液质联用检测碳酸类饮料中的苯甲酸和山梨酸
液相色谱法检测苯甲酸、山梨酸、糖精钠的疑难详解
液相色谱法检测苯甲酸、山梨酸、糖精钠的疑难详解1、苯甲酸、山梨酸、糖精钠是衡量食品卫生质量的重要指标，苯甲酸、山梨酸的检测参照GB/T5009.29-2021，糖精钠的检测参照GB/T5009.28-2021，即可开展试验。
苯甲酸、山梨酸、糖精钠虽是较常见的检测项目，但是要得到一个精确牢靠的结果，也存在肯定的难度，很多新手常消失因对方法理解发生偏差而检测出错的事故。
笔者依据自己多年该方面工作的实际阅历动身，以苯甲酸、山梨酸为着重点，从样品前处理、检测仪器的选择、超标时的推断等几个易出问题的方面，进行了具体的阐述。
2、样品前处理的留意事项GB/T5009.28-2021和GB/T5009.29-2021在文字结构上有缺陷，在涉及用仪器法测定苯甲酸、山梨酸、糖精钠时，只叙述了液体样品的前处理方法，没有涉及对固体样品的前处理。
食品样品往往含有大量的油脂、蛋白质，对提取极为不利；如处理不洁净也会污染色谱柱，影响检测工作。
这类样品处理的关键在于如何找到一种较抱负的沉淀剂，尽量排解待测样品中的油脂、蛋白质，且不影响待测物组分的回收率。
GB/T5009.29-2021使用5%硫酸铜溶液沉淀蛋白，对于蛋白质含量较低的食品尚可，对于豆粉、奶粉、月饼等高油脂、高蛋白样品则沉淀效果不抱负。
如用10%钨酸钠溶液作为沉淀剂，效果好些；如用10%亚铁氰化钾溶液和20%醋酸锌溶液则效果更抱负(这是笔者目前用过最抱负的沉淀剂)。
详细操作步骤如下：取肯定量样品，捣碎，利用四分法原理称取样品5.0克于50ml比色管中，加水20ml，浸泡、振荡匀称，加入氢氧化钠溶液(1mol/L)1.0ml，加入9.5mL10%亚铁氰化钾溶液，9.50mL20%乙酸锌溶液，定容，振荡使其充分混匀后,用滤纸初滤除去沉淀物,初滤液过0.45m微孔滤膜,收集滤液于样品瓶中，样品处理液和标准有溶液各进样5uL测定。
用这种方法简洁易行，接触有机试剂少，重复性和回收率都令人满足；缺点是肯定要用液相色谱法检测，有肯定局限。
高效液相色谱法快速测定饮料中的苯甲酸_山梨酸和糖精钠
第34卷第10期辽宁化工Vol.34,No.10 2005年10月Liaoning Chemical Industry October,2005分析检测高效液相色谱法快速测定饮料中的苯甲酸、山梨酸和糖精钠刘渭萍(辽宁省产品质量监督检验院,辽宁沈阳110004)摘要:将饮料样品定量稀释后,用针筒式水膜过滤器处理后,直接进样,外标法进行液相色谱定性、定量分析。
用此方法进行了不同水平的加标回收率测试,证明方法快捷可靠,非常适用于大量的样品的快速测定。
关键词:食品添加剂;针筒式水膜过滤器;苯甲酸;山梨酸;糖精钠中图分类号:O657.7+2文献标识码:A文章编号:10040935(2005)10045403随着化学添加剂的诞生和发展,人类健康不断受到威胁。
食品添加剂对人体的毒性概括起来有致癌性、致畸性和致突变性[1,2],这些毒性要经过较长时间才能显露出来,即对人体产生潜在的毒害[3,4],这也是人们关心食品添加剂安全性的原因。
近年来我国使用的食品添加剂由20世纪70年代的几十种发展到目前卫生部颁发许可使用的1516种[5,6](截止到1997年7月),食品添加剂的绝对用量虽然只占食品的千分之几到万分之几[7,8],但是随着现代食品工业的发展,食品的种类日益增加,食品添加剂的超量和超范围使用现象十分严重,因此食品添加剂对人类产生了极大的危害,对食品添加剂的检测也越来越受到人们的重视。
1实验部分1.1仪器与试剂(1)Agilent1100液相色谱(二级管阵列检测器)。
(2)甲醇(色谱纯)。
(3)水(石英亚沸二次蒸馏水)。
