维生素A和维生素E的测定方法
维生素a、e 质谱
维生素a、e 质谱维生素A和E质谱是一种测定维生素A和E的分析方法，可以用来评估食物中维生素A和E的含量。
维生素A 和E质谱（Vitamins A and E Mass Spectrometry）是一种新兴的测定维生素A和E的分析技术，它可以快速、准确地测定出维生素A和E的含量，这使得它成为监测食品质量的重要手段。
维生素A和E质谱的分析原理是将样品中的维生素A 和E分子进行分離，然后通过质谱测定分子的质量，并根据质量与标准曲线的比较，计算出样品中的维生素A和E 的含量。
维生素A和E质谱的分析步骤如下：1. 将样品加入质谱管，并加入标准溶液，形成标准曲线；2. 通过调节电压，让维生素A和E分子穿过质谱管，并在质谱仪上显示出峰值；3. 计算出样品中的维生素A和E的含量，并根据标准曲线进行分析比较；4. 最后，将结果进行统计，得出样品中维生素A和E 的含量。
维生素A和E质谱的优点在于：1. 精度高：维生素A和E质谱可以检测到极低水平的维生素A和E；2. 响应时间短：维生素A和E质谱的响应时间比其它常规技术要短；3. 操作简单：维生素A和E质谱的操作简单，不需要复杂的仪器设备，耗时也较短；4. 样品要求低：维生素A和E质谱对样品的要求比较低，一般可以直接使用原始样品。
维生素A和E质谱的缺点是：1. 成本较高：维生素A和E质谱的成本较高，一般都是由专业机构进行检测；2. 样品量要求较高：维生素A和E质谱要求样品量较大，不能用于小量样品的检测；3. 样品的处理复杂：维生素A和E质谱的样品处理过程较为复杂，需要比较多的步骤。
维生素A和E质谱是一种新兴的分析技术，它可以快速、准确地测定出食品中的维生素A和E的含量，这是监测食品质量的重要手段之一。
但是，维生素A和E质谱的成本较高，样品量要求较大，样品处理复杂，因此，它不太适合普通实验室使用。
液相色谱串联质谱法测定血清维生素A、E含量
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Ｌａｂｅｌｅｄ Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙｓ＆ Ｃｌｉｒｔ Ｍｅｄ Ａｏｒ．２０１８．Ｖｏ１．２５．Ｎｏ．４ ，
维生素A和E的测定方法
中华人民共和国国家标准食物中维生素A和维生素E的测定方法Method for determination of retinol andtocopherol in foodsGB/T 12388—19901 主题内容与适用范围本标准规定了用高效液相色谱法测定食物中维生素A和维生素E。
本标准适用于食物中维生素A和维生素E的测定。
第一篇 高效液相色谱法2 原理样品中的维生素A及维生素E经皂化提取处理后，将其从不可皂化部分提反相柱将维生素A和维生素E分离，经取至有机溶剂中。
用高效液相色谱法C2n紫外检测器检测，并用内标法定量测定。
最小检出量分别为V：0.8ng，α-B：A91.8ng：γ-E：36.6ng：δ-E：20.6ng。
3 试剂实验用水为蒸馏水。
试剂不加说明为分析纯。
3．1 无水乙醚：不含有过氧化物。
3．1．1 过氧化物检查方法：用5mL乙醚加1mL 10%碘化钾溶液，振摇1min，如有过氧化物则放出游离碘，水层呈黄色或加4滴0.5%淀粉液，水层呈蓝色。
该醚需处理后使用。
3．1．2 去除过氧化物的方法：熏蒸乙醚时，瓶中放入纯铁丝或铁末少许，弃去10%蒸馏水和10%残留液。
