酶联免疫斑点试验诊断结核的敏感性和特异性研究

２０１１ －１２ －２７ 接收 作 者 单 位 ：安 徽 医 科 大 学 附 属 省 立 医 院 检 验 科 ， 合 肥 ２３０００１ 作者 简 介： 储 新 民， 男， 博 士， 主 管 检 验 师， 责 任 作 者， Ｅ－ｍａｉｌ：
ｃｈｕｘ～５２（２９畅１ ±１６畅２） 岁，均无结核病史和任何临床 症状，经胸部 Ｘ 线检查确定无异常。 １．２ 试剂 Ｔ－ＳＰＯＴ· ＴＢ 结核试剂盒由英国 Ｏｘｆｏｒｄ Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃ 公司生产，上海复星公司提供。 ＡＦＢ 试 剂由法国生物梅里埃公司生产，上海祥和科学技术 有限公司提供。 ＰＰＤ 试剂由成都生物制品研究所生 产并提供。 结核分枝杆菌抗体诊断试剂盒（ 胶体金 法）由法国 ＶＥＤＡ ＬＡＢ 公司生产，上海鸿泰生物工 程有限公司提供。 １．３ 方法 Ｔ－ＳＰＯＴ· ＴＢ 试验，使用肝素抗凝管采 集受检者静脉血 ５ ｍｌ，加入 Ｆｉｃｏｌｌ 淋巴细胞分离液 后离心分离单核淋巴细胞，制备的淋巴细胞经过计 数后使用 Ｔ－ＳＰＯＴ· ＴＢ 诊断试剂盒进行检测，检测 方法与结果判读严格按照试剂盒说明书进行。 ＰＰＤ 试验采用曼图氏法皮内注射 ＰＰＤ ０畅１ ｍｌ（ 含 ５ 个结 核菌素单位），７２ ｈ 观察结果，测量硬结的横径及纵 径的平均数，均径≥５ ｍｍ 为阳性反应，１０ ～１９ ｍｍ 为中度阳性，≥２０ ｍｍ 或有水泡、双圈、淋巴管炎、坏 死为强阳性反应。 ＡＦＢ 和结核分枝杆菌抗体试验 操作与结果判读严格按照试剂盒说明书进行。 １．４ 统计学处理 应用 ＳＰＳＳ １７畅０ 软件分析，采用 χ２ 检验对各组检出阳性率进行统计学分析。
［５］ 乐 军，梁 莉，李苏辉，等．酶联免疫斑点试验快速诊断结核 分枝杆菌感染的临床应用价值［ Ｊ］ ．中华检验医学杂志，２００６， ２９（１１） ：１００５ －８．
［６］ 张 瑛，孙亚蒙，徐欣晖，等．结核感染 Ｔ 细胞斑点试验在结核 性疾病中的诊断价值 ［ Ｊ］ ．中 华 临 床 医 师 杂 志，２０１０， ４ （ １２ ） ： ２４３１ －５．
ｎ
灵敏度（ ％）
９９
９３ ．４
３９
３６ ．８
６５
５７ ．５
４４
３９ ．６
χ２ 值
７７ ．７４２ ３３ ．４８８ ６７ ．８９５
Ｐ值
０．０００ ０．０００ ０．０００
特异度（ ％） ９５ ．８ １００．０ ８３ ．３ ９１ ．７
χ２ 值
１ ．０２１ ２ ．００９ ０ ．３５６
Ｐ值
０ ．３１２ ０ ．１５６ ０ ．５５１
２ 结果
２．１ 不同人群中结核分枝杆菌抗原特异性 Ｔ 细胞 反应频率比较 结核组中 １０６ 例结核患者 Ｔ－ＳＰＯＴ · ＴＢ 阳性 ９９ 例，阳性率为 ９３畅４％，而对照组 ２４ 例 中仅 有 １ 例 Ｔ－ＳＰＯＴ · ＴＢ 检 测 阳 性， 阳 性 率 为 ４畅２％，两组比较， 差异有统计学意义 （ Ｐ ＜０畅０１）。 表明 Ｔ－ＳＰＯＴ· ＴＢ 诊断结核病的灵敏度为 ９３畅４％， 特异度为 ９５畅８％。 ２．２ 不同结核检验方法比较 Ｔ－ＳＰＯＴ· ＴＢ 试验 检出阳性率分别与 ＡＦＢ 阳性率、ＰＰＤ 试验阳性率及 结核抗 体 阳 性 率 比 较， 差 异 有 统 计 学 意 义 （ Ｐ ＜ ０畅０１）。 而 Ｔ－ＳＰＯＴ· ＴＢ 试验特异性与 ＡＦＢ、ＰＰＤ 和 结核抗体比较差异无统计学意义。 见表 １。
以 Ｔ 细胞免疫应答为基础的 γ－干扰素（γ－ＩＦＮ） 释放 实验，其原理是结核杆菌感染者外周血 单核细胞 （ＰＢＭＣ） 中存在的特异性 Ｔ 细胞在受到抗原早期分 泌性抗 原靶蛋白 ６ （ ＥＳＡＴ－６） 和 培 养 滤 过 蛋 白 １０ （ＣＦＰ－１０）刺激后会分泌 γ－ＩＦＮ，释放的 γ－ＩＦＮ 随即 与微孔板底部包被的 γ－ＩＦＮ 抗体结合而形成免疫复 合物，该复合物再与随后加入的碱性磷酸酶标记的 抗抗体结合，继而分解随后加入的显色底物溶液而 在反应部位形成不溶性色素沉淀斑点。 每一个斑点 代表 １ 个 γ－ＩＦＮ 分泌细胞 （ 结核特异的效应 Ｔ 细 胞）。 