(4)乙酸铵溶液(0.02mol/L):称取1.54g乙酸铵,加石英亚沸二次蒸馏水溶解至1000mL,经滤膜(0.45L m)过滤。
(5)碳酸氢钠溶液(20g/L):称取2g碳酸氢钠(优级纯),加水至100mL,振摇溶解。
(6)苯甲酸标准储备液:准确称取0.1000g (精确至0.0001g)苯甲酸(色谱纯),加碳酸氢钠溶液(20g/L),加热溶解,移入100mL容量瓶中,加水定容至100mL,苯甲酸含量为1mg/m L。
饮料中6种防腐剂的高效液相色谱法同时测定
饮料中6种防腐剂的高效液相色谱法同时测定作者：徐霞顾成鹏李殷余花来源：《科技资讯》 2012年第7期徐霞顾成鹏李殷余花(常州市产品质量监督检验所江苏常州 213001)摘要:目的:建立高效液相色谱法同时测定饮料中苯甲酸、山梨酸、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯等6种防腐剂的分析方法。
方法:样品用水溶解,去除蛋白后过滤待测。
检测时以甲醇-乙酸铵(0.02M)为流动相,经梯度洗脱,在238nm 波长处进行检测,以外标法定量。
结果:6种防腐剂的加标回收率在93.2%～103.8%,相关系数0.9996～0.9999,检出限0.01～0.03g/kg。
结论:本方法简单,快速,灵敏度高,重现性好,可以满足饮料中防腐剂的检测要求。
关键词:高效液相色谱法防腐剂饮料中图分类号:TQ 文献标识码:A 文章编号:1672-3791(2012)03(a)-0118-01防腐剂是用于保持食品原有品质和营养价值为目的的食品添加剂,但是有研究表明,食用含过量防腐剂的食品有可能对人体健康产生不利影响。
目前,在饮料中常见的添加剂有苯甲酸、山梨酸、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯等,这六种防腐剂均有相应的国标检测方法,但并无同时测定方法。
本文利用高效液相色谱对其进行了同时测定,且处理方法简单快速,分析时间短,灵敏度高。
1 材料和方法1.1 分析方法1.1.1 样品前处理乳饮料和果汁饮料:称取5.00g(精确到0.01g)样品于50mL比色管中,加少量水后分别加入5mL亚铁氰化钾溶液和5mL乙酸锌溶液,再用水定容至刻度,摇匀后离心,取上清液过0.22μm滤膜,待测。
碳酸饮料:称取5.00g(精确到0.01g)样品于50mL比色管中,超声脱气后用水定容至刻度,摇匀后过0.22μm滤膜,待测。
1.1.2 检测条件检测波长:238nm、柱温:30℃、进样量:10μl、流速:0.7mL/min、采用甲醇和0.02M乙酸铵溶液进行梯度洗脱,洗脱程序为:0～6min,甲醇10%;7min～11min,甲醇70%;12min～15min,甲醇10%;2 结果2．1．1 检测波长的选择由苯甲酸、山梨酸、对羟基苯甲酸酯类的紫外吸收光谱图可知,它们的最大吸收波长分别为223.3、254.0、256.4。
高效液相色谱法同时检测碳酸饮料中安赛蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精钠含量
高效液相色谱法同时检测碳酸饮料中安赛蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精钠含量摘要: 采用高效液相色谱法同时检测饮料中的安赛蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精钠。
样品经除乙醇（如果含有乙醇），氨水调pH至中性，定容，过水相微孔滤膜，以 C18 （6 × 250mm）色谱柱分离，用配紫外检测器的高效液相色谱仪进行检测。
