土壤中微生物的分离_PPT幻灯片
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土壤微生物的分离筛选 ppt课件
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概念 筛选及纯化的方法 培养基的选择
细菌的筛选：选择性培养基 根据某种微生物的特殊营养要求或其对某化
学、物理因素的抗性而设计的培养基。其功能是
使混合菌样中的劣势菌变成优势菌，从而提高该
菌的筛选效率。
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概念 筛选及纯化的方法 培养基的选择
细菌的保存：牛肉膏蛋白胨培养基 配方（g）：牛肉膏3,蛋白胨10,氯化钠5，琼脂15,
蒸馏水1000ml，pH7.2。
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二、微生物筛选纯化的流程
富
梯
涂
样
集
度
布
品
培
稀培ຫໍສະໝຸດ 养释养平
板
斜
划
面
线
保
纯
存
化
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三 微生物筛选纯化的操作
注意事项： ①筛选之前，提前制作好试验用的培养基。 ②与培养微生物相关的试验器材需要灭菌，方法为 在 121 ℃的条件下高压灭菌20分钟。 ③与微生物相关的操作需要在无菌操作台上进行。 操作之前15分钟打开紫外灯。
土壤是微生物的大本营，混杂着大量的微生物， 从中分离可得到只含有一种微生物的纯培养。
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概念 筛选及纯化的方法 培养基的选择
微生物筛选的方法有：稀释涂布法和平板划线法。
稀释涂布法：将土壤溶液稀释成一定的梯度，将其 涂布到固体平板培养基上。
平板划线法：挑取稀释涂布后长出的菌落，在固体 平板培养基上划线培养，获取纯菌落。
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将接种菌株的斜面放入4 ℃冰箱中保存。 至此，已经完成了微生物的初筛。有关微 生物的更多信息可以用鉴别培养基对其进 行复筛，或者运用其他手段对其进行鉴别。
实验-土壤中细菌的分离与纯化PPT课件
1. 试拟出从土壤中分离芽孢杆菌的主要实验步 骤。
2. 如何检验平板上某个单菌落是不是纯培养？
2021
2021制备土壤稀释液制备土壤稀释液涂布平板涂布平板培养培养挑菌落挑菌落平板划线分离平板划线分离转入斜面转入斜面观察菌落特征制片镜检菌体形态观察菌落特征制片镜检菌体形态菌种保藏菌种保藏2021制备土壤稀释液制备土壤稀释液2021涂布涂布2021培养
实验十
微生物的分离与纯化
2021
一、目的要求
1. 掌握土壤微生物的分离纯化方法和无菌操作 技术；
平板线法
平板划线分离的方法
1.斜线法；2.曲线法；3.方格法；4.放射法；5.四格法
2021
四、操作步骤（6）
平板划线分离
2021
四、操作步骤（7）
6. 转入斜面
斜面接种时的无菌操作
(1)接种灭菌; (2)开启棉塞; (3)管口灭20菌21; (4)挑起菌苔; (5)接种; (6)塞好棉塞
六、思考题
2021
三、实验器材
1. 土样：采集校园土壤
2. 培养基：牛肉膏蛋白胨培养基——细菌
3.
高氏Ⅰ号培养基——放线菌
4.
