桔梗总皂苷含量测定方法研究

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LI SH I ZH EN M ED IC I NE A ND M ATER I A M ED I CA RESEA RCH 2009 VOL. 20 NO. 7
时珍国医国药 2009 年第 20 卷第 7 期
醇至回流前重量。过滤 , 合并滤液于蒸发皿中 , 水浴蒸发至干 , 用 10 m l水溶解残留物 , 将所得溶液缓缓通过 已处理好 的 AB! 8 型 大孔吸附树脂柱 ( 重量比 1% 20), 反复 上样 5 次后 , 以水 150 m l 洗脱 , 弃去水液 , 之后再 以 300 m l 60 % 乙醇洗脱 , 收集 60% 乙醇 洗脱液 , 蒸干。残留物用 70% 甲醇溶解 , 转移 至 10 m l量瓶中 , 定 容 , 摇匀 , 即得 [ 10] 。 2. 3 测定波长 的选择 精密移取 80 l的标准品及 50 l的供试 品溶液 , 置 10 m l具塞磨口试管中 , 于 70# 水浴蒸发至干 , 精密加 入 10 % 香草醛试液 0. 5 m ,l 60% 硫 酸 5 m , l 摇 匀 , 于 60# 水浴加 热 15 m in, 冰水浴中冷却 3 m in, 随行 试剂做 空白 , 在紫外 分光光 度计于 400~ 700 nm 波 长范 围全程 扫描 [ 11] , 标准品 及供 试品的 最大吸收波长 均在 472 nm, 且空 白对 照无 干扰 , 故选 择 472 nm 为测定波长。 2. 4 标准曲线的绘制 精密吸 取桔 梗皂苷 D 标准 品溶液 0 , 40, 80, 160, 200 ,l 置 10 m l具塞 磨口试管中 , 于 70# 水浴蒸发至干 , 精密加入 10 % 香草醛 试液 0. 5 m ,l 60% 硫 酸 5 m , l 摇匀 , 于 60# 水浴加热 15 m in, 冰水浴中冷却 3 m in, 以同法平行处理的空白溶 剂为空白 , 在 472 nm 处测定吸光度。以标准品浓 度 C ( l/m l) 为 横坐标 , 吸光度 A 为纵坐标 绘制标准曲 线 , 得 到回归 方程为 : A = 0. 003 4C + 0. 006 4 , r = 0. 999 7, 结 果看 出 C 在此浓 度系 列范围 内与 A 呈现良好的线性关系。 2. 5 精密度实验 精密吸取标准品溶液 80 , l 按照 & 2. 4∋项下方 法显色测定吸光度 , 连续 测定 5 次 , 结果 RSD 为 0. 30% , 说明仪 器的测试性能良好。 2. 6 稳定性实验 精密吸取供试品溶液 50 , l 按照 & 2. 4∋项下方 法操作 , 按不同时间测定其吸 光度变 化 , 在 放置 5, 10 , 20, 30 , 40, 50, 60 m in 后 , 吸 光度分 别为 0. 214, 0. 214, 0 . 214 , 0. 215, 0. 216, 0. 215 , 0. 217。结果表明该法在 60 m in 内 , 吸光度值稳定。 2. 7 重复性实 验 称取桔梗药材已干燥粉末 6 份 , 每份 1 . 0 g ,准 确称定 , 按照 & 2. 2∋ 项下操作 , 制 备 6 份供试 品溶液 , 各准 确移取 50 ,l 按照 & 2. 4 ∋ 项下 方法 操 作 , 测定 吸 光度 A, 计 算 总皂 苷含 量。结果平均含量为 3. 07 % , RSD 为 1 . 17 %。 2. 8 加样回收率实验 准 确称取 已知含 量的桔 梗药材已 干燥粉 末 6 份 , 每份 0. 05 g , 加入桔梗皂苷 D 适量 , 按 照 & 2. 2∋ 项下方法 制备样品溶液 , 各取 50 l样品液 , 按照 & 2. 4∋项下方 法显色后测 定吸 光 度 , 计 算 回 收 率。 结 果 见 表 1 。平 均 加样 回收 率为 96. 97 % , RSD 为 1 . 51 % ( n = 6) 。
, ZHANG C hong x i, W E I J ian he , XU X u dong , CHU Q ing long ( 1. J ilin Agricultural University, Chang chun 130118 ; 2 . Institu te of M edicinal P lant, Chinese A cademy of M edi cal Sciences , B eijing Union M edical College, Beijing 100193 , China ) Abstract : O bjective To develop a v an illin - H 2 SO4 co lo ri m etry m ethod for the deter m ination of tota l saponins in R adix P la ty c
关键词 : 桔梗; 总 皂苷; 桔梗皂苷 D; 比色法 中图分类号 : R284 文献标识码 : A 文章编号 : 1008 0805( 2009) 07 1580 02
