细胞学诊断检材的制备技术
病理组织学诊断检材的制备技术
病理组织学诊断检材的制备技术一、组织的固定㈠凡需要进行病理组织学检查的标本（器官或组织），于离体（活体或尸体）后，应尽快置放（浸泡）于装有足够量固定液的容器中固定。
固定液量应为被固定标本体积的5~10倍。
置放标本的容器大小视标本和固定液的体积而定，应适当大一些。
临床科室切取的标本置放于容器中固定后，应尽快送交病理科继续固定。
未能及时、充分固定的干涸或腐败标本不能再进行固定和用于制做切片。
㈡常规固定液为4%中性甲醛（10%中性福尔马林），应预先多量配制贮存，以备随时使用。
小标本的固定时间为4~6小时，大标本为18~24小时或更久。
㈢根据病理学特殊检查（特殊染色和组织化学染色、免疫组织化学染色和原位核酸分子杂交染色、电镜观察等）的需要，应选用其他适宜的固定液进行固定［参见后述的“㈦固定液的常用种类和制备”］。
㈣器官、组织固定的基本方法1．食管、胃、肠、胆囊、膀胱等空腔器官：依规范方法剪开后，按其自然状态平铺于硬纸板上（重点暴露黏膜面或内表面的病变处），并用大头针将标本边缘处固定于纸板上，然后放入4%中性甲醛中固定（黏膜面或内表面朝向容器的液面，并覆盖薄层脱脂棉）。
2．肝、脾：由器官背面，沿其长轴每间隔1.5~2.0cm纵向平行剖开，切成数片。
将每片肝或脾轻轻地平放于装有4%中性甲醛的容器中，容器底面衬以脱脂棉。
应避免标本弯曲和相互间的叠压。
3．肺叶：放入固定液中的肺叶漂浮于液面，需在肺表面覆盖薄层脱脂棉。
必要时从支气管注入适量4%中性甲醛。
4．肾：沿肾外缘中线朝肾门方向作一水平切面（深达于肾盏），再行固定。
5．淋巴结：先用4%中性甲醛固定1小时后，再沿其长轴切成数片（厚 2 ~3mm），继续固定。
6．骨组织：先锯成小片（若是长骨应作横向锯片），在4%中性甲醛中固定24小时后，再进行脱钙。
7．微小组织或液体沉淀物：先用拭纸或滤纸妥为包裹（需用大头针扎牢），然后放入专用小盒内进行中性4%甲醛固定，以防检材遗失。
检验科常见细胞学检测方法解析
检验科常见细胞学检测方法解析一、涂片技术涂片技术是细胞学检测中常用的一种方法，它通过将采集到的细胞样本均匀涂布在载玻片上，经过染色、封片等处理后，通过显微镜观察细胞形态和结构。
涂片技术可以快速获取细胞学信息，适用于各种细胞学检测项目。
其中，常见的涂片技术包括巴斯夫涂片法、涂片健康法等。
巴斯夫涂片法是一种常规的细胞学检测方法，适用于各类细胞标本的处理。
通过将细胞标本均匀涂布在载玻片上，经过固定、染色等处理后，观察细胞形态、核质比、细胞核形态等指标，从而进行细胞学分析。
涂片健康法是一种改进的涂片技术，通过优化染色方法、调整固定条件等方式，提高了细胞学检测的准确性和灵敏度。
涂片健康法适用于各类细胞学检测项目，可以帮助临床医生进行更精准的诊断和治疗。
二、液基细胞学技术液基细胞学技术是近年来逐渐兴起的细胞学检测方法，它通过将采集到的细胞样本均匀涂布在液基载玻片上，进行特殊染色处理后，通过自动扫描、计数等方式获取细胞学信息。
液基细胞学技术具有高度的标准化和自动化程度，适用于大规模筛查和常规检测。
液基细胞学技术在宫颈细胞学检测中得到广泛应用，通过对宫颈细胞进行染色、计数和分析，可以及早发现宫颈癌前病变，为临床医生提供重要诊断依据。
同时，液基细胞学技术还可以用于其他细胞学检测项目，如乳腺细胞学检测、尿细胞学检测等。
三、免疫细胞化学技术免疫细胞化学技术是一种高级的细胞学检测方法，它通过利用抗体与特定抗原的特异性结合，对细胞样本中的蛋白质进行标记和检测。
免疫细胞化学技术可以用于检测细胞内各种蛋白质的表达，如肿瘤标志物、细胞信号分子等。
免疫细胞化学技术在肿瘤诊断和治疗中有着重要的应用，通过检测癌细胞表面的特定蛋白标记，可以帮助医生进行肿瘤的精准诊断和靶向治疗。
此外，免疫细胞化学技术还可以用于研究细胞信号通路、细胞周期等生物学过程。
结语细胞学检测是临床医学中重要的辅助诊断方法，涂片技术、液基细胞学技术、免疫细胞化学技术等多种检测方法的应用，为医生提供了更加全面和准确的细胞学信息。
法医病理学检材的提取、固定作业指导书
法医病理学检材的提取、固定作业指导书1.目的规范法医病理学检材提取和固定的方法和要求。
2.适用范围凡因鉴定需要取材和固定的按照此作业指导书执行。
3.职责中心主任批准具有法医病理学鉴定资格的鉴定人完成此项工作。
4.程序4.1尸表损伤和病变检材的方法和要求4.1.1体表损伤和病变的提取方法和原则：病变或损伤均应带有周围1cm的正常组织，能完整提取的应尽量提取整个损伤或病变区。
4.1.2电流斑的提取方法：对直径小于3~4cm的损伤，在损伤边缘正常组织1cm处完整切取。
如多处相同损伤应提取4处以上。
直径大于4cm的损伤，在不破坏尸体外观情况下，也可整个提取。
如不能整个提取，可跨损伤的最大直径切取1cm宽的条状组织两块，并要求至少一端带有1cm的正常组织，切取时避免挤压和金属类工具接触损伤，以免局部组织受压变形和影响金属元素分析的准确度，提取损伤的同时应提取周围正常组织，以利作金属元素分析的空白对照使用。
剖验提取后，除留做金属元素分析的损伤和空白对照组不能放入固定液外，应按元素分析的要求包装送检。
做病理组织细胞学检验的检材应立即放入固定液固定。
