植物显微重点2015

植物显微技术

一、名词解释

石蜡制片法：用石蜡做包埋剂，将植物组织固定、脱水、透明、浸蜡包埋在石蜡中，然后用切片机切片

徒手切片法：用锋利的剃刀或双面刀片，把新鲜的或已固定的植物材料（根茎叶等）切成薄片，用临时装片法（染色或不染色）装片，在显微镜下观察植物内部结构的方法

冰冻切片法：将植物材料（新鲜样品立即在液态氮或其他制冷剂中冰冻或经化学固定后再冰冻）置于低温下冰冻至一定硬度后直接进行切片的方法

滑走切片法：用滑走切片机对植物材料进行切片的方法。既可以切新鲜或固定的材料，也可以切石蜡包埋后的材料

压片制片法：将植物材料酸解或酶解后置于载玻片上，再在载玻片上盖上盖玻片并施加外力，使得正在有丝分裂的材料的染色体得以铺展的进行制片的方法

涂片制片法：将植物材料酶解去掉细胞壁后，经低渗液处理，用酒精灯火焰干燥使得染色体膨胀，用镊子捣碎后将材料铺展开，得到分散良好的铺展的染色体与细胞核标本

整体制片法：将微小的植物材料或部分组织器官经整体制成永存玻片的方法

离析法：在研究植物细胞时，为了详细研究单个细胞完整的形态结构，用一些化学药品（酸碱酶）将细胞与细胞之间的胞间层溶解，使细胞彼此分离成单个细胞的方法

固定：用化学或物理的方法，迅速杀死植物细胞或组织，使细胞或组织的形态结构尽量保持在其生活时的状态

脱水：用脱水剂逐步取代样品中水分的过程

透明：是脱水与浸蜡，脱水与封藏之间的桥梁。材料经各级乙醇脱水后，组织内部已没有水分，但脱水剂（乙醇）与石蜡不相溶，石蜡不能进入到组织或细胞中，必须经过一种既能和脱水剂混合又能溶解包埋剂（如石蜡）的溶剂（如氯仿）来处理，使包埋剂浸入植物组织或封藏。由于这种溶剂可使材料透明，所以这一过程称为透明

染色：使植物组织染上颜色便于观察

浸蜡：将包埋剂石蜡逐步透入植物组织和细胞取代透明剂的过程

包埋：将溶解的石蜡倒入包埋盒，再将经石蜡浸透的组织放入盒中，调整材料位置并使之迅速冷却，石蜡由液态凝固成蜡块的过程

封藏：将封藏剂均匀地、适量地布满在材料上，轻轻盖上干净的盖玻片，便于后续的观察和研究，经封藏后切片可以长期保存

显微摄影：是显微成像技术和显微成像艺术的有机结合，可获得清晰真实的生物图像，用于阐明动植物形态发生发育规律

景深：在焦点所及范围内主题最近部分到最远部分的距离

分辨率：物镜所能分辨两个点的最短距离

二、填空：

1、植物制片方法按照保存时间可分为两种类型：临时制片法和永存片制片法。

2、植物制片方法，其中切片法可以分为7种类型：石蜡切片法、徒手切片法、冰冻切片法、滑走切片法、半薄切片法、超薄切片法、振动切片法

3、FPA是最常用的植物样品固定液，分别是由：福尔马林，丙酸，70%乙醇。

4、FAA是最常用的植物样品固定液，分别是由：福尔马林，乙酸，50%或70%乙醇

5、透明剂都是石蜡溶剂，不能与水混合。常用的透明试剂有：二甲苯，氯仿，冬青油

6、植物组织的染色，木质化细胞常用番红O染成鲜艳的红色，用固绿把纤维素细胞壁和细胞质染成鲜艳绿色

7、封藏是植物制片的最后一步，常用的封藏剂有：加拿大树胶、中性树胶、达马树胶、油派胶

8、显微镜按属性分：光学显微镜、非光学显微镜；按用途分：生物显微镜、体视显微镜、偏光显微镜、电子显微镜、特种显微镜

9、摄影技术中控制景深的三要素：光圈、镜头焦距、拍摄距离

10、照相机的图像传感器主要有两种类型：CCD和CMOS

11、数码照相机的常用存储卡类型：SD卡、CF卡、记忆棒

12、照相机的快门有两种类型：镜间快门、焦平面快门

13、石蜡切片常用粘贴剂主要有两种类型：蛋清甘油、明胶甘油

14、照相机的镜头一般可以分为：鱼眼镜头、广角镜头、标准镜头、长焦距镜头、变焦镜头、微距镜头

15、闪光指数GN是衡量闪光灯闪光强度的指标，也是闪光摄影曝光的依据：GN=光圈数*被摄体的距离（感光度100时）

16、石蜡制片法中最常用的脱水剂是乙醇，脱水的方法应该逐级进行，由低到高的梯度，不能将材料直接置于高浓度脱水剂中，否则会使细胞收缩或损坏

17、显微镜由光学部分（包括照明）、机械部分、摄影部分等三部分组成，各部分在显微镜中相互配合发挥出其独特功能

18、显微镜经历了大致三个阶段，并沿着这三个方向发展着，肉眼观察的解剖水平、光学显微镜观察的显微结构水平、电子显微镜观察的超微结构水平，这三个阶段是密切联系、相互促进的，其发展有越来越快、功能越来越完善的趋势

三、问答

1、石蜡制片步骤：

取样：材料的选择与分割→固定、保存→冲洗、染色（整染）→脱水（各级乙醇，低浓度到高浓度）→透明（透明剂，低浓度到高浓度）→浸蜡（低浓度到高浓度）→包埋（石蜡包埋剂）→切片（旋转切片机）→展片、粘片→烘片→脱蜡（脱包埋剂石蜡）→复水（各级乙醇，高浓度到低浓度）→染色（片染）→分色→脱水（各级乙醇，低浓度到高浓度）→透明→镜鉴、封藏→烘片、观察、摄影（烘片后可长期保存一永存片）。

2、试比较石蜡制片法和徒手制片法的主要特点：

石蜡切片法以石蜡作包埋剂，用旋转切片机将样品切成薄片（一般为8~12μm，可以连接成蜡带），经一系列处理后制成永存片。切片厚度由切片机控制，比较均匀。

徒手切片用锋利的剃刀或双面刀片。方法简便、快速，设备要求简单。但徒手切片技术要求熟练，才能切出符合要求的薄片。切片厚度为20~25μm

3、石蜡制片法在取样时应注意哪些方面：

○1选择新鲜、健壮、正常、有代表性的材料（病理解剖材料除外）；

○2取材时注意按植物的生长季节及生长发育的不同阶段选取（可安排定期取样）；

○3取材大小要适当，一般在5~10μm为宜，便于制片；

○4取材时选取所需部位，切去多余的部分，最好能先做徒手切片观察，决定是否适用；

○5切去材料时必须使用锋利的新刀片，要尽量避免损伤植物体或选取的部位，并立即固定，防止变化；○6注意切面：在切取器官时，应根据制片的要求，选取最能代表其结构的切面。常用的切面包括横切、纵切、径向切等；

○7尽量保持植物组织原有的形态。

4、叙述扫描电子显微镜的特点：

○1能够直接和多角度观察样品表面的结构。

○2样品制备过程简单，不用切成薄片。