3．2 无水乙醇：不得含有醛类物质。
3．2．1 检查方法：取2mL银氨溶液于试管中，加入少量乙醛，摇匀，再加入10%氢氧化钠溶液，加热，放置冷却后，若有银镜反应则表示乙醇中有醛。
3．2．2 脱醛方法：取2g硝酸银溶于少量水中，取4g氢氧化钠溶于温乙醇中。
将两者倾入1L乙醇中，振摇后，放置暗处两天（不时摇动，促进反应），经过滤，置蒸馏瓶中蒸馏，弃去初蒸出的50mL。
当乙醇中含醛较多时，硝酸银用量适当增加。
3．3 无水硫酸钠。
3．4 甲醇：重蒸后使用。
3．5 重蒸水：水中加少量高锰酸钾，临用前蒸馏。
3．6 10%抗坏血酸溶液（m/V）：临用前配制。
3．7 1：1氢氧化钾溶液。
3．8 10%氢氧化钠溶液（m/V）。
3．9 5%硝酸银溶液（m/V）。
〖医学〗高效液相色谱法测定血清中维生素A、E、β-胡萝卜素
五、思考题
1. 维生素A、D 、E的生理作用、缺乏表 现及食物来源。
2. 哪些B 族维生素与能量代谢有关？
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1. 配制标准液时：
若有条件应对配制好的标准稀释液 维生素A、维生素E、β-胡萝卜素 200～600nm扫描，观察最大吸收峰 的波长；
如果所用HPLC仪能作波长变换，则 在测定组分的最大吸收波长下测定 可取得较高的灵敏度。
2. 吸取上清液时：
注意不可触及界面；
否则： 一方面会吸入水，影响分析和柱 的分离能力； 另一方面，界面上的脂肪层可能 会影响分析结果。
多种 肺炎
细菌均可引起大叶性肺炎，但绝大多 数为肺 炎链球 菌，其 中以Ⅲ 型致病 力最强 。肺炎 链球菌 为革兰 阳性球 菌，有 荚膜， 其致病 力是由 于高分 子多糖 体的荚 膜对组 织的侵 袭作 用。少数为肺炎杆菌、金黄*色葡萄球 菌、溶 血性链 球菌、 流感嗜 血杆菌 等。肺 炎链球 菌为口 腔及鼻 咽部的 正常寄 生菌群 ，若呼 吸道的 排菌自 净功能 及机体 的抵抗 力正常 时， 不引发肺炎。当机体受寒、过度疲劳 、醉酒 、感冒 、糖尿 病、免 疫功能 低下等 使呼吸 道防御 功能被 削弱， 细菌侵 入肺泡 通过变 态反应 使肺泡 壁毛细 血管通 透性增 强，浆 液及 纤维素渗出，富含蛋白的渗出物中细 菌迅速 繁殖， 并通过 肺泡间 孔或呼 吸细支 气管向 邻近肺 组织蔓 延，波 及一个 肺段或 整个肺 叶。大 叶间的 蔓延系 带菌的 渗出液 经叶支 气管 播散所致。 编 辑 本 段 临 床表现
多数起病急骤，常有受凉淋雨、劳累、 病毒感 染等诱 因，约1/3患病 前有上 呼吸道 感染。 病程7~ 10天。 （一 ）寒战 、高热 ：典型 病例以 突然寒 战起病 ，继之 高热， 体温可 高达39℃~40℃，呈 稽留热 型，常 伴有头 痛、全 身肌肉 酸痛， 食量减 少。抗 生素使 用后热 型可不 典型， 年老体弱者可仅有低热或不发热。
中国药典维生素A测定法—科标检测
中国药典维生素A测定法——科标检测科标检测可以提供专业维生素检测服务，可以根据客户的不同类型和检测需求，严格按照相关标准和方法进行检测，积累了大量的实践经验和科学数据，以下介绍的是《中国药典》中维生素A测定方法。
本法用紫外-可见分光光度法或高效液相色谱法测定维生素 A 及其制剂中维生素A 的含量，以单位表示，每单位相当于全反式维生素A醋酸酯0.344µg 或全反式维生素A醇0.300µg。
测定应在暗室中进行。