4.2胸腹腔、颅腔器官检材的提取方法（见法医病理学尸体解剖作业指导书）。
4.3骨骼检材提取方法要求：对疑有造血系统疾病可提取三处以上的骨髓做组织细胞学检验，常取的部位有髂前上棘、胸骨、肋骨、股骨等，要求取3cm后的骨放入固定液内固定。
4.4法医病理学检材提取的原则和方法4.4.1提取检材时，要记录器官表面和切面。
病变及损伤的大小，以长/宽/深或厚（cm）表示，测量器官的大小以长/宽/厚（cm）表示，重量，以g表示。
4.4.2各器官检材提取要求和原则：胸、腹腔和大脑在没有明显病变和损伤的情况下，要求提取整个心脏和大脑。
其他器官在无明显病变损伤时，可按照标标准的规定提取组织块，组织块的厚度应在1-2cm。
4.4.3肺组织的切取：右肺上、中、下叶各取一块，上叶为小正方形，中叶为中正方形，下叶为大正方形。
荧光细胞化学样品制备和检测技术
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混合固定液
（1）乙醇-甲醛（乙醇-福尔马林，AF）固定液：适用于皮下组织中肥大细胞的固定。该固定 液有固定兼脱水作用，固定后的标本可直接入95%乙醇脱水。
甲醛（40%） 100ml
95%乙醇
900ml
（2）B5（醋酸钠-升汞-甲醛）固定液：多用于固定淋巴组织。染色前应进行脱汞沉淀处理。
升汞
5.0g
重铬酸钾
2.5g
硫酸钠
1.0g
蒸馏水（加至）
100ml
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取材
组织取材：按病理诊断和研究的目的和要求，从标本上切取适当大小和数目的组织块，供后续 制片和显微镜下观察用于诊断以及相关研究。
细胞标本的取材 （1）贴壁生长的培养细胞 （2）悬浮的培养细胞：
什么是荧光 ?
• 物质中的电子吸收光的能量由低能状态转变为高能状态，再回到低能状态时释放出的光，是非温度 辐射光——冷光。即：物质吸收短波光，发射出的长波光。
• 显微镜荧光利用光源激发——光化荧光
荧光的性质
吸收光，必需有激发光源 荧光波长＞激发波长（损失热能） 荧光强度极小于激发光的强度 有不同程度的衰减 荧光强度取决于激发光强度、被检物浓度、荧光效率
无水醋酸钠
1.25g
升汞
6.0g
蒸馏水
90ml
使用前加入甲醛 10ml
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混合固定液
（3）Bouin固定液：特别适用于睾丸活检组织的固定。Bouin液对组织固定较均匀，收缩很
法医病理学检材的提取、固定、包装、送检方法
法医病理学检材的提取、固定、包装、送检方法【1996－7－25批准】说明本标准由全国刑事技术标准化技术委员会归口。
本标准由河南省公安厅刑科所、河南医科大学起草。
本标准起草人：高金才、王乃斌、李力宏、闫红涛、李家陶。
1 范围本标准规定了法医病理学检验检材的剖验提取、固定、固定液选择及配制以及检材的包装、送检的方法和步骤。
本标准适用于各级公、检、法、司及院校系统进行司法解剖的病理学检验。
2 总则在法医病理学组织细胞检验、组织化学检验、免疫荧光及超微结构等项检验中，检材的提取、固定、送检正确与否，直接关系到鉴定结论的准确性和正确性。
本标准的制定是为了法医病理学检材的提取、固定、送检有一个统一的方法及步骤，为今后复核和法医病理学的发展及国际交流奠定基础。
3 法医病理学检材的提取要求、方法和步骤3.1 法医病理检材提取前要求详细了解记录：死者姓名、性别、年龄、民族、住址、工作单位、职业、生前健康状况、详细案情及死亡过程和症状，提取住院病历或门诊治疗情况和详细的现场勘验情况。
3.2 为了保证法医病理检验鉴定结论的准确性，要求：组织细胞学检验鉴定检材的提取应在死亡后48h内进行，特殊情况下冬季不超过72h，春秋季不超过48h，夏季不超过24h。
存放在冷箱内的尸体不超过72h，冰柜内保存结冰的尸体96h，最长时间不过一周。
免疫组织化学、电镜等项检验鉴定检材的提取应在12～24h以内进行。
3.3 剖验时要详细检查、记录拍照尸表损伤病变和剖验脏器的表面、切面的损伤和病变，记录损伤和病变的部位、数量、形态、大小、范围、色泽、硬度等情况(大小以厘米表示)。
脏器剖验检查的原则是：实质性脏器主要注意检查表面和切面损伤和病变；空腔性脏器主要注意检查浆膜和粘膜有无损伤和病变、管壁有无增厚及狭窄等。
3.4 尸表损伤和病变检材提取的方法和要求3.4.1 颈部损伤检材提取的方法：经详细的检验记录拍照后“T”字形切开胸腹腔，按照尸体解剖规定的方法开颅。
病理细胞学制片流程
病理细胞学制片流程
光学显微镜切片制作技术最简单的切片法是徒手切片，但是由于组织块往往十分柔软，切削很困难，而且无法得到十分菲薄的切片，因此必须先用某些特殊物质渗入组织块的内部起支持作用，并将整个组织块包住，然后再用精密的切片机制作切片，才能获得良好的效果。
这种方法称为包埋法，包埋的物质称为包埋剂。
分别有石蜡切片、火棉胶切片、冰冻切片等，它们各有长处，可以根据需要选用，但是使用得最多的还是石蜡切片技术。
石蜡切片的制作过程主要包括：取材，固定，脱水，透明，透蜡，包埋，切片，贴片，染色，透明，封藏等步骤。
细胞标本取材和制片方法
随着疾病的发生、发展,病理标本在疾病的诊断过程中越来越重要。