马丁氏培养基——真菌
3. 其他：无菌的培养皿、盛90mL无菌水并带 玻璃珠的三角瓶、盛9mL无菌水的试管、小 铁铲、吸头、移液器、无菌玻璃涂棒、接种 环、显微镜、染色液等。
2021
四、操作步骤（1）
于28℃培养箱中培养3~5 d，牛肉膏蛋白胨培养基平板 倒置于37℃培养箱中培养2~3 d。
2021
四、操作步骤（5）
4. 挑菌落
接种和分离工具
1. 接种针；2.接种环；3.接种钩；4.5.玻20璃21涂棒；6.接种圈；7.接种锄；8.小解剖刀
2. 如何检验平板上某个单菌落是不是纯培养？
2021
2021制备土壤稀释液制备土壤稀释液涂布平板涂布平板培养培养挑菌落挑菌落平板划线分离平板划线分离转入斜面转入斜面观察菌落特征制片镜检菌体形态观察菌落特征制片镜检菌体形态菌种保藏菌种保藏2021制备土壤稀释液制备土壤稀释液2021涂布涂布2021培养
实验十
微生物的分离与纯化
2021
一、目的要求
1. 掌握土壤微生物的分离纯化方法和无菌操作 技术；
平板线法
平板划线分离的方法
1.斜线法；2.曲线法；3.方格法；4.放射法；5.四格法
2021
四、操作步骤（6）
平板划线分离
2021
四、操作步骤（7）
6. 转入斜面
斜面接种时的无菌操作
(1)接种灭菌; (2)开启棉塞; (3)管口灭20菌21; (4)挑起菌苔; (5)接种; (6)塞好棉塞
六、思考题
2021
三、实验器材
1. 土样：采集校园土壤
2. 培养基：牛肉膏蛋白胨培养基——细菌
3.
高氏Ⅰ号培养基——放线菌
4.
马丁氏培养基——真菌
3. 其他：无菌的培养皿、盛90mL无菌水并带 玻璃珠的三角瓶、盛9mL无菌水的试管、小 铁铲、吸头、移液器、无菌玻璃涂棒、接种 环、显微镜、染色液等。
2021
四、操作步骤（1）
于28℃培养箱中培养3~5 d，牛肉膏蛋白胨培养基平板 倒置于37℃培养箱中培养2~3 d。
2021
四、操作步骤（5）
4. 挑菌落
接种和分离工具
1. 接种针；2.接种环；3.接种钩；4.5.玻20璃21涂棒；6.接种圈；7.接种锄；8.小解剖刀
土壤里的微生物ppt课件
它们在土壤中的功能多样，包 括分解有机物、固氮、促进植 物生长等。
细菌的种类繁多，包括革兰氏 阳性菌、革兰氏阴性菌、芽孢 杆菌等。
真菌
真菌在土壤中的数量相对较少， 但它们在土壤生态系统中的作用
非常重要。
真菌主要通过分解有机物来获取 营养，同时它们也与植物形成共 生关系，帮助植物吸收水分和养
分。
常见的土壤真菌包括霉菌、酵母 菌和蘑菇等。
土壤微生物的生理功能
物质循环与转化
碳循环
氮循环
微生物通过呼吸作用将土壤中的有机碳转化 为二氧化碳，同时也可以通过光合作用将二 氧化碳固定为有机碳。
微生物参与土壤中的氮素转化，包括氨化作 用、硝化作用、反硝化作用等，实现氮素在 土壤中的循环和利用。
磷循环
硫循环
微生物通过分解含磷有机物和矿化作用，将 土壤中的磷素释放出来，供植物吸收利用。
促进植物生长的微生物
氮固定菌
将大气中的氮气转化为植物可利用的 氨态氮，如根瘤菌与豆科植物共生， 固定空气中的氮气。
磷细菌
分解含磷化合物，使土壤中的磷元素 转化为植物可吸收的状态。
钾细菌
分解含钾矿物，释放出钾元素供植物 吸收。
有益真菌
如菌根真菌，与植物根系形成共生体， 增加植物对水分和养分的吸收能力。
微生物生态学技术
荧光原位杂交技术（FISH）
利用特异性荧光标记的寡核苷酸探针与土壤微生物细胞内的靶序列进行杂交，通过荧光显微 镜观察杂交信号，可以对土壤微生物进行原位鉴定和定位。
稳定同位素探针技术（SIP）
利用稳定性同位素标记的底物喂养土壤微生物，通过追踪同位素标记物在微生物体内的转化 和分布，可以了解土壤微生物对特定底物的利用情况和代谢途径。
土壤微生物PPT课件
物质循环
土壤微生物在碳、氮、磷、硫等元 素的生物地球化学循环中起着重要 作用，如固氮、硝化、反硝化、硫
化等过程。
能量流动
土壤微生物通过分解有机物质释放 能量，供自身和其他生物利用。
土壤结构形成与改良
微生物通过分泌多糖等胶结物质促 进土壤团聚体形成，改善土壤结构 ；同时参与土壤有机质分解和腐殖 质形成，提高土壤肥力。
