细胞学基础知识专题

细胞学基础知识专题

一、细胞的基本特点与共性[1]

随着对细胞结构、功能和生命活动研究的不断深入，近些年比较普遍的提法是：细胞是什么活动的基本单位。

➢细胞是构成有机体的基本单位

➢细胞是新陈代谢与功能的基本单位

➢细胞是有机体生产和发育的基础

➢细胞是遗传的基本单位

➢没有细胞就没有完整的生命（基础题）

二、细胞的基本共性[1]

➢所有的细胞都有相似的化学组成。

➢所有的细胞表面均由磷脂双分子层和蛋白质构成的生物膜，即细胞膜。

➢所有的细胞都有两种核酸：DNA与RNA作为遗传信息复制与转录的载体。

➢所有细胞都有蛋白质合成的机器——核糖体。

➢所有细胞的增殖都以一分为二的方式进行分裂。（基础题）

三、细胞的分类及其形态结构[1]

根据细胞进化地位、结构的复杂程度、遗传装置的类型与主要生命活动的方式，可以将细胞分为原核细胞与真核细胞两大类。（基础题）

细胞的基本结构：（拓展题）

四、原核细胞和真核细胞[1]

原核细胞基本特点：①没有典型的细胞核，无核膜；②遗传的信息量小，遗传信息载体仅由一个环状DNA构成；③细胞内没有内膜系统，由细胞膜内陷形成中间体；④细胞内没有细胞骨架结构。

真核细胞基本特点：①以脂质及蛋白质成分分为基础的生物膜结构系统；②以核酸（DNA 或RNA）与蛋白质为主要成分的遗传信息表达系统；③以特意蛋白分子装配构成的细胞骨架系统。（拓展题）

原核细胞与真核细胞的区别: （基础题）

五、细胞培养[1]

5.1 细胞培养是指用机械或化学的方法将组织分散成单个细胞而进行的培养。培养方式分为：群体培养和克隆培养。（基础题）

5.2 细胞系对原代培养物进行传代培养，经传代培养后得到的可以长期连续传代的不均一的细胞群称为细胞系。（基础题）

5.3 细胞株通过选择法或克隆形成法，从原代培养物或细胞系中获得的具有特定性质或标识的细胞群。（基础题）

5.4 克隆克隆是指由同一个祖先细胞通过有丝分裂所产生的遗传性状相同的细胞群体。5.5 原代细胞凡是来源于胚胎、组织器官及外周血，经特殊分离方法制备而来的原初培养的细胞称为原代细胞。原代细胞的培养也称初代培养。一般认为，培养原代的第1代细胞核传代到第10代以内的细胞统称为原代细胞培养。

5.6 传代细胞原代细胞经分散接种称为传代，凡适应在体外培养条件下持续传代培养的细胞称为传代细胞。（拓展题）

六、动物细胞的类型[1]、[2]

6.1 形态

千姿百态、多种多样

6.2 分类

6.2.1按照培养细胞的生长方式和类型可分为：

6.2.1.1贴壁生长型细胞形态上可分为几大类型:成纤维细胞、上皮型细胞、游走细胞型、多形型细胞（拓展题）

6.2.1.2悬浮型生长细胞

七、细胞生长的特点[1]

1．粘附并伸展

2．密度依赖性（基础题）

八、细胞生长增殖过程[1]

九、动物细胞培养的主要特点[2]

➢污染可能概率大

➢营养成分需求高

➢培养环境适应性差

➢培养条件要求严

➢代谢废物毒性大

➢检测控制指标多

➢载体生长依赖强

十、细胞培养的条件与影响因素[1]

10.1 细胞培养的营养

➢水

➢糖

➢氨基酸

➢维生素

➢无机离子和微量元素

➢血清

➢促细胞生长因子（基础题）

10.2 影响细胞生长的因素[1]

➢温度

➢渗透压

➢气体环境和pH

➢无毒和无菌

➢细胞接种密度

➢容器转动速度和悬浮搅动速度（基础题）

10.3 细胞培养无菌无毒环境[2]

➢实验室、生产车间设计合理

➢常用设施及设备

➢培养器皿：透明度好、无毒、利于细胞贴附和生长的材料。

10.4 常用设备设施（公司细胞毒线）

➢液氮罐及冻存管

➢二氧化碳培养箱及细胞培养瓶

➢转瓶机及转瓶

➢激流灌注式生物反应器（贴壁培养）

➢生物反应器（NBS）（贴壁或悬浮培养）

➢倒置显微镜

➢……（基础题）

10.5 目前生产用最常用的培养基：MEM（传代细胞）、乳汉液（原代细胞）。（基础题）10.6 其它常用液体试剂[2]

PBS

Hank’s液

NaHCO3溶液

0.25%胰酶溶液

EDTA-胰酶分散液

SP

HEPES

L-谷氨酰胺

D-氨基葡萄糖

DMSO

……（拓展题）

10.7 哺乳动物细胞冷冻保存[2]

主要目的：（拓展题）

（1）保存种子细胞，以便随时取用。

（2）降低人力和物力。

（3）减少细胞被微生物污染的危险性。

（4）避免有限细胞系出现衰老或恶性转变。

（5）减少细胞因传代培养而引起的遗传变异和形态改变。

冷冻保存要点：（拓展题）

（1）冷冻过程要缓慢，有条件的地方，可用程控降温仪，按每分钟-1 到-3℃速度降温，一直到-80℃以下，然后直接放入液氮中长期保存

（2）冻存细胞必须处在对数生长期，活力大于90％，无微生物污染。

（3）细胞浓度控制在：1×106－1×107/ml。

（4）使用高浓度血清（20~30%）

（5）使用合适的细胞冷冻保护剂（DMSO、甘油）

细胞冻存-慢冻;细胞复苏-快融（基础题）

10.8 不易察觉的细胞污染[2]

真菌污染（拓展题）

真菌污染是细胞培养过程中最常见的一种，尤其在霉雨季节进行细胞培养更易污染。最常见的真菌有烟曲霉、黑曲菌、孔子霉、毛霉菌、白色念珠菌和酵母菌。培养细胞受真菌污染后，可见培养液中漂浮着白色或浅黄色的小点，有的散在生长，培养液一般不发生混浊；

倒置显微镜下可见丝状、管状或树枝状的菌丝纵横交错在细胞之间或培养基中，有的呈链状排列。念珠菌和酵母菌呈卵圆形散在细胞周边和细胞之间。个体细小，有增多趋势。

真菌污染后，细胞生长变慢，但最后由于营养耗尽及毒性作用而使细胞脱落死亡。

支原体污染（拓展题）

支原体是介于细菌与病毒之间能独立生活的最小微生物，最小直径0.2μm，一般过滤除菌无法去除它，光镜下难以看清它的形态结构。开始不易发现，能在偏碱条件(pH7.6～8.0)下生存，对青霉素有抗药性。