重庆大学环境微生物学考研笔记

环境生物技术定义：即直接或间接利用完整的生物体或生物体的某些组成部分或某些机能，建立降低或消除污染物产生的生产工艺，或者能够高效净化环境污染以及同时生产有用物质的人工技术系统，称之为环境生物技术。

环境生物技术分为三个层次：1第一层次为现代环境生物技术，是指以基因工程为主导的现代污染防治生物技术。2第二层次是指传统的生物处理技术，如活性污泥法、生物膜法，及其在新的理论和技术背景下产生出的强化处理技术和工艺，如生物流化床、生物强化工艺等。3第三层次是指利用天然处理系统进行废物处理的技术，如氧化塘、人工湿地和农业生态工程等

.对酶源的要求1）酶含量丰富2）提取、纯化方便

微生物作为酶的优势

1）微生物种类多，易得到所需的酶类

2）可以控制微生物培养条件，易获得高产菌株

3）生产成本低

4）微生物繁殖快、生长周期短

5）生产易管理

6）提高微生物产酶能力的途径较多

7）微生物易改造，可提高酶产量或改造酶

对酶生产菌的要求

1）不是致病菌，也不产毒素

2）不易变异退化，不易感染噬菌体

3）产酶量高，而且最好产生胞外酶

4）原料廉价，周期短，易培养

对酶进行分离提纯的目的：1为了研究酶的理化性质，对酶进行鉴定，必须用纯酶2作为生化试剂及用作药物的酶，常常也要求有较高的纯度

细胞破碎的方法：1）机械破碎2）物理破碎3）化学破碎4）酶解破碎

酶的提取是指在一定的条件下，用适当的溶剂或溶液处理含酶原料，使酶充分溶解到溶剂或溶液中的过程。

提取目标：a. 将目的酶最大限度地溶解出来。 b. 保持生物活性。

提取原则：a. 相似相溶b. 远离等电点的pH值，溶解度增加

提取方法：（一）盐溶液提取常用稀盐（常用NaCl）溶液（盐溶），对酶稳定性好、溶解度大，最常用。（二）酸、碱溶液提取（三）有机溶剂提取

沉淀分离：是通过改变某些条件或添加某种物质，使酶的溶解度降低，而从溶液中沉淀析出，与其它溶质分离的技术过程。

在生物大分子制备中最常用的几种沉淀方法：⑴中性盐沉淀（盐析法）⑵有机溶剂沉淀⑶选择性沉淀（热变性和酸碱变性）⑷等电点沉淀⑸有机聚合物沉淀（PEG沉淀法）

影响蛋白质盐析沉淀的因素a.蛋白质的浓度:2.5-3.0%b.介质的pH:接近等电点c.温度:一般在室温，特殊在4度 d.盐类型:单价盐很差

PEG法的影响因素：影响因素a. 蛋白质的分子质量——大，沉降好b. 蛋白质浓度: 浓度高，易于沉淀；太高，分段作用减弱c. pH值:接近等电点d. 离子强度:低离子强度影响不大，过高影响分段效果 e. 温度: 0－30度f. PEG聚合度:越高，用量越少；过高操作不便，多用PEG6000

7种氨基酸出现的频率最高

Lys Asp Glu Cys His Tyr Ser

（兰天果拌猪肉丝）

某些功能基团,如（氨基、羧基、巯基、羟基和咪唑基）是酶的必需基团。赖氨酸的氨基天冬氨酸和谷氨酸的羧基半胱氨酸的巯基组氨酸的咪唑基酪氨酸和丝氨酸的羟基酶分子修饰：通过各种方法使酶分子的结构发生某些改变，从而改变酶的某些特性和功能的技术过程称为酶分子修饰。

固定化酶：是指固定在一定载体上并在一定的空间范围内进行催化反应的酶。

基因工程:就是对不同生物的遗传物质，在体外进行剪切、组合和拼接，使遗传物质重新组合，然后通过载体转入微生物、植物和动物细胞内，进行无性繁殖，并使所需要的基因在细胞中表达，产生出人类所需要的产物或组建成新的生物类型。

基因工程四大要素：供体基因载体工具酶受体细胞

载体的功能1运送外源基因高效转入受体细胞2为外源基因提供复制能力或整合能力3为外源基因的扩增或表达提供必要的条件