通过共代谢等途径，将有毒有害物质转化为无毒或低毒物 质。
修复重金属污染土 壤
通过生物吸附、生物转化等作用，降低土壤中重金属毒性 。
改善土壤结构
增加土壤团聚体稳定性，提高土壤抗侵蚀能力。
土壤微生物资源开发与利用的挑战
微生物资源多样性不足
目前已知可培养的土壤微生物种类有限，大量未知功能微生物资 源有待开发。
生物防治
某些微生物对植物病原菌具有拮抗 作用，可用于生物防治；同时微生 物还能产生多种抗生素和生长调节 物质，促进植物生长。
02
土壤微生物与土壤肥力
土壤微生物在养分循环中的作用
氮循环
土壤微生物参与氮的固定、硝化、反硝 化等过程，对氮素的转化和供应起重要 作用。
磷循环
微生物通过分解有机磷化合物，释放磷 元素供植物吸收利用，同时参与磷酸盐 的沉淀与溶解平ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ。
种类繁多、数量巨大、代谢类型多样、适应性强、繁殖迅速等。
土壤微生物的组成与分类
组成
土壤微生物主要由细菌、真菌、放线 菌、藻类和原生动物等组成，其中细 菌和真菌数量最多。
分类
根据形态、结构和功能等特征，土壤 微生物可分为自养型微生物（如硝化 细菌、蓝藻等）和异养型微生物（如 腐生细菌和真菌等）。
土壤微生物的生态功能
根据观察到的形态学特征，对微生物 进行初步分类和鉴定。
土壤微生物在碳、氮、磷、硫等元 素的生物地球化学循环中起着重要 作用，如固氮、硝化、反硝化、硫
化等过程。
能量流动
土壤微生物通过分解有机物质释放 能量，供自身和其他生物利用。
土壤结构形成与改良
微生物通过分泌多糖等胶结物质促 进土壤团聚体形成，改善土壤结构 ；同时参与土壤有机质分解和腐殖 质形成，提高土壤肥力。
通过共代谢等途径，将有毒有害物质转化为无毒或低毒物 质。
修复重金属污染土 壤
通过生物吸附、生物转化等作用，降低土壤中重金属毒性 。
改善土壤结构
增加土壤团聚体稳定性，提高土壤抗侵蚀能力。
土壤微生物资源开发与利用的挑战
微生物资源多样性不足
目前已知可培养的土壤微生物种类有限，大量未知功能微生物资 源有待开发。
生物防治
某些微生物对植物病原菌具有拮抗 作用，可用于生物防治；同时微生 物还能产生多种抗生素和生长调节 物质，促进植物生长。
02
土壤微生物与土壤肥力
土壤微生物在养分循环中的作用
氮循环
土壤微生物参与氮的固定、硝化、反硝 化等过程，对氮素的转化和供应起重要 作用。
磷循环
微生物通过分解有机磷化合物，释放磷 元素供植物吸收利用，同时参与磷酸盐 的沉淀与溶解平ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ。
种类繁多、数量巨大、代谢类型多样、适应性强、繁殖迅速等。
土壤微生物的组成与分类
组成
土壤微生物主要由细菌、真菌、放线 菌、藻类和原生动物等组成，其中细 菌和真菌数量最多。
分类
根据形态、结构和功能等特征，土壤 微生物可分为自养型微生物（如硝化 细菌、蓝藻等）和异养型微生物（如 腐生细菌和真菌等）。
土壤微生物的生态功能
根据观察到的形态学特征，对微生物 进行初步分类和鉴定。
实验六-土壤中微生物的分离和PPT课件
完整版课件
15
固体斜面培养特征
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16
液体培养特征
完整版课件
17
半固体穿刺培养特征
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18
3 微生物的无菌操作接种原理
• 1) 斜面接种
菌种管和待接试管在手中的拿法
完整版课件
19
试管拔塞后的灭菌
完整版课件
20
试管拔塞后的取菌
完整版课件
21
• 2) 穿刺接种
穿刺接种
（a）水平穿刺接完种整；版（课件b）垂直穿刺接种
• 10 体表不同部位的微生物
• 取一个平板, 用记号笔在平板背面化分为几部分,每部分标 记好要检测的部位,如手,头发,衣服等, 可将洗手前后分别 检测.然后用不同的人体部位按在标记好的平板部位上,将 平板倒转, 恒温37℃培养两天后观察.