病理标本的检查应包括大体和显微镜下观察两个方面,而正确的诊断往往取决于准确的显微镜下观察,因此制片质量的好坏将直接影响诊断结果的准确性,甚至会带来错误的结果。
一张好的切片与取材和固定都有密切的关系。
对于免疫组织化学方法所需材料的取材,不仅要求组织细胞的形态完整保存,而且要最大程度的保存组织或细胞成分的抗原性。
1印片法印片法的优点是简便、快速、经济、准确,特别是前三方面超过任何一种冰冻切片及快速石蜡切片法。
它不需要特殊设备,凡病理室均可开展。
特别适用于县以下没有冰冻切片设备和条件的病理室。
印片法的速度特快,仅数分钟即可出结果。
在准确性方面与一般冰冻切片相同。
印片中的细胞形态比之在较厚的冰冻切片中所观察到的细胞形态结构更为清晰可辨,细胞畸形远较冰冻切片显著。
冯毓正等[1]曾遇到两例乳腺硬癌,冰冻切片观察难以与硬化性乳腺病鉴别,而是结合印片中发现恶性细胞才确诊为硬癌。
根据乳腺标本的肉眼观察结合印片中有无恶性细胞对某些乳腺病变也能做出初步的诊断。
一般说来,印片法是一种病理诊断的辅助方法。
无论石蜡切片或冰冻切片辅之以印片,互补短缺,对于进一步提高病理诊断的准确性均有极大的帮助。
冯毓正等[1]认为印片法不仅只是冰冻及石蜡切片的辅助诊断方法,它可以代替冰冻切片对乳腺肿块进行快速诊断。
邝国乾等[2]采用印片法检测AgNOR可结合印片细胞学检查,使诊断鼻咽癌的敏感性、特异性、实用性等都有提高。
因此,印片法优于切片法。
本方法作为诊断鼻咽癌,具有操作简单、经济、实用、准确、可靠、重复性好,易于普及推广。
崔海等[3]在研究认为使用印片法可提高外科医师术中对胃癌浆膜浸润或浸出情况的判断准确率,减少肉眼判断上的误判或漏判,而且方法简便、快速。
需要指出的是,在做印片取材时,应小心轻柔操作,更不能用刮片的方法,以免人为引起癌细胞的扩散转移。
2穿刺法目前临床上常用的穿刺方式有两种:绳梯式和纽扣式穿刺方式。
细胞生物学技术与文化标本制备
细胞生物学技术与文化标本制备细胞生物学技术是一项高精度、高要求的生物学技术，广泛应用在许多领域。
其中，文化标本制备是细胞生物学技术的重要应用之一。
文化标本制备是一种将细胞培养、扩增和分离等技术应用于文化标本制备的生物技术，随着近年来生物技术的快速发展，文化标本制备在医疗、科学研究等领域中的应用日益广泛。
文化标本制备是一种综合性强的技术，其操作要求高、步骤繁琐。
文化标本制备的前期准备工作包括选取、分离并准备实验样本，对于样本的质量选择和分离操作的技巧准备都至关重要。
在细胞生物学技术中，实验室人员通常要对生物样本进行多次鉴定和筛选，最终选出一个高质量的文化标本样本。
文化标本制备的核心在于细胞培养技术。
细胞培养技术是现代生物技术中最常用的一种技术，通过培养技术可以将样本的细胞培养出来并扩增，用于观察其生理活动、血液学检测、乃至药物筛选等不同领域的研究。
在细胞培养技术中，实验人员需要在适宜的培养基中添加适合细胞分裂和生长的营养物质、气体和溶液等，在恰当的温度和湿度条件下培养细胞，直至细胞达到最佳生长状态，这些工作都是决定文化标本制备成功的关键因素。
在培养过程中，实验人员还需要时刻观察细胞生长状态，及时调整培养条件，保证细胞能够快速、健康地生长繁殖。
在文化标本制备过程中，实验人员还需注意细胞质与扩增环境的协调，以及细胞各自的特殊要求。
例如，细胞需要特定的培养基或生长环境等，也需要在培养基和细胞之间互相协调，以保证细胞均能成为高质量的文化标本。
除了细胞培养技术外，文化标本制备还涉及多种其他细胞生物学技术，如细胞遗传学、细胞分子生物学、细胞生长和分化等方面的研究，这些技术的发展日新月异，使文化标本制备在生物类学、临床医学、药物研发等领域中更加得到广泛应用。
然而，尽管文化标本制备发展至今已十分成熟，但文化标本制备仍面临着一些挑战。
首先，由于细胞生长状态的不可控性，文化标本制备过程中会出现一些不确定性和意外情况。
细胞样品制备
细胞样品制备细胞样品制备听起来就很专业呢，但其实也没那么难啦。
一、细胞样品制备的那些事儿1. 细胞样品制备就像是一场奇妙的探险。
你得先找到你的目标细胞，这就像是在一个大森林里找特定的小动物一样。
有时候细胞在培养皿里安安静静地待着，等着你去发现，有时候又好像在和你玩捉迷藏，藏在各种组织或者液体里。
2. 当你找到细胞后，就该把它们和其他杂质分离开来。
这可不是个简单的活，就像把混在一起的小珠子一颗颗挑出来一样。
你可能得用一些特殊的溶液，让细胞乖乖地从它们藏身的地方出来，而把那些不需要的东西留在后面。
3. 细胞的状态也很重要哦。
你要确保它们是健康的，就像照顾小宠物一样。
如果细胞生病了或者状态不好，那做出来的样品可就不准确啦。
你得时刻关注它们的生长环境，温度啊、营养物质啊，这些都不能马虎。
4. 采集细胞的时候也要小心翼翼。
不能太粗鲁，不然细胞会被你弄伤的。
就像摘花一样，要轻轻的，这样才能保证细胞的完整性。
5. 在制备过程中，清洁是超级重要的。
任何一点小灰尘或者小杂质混进去，就可能把整个样品都搞砸了。
这就好比你在做蛋糕，要是面粉里混进了沙子，那蛋糕肯定没法吃了。
6. 还有就是要选择合适的容器来存放细胞样品。
这个容器就像是细胞的小房子，要让它们住得舒服。
如果房子不合适，细胞可能就不开心，然后就影响它们的状态了。