一、紫外-可见分光光度法由于维生素A 制剂中含有稀释用油和维生素A 原料药中混有其他杂质，采用紫外-可见分光光度法测得的吸光度不是维生素 A 独有的吸收。
在以下规定的条件下，非维生素 A 物质的无关吸收所引入的误差可以用校正公式校正，以便得到正确结果。
校正公式采用三点法，除其中一点是在吸收峰波长处测得外，其他两点分别在吸收峰两侧的波长处测定，因此仪器波长应准确，故在测定前，应对仪器波长进行校正。
检查法取供试品适量，精密称定，加环己烷溶解并定量稀释制成每1ml 中含9～15单位的溶液，照紫外－可见分光光度法，测定其吸收峰的波长，并在下表所列各波长处测定吸光度，计算各吸光度与波长328nm 处吸光度的比值和波长328nm处的E1％1cm值。
如果吸收峰波长在326～329nm之间，且所测得各波长吸光度比值不超过表中规定的±0.02，可用下式计算含量：每1g 供试品中含有的维生素A的单位＝E1％1cm（328nm）×1900如果吸收峰波长在326～329nm之间，但所测得的各波长吸光度比值超过表中规定值的±0.02，应按下式求出校正后的吸光度，然后再计算含量：A328（校正）＝3.52（2A328－A316－A340）如果在328nm处的校正吸光度与未校正吸光度相差不超过±3.0％，则不用校正吸光度，仍以未经校正的吸光度计算含量。
如果校正吸光度与未校正吸光度相差在－15％至－3％之间，则以校正吸光度计算含量。
维生素的检测方法
《维生素的检测》一、维生素E取样品0.18g，置于100mL的量瓶中，加无水乙醇稀释到刻度，摇30s，用干滤纸滤过，弃取初滤液，吸取50mL，置于回流瓶中，加硫酸3mL，摇匀，加热回流3小时放冷，移至于100mL量瓶中，用无水乙醇洗条容器，洗液并加入量瓶中，再加入无水乙醇稀释至刻度，摇匀，吸取25mL/L，加乙醇(95%)20mL，水10mL/L，二苯胺硫酸溶液2滴(10g/L)，用0.01mol/L 硫酸铈标准液滴定结果用空白试验校正。
计算公式：(试样滴定数—空白滴定数)×标准液浓度×0.002364×8÷质量÷维生素E的标示量<如:50/100 33/100 25/100 20/100 等>×100二、维生素K3(亚硫酸氢钠甲苯酯含量测定)标准溶液配制：取甲萘醌对照品约0.05g，置于250mL的量瓶中，用三氯甲烷溶解，并稀释到刻度，摇匀。
吸取2mL置于100mL量瓶中，用无水乙醇稀释到刻度，摇匀。
样品溶液的配制：取样品1.3g，置于250mL量瓶中，用水稀释到刻度，摇匀。
吸取25mL 至于分液漏斗中，加三氯甲烷40mL/L，碳酸钠溶液5mL(1/100)，剧烈振摇30s，静止分层，分出的三氯甲烷层通过预先用三氯甲烷湿润的棉花过滤到250mL的量瓶中，再加三氯甲烷40mL迅速洗条滤器，洗液并加入量瓶中，水层用三氯甲烷萃取2次，每次约20mL，萃取液过滤，并用三氯甲烷20mL洗条滤器，洗液和全部滤并到量瓶中，用三氯甲烷稀释到刻度,摇匀.吸取2mL至于100mL量瓶中,用无水乙醇稀释到刻度,摇匀.(用分光光度计在250nm波长处平行测定吸收度,用2%三氯甲烷的无水乙醇溶液做空白).计算公式：样品溶液的吸光度×标准溶液的吸光度÷标准溶液的吸光度÷样品溶液的浓度×191.82三、维生素B1 (硝酸硫胺含量的测定)取样0.1g,加水50mL溶解后,加盐酸2mL,煮沸,立即滴加硅钨酸溶液10mL,继续煮沸2nim,用在80℃干燥至恒重有4号垂溶坩埚滤过,沉淀先用煮沸的盐酸溶液洗条2次,每次10mL,再用水10mL洗条一次,最后用丙酮洗条2次,每次5mL,沉淀物在80℃干燥至恒重.