 % 散射光强度 0% 时间
速率散射比浊法
（一）基本原理 — 是测定抗原抗体结合反应的动态过程。 是测定抗原抗体结合反应的动态过程。 — 所谓速率，是在单位时间内抗原抗体结合形成 所谓速率，是在单位时间内抗原抗体结合形成 单位时间内 复合物的速度。 复合物的速度。将各单位时间内形成复合物的 速率及测定的散射信号连接在一起， 速率及测定的散射信号连接在一起，即是动态 的速率比浊分析。 的速率比浊分析。 — 当仪器测定到某一时 间内形成速率下降时， 间内形成速率下降时， 速率峰， 即出现速率峰 即出现速率峰，该峰 值的高低， 值的高低，即代表所 测抗原的量。 测抗原的量。
光通量是每单位时间到达、 光通量是每单位时间到达、离开或通过曲面 的光能数量
散射比浊法
• 原理 在入射光的一定角度检测粒子发出的散 在入射光的一定角度检测粒子发出的散 一定角度 射光，散射光的强度与IC的含量呈正比。 射光，散射光的强度与IC的含量呈正比。 IC的含量呈正比
散射比浊法测定原理
聚集形成 聚集形成
材料
1.免疫球蛋白试剂A,M,G 1.免疫球蛋白试剂A,M,G 免疫球蛋白试剂 2.免疫球蛋白试剂A,M,G校准品， 2.免疫球蛋白试剂A,M,G校准品，蒸馏水 免疫球蛋白试剂A,M,G校准品 3.微量加样枪 3.微量加样枪 4.分光光度仪 4.分光光度仪
结果计算方法
样本管吸光度 Ig浓度（g/L）= 校准管浓度 × Ig校准浓度（g/L）
透射比浊法和散射比浊法光路
IC I
透射比浊法 检测器A 检测器
I0
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免疫比浊法检测免疫球蛋白
一、实验目的
利用免疫比浊法绘制标准曲线，并检测样品中免疫球蛋白的浓度。
（本小组检测的为IgG样品）
二、实验原理
1.抗原抗体反应(Antigen-antibody reaction)：抗原与其刺激机体产生的相应抗体在体内或体外发生特异性结合的反应。
反应特点有：特异性、比例性、可逆性、敏感性。
影响因素有：电解质、温度、酸碱度。
2.免疫比浊法：合适比例的抗原抗体形成的免疫复合物，在PEG作用下形成微粒，使样品浊度发生变化。
当一束光线通过溶液受到光散射和光吸收两个因素的影响而使光的强度减弱，根据光的强度改变可测得微粒浓度。
分类：①透射比浊法（Transmission tubidimetry）当一定波长光线通过浊度发生变化的反应混合物时，由于被不溶性免疫复合物吸收而减弱，故在一定范围内吸光度与免疫复合物量呈正相关。
当抗体浓度固定（过量），样品的浊度与其中所含抗原量成正比。
（特点）透射比浊操作简便，适用于普通的自动生化分析仪和普通的分光光度计，几乎所有的实验室均能开展。
不足的是灵敏度和精密度均不够理想，所需的抗血清量大，检测的时间较长。
②散射比浊法（Nephelometry）光线通过检测溶液时，被其中所含的抗原抗体复合物折射而部分偏转，产生散射光，其强度与复合物的数量和散射夹角成正比，与光的波长成反比。
（特点）优点是灵敏度、精密度均较高，检测快速。
其缺点是需特定的分析仪器，试剂价格高。
本实验采用透射法。
3.聚乙二醇PEG的作用：在免疫反应中，为增强抗原抗体反应常使用增聚剂，3~4％的聚乙二醇，可破坏抗原抗体的水化层，促进抗原抗体靠近反应，但如浓度不适合，会影响其它溶质或产生非特异性聚集影响结果。
三、实验材料
免疫球蛋白A,G(IgA,IgG)测定试剂(试剂1[PEG]，试剂2[羊抗人IgA, IgG]）（1管/每组）
免疫球蛋白A, G(IgA,IgG)校准品，蒸馏水，血清样本（1管）
微量加样枪、ep管（1.5mL离心管）