D eterm ination of Total Sapon in s in Rad ix P latycodon is
L I Y an
转蒸发 仪 R - 205( B CH I有限 公司产 品 ); 电热 恒温鼓 风干燥 箱 DHG - 9240( 上海 精宏 实验 设备 有限 公司 产品 ); SK 8200H 型 超 声波清 洗器 ( 上海科导超声仪器有限公司 ) ; SHZ - ∀ 型循环水 真 空泵 ( 上海亚荣生化仪器厂 ) ; 大孔树脂 层析色 谱柱 ( 内径 3 c m, 长 30 c m ) 。标准品桔梗皂苷 D ( HPLC 制备 纯化 , 纯 度用归一 化 法计算 在 98% 以 上 ) ; AB! 8 型 大 孔吸 附 树 脂 ( 南开 大 学 化 工 厂 ); 其他试剂均为分析纯。 1. 2 材料 桔梗 样品 共 14 个 : GP1BC1- 12 和 GP1BC2 - 6 为 3 代不育 株系 , G SNH 3- M 3 为 2 代 粉花 自交 株系 , 种质 来源 于 河 北 ; GP2BC4- 10 和 GP 2BC4- 5 为 3 代不 育株 系 , G S902- 7 - 2 为 3 代自交保持株 系 , 种质来 源于 安徽 ; GS218- 1, G S218- 2 和 G S228- 1 为 2 代自交系 , 种 质来源于山东 ; G S111- 2 为 2 代自交 株系 , GS262- W 4- W 2 为 3 代自交保 持株系 , 种 质来源 于赤峰 ; G S173- 5 为 2 代自交株 系 , 来源于延庆野 生种质 ; CK 2 为山东 生 产用种 质 , CK 1 为赤峰 生产用种质 [ 9] 。以上各样品 于 2007 11 初 地上 部分 枯萎后 , 将 其根 部挖出 , 每 个样 品系 内随机 取 3 株 , 洗 净 , 趁鲜刮去外皮 , 烘箱中 60 # 烘 干 , 粉碎 , 粉末混 合均匀 后 , 装 于自封 袋中 , 置于干燥 器中保存 , 备 用。样品均 采自药 用植物 研 究所试 验基地 ( 北京市海淀区 ), 由魏建和研究员鉴定。 2 方法与结果 收稿日期 : 2008 10 21 ; 修订日期 : 2009 02 23 2. 1 标准品溶液的制备 精密称 取经 60# 减 压干燥至 恒重的 桔 基金项目 : 国家自然科学基金面上项目 ( N o. 30772728) , 加 70% 甲醇适量溶解 , 置 1 m l量 瓶中 , 用 70% 作者简介 : 李 妍 ( 1984 ) , 女 ( 蒙古族 ) , 吉林长春人 , 现任吉林农业大学中 梗皂苷 D 3. 5 mg 药材学院在读硕士研究生 , 学士学位 , 主要从事天然药物化学研究工作 . 甲醇稀 释至刻度 , 摇匀 , 即得。 * 通讯作者简介 : 许旭东 ( 1968 ), 男 ( 汉族 ) , 北 京人 , 现任 中国医 学科学 2. 2 供试品溶 液的制备 取桔 梗药材已干 燥粉末约 1. 0 g , 准确 院中国协和医科大学药用植物研究所副研究员 , 博士学 位 , 主要从事天然 称定 , 置索氏提取器中 , 加 入 10 倍 量的 70% 甲醇 后 , 准确 称重。 药物化学研究工作 . 浸泡 30 m in, 加热 回流提取 3 次 , 2 h /次 , 再次称 重 , 补加 70 %甲
1 , 2
1w ord s : R ad ix P la tycodonis;
T ota l saponins;
P latycod in D;
Co lor i m etry
桔梗 ( R adix P latycodonis) 为 桔梗科 ( Campanulaceae ) 植 物桔 梗 P la tycodon grandif lorum ( Jacq . ) A. DC 的干燥根 [ 1] , 是一种药食 同源的植物 , 用途广泛。桔 梗性味 苦、 辛、 平 , 归肺 经 , 有宣 肺、 利 咽、 祛痰、 排脓之功效 , 用于咳嗽痰多 , 胸闷不畅 , 咽痛 , 音哑 , 肺痈 吐脓 , 疮疡脓成不溃 , 被广 泛应用 于祛痰 止咳药 [ 2] 。桔梗 中的皂 苷类成分 , 是桔梗药用品质的 主要评 价指标 , 桔 梗中含有 大量的 三萜皂苷 , 已经分离鉴别出四十多种单体皂苷 , 如桔梗皂苷 D、 桔 梗皂苷 A、 桔梗皂苷 B、 桔梗 皂苷 D2、 D3、 桔梗 皂苷 E 等 [ 3~ 5] 。现 代药理学研 究 表明 , 桔梗 皂 苷为 桔 梗 主要 的 药理 活 性成 分 [ 6] 。 中国药典 ( 2005 年版 ) 采用 重量法 测定桔 梗总皂 苷含量 , 该方 法操作繁琐 , 特别是其中糖类成分等杂质会对测定结果产生严重 干扰 , 造成检测结果大大高于实际 总皂苷 的含量 [ 7, 8] 。本 实验以 桔梗皂苷 D 为标准品 , 采用香 草醛 - 硫酸 显色 , 比色法对 桔梗总 皂苷的含量进行了测 定。 1 仪器与材料 1. 1 仪器 与 试剂 UV 2550 型 紫外 ! 可 见 分 光光 度 计 ( 日 本岛 津 ) ; TB - 214 型电子 分析 天平 ( 北 京赛 多利 斯仪 器系 统有 限公 司产品 ); 数显恒温水 浴锅 HH - 6( 国华 电器有 限公司 产品 ) ; 旋