计算公式：干燥后沉淀的重量×0.1882÷样品重量÷(1－样品干燥失重,重量百分数)×100四、烟酸取样0.3g,加新沸过的冷水50mL溶解,加酚酞指示剂3滴(1g/L),用0.1monl/L氢氧化钠标准液滴定至粉红色.计算公式：滴定数×标准液的浓度×0.01231÷质量×100五、维生素B6取样0.15g,加冰乙酸20mL与乙酸贡溶液(5g乙酸贡研细加温热的冰乙酸溶解为100mL)5mL,温热溶解,放冷,加(5g/L)结晶紫指示剂1滴,用0.1monl/L高氯酸标准液滴定,至溶液显蓝紫色,并将滴定结果用空白实验校正.计算公式：(样品滴定数－空白滴定数)×高氯酸标准液的浓度×0.02056÷质量×100六、维生素B12(氰钴胺)粉剂外观及颜色：浅红色至棕色细微粒粉末状,具有吸潮性.取样品维生素B12 0.002克,置于100毫升的量瓶中.加水80毫升,充分振摇混合后稀释至刻度,摇匀,用干滤纸过滤(必要时离心),弃去初滤液作为样品测量溶液.取维生素B12(氰钴胺)对照品(干燥品)0.2克,置于1000毫升的量瓶中用水稀释至刻度,摇匀,作为对照品测定液,用水做空白对照,于1cm比色皿内,用分光光度计于361nm波长处测定样品溶液和标准液的吸收度。
高效液相色谱法测定血清中维生素A、E、β-胡萝卜素
血清样品在采血后立即离心，分离 血清； 置5ml塑料试管中，充氮、密封，于 -40℃保存备用。
在5ml棕色具塞玻璃离心管中，加入 0.25ml血清、1ml 10％邻苯三酚乙醇溶 液、0.5ml 60％KOH，用氮气将管内空 气置换，37℃水浴1h。
冷水浴3min后加入5％NaCl 1ml，己烷 /乙酸乙酯(9:1)3ml，用氮气将管内空 气置换，盖紧塞子，水平振荡器上振 荡5min(40次/min)；
β-胡萝卜素遇光和氧会被迅速破坏， 所以应临用新配，并注意避光保存。 样品的提取液比较稳定，可以隔夜 后进行分析。
五、思考题
1. 维生素A族维生素与能量代谢有关？
四、质量控制
1. 配制标准液时：
若有条件应对配制好的标准稀释液 维生素A、维生素E、β-胡萝卜素 200～600nm扫描，观察最大吸收峰 的波长。
如果所用HPLC仪能作波长变换，则 在测定组分的最大吸收波长下测定 可取得较高的灵敏度。
2. 吸取上清液时：
注意不可触及界面；
否则： 一方面会吸入水，影响分析和柱 的分离能力； 另一方面，界面上的脂肪层可能 会影响分析结果。
β-胡萝卜素以氯仿配制成不同浓 度的标准液，同样品一样处理。
分别以标准应用液浓度为横坐标， 峰面积为纵坐标，绘制工作曲线。
三、数据处理
将样品中三种待测组分平行测定的峰面 积均值分别代入各自的工作曲线，求得 测定样液中各自的含量。
再乘以样品处理时的稀释倍数，即得 到血清样品中维生素A、维生素 E及β胡萝卜素的含量。
高效液相色谱法测定血清中 维生素A、E、β-胡萝卜素
测定饲料中维生素A和维生素E含量方法的研究