7. 有时候你可能还需要对细胞进行一些预处理，比如给它们标记或者染色。
这就像是给细胞穿上一件特殊的衣服，这样你就能更好地观察它们了。
不过这个衣服可得选对了，不然可能会对细胞产生不好的影响。
8. 别忘了记录每一个步骤哦。
就像写日记一样，你要把细胞样品制备过程中的点点滴滴都记下来。
这样以后要是出了问题，你就可以回头看看是哪里出了差错。
9. 在处理细胞样品的时候，时间也是个关键因素。
有些步骤要快，有些步骤则要慢慢来。
就像跑步和散步一样，要把握好节奏。
10. 不同类型的细胞在制备样品的时候可能会有不同的要求。
这就像是不同的人有不同的喜好一样，你得根据细胞的类型来调整你的制备方法。
细胞学诊断组织印片、压片的制备
细胞学诊断组织印片、压片的制备细胞学诊断组织印片、压片的制备（一）组织印片：1．用锋利刀片剖开刚切取的新鲜肿瘤组织或淋巴结等，然后用清洁载玻片轻压于组织剖面处，将组织表面的细胞成分印在玻片上。
用稍微加温的载玻片制备印片时，可印得较多细胞。
2．制作淋巴结印片前，应先用滤纸吸去淋巴结切面上的血液、组织液。
（二）压片：1．选取微小薄片组织平铺于一张载玻片上，再用另一张载玻片叠加其上并予轻压。
2．脑组织质软，易于制作压片；稍硬的组织需切成细碎薄片制作压片。
四、涂片的固定（一）用于HE染色和巴氏染色的涂片必须湿固定，即涂片后立即进行固定。
乳头溢液涂片和液体标本离心沉淀物涂片，应待涂膜潮干（即周膜稍干而其中央区域未干）时进行固定。
用于瑞氏染色、May-Grünwald姬姆萨染色和免疫细胞化学染色的涂片，必须干固定，即待涂片稍干后再进行固定。
（二）固定液1．乙醇－冰醋酸液：95%乙醇∶冰醋酸＝99∶1。
常用。
2．乙醇－乙醚液：95%乙醇49.5ml, 乙醚49.5ml, 冰醋酸1ml。
较常用。
3．甲醇：滴加在干燥涂片上，用于瑞氏染色、May-Grünwald 姬姆萨染色和免疫细胞化学染色。
4．丙酮：适用于酶类染色。
5．Carnoy液：由无水乙醇、氯仿、冰醋酸按6:3:1比例混成，适用于显示核酸、糖原、黏液染色。
涂片在Carnoy液固定3～5min后，应移入95%乙醇中继续固定。
6．对于液体标本的离心沉淀物、食管拉网获取的小块组织或吸出物中的细小组织块等，固定于4%中性甲醛液中1h，然后制作常规石蜡包埋切片。
（三）固定方法1．浸入法：（1）将稍为干燥（不能完全干燥）的涂片直接浸泡于固定液内至少15 ～30min。
（2）因细胞容易脱落，宜以一个盛有固定液的容器只固定一例标本的涂片；一个容器固定多例涂片时，有可能造成的肿瘤细胞交叉污染。
（3）必要时可将标本涂在硅化载玻片上，以防脱落。
（4）固定液重复使用时，应先用滤纸过滤。
【衡道】不同细胞量蜡块的样本制备方法
【衡道】不同细胞量蜡块的样本制备方法细胞诊断学在病理具有不可或缺的价值。
此篇文献编译是相关样本制备方法的一个小集成。
藉由制作适当高质量细胞蜡块获得足够的细胞样本，不仅能够进行细胞学诊断，还能用来进行更多的辅助性研究，如免疫组织化学染色，原位荧光杂交和其他分子研究等，帮助对病变进行明确分类与确定治疗方案。
与传统手术获得的样本相比，细胞技术所需费用相对低廉，且侵入性较小。
细胞蜡块可以永久储存，同时允许保留原始涂片。
另外一个好处是，新兴微波处理技术可应用于小型活体组织和细胞蜡块，进而缩短紧急样本的制备时间，提高报告时效。
Varghese等人在现代病理学杂志上发表了一项验证研究，分析比对了细胞蜡块与外科手术蜡块染色形态的免疫组织化学结果。
该研究使用了41个样本并附加适当对照，共比对了113个染色项目的118次染色，结果表明一致率为95.7％。
对于从细胞蜡块中获得的组织与来自相应手术样本的组织，实验室可以使用不同的细胞块制备方法，从所谓「穷人的方法」的低技术蒸汽固定方法到高科技的Cellient自动化细胞蜡块制作系统等。
本文描述了几种细胞蜡块的制备方法。
需要说明的是：1、当实验室决策采用哪种方法时，必须统筹考虑制备和工作流程及实验室资源、样本量、样本类型等。
2、不同的细胞蜡块制备使用不同的培养基来冲洗、运输和固定样本。
中性缓冲福尔马林被认为是普遍的固定剂。
其他固定剂包括福尔马林/ 95％乙醇冲洗液液和Nathan酒精福尔马林替代品（9份100％乙醇/ 1份40％甲醛），被认为是一种毒性较小固定剂。
甲醇则作为自动Cellient细胞蜡块技术固定剂。
许多辅助测试平台使用福尔马林固定石蜡包埋的组织进行验证。
3、由于抗原性改变，非福尔马林固定方法可能出现假阴性免疫细胞化学染色结果，实验室需要对使用酒精和福尔马林固定的细胞蜡块进行免疫细胞化学和分子技术验证。
01凝块和刮擦方法：可以藉由细针抽吸方式吸取样本置于载玻片上以获得细胞蜡块。
细胞鉴定
成骨细胞鉴定：1. Giemsa染色：将纯化后的第2代细胞调整细胞浓度至5×107L-1，接种到12孔细胞培养板中，每孔接种0.75 mL，以后每3 d换液。
待细胞分布均匀、约80%融合时，PBS洗3次，甲醇固定10 min，Giemsa染液染2 min，蒸馏水冲洗，显微镜下观察拍照。
2. 碱性磷酸酶活性检测细胞化学染色：细胞接种方法同上，体积分数95%乙醇固定30 min，按碱性磷酸酶活性检测试剂盒要求进行检测。