酶标仪、水浴箱
四、实验步骤
1.在7个EP管中各加250µL IgG试剂1（PEG）。
2.7管分别加入蒸馏水、校准品原液、1：2校准品、1：4校准品、1：8校准品、1：16校准品、样本各2μL。
3.混匀后37℃水浴5min。
4.7管各加入85μL IgG试剂2（羊抗人IgG）。
5.混匀后37℃水浴10min。
6.分别吸取200µL至96孔酶标板中，用酶标仪在700nm处读取OD值。
五、实验结果与数据处理
2.标准曲线
3.样本浓度：y=0.604代入x=26.648g/L
由此得稀释之前样本的浓度为79.945g/L
误差：（79.945-34.8）/34.8*100％=129.73%
误差分析：
①抗原抗体反应需要一定孵育时间和温度，而操作中由于加样的速度限制，无法严格控制各管的反应时间；本次制作标准液时量极小，很有可能出现未混匀、挂壁的情况；标准液吸取量小会导致移液枪的误差被放大。
②免疫比浊法的基本原理是基于抗原抗体结合，而这个结合反应有特殊性，只有在一定范围浓度中，两者比例合适时检测结果才准确，否则会产生带现象，已有文章表明，稀释前后检测结果偏差很大(朱爱萍, 郭书云, 赵锐. 免疫比浊法检测异常血清免疫球蛋白的方法学探讨[J]. 现代检验医学杂志, 1999(4):33-34.)，所以我认为此样本虽然是由原液稀释三倍所得，但在溶液中IgG抗体的浓度都相同的情况下，两管中抗原抗体比例相差很大，所以检测结果也有偏差是可以理解的。
同时再结合散点图拟合出的标准曲线，可以发现，浓度较高的两管标准液距离拟合曲线的偏差是最大的，由此推断，1：1原液和1：2原液并不适合本次实验中所给的羊抗人抗体浓度（未知）。
所以，误差来源除了以上所说原因之外，还有本次实验提供的抗体浓度，并不适合原液中IgG浓度的检测，而稀释三倍后的样品属比较适合的范围。
所以最大的误差来源是抗体浓度的选择，虽然抗体浓度是保证过量的，但是过量的程度相对每个管来说是不同的，1：1和1：2也许需要更大的浓度。
六、思考
1.本实验采用的免疫比浊法适用于人体内哪几种Ig？
人体血清中含有五类免疫球蛋白，分别为IgG、IgA、IgM、IgD、IgE。
其中前三种含量相对较高，而IgD和IgE含量极低，膜结合型IgD构成BCR，是Bcell成熟的标志，IgE在正常人血清中含量最少，与Ⅰ型超敏反应和寄生虫感染有关。
理论上此五种Ig均可以采用免疫比浊法检测含量，但临床上常只检测前三种含量较高、疾病相关性更强的Ig，在考虑寄生虫感染和变态反应性疾病时还可以检测血清中IgE的含量。
2.检测血清等体液标本中某种抗原分子的方法？
原理同本实验，采用抗原抗体结合的原理，凝集反应、沉淀反应、中和反应，以及免疫荧光法和酶联免疫吸附试验等，在使用抗原抗体结合原理时，将抗体加入荧光可以直接检测荧光强度来定量检测抗原含量，而酶联免疫吸附试验还可采用双抗体法以级联放大更易检
测。
3.使用免疫比浊法时，抗原抗体的比例应采用哪个区域？
应采用抗体过量的前带，因为所检测的物质是抗原，希望所加样品中的抗原完全与抗体结合形成微粒，所有的微粒均可吸收酶标仪中透过的光线。
因为吸光度OD值与溶液中颗粒的浓度成正比，而计算时默认颗粒的浓度与样品中所含抗原的浓度相当，所以，只有在抗体含量过量时，才能保证所有抗原都能与抗体结合形成微粒，降低因抗原未完全结合抗体所带来的误差。
而且结合本次误差，不同管抗体过量的程度也应该大致相当。
4.为何波长选择700nm？
抗原抗体结合后的吸光度受抗原抗体种类的影响，本次采用的是羊抗人Ig抗体，应该由经验值可知700nm是IgG抗原抗体结合后最大的吸收波长，在最大吸收波长处通过测吸光度来测浓度所得结果的误差最小。