测定饲料中维生素A和维生素E含量方法的研究裘丞军;任玉琴【摘要】本文旨在建立一种能同时准确测定饲料中维生素A和维生素E含量的方法,试验将样品在碱性条件下65℃水浴超声皂化提取,冰乙酸调pH至中性,乙醇稀释后直接用高效液相色谱法(HPLC)进行测定.结果表明:维生素A在0.036～108 IU/mL线性关系良好,相关系数为1.00000,检出限1000 IU/kg,方法回收率为95.8％～98.8％,RSD为0.8％～4.4％(n=5);维生素E在0.6～125 μg/mL线性关系良好,相关系数为0.99998,检出限15 mg/kg,方法回收率为95.3％～102.2％,RSD为0.8％～ 4.2％(n=5).本方法快速简便,适用于配合料、浓缩料、维生素预混料和复合预混料中同时准确测定维生素A和维生素E的含量,相对于国标法节省了大量的时间和试剂,可应用于日常大批量饲料检测中.【期刊名称】《中国饲料》【年(卷),期】2019(000)011【总页数】5页(P56-60)【关键词】高效液相色谱;维生素A;维生素E;饲料;皂化【作者】裘丞军;任玉琴【作者单位】浙江省兽药饲料监察所,浙江杭州311199;浙江省兽药饲料监察所,浙江杭州311199【正文语种】中文【中图分类】S816.17维生素A和维生素E是维持动物体正常代谢所必需的脂溶性维生素，具有促进生长，提高免疫力等作用，已经广泛应用于大规模畜禽养殖中。
在饲料添加剂中主要以维生素A乙酸酯和dl-α-生育酚乙酸酯的形式存在，并且通过各种壁材包被保护（杨优敏，2016）。
目前测定饲料中维生素A和维生素E的方法已有国家标准GB/T 17812-2008和GB/T 17817-2010，主要是皂化萃取法和甲醇直接提取法，还有碱性蛋白酶水解法（赵晓华等，2010）。
皂化萃取法操作步骤繁琐，时间长，消耗试剂多；甲醇直接提取法和酶解法结果不稳定，有些包被产品未能被有效提取。
正相高效液相色谱法测定食物中8种维生素E异构体及维生素A
正相高效液相色谱法测定食物中8种维生素E异构体及维生素A郑熠斌;黄百芬;任一平【摘要】A synchronous detection method was established by normal-phase( NP )-HPLC to separate and determine eight vitamin E isomers and vitamin A in foods. The sample was pre-treated and then separated on a Waters ACQUITY TM UPLC BEH Amide column( 150 mm × 3. 0 mm,1. 7μm). The mobile phase consisted of hexane( A,90%)and tert-butyl methyl ether-tetrahydrofuran-methanol(20∶10∶1,v/v/v)(B,10%). The analytes were detected by UV and fluorescence detectors,identified and quantified with external standards. The linear ranges of tocopherols were from 5. 0mg/L to 60. 0 mg/L( r2≥0. 999 9),and those of tocotrienols and vitamin A were from 0. 5 mg/L to 6. 0 mg/L( r2≥0. 999 6),while the LODs of vitamin E iso-mers and vitamin A w ere from 20 μg/kg to 60 μg/kg. The method is of high precision,stability and repeatability,and the recoveries were from 79. 2% to 114. 2%. This method is simple,accu-rate and suitable for the analysis of vitamin E isomers and vitamin A in foods.%建立了正相高效液相色谱测定食物中8种维生素E异构体及维生素A的方法。