核固红复染细胞核，自然干燥后中性树胶封固。
阳性细胞可见蓝黑色颗粒沉积在胞浆碱性磷酸酶活性部位。
3. 钙化结节染色(茜素红法)：细胞接种方法同上，弃培养基，培养板用PBS冲洗2次，体积分数95%乙醇固定30 min，蒸馏水冲洗3次，0.1%茜素红[茜素红-Tris-Hcl(pH 8.3)]染色，37 ℃，30 min，蒸馏水冲洗。
低倍镜视野(×40)下进行矿化结节观察。
4. V on Kossa’s矿化结节染色法：细胞接种方法同上，弃培养基，培养板用PBS冲洗2次，40 g/L多聚甲醛固定标本，5%硫代硫酸钠孵育30 min，蒸馏水冲洗，然后用1%硝酸银溶液紫外线下染色30 min，蒸馏水冲洗掉浮于细胞表面的黑色物质，继续用5%硫代硫酸钠染色2 min，1%中性红复染10 min，蒸馏水漂洗后观察。
5. 成骨细胞扫描电镜表面形态观察：培养24 h后取出预先置培养板内的圆盖玻片( 直径9 mm)，用PBS冲洗3次，加入3%戊二醛固定2 h；用PBS冲洗3次，45 min/次。
加入1%锇酸，固定2 h。
体积分数为50%，70%，80%，90%，95%的乙醇逐级脱水，各15 min；体积分数100%乙醇脱水2次(15 min/次)。
醋酸异戊酯15 min。
CO2临界点干燥，黏附于载物台上真空镀膜仪镀金，扫描电镜观察并摄片。
6. 成骨细胞透射电镜超微结构观察：消化收集细胞，1 000 r/min离心5 min弃上清；前固定：加入预冷的固定液3%戊二醛固定2 h。
《临床技术操作规范_病理学分册》医院用
《临床技术操作规范_病理学分册》医院用第1章总则一、为提升病理学诊断质量，促进临床工作，依据《中华人民共和国执业医师法》精神，结合医院病理科工作的特点，制定本规范。
二、医院病理科和承担医院病理科任务的医学院校病理教研室的要紧临床任务是通过活体组织病理学检查（简称活检）、细胞病理学检查（简称细胞学检查）和尸体剖检（简称尸检）等作出疾病的病理学诊断（或称病理诊断）。
具有一定规模的病理科，应主动开展教学、培训病理医师和科学研究等项工作。
三、病理学诊断是病理医师应用病理学知识、有关技术和个人专业实践体会，对送检的患者标本（或称检材，包括活体组织、细胞和尸体等）进行病理学检查，结合有关临床资料，通过分析、综合后，作出的关于该标本病理变化性质的判定和具体疾病的诊断。
病理学诊断为临床医师确定疾病诊断、制定治疗方案、评估疾病预后和总结诊治疾病体会等提供重要的、有时是决定性的依据，并在疾病预防，专门是传染病预防中发挥重要作用。
四、病理学诊断报告书（或称病理诊断报告）是关于疾病诊断的重要医学文书。
当涉及医、患间医疗争议时，有关的病理学诊断报告书具有法律意义。
病理学诊断报告书应由具有执业资格的注册主治医师以上（含主治医师）的病理医师签发。
各医院可酌情准予条件适宜的高年资病理科住院医师试行签署病理学诊断报告书。
低年资病理科住院医师、病理科进修医师和非病理学专业的医师不得签署病理学诊断报告书。
五、病理学检查是临床医师与病理医师为确立疾病诊断而进行的合作行为，是有关临床科室与病理科之间专门形式的会诊。
临床医师和病理医师双方皆应认真履行各自的义务和承担相应的责任。
六、病理学检查申请单是临床医师向病理医师发出的会诊邀请单。
病理学检查申请单的作用是：临床医师向病理医师传递关于患者的要紧临床信息（包括症状、体征、各种辅助检查结果和手术所见等）、诊断意向和就具体病例对病理学检查提出的某些专门要求，为进行病理学检查和病理学诊断提供重要的参考资料或依据。
细胞学的常规制片方法
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细胞学检查包括：标本采集、涂片、固定、 染色、封片、阅片等过程，其中细胞学制片 是诊断细胞学的基础。
细胞学标本采集的原则应尽量减少受检者的 痛苦，取得其合作；尽可能使方法简便、快 速，并能获取丰富的细胞成分；还应尽量保
持标本新鲜，避免污染，制作及时。
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(一)细胞学标本类型
• 细胞学标本分脱落细胞和细针穿刺细胞两大类。
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1．脱落细胞是指正常或病理情况下，自然脱 落下来的细胞，随分泌物、排泄物排除体外。恶性 肿瘤的组织细胞之间粘合力下降，加上常有出血坏 死等情况，致使肿瘤细胞更易脱落。这是脱落细胞 学用以临床诊断的理论依据。如痰液、尿液细胞学 检查，可分别查到呼吸道、泌尿道肿瘤细胞，子宫 颈刮片可查见宫颈恶性瘤细胞。
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推片法
• 推片法为血液科常用的涂片方法，即选一个边缘光 滑的载玻片做推片，并使推片与载玻片之间成40° 左右的夹角，将载玻片上的细胞标本匀速推动，做 成细胞涂片。常用于穿刺细胞和体液标本。应注意： 因癌细胞体积较大，常位于细胞涂膜的尾部，因此 推片时不要将尾部推出片外。
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印片法
• 印片法取新鲜组织标本，切开后，用载玻片轻压切 面，即可将细胞粘附于玻片上，称印片法。