根据斑点数推测体内是否存在对结核杆菌反 应的效应 Ｔ 细胞，从而对结核杆菌感染进行辅助诊 断［１］ 。 其中抗原 ＥＳＡＴ－６ 和 ＣＦＰ－１０ 为结核分枝杆 菌和少数非结核分枝杆菌所特有，而不存在于卡介 苗及大多数非结核分枝杆菌中［２］ ，因而从根本上避 免了传统结核菌素皮试中所存在的 ＢＣＧ 交叉抗原 反应，从而确保了 Ｔ－ＳＰＯＴ· ＴＢ 的高度特异性。 本研究对 １３０ 例受检者进行了 Ｔ－ＳＰＯＴ· ＴＢ 检 测，结果表明其诊断结核的特异性和敏感性分别为 ９３畅４％和 ９５畅８％。 Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ［３］２００６ 年在韩国进行的 一项关于 Ｔ－ＳＰＯＴ· ＴＢ 的前瞻性研究结果显示其敏 感性 为 ９６畅６％、 特 异 性 为 ８４畅７％。 Ｐａｉ ｅｔ ａｌ［４］ 于 ２００８ 年对有关 Ｔ－ＳＰＯＴ· ＴＢ 的 ３８ 个研究资料进行 了总结分析，表明其诊断结核的特异性和敏感性分 别为 ９０畅０％ 和 ９３畅０％。 在 国 内， 乐 军 等［５］ 对 Ｔ－ ＳＰＯＴ· ＴＢ 试验在我国的临床应用价值进行了评 估，１４２ 名受检者的试验结果分析表明其敏感性为 ９５畅５％，特异性为 ９３畅３％。 张瑛 等［６］ 对 ４２ 名患者 进行了 Ｔ－ＳＰＯＴ· ＴＢ 检测，结果表明其诊断结核性 疾病敏感性、特异性分别为 ９４畅４％、９５畅２％。 本研 究结果中 Ｔ－ＳＰＯＴ· ＴＢ 诊断结核的敏感性和特异性 水平与上述研究结果相似。 除了 Ｔ－ＳＰＯＴ· ＴＢ 检测以外，本研究对 １３０ 例 受检者还进行了 ＡＦＢ、ＰＰＤ 和结核抗体检查，结果 表明 Ｔ－ＳＰＯＴ· ＴＢ 诊断结核敏感性水平显著高于 ＡＦＢ、ＰＰＤ 和结核抗体检验方法，特异性水平与目前 结核病原学检验“金标准” ＡＦＢ 相近，这与国内外多 位学者［３，６］ 的研究结果一致。 我国是结核感染的高
［８］ Ｃｈａｐｍａｎ Ａ Ｌ， Ｍｕｎｋａｎｔａ Ｍ， Ｗｉｌｋｉｎｓｏｎ Ｋ Ａ， ｅｔ ａｌ．Ｒａｐｉｄ ｄｅｔｅｃ－ ｔｉｏｎ ｏｆ ａｃｔｉｖｅ ａｎｄ ｌａｔｅｎｔ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｉｎ ＨＩＶ －ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｉｎｄｉ－ ｖｉｄｕａｌｓ ｂｙ ｅｎｕｍｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｔ ｃｅｌｌｓ［ Ｊ］ ．Ａｉｄｓ，２００２，１６（１７） ：２２８５ －９３．
［４］ Ｐａｉ Ｍ， Ｚｗｅｒｌｉｎｇ Ａ， Ｍｅｎｚｉｅｓ Ｄ．Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ ｒｅｖｉｅｗ： Ｔ－ｃｅｌｌ－ｂａｓｅｄ ａｓｓａｙｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｏｆ ｌａｔｅｎｔ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ： ａｎ ｕｐｄａｔｅ ［ Ｊ］ ．Ａｎｎ Ｉｎｔｅｒｎ Ｍｅｄ，２００８，１４９（３） ：１７７ －８４．
安徽医科大学学报 Ａｃｔａ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔａｔｉｓ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌｉｓ Ａｎｈｕｉ ２０１２ Ｍａｙ；４７（５）
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酶联免疫斑点试验诊断结核的敏感性和特异性研究
储新民，孔建新