景泰县妇女血清维生素A、E含量测定
图 Ｉ 混合标准色谱
１ 。雏生素 Ａ，．苯并（ ） ３ 一雏生素 Ｅ，． 一维生素 Ｅ ２ Ｅ 芘，。 ４
２
（ ３ ℃）作为测定维生素 Ａ Ｅ用的样品。 一０ ， 、
１２ 方 法 ．
所用试 剂需 经纯 化处理 。 甲醇 、 己烷 ， 馏 正 重蒸 后使 用 ， 乙醇需经 脱醛蒸 馏后使 用 。 视 黄 醇 和生 育 酚均 不稳 定 ， 故需 于 临用 前重 新 标定 浓 度。用 紫 外 分 光 光 度 计 于 波 长 ３５ｍ、 ２ｎ ２４ ｍ、９ ｎ ９ ｎ ２ ８ｍ测 定 各维生 素 的 吸光度 值 ， 再按 其 消 光 系数 １３ 、１０及 ９ ． 别计 算 出 各种 维 生 素 ８５ ７ ． ２８分
Ｅ均 数 水平 进行 统 计 处理 ， 果 表 明 ， 妇 血 清 Ｖ 结 孕 Ａ
水平与非孕妇女相 比没有显著性 ， 孕妇血清 Ｖ Ｅ水 平与非孕妇女相 比具有高度 的显著性。这可能与胎 盘催乳激素刺激母体脂肪分解 ， 提高母血游离脂肪 酸和甘油的浓度 ， 使得分布于血液脂蛋 白中的维生
［ ］ Ｇ ０ １ ２ ０ ， ２ Ｂ５０ ０－ ０２ 混凝土结构设计规 范 ．北京 ： 中国建
筑工业出版社 ，０２ ２０ ．
［ ］ 中国建筑 科学 研究 院 ， 筑工 程 软 件研 究所 ． Ｋ Ｍ ３ 建 ＰＰ
素 Ｅ类 的脂 溶性 维 生素 吸收增 加所 致 ， 由于维生 素
２ 测 定 结果
２ １育龄期 妇女 血清维 生素 测定 结 果 （ 表 ２ ． 见 ）
表 ２ 育 龄 期 妇 女 血 清 维 生 素 Ａ、 Ｅ含 量 ｇ ／ ． ｍＬ ｇ
Ａ主要 储 存 于人 体 的肝 脏 中 ， 此 受 此 影 响 较 小 。 因 同时孕妇 维 生 素 Ｅ 的 升 高 与 母 体 、 儿 需 氧 量 增 胎 大， 氧化 反应增 强 而 导致 的抗 氧 化保 护 机 制也 代 偿
冷皂化_HPLC测定强化食品中的维生素A_E的方法研究
—344—中国食品卫生杂志CHINESE JOURNAL OF FOOD HYGIENE2010年第22卷第4期实验技术与方法冷皂化-HPLC测定强化食品中的维生素A、E的方法研究赵海燕赵榕杨永红罗仁才（北京市疾病预防控制中心，北京100013）摘要：目的建立测定强化食品中的维生素A、E的冷皂化-HPLC方法。
方法试样经过夜冷皂化后，醋酸调pH值至6.0 7.5，定容离心后高效液相色谱法测定；色谱条件：色谱柱SUPERIOREX ODS（4.6mmˑ250mm，5μm），流动相：甲醇+水=94+6。
结果方法的线性范围：维生素A：0.25 3.00μg/ml；γ-、δ-、α-维生素E：10.0 150μg/ml。
相关系数（r）为0.9997 0.9999；方法的定性检出限维生素A、γ-、δ-、α-维生素E分别为：0.40、5.0、5.0、8.0μg/g；定量检出限：1.30、16.7、16.7、26.7μg/g。