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• 1、细胞涂布均匀，分布在载玻片一侧2/3范围内，其余l/3留作贴 标签；
• 2、涂片时，勿用力挤压或摩擦，防止细胞由于挤压损伤或变形； • 3、做好标记，刻写编码，防止错号。
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细胞学制片的方法很多，常用的方法是
细胞学诊断制度及流程
细胞学检查制度及流程1. 由病理科接收标本处统一接收细胞学样本,核对申请单与样本是否相符并记录；2．细胞室具有本专业资质及授权的病理技术人员核对申请单及标本、编病理号、登记、将病人的临床资料输入在电脑中；3. 细胞室具有本专业资质及授权的病理技术人员对相应的细胞学标本,按照细胞学涂片与染色技术操作规则进行处理、涂片和染色；打印标签、制成涂片,并与申请单核对无误后交给当天阅片的病理医师；4. 每个工作日中午9:30时及下午3:30时各出片一次；5. 若出现送检标本过少、标本与申请单不符合、申请单字迹不清楚等,由当天制作涂片的病理技术人员及时与送检的临床医师联系核对并记录；6. 细胞室具有本专业资质及授权的病理医师核对申请单与涂片编号是否相符；7. 细胞室具有本专业资质及授权的病理医师按照细胞学诊断的操作规范和诊断原则阅片、进行细胞学诊断、及时发出报告；有疑难病例及时交给上级医师复核；定期进行科内会诊；8. 细胞室具有本专业资质及授权的病理医师在进行阅片时进行细胞学涂片及染色技术的质量控制并记录；9. 细胞学报告在2个工作日内发出疑难病例和特殊病例除外；若有迟发报告应向临床医师说明并记录；10. 细胞室具有本专业资质及授权的病理医师每季度进行细胞学阳性检出率及准确率统计并记录；11. 细胞室具有本专业资质及授权的病理技术人员对细胞室的病理档案进行归档及保管;细胞学筛查与细胞学诊断的制度与流程1. 核对申请单与送检样品或涂片是否相符；2. 细胞病理诊断报告在2个工作日内发出,疑难病例和特殊病例除外；3. 细胞学筛查工作由具有资质的筛查员进行,由病理医师复审签字发出；4. 细胞病理学诊断报告的签发必须由具有资质的病理医师完成;5. 如遇疑难病例,交由上级医师复核签字发出;6. 具有资质的病理医师负责对出具的细胞学诊断报告提供解释说明;细胞病理报告书内容1. 病理号、送检标本的科室、患者姓名、性别、年龄、样本采集部位、门诊号和或住院号；2. 非妇科样本采用巴氏5级细胞学诊断报告方式；妇科样本采用阴道/宫颈脱落细胞学TBS诊断系统的报告方式；必要时附有建议内容;3. 报告医师签名、报告时间;4. 细胞学诊断报告书采用中文或国际通用的规范术语;细胞学诊断规范1. 细胞病理医师诊断前,核对申请单与涂片是否相符；2. 阅读申请单上填写的内容,对于不清楚的内容及时联系送检医师；3. 阅片时全面观察,不遗漏视野及病变；4. 客观、准确地作细胞出病理诊断、及时发出报告；5. 不能及时发出的报告,向临床医师说明迟发的原因;6. 如遇疑难病例,交由上级医师复核签字发出;。
细胞标本取材和制片方法
细胞标本取材和制片方法摘要：细胞标本取材和制片方法在病理诊断过程中占有重要位置。
简要介绍了印片法、穿刺法、沉淀法等活细胞标本的制备方法。
关键词：细胞标本；取材；制片随着疾病的发生、发展，病理标本在疾病的诊断过程中越来越重要。
病理标本的检查应包括大体和显微镜下观察两个方面，而正确的诊断往往取决于准确的显微镜下观察，因此制片质量的好坏将直接影响诊断结果的准确性，甚至会带来错误的结果。
一张好的切片与取材和固定都有密切的关系。
对于免疫组织化学方法所需材料的取材，不仅要求组织细胞的形态完整保存，而且要最大程度的保存组织或细胞成分的抗原性。
1印片法印片法的优点是简便、快速、经济、准确，特别是前三方面超过任何一种冰冻切片及快速石蜡切片法。
它不需要特殊设备，凡病理室均可开展。
特别适用于县以下没有冰冻切片设备和条件的病理室。
印片法的速度特快，仅数分钟即可出结果。
在准确性方面与一般冰冻切片相同。
印片中的细胞形态比之在较厚的冰冻切片中所观察到的细胞形态结构更为清晰可辨，细胞畸形远较冰冻切片显著。
冯毓正等[1]曾遇到两例乳腺硬癌，冰冻切片观察难以与硬化性乳腺病鉴别，而是结合印片中发现恶性细胞才确诊为硬癌。
根据乳腺标本的肉眼观察结合印片中有无恶性细胞对某些乳腺病变也能做出初步的诊断。
一般说来，印片法是一种病理诊断的辅助方法。
无论石蜡切片或冰冻切片辅之以印片，互补短缺，对于进一步提高病理诊断的准确性均有极大的帮助。
冯毓正等[1]认为印片法不仅只是冰冻及石蜡切片的辅助诊断方法，它可以代替冰冻切片对乳腺肿块进行快速诊断。
邝国乾等[2]采用印片法检测AgNOR可结合印片细胞学检查，使诊断鼻咽癌的敏感性、特异性、实用性等都有提高。
因此，印片法优于切片法。
本方法作为诊断鼻咽癌，具有操作简单、经济、实用、准确、可靠、重复性好，易于普及推广。
崔海等[3]在研究认为使用印片法可提高外科医师术中对胃癌浆膜浸润或浸出情况的判断准确率，减少肉眼判断上的误判或漏判，而且方法简便、快速。