22
三 实验器材
• 1 培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基,倒平 板, 斜面,液体,半固体培养基.
• 2 器材：花园土，99mL无菌水1瓶，9mL无 菌水4支，1mL枪头, 0.1mL, 直径9cm的无 菌平皿，天平，试管架，无菌称量纸，酒 精灯，火柴，接种环，涂布棒，记号笔等.
• 3 菌种: 金黄色葡萄球菌, 变形杆菌,枯草杆 菌.
了研究某种微生物的特性或者要大量培养和使用某种微生 物，必须从这些混杂的微生物群落中获得纯培养，这种获 得纯培养的方法称为微生物的分离与纯化。 • 在自然界中，上壤是微生物生活的良好环境，其中生活的 微生物数量和种类都是极其丰富的。土壤中的微生物数量 与种类非常多,在通气良好的花园土中，好气性微生物占 有绝对优势。本实验以花园土为材料分离土壤中的好气性 细菌. • 分离微生物常用的方法有稀释平板分离法和划线分离法， 根据不同的材料，可以采用不同方法，其最终目的是要在 培养基上出现欲分离微生物的单个菌落，必要时再对单菌 落进一步分离纯化。在用稀释平板法分离微生物时，还可 以同时测定待分离的微生物的数量。
实验三 霉菌、放线菌及土壤中微生物的分离纯化27页PPT
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71、既然我已经踏上这条道路，那么，任何东西都不应妨碍我沿着这条路走下去。——康德 72、家庭成为快乐的种子在外也不致成为障碍物但在旅行之际却是夜间的伴侣。——西塞罗 73、坚持意志伟大的事业需要始终不渝的精神。——伏尔泰 74、路漫漫其修道远，吾将上下而求索。——屈原 75、内外相应，言行相称。——韩非
实验三 霉菌、放线菌及土壤中微生物 的分离纯化
16、自己选择的路、跪着也要把它走 完。 17、一般情况下)不想三年以后的事， 只想现 在的事 。现在 有成就 ，以后 才能更 辉煌。
18、敢于向黑暗宣战的人，心里必须 充满光 明。 19、学习的关键--重复。
20、懦弱的人只会裹足不前，莽撞的 人只能 引为烧 身，只 有真正 勇敢的 人才能 所向披 靡。
71、既然我已经踏上这条道路，那么，任何东西都不应妨碍我沿着这条路走下去。——康德 72、家庭成为快乐的种子在外也不致成为障碍物但在旅行之际却是夜间的伴侣。——西塞罗 73、坚持意志伟大的事业需要始终不渝的精神。——伏尔泰 74、路漫漫其修道远，吾将上下而求索。——屈原 75、内外相应，言行相称。——韩非
实验三 霉菌、放线菌及土壤中微生物 的分离纯化
16、自己选择的路、跪着也要把它走 完。 17、一般情况下)不想三年以后的事， 只想现 在的事 。现在 有成就 ，以后 才能更 辉煌。
18、敢于向黑暗宣战的人，心里必须 充满光 明。 19、学习的关键--重复。
20、懦弱的人只会裹足不前，莽撞的 人只能 引为烧 身，只 有真正 勇敢的 人才能 所向披 靡。
实验六从土壤中分离特定功能微生物.ppt
课程内容
• 微生物所需要的营养物质 • 培养基及其种类 • 土壤中的微生物及其分布特点
3.1.2 微生物需要的营养物质