高低两个浓度水平加标回收率77.1% 105.0%；相对标准偏差（RSD）均<5%。
结论本方法简便、快速、准确、重现性好，适用于强化食品中维生素A、E的测定。
关键词：维生素A；维生素E；高效液相色谱法；冷皂化维生素A（retinol）和维生素E（tocopherol）是机体维持正常代谢和机能必需的脂溶性维生素。
维生素A又称为视黄醇，主要用来提高视力并且增强免疫系统功能，过量摄入会引起食欲减退、过敏、疲劳、失眠、头痛及肌肉老化；维生素E又称为生育酚，生育酚结构复杂，异构体种类多，其生物活性也千差万别，主要包括α-、β-、γ-、δ-生育酚，其中α-生育酚的生物活性最高，生育酚具有促进生育、延缓衰老、辅助抑制肿瘤的作用，并对糖尿病并发症、动脉粥样硬化起到预防作用，增补过量时会出现头痛、疲劳和视力异常现象。
文献报道测定维生素A、E的方法有分光光度法、荧光分析法、高效液相色谱法（high performance liquid chromatography，HPLC）、双波电压法、示波极谱法等［1］。
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维生素A和维生素E的测定方法（HPLC）
杨月欣教授等
高效液相色谱法
最小检出量分别为VA：0.8ng；α-E：91.8ng；γ-E：36.6ng；δ-E：20.6ng。
1.原理
食物中的维生素A及维生素E经皂化提取以后，将其不可皂化的部分提取到有机溶剂中。
用HPLC法测定维生素A及维生素E的含量。
2. 适用范围
GB12388-90 本法适用于各种食物和饲料的测定
3. 仪器
（1）高压液相色谱仪（带紫外检测器）
（2）六孔恒温水浴锅
（3）旋转蒸发器
（4）高纯氮气
（5）高速离心机
4. 试剂
本实验所用试剂皆为分析纯，所用水皆为蒸馏水
4.1 无水乙醇：重蒸，不含有醛类物质
检查方法：取2ml银氨溶液于试管中，加入少量乙醇，摇匀，再加入10%氢氧化钠溶液，加热，放置冷却后，若有银镜反应则表示乙醇中有醛。
脱醛方法：取2g硝酸银溶于少量水中。
取4g氢氧化钠溶于温乙醇中。
将两者倾入1L乙醇中，振摇后，放置暗处两天（不时摇动，促进反应），经过滤，置蒸馏瓶蒸馏，弃去初蒸出的50ml。
当乙醇中：
4.2 10%抗坏血酸溶液（Vc）W/V 临用前配制
4.3 50%氢氧化钾溶液（KOH）W/V
4.4 无水乙醚重蒸，不含过氧化物
4.4.1 过氧化物检查方法：用5ml乙醚加1ml10%碘化钾溶液，振摇1min，如有过氧化物则放出游离碘，水层呈黄色或加4滴0.5%淀粉液，水层呈蓝色。
该乙醚需处理后使用。
4.4.2 去除过氧化物的方法：重蒸乙醚时，瓶中放入铁丝或铁末少许。
弃去10%初馏液和10%残馏液。
4.5 pH 1-14试纸
4.6 无水硫酸钠Na2SO4
4.7 甲醇色谱纯或分析纯重蒸后使用
4.8 重蒸水蒸馏水中加入少量高锰酸钾重蒸后使用
4.9 苯并〔e〕芘标准液称取苯并〔e〕芘（纯度98%），用脱醛乙醇配制成1ml相当于5μg苯并〔e〕芘的内标溶液。
4.10 维生素A标准液视黄醇（纯度85% Sigma公司）用脱醛乙醇溶解维生素A标准品，使其浓度大约为1ml相当于1mg视黄醇。
临用前用紫外分光光度法标定其准确浓度。
维生素E标准液α-生育酚（纯度95% Sigma公司），δ-生育酚（纯度95% Sigma公司），δ-生育酚（纯度95% Sigma公司）。
用脱醛乙醇分别溶解以上三种维生素E标准品，使其浓度大约为1ml相当于1mg。