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细胞学诊断检材的制备技术一、细胞涂片、组织印片和压片的制备（一）涂片质量的基本要求1．将检材涂布于载玻片的右（或左）2/3处，另1/3部位粘贴标签。
2．单向涂布检材，避免细胞变形。
3．均匀涂布检材，涂片厚薄适当。
4．红细胞过多的涂片，可酌情进行溶解红细胞处理。
（二）涂片方法1．涂抹法：用棉签或针头将标本单向、均匀地涂抹于载玻片上。
2．拉片法：将一滴检材置于一张载玻片上，再用另一张载玻片叠加其上并予轻压，再将该两张载玻片朝反向拉动，从而获得两张涂片。
3．推片法：将一滴检液置于载玻片的右端，再用另一张窄边光滑的载玻片作为推片，并以与滴液载玻片成40°夹角、自右向左匀力推动检液，形成涂片。
（三）痰涂片的制作1．送检的痰液应是由肺内咳出，最好是清晨空腹时自肺内深咳出的痰液。
2．核查无误的收验痰液，应立即制作涂片（通常为2～3张）。
3．用细签或无钩镊子挑取痰液置于载玻片上，并左右往复薄涂，随即投入固定液中。
4．痰液中呈现下列性状的成分可能含有癌细胞，应注意挑取制作涂片：①血丝；②灰白色痰丝（形如白色细线，微细螺旋状，牵引时可伸长）；③透明痰液（可拉成较长细丝）。
［及时在细胞学检查申请单上记录痰液性状］5．检查痰液中的肿瘤细胞，一般应连续送检3次。
（四）黏膜、皮肤表面刮取（刷取、拉取）物和分泌物的涂片的制作1．阴道排出物、子宫颈刮取物涂片：通常由妇产科医师将已制作、固定后的涂片送交病理科检查。
［注意由子宫颈外口上皮移行带刮取细胞涂片］2．支气管镜、胃镜等内腔镜的黏膜刷取物涂片（黏膜刷片）：刷片通常由内腔镜医师制作、固定后送交病理科检查。
3．食管、胃拉网涂片：由食管拉出的套网气囊适量放气后，将气囊套网在载玻片滚动涂片，尤应将套囊上血丝、灰白色物制作涂片；涂片通常由有关临床医师将已制作、固定后的刷片送交病理科检查。
套网中的小块组织可用来制作石蜡包埋切片。
4．眼、耳、鼻、咽、口腔、皮肤等处病变（溃疡性病变等）的分泌物涂片。
（五）液体涂片的制作液体标本（检材）包括乳头溢液、胸水、腹水、尿液、胃液、脑脊液、穿刺液、冲洗液、灌注液等。
除乳头溢液外，其他液体检材一般均应先行离心（2000r/min，10～20min）后，取其沉淀物制作涂片；液体检材也可用细胞涂片离心机（cytospin）直接制作细胞涂片。
制作好的涂片应立即固定和染色。
［及时在细胞学检查申请单上记录液体标本的性状和数量］液体标本的离心沉淀物较多时，将制作涂片后剩余的沉淀物固定于4％中性甲醛中1h，然后用檫镜纸或绸布将其包裹，制作石蜡包埋切片。
1．乳头溢液：直接滴于载玻片上制作涂片。
（1）患者乳腺触及肿物时：用手指自肿物远方沿乳腺导管引流方向轻力按模挤压，获取溢液，宜取中段溢液和血性溢液涂片。
（2）患者乳腺未触及肿物时：可自乳晕周围向乳腺外周轻力按模挤压，获取溢液。
2．胸水和腹水（1）由患者体内抽取的胸水或腹水应尽快送交病理科验收，检液量以200～500ml为宜。
因故（例如远途）延时送达时，需在标本中加入40%的甲醛（加入量为送检胸水、腹水量的1/5），或加入等量的50％乙醇－生理盐水。
（2）胸水、腹水的离心：采取容器底部的液体10ml（包括可能存在的沉淀物），移入离心管内进行离心。
（3）离心后，倾去全部上清液，将离心管底部含有沉淀物的液体摇匀并用吸管吸出适量，滴注于载玻片上，制作涂片。
3．尿液（1）制作方法同胸、腹水。
（2）尿液含有胶状物时，应先将其除去。
清除方法：用0.5ml/L氢氧化钠调节尿液Ph至6.0；离心后，倾去上清液，再向沉淀物中加入95%乙醇5～10ml ／L（固定细胞），静置5min后加入蒸馏水并轻摇（溶去胶状物）；再次离心后，取沉淀物制作涂片。
检查尿液中的肿瘤细胞，一般应连续送检3次。
4．胃液、胃冲洗液：制作方法同胸、腹水。
5．脑脊液（1）制作方法同胸、腹水。
（2）脑脊液内细胞一般较少，可用微孔滤膜过滤法、沉淀法或纤维捕捉法收集细胞，制作涂片。
6．冲洗液、灌洗液、穿刺液涂片的制作：参见上述的胸水、腹水项。
二、肿物细针穿刺物涂片的制备（一）实施细针穿刺术前的准备工作1．实施细针穿刺术的病理医师应先了解患者临床情况，向患者和/或患者授权人说明实施穿刺术的意义、局限性和其他相关问题等，取得患者和/或患方的知情和理解，并签署由各医院制订的《申请实施细针穿刺术细胞病理学诊断患方知情同意书》。
2．合格的手术操作环境。
3．必备的适用手术器械和其他相关设施。
（二）肿物穿刺术的操作要点：1．确认肿物部位并估计其大小、与皮表距离和质地（实／囊性、硬度等），以指导穿刺的方向、深度和用力程度。
2．必须严格实行无菌操作。
3．根据肿物大小及其血供情况选择适用型号的穿刺用针头。
穿刺用针头的外径为0.6～0.9mm，安置在2ml或10ml的一次性空注射器上。
4．针吸法穿刺术操作要点（1）进行穿刺前，先将安装了穿刺用针头的空注射器管芯外拉2cm；然后，用手固定肿物，将安装在空注射器上的穿刺用针头刺入肿物（注射器内无空气）。
（2）迅速上下提插注射器管芯10～20次（其间变换针头方向3～4次），遂使肿物不同部位的多较内容吸进入针头和注射器内。
（3）将注射器与针头分离（管内负压因而解除）；随后，再将该注射器与仍插于肿物内的针头相接，拔出针头，穿刺结束。