水（water） 碳源 （carbon source）
氮源（nitrogen source） 无机盐（mineral salts）
生长因子（growth factor）
水
微生物细胞含水约占细胞鲜重的70－90％ ， 水作用是多方面的 水的功能：
（第5、6排）
富集纤维素分解菌的培养基1
• 1L水中含：
KH2PO4 1.00 ； MgSO4 0.3 ； NaCl 0. 1； NaNO3 2.5 ； CaCl2· 6H2O 0.1 ；培养基 第六排：液体培养基
纤维素好氧分解实验步骤
按培养基的物理状态分类
• 1．固体培养基:在液体培养基中加入凝固剂即为 固体培养基。实验用的凝固剂有琼脂、明胶和硅 胶，后者用于配制自养微生物的固体培养基。对 其他多数微生物来讲，以琼脂最为合适，一般加 入1．5—2．5%即可凝固成固体。此培养基可供 分离、鉴定、活菌计数、菌种保藏等用。 • 2．半固体培养基:在液体培养基中加入少量凝固 剂即为半固体培养基，例如琼脂只需加入0．2— 0．7%。常用作细菌动力检查和菌种保存、噬菌 体制剂的制备等。 • 3．液体培养基:没有加琼脂，配好后成液体状态 的培养基。常用于生理代谢的研究和工业发酵等。
（第7、8排）
富集纤维素分解菌的培养基2
• 1L水中含：
羧甲基纤维素钠(CMC-Na) 20 ； Na2HPO4 2.5 ； KH2PO4 1.5 ； 蛋白胨2.5 ； pH 7.0—7.5 第七排做固体培养基；第八排做液体培养基。 注意：在无菌培养基内直接接如土粒即可，不需要加滤纸 ，因为已经含 羧甲基纤维素钠
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• 实验目的：
1、学会倒平板 2、了解土壤中微生物分离方法 3、学会稀释涂布平板计数法对微生物计数
微生物的分离及稀释平板法计数
（1）倾注平板法 (混合平板法)
（2）涂布平板法
稀释到适量浓度
倾注或涂布平板
培养
菌落计数
实验安排
• 10-710-610-5 稀释度为细菌培养,肉汤蛋白胨 培养基
• 10-5
• 10-510-410-3 稀释度为真菌培养,马丁氏培养 基
每个梯度3个平行，所以每种菌需要9块平板, 注意标记
• 培养 将细菌、真菌、放线菌培养基倒置于28度培养箱 中培养3-5d；统计所长出的菌落数；
• 挑菌（纯化） 将培养后长出的单菌落数量、形态、培养特征进 行观察，分别挑取单菌落于相应平板上划线、分离， 培养，检查菌落是否一致、单纯（也可以用显微镜 涂片染色镜检是否是单一的微生物），如有杂菌需 进一步纯化、分离。
一般用菌落形成单位（colony forming units， CFU）来表示原 样品中的细胞数。
三、作业
• 利用涂布平板法对土壤样品进行活菌计数
菌落计数 ：
稀
10-4
释
度
10-5
10-6
平板中的 细 1 2 3 平 1 2 3 平 1 2 3 平
CFU数 菌
均
均
均
放 线 菌
真 菌
• 每克含菌样品中细菌/放线菌/真菌 活细胞数＝ （同一稀释度平板上菌落平均数× 10×稀释倍数× 10 ） 含菌样品克数