摘要 应用 Ｔ－ＳＰＯＴ· ＴＢ 检测临床确诊的 １０６ 例结核患者 和 ２４ 例健康体检者，与抗酸染色（ＡＦＢ）、结核菌纯蛋白衍生 物试验（ＰＰＤ）、结核抗体检查结果进行比较分析。 结果显 示，Ｔ－ＳＰＯＴ· ＴＢ 敏感性为 ９３畅４％，特异性为 ９５畅８％。 ＡＦＢ、 ＰＰＤ、结核抗体敏感性分别为 ３６畅８％、５７畅５％、３９畅６％，特异 性分别为 １００畅０％、８３畅３％、９１畅７％。 Ｔ－ＳＰＯＴ· ＴＢ 敏感性与 三者相比，差异有统计学意义（ Ｐ ＜０畅０１），特异性与三者相 比，差异无统计学意义。 表明酶联免疫斑点 Ｔ－ＳＰＯＴ· ＴＢ 实 验检测结核敏感性强、特异性高，是快速诊断结核感染的有 效手段。 关键词 结核分枝杆菌；γ－干扰素释放酶联免疫斑点试验； Ｔ－ＳＰＯＴ· ＴＢ 中图分类号 Ｒ ４４６．５；Ｒ ３７８．９１１ 文献标识码 Ａ 文章编号 １０００ －１４９２（２０１２）０５ －０６１３ －０３
近年来我国结核病疫情出现回升趋势，结核病 防治形势严峻，任务紧迫。 实验室的检验早期发现 和准确诊断是降低结核病发病率、减少传播机会、控 制结核病疫情的关键环节。 然而国内现有的结核病 实验室诊断方法虽然较多，但诊断阳性 率均不到 ６０％，临床应用效果不佳。 而以结核分枝杆菌特异 性 γ－干扰素酶联免疫斑点检测技术为 基 础 的 Ｔ－ ＳＰＯＴ· ＴＢ 试剂盒在欧美国家获得了广泛应用。 由 于该试剂盒和酶联斑点分析仪价格昂贵、实验操作 技术及实验室条件要求较高导致在我国应用较少。 该研究采用 Ｔ－ＳＰＯＴ· ＴＢ 试验与其它多种结核检测 技术对 １３０ 例受检者进行检测，评估 Ｔ－ＳＰＯＴ · ＴＢ 试验的特异性及敏感性。
参考文献
［１］ 霍霏霏，刘晓清．结核病免疫 学诊断新进 展 Ｔ－ＳＰＯＴ· ＴＢ ［ Ｊ］ ． 中华实验和临床感染病杂志，２０１０，４（２） ：４８ －５０．
［２］ Ｂｅｈｒ Ｍ Ａ，Ｗｉｌｓｏｎ Ｍ Ａ，Ｇｉｌｌ Ｗ Ｐ，ｅｔ ａｌ．Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ ｇｅｎｏｍｉｃｓ ｏｆ ＢＣＧ ｖａｃｃｉｎｅｓ ｂｙ ｗｈｏｌｅ－ｇｅｎｏｍｅ ＤＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ ［ Ｊ ］ ．Ｓｃｉｅｎｃｅ， １９９９，２８４（５４１９） ：１５２０ －３．
［７］ Ｌａｌｖａｎｉ Ａ，Ｐａｔｈａｎ Ａ Ａ，ＭｃＳｈａｎｅ Ｈ，ｅｔ ａｌ．Ｒａｐｉｄ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｍｙｃｏ－ ｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｂｙ ｅｎｕｍｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ａｎｔｉｇｅｎ －ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｔ ｃｅｌｌｓ［Ｊ］．Ａｍ Ｊ Ｒｅｓｐｉｒ Ｃｒｉｔ Ｃａｒｅ Ｍｅｄ，２００１，１６３（４）：８２４ －８．
万方数据
流行区，存在着相当比例的潜伏结核感染者，而本研 究中的 ＡＦＢ 和结核抗体的检出率均不足 ４０％，分别 为 ３６畅８％和 ３９畅６％，容易导致结核漏诊和误诊，而 Ｔ－ＳＰＯＴ· ＴＢ 可以有效地筛选出潜伏结核感染者， 对这些潜伏感染患者进行干预治疗可以有效遏制潜 伏结核转化为活动性结核，这对于减少结核感染的 传播和流行， 实 现 结 核 病 疫 情 控 制 目 标 至 关 重 要。 另外，本研究中 ＰＰＤ 的灵敏度和特异性分别 ５７畅５％ 和 ８３畅３％，其灵敏度和特异性水平受患者免疫力状 况、营养状况、卡介苗接种等多种因素影响而大大影 响了其临床应用价值，而 Ｔ－ＳＰＯＴ· ＴＢ 不受 ＢＣＧ 接 种 及 ［４，７］ ＨＩＶ 感染［８］ 的影响， 因此 Ｔ－ＳＰＯＴ · ＴＢ 较 ＰＰＤ 更适宜在我国这种卡介苗接种率高、处在 ＨＩＶ 高发病时期的国家开展。 总之，Ｔ－ＳＰＯＴ· ＴＢ 诊断 结核特异性强，较其它传统辅助检查方法更灵敏，而 且操作简便、快速，作为结核的重要辅助诊断依据在 我国具有较好的应用价值和推广前景。