（4）迅速推动注射器的管芯，尽快地将位于穿刺针头内的少量吸出物排射在2～3张清洁的载玻片上，进行涂片。
5．涂片方法：用针头将载玻片上的吸出物轻轻均匀拨开，或用推片法朝一个方向展开（不可双向往返推移）。
6．吸出物过少时，可用向离心管内冲洗穿刺针头；再将冲洗液离心，然后取其沉淀物涂片。
7．吸出物较多时，可适量50％乙醇－生理盐水液将涂片后注射器和针头内剩余的吸出物冲洗至离心管中，离心后，取其沉淀物制作常规石蜡包埋切片。
8．吸出物中含有细小组织块时，应将其制作常规石蜡包埋切片。
9．内脏肿物穿刺时，必须在影象学检查的引导下用较长细针进行穿刺。
10．穿刺操作完成后，即在细胞病理学检查单上书写穿刺记录。
三、组织印片、压片的制备（一）组织印片：1．用锋利刀片剖开刚切取的新鲜肿瘤组织或淋巴结等，然后用清洁载玻片轻压于组织剖面处，将组织表面的细胞成分印在玻片上。
用稍微加温的载玻片制备印片时，可印得较多细胞。
2．制作淋巴结印片前，应先用滤纸吸去淋巴结切面上的血液、组织液。
（二）压片：1．选取微小薄片组织平铺于一张载玻片上，再用另一张载玻片叠加其上并予轻压。
2．脑组织质软，易于制作压片；稍硬的组织需切成细碎薄片制作压片。
四、涂片的固定（一）用于HE染色和巴氏染色的涂片必须湿固定，即涂片后立即进行固定。
乳头溢液涂片和液体标本离心沉淀物涂片，应待涂膜潮干（即周膜稍干而其中央区域未干）时进行固定。
用于瑞氏染色、May-Grünwald姬姆萨染色和免疫细胞化学染色的涂片，必须干固定，即待涂片稍干后再进行固定。
（二）固定液1．乙醇－冰醋酸液：95%乙醇∶冰醋酸＝99∶1。
常用。
2．乙醇－乙醚液：95%乙醇49.5ml, 乙醚49.5ml, 冰醋酸1ml。
较常用。
3．甲醇：滴加在干燥涂片上，用于瑞氏染色、May-Grünwald姬姆萨染色和免疫细胞化学染色。
4．丙酮：适用于酶类染色。
5．Carnoy液：由无水乙醇、氯仿、冰醋酸按6:3:1比例混成，适用于显示核酸、糖原、黏液染色。
涂片在Carnoy液固定3～5min后，应移入95%乙醇中继续固定。
6．对于液体标本的离心沉淀物、食管拉网获取的小块组织或吸出物中的细小组织块等，固定于4%中性甲醛液中1h，然后制作常规石蜡包埋切片。
（三）固定方法1．浸入法：（1）将稍为干燥（不能完全干燥）的涂片直接浸泡于固定液内至少15 ～30min。
（2）因细胞容易脱落，宜以一个盛有固定液的容器只固定一例标本的涂片；一个容器固定多例涂片时，有可能造成的肿瘤细胞交叉污染。
（3）必要时可将标本涂在硅化载玻片上，以防脱落。
（4）固定液重复使用时，应先用滤纸过滤。
（5）95%乙醇固定液多次重复使用时，需测定其浓度比重，乙醇浓度低于90%时应予弃用。
2．滴加法：将固定液滴加于平放的干燥涂片上，应避免因固定液挥发造成沉淀。
（四）固定后未染色涂片的保存或邮寄：涂片固定15min后取出，立即滴加数滴甘油于涂膜上。
对该涂片进行染色前，应先将其置于95%乙醇中溶去甘油。
五、涂片的染色最常用于细胞病理学涂片检查的是苏木素－伊红（HE）染色和巴氏染色。
（一）苏木素－伊红（HE）染色。
（二）染色程序1．石蜡切片HE染色（常规HE染色）（1）二甲苯Ⅰ 5～10min（2）二甲苯Ⅱ 5～10min（3）无水乙醇Ⅰ 1～3min（4）无水乙醇Ⅱ 1～3min（5）95%乙醇Ⅰ 1～3min（6）95%乙醇Ⅱ 1～3min（7）80%乙醇 1min（8）蒸馏水 1min（9）苏木素液染色 5～10min（10）流水洗去苏木素液 1min（11）1%盐酸-乙醇 1～3s（12）稍水洗 1～2s（13）返蓝（用温水或1%氨水等） 5～10s（14）流水冲洗 1～2min（15）蒸馏水洗 1～2min（16）0.5%伊红液染色 1～3min（17）蒸馏水稍洗 1～2s（18）80%乙醇 1～2s（19）95%乙醇Ⅰ 2～3min（20）95%乙醇Ⅱ 2～3min（21）无水乙醇Ⅰ 3～5min（22）无水乙醇Ⅱ 3～5min（23）石炭酸-二甲苯 3～5min（24）二甲苯Ⅰ 3～5min（25）二甲苯Ⅱ 3～5min（26）二甲苯Ⅲ 3～5min（27）中性树胶封固注：①（12）和（13）项可省去，但（14）的冲水时间需延长至10～15min （细胞核显示更清晰）。
②（23）项可用无水乙醇代替；北方地区可省略。
2．冰冻切片HE染色（1）冰冻切片固定 10～30s（2）稍水洗 1～2s（3）苏木素液染色（60℃） 30～60s（4）流水洗去苏木素液 5～10s（5）1%盐酸-乙醇 1～3s（6）稍水洗 1～2min（7）返蓝（用温水或1%氨水等） 5～10s（8）流水冲洗 15～30s（9）0.5%伊红液染色 1～2min（10）蒸馏水稍洗 1～2min（11）80%乙醇 1～2min（12）95%乙醇 1～2min（13）无水乙醇Ⅰ 1～2min（14）无水乙醇Ⅱ 1～2min（15）石炭酸-二甲苯 2～3min（16）二甲苯Ⅰ 2～3min（17）二甲苯Ⅱ 2～3min（18）中性树胶封固注：①（7）和（8）项可省去，但（9）的冲水时间需延长至10～15min（细胞核显示更清晰）。
②（15）项可用无水乙醇代替；北方地区可省略。
㈡染色结果：细胞核呈蓝色，细胞浆、肌纤维、胶原纤维和红细胞呈不同程度的红色。