临用前用紫外分光光度法分别标定此三种维生素E的准确浓度。
5. 操作步骤
本实验需避光操作
(1) 样品皂化称取样品于三角瓶中，加30ml无水乙醇，振摇三角瓶，使样品分散均匀。
加入5ml 10%抗坏血酸和苯并〔e〕芘标准液2ml，混匀。
最后加入10ml氢氧化钾边加边振摇。
于沸水浴上回流30min使样品皂化完全。
皂化后立即放入冰水中冷却。
(2) 样品萃取将皂化后的样品移入分液漏斗中，用50ml水分2次洗皂化瓶，洗液并入分液漏斗中。
用10 0ml无水乙醚分两次洗皂化瓶及残渣，乙醚液并入分液漏斗中。
轻轻振摇分液漏斗2min，静置分层，弃去水层。
然后每次用约100ml水将乙醚液洗至中性，约4-5次。
(3) 浓缩将乙醚提取液经无水硫酸钠（约5g）滤入150ml旋转蒸发瓶内，用约15ml乙醚冲洗分液漏斗及无水硫酸钠2次，并入蒸发瓶内，并将其接在旋转蒸发器上，于55℃水浴中减压蒸馏并回收乙醚，待瓶中乙醚剩下约2ml时，取下蒸发瓶，立即用氮气将乙醚吹干。
加入2ml乙醇溶液，充分混合，溶解提取物。
将乙醇液移入塑料离心管中，于离心机上以3000转/min离心5分钟。
上清液供色谱分析。
(4) 标准曲线的制备将维生素A和维生素E标准品配置成标准溶液（约1mg/ml），制备标准曲线前用紫外分光光度法标定其准确浓度。
标准浓度的标定方法取维生素A和维生素E标准液若干微升，分别稀释至10.00ml乙醇中，并分别按给定波长测定各维生素的吸光值。
用比吸光系数计算该维生素的浓度。
测定条件如下
标准比吸光系数E1%cm 波长λ，nm
视黄醇1835 325
α—生育酚71 294
γ—生育酚92.8 298
δ—生育酚91.2 298
浓度计算：
X1= A/E×1/100×10.00/S×10-3
式中X1：某维生素浓度，mg/ml；
A：维生素的平均紫外吸光值；
S：加入标准的量，μL；
E：某种维生素1%比吸光系数；
10.00/S×10-3：标准液稀释倍数。
本法采用内标两点法进行定量。
把一定量的维生素A、维生素E及内标苯并〔e〕芘液混合均匀，选择合适的灵敏度，使上述物质的各峰高约为满量程的70%，作为高浓度点，高浓度的1/2为低浓度点（内标苯并〔e〕芘的浓度值不变），用此二种浓度的混合标准进行色谱分析。
根据微处理机装置，按说明用二点内标法进行定量。
液相色谱分析
仪器所需条件
预柱：ODS 10μm，4mm×4.5cm。
分析柱：ODS 5μm，4.6mm×25cm。
流动相：甲醇：水=98：2。
混匀，临用前脱气。
紫外检测器波长：300nm。
量程0.02。
进样量：20μL进样定量环。
流速：1.65-1.70mL/min。
6. 计算
X=C/m×V×100/1000
X：某种维生素的含量，mg/100g；
C：由标准曲线上查到某种维生素含量，μg/mL；
V：样品浓缩定容体积，mL；
m：样品质量，g；
用微处理机二点内标法进行计算时，按计算公式计算或由微机直
接给出结果。
7. 注意事项
（1）维生素A极易被破坏，实验操作应在微弱光线下进行，或用棕色玻璃仪器。
（2）在皂化过程中，应每5分钟摇一下皂化瓶，使样品皂化完全。
（3）提取过程中，振摇不应太剧烈，避免溶液乳化而不易分层。
（4）洗涤时，最初水洗轻摇，逐次振摇强度可增加。
（5）无水硫酸钠如有结块，应烘干后使用。
（6）在旋转蒸发时，乙醚溶液不应蒸干，以免被测样品含量有损失。
（7）用高纯氮吹干时，氮气不能开的太大，避免样品吹出瓶外结果偏低。