结果显示安赛蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精钠浓度在 1.0mg/ L ～ 100. 0mg/ L 范围内呈线性关系，回收率在87% ～ 98% 之间，相对标准偏差在 1%以下，最低检测限0.5mg/kg，适用于同时检测碳酸饮料中的安赛蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精钠的含量。
关键词:碳酸饮料；安赛蜜；苯甲酸; 山梨酸; 糖精钠; 高效液相色谱仪防腐剂能抑制微生物生长繁殖，在食品中应用普遍，我国到目前为止已批准了32种使用的食物防腐剂，其中最常用的有苯甲酸钠、山梨酸钾等经常用于食品防腐，苯甲酸钠价格低廉，主要用于碳酸饮料和果汁饮料。
糖精钠及安赛蜜作为甜味剂应用于食品中调整食品口味，它们属于高倍甜味剂。
这些产品的甜度都比蔗糖高，现在糖精钠的使用得越来越少，而安赛蜜普遍添加到饮料中。
但过量使用会对人体产生毒副作用，甚至引发癌症。
因而对各类食品进行安全质量控制尤为重要。
现有的国家标准方法中，只有同时测定苯甲酸、山梨酸、糖精钠的方法。
由于碳酸饮料中一般添加安赛蜜比较普遍，很少添加糖精钠，在日常工作中，为节约时间提高分析效率，就要求检测人员研究出适合食品中普遍存在的多种添加剂同时测定的检测方法。
1 材料与方法1. 1 仪器（1）赛默飞世尔高效液相色谱仪U3000带紫外检测器；（2）C18 ( 4.6× 250mm) 色谱柱；(3)万分之一电子天平；（4）无油真空抽滤装置 (5)水浴锅（6）刻度吸管10mL,移液管5mL,容量瓶50mL(7)0.22μm水相微孔滤膜1.2 试剂：（1）盐酸（优级纯）；（2）氨水 ( 优级纯) ; （3）甲醇 ( 色谱纯 ) ;（4）醋酸铵(20mmol/L)：称取1.54g优级纯醋酸铵，加入少量水溶解后，转入1000mL的容量瓶中，加水定容到刻度，经0.22μm水相微孔滤膜用真空抽滤装置抽滤后备用。
高效液相色谱法测定饮料中的苯甲酸、糖精钠、山梨酸
苯 甲酸 、 山梨 酸 、糖 精 钠 标 准 物 质 ：纯 度 均 ＞ 柱 ，各 峰 能达 到 有 效 分 离 （ 离度 均 大 干 １ ５ ， 分 ．）
２ 、仪 器 与设备
ＬＣ～１ ＡＶＰ高效 液 相 色谱 仪 ，电 子天 平 （ 多 的 影 响 ，同 样长 度 的 色谱 柱 ，３ｂ ｍ粒 径 的 填 料 分 ０ 赛 ｔ
检 测波长 ：２ ０ ｍ； ３ｎ
进样 量 ： １ ． 。 ０ｔｌ Ｊ
４ 、标 准溶 液的 配置
用超 纯 水分 别 将 ３ 种标 准 物 质配 置成 约 １ ／ ｍｇ ｍｌ
禁 、滥 用 以及 超 范 围 、超 标 准 使 用添 加 剂 ，都 会给 的标 准 储备 溶液 （ 容时 可加 入 １ ２ 无水 乙 醇消 定 — 滴 食 品 质量 、安 全 卫生 以 及 消费 者 的健 康 带来 巨大 的 泡 ），使用 时用 超纯 水稀释 成适 宜浓 度的混 合 损 害 。食 品添 加 剂 的种 类和 数 量越 来 越 多 ，对 人们 健康 的 影 响也 就越 来 越大 。随 着研 究 的不 断 改进 和
前 关于 食 品 中防 腐 剂与 甜 味剂 的 检测 方 法 有很 多 ，
［１ １ ２１ ３
￣
主 要 涉 及 的检 测 方 法 有 薄 层 色谱 法…、气 相 色谱 法 棒小 心将 样 品转移 至 ２ ｍｌ ５ 容量 瓶 中 ，并用 少量 水 清 液 相 色 谱 法 等 。本 文 在 液 相 色谱 方 法 基 础 洗烧 杯 内壁 ，清 洗液 一 并转 移 至容 量 瓶 中 ，并加 水 “
测。
上对 色 谱 条件 进一 步 优 化 ，同 时检 测 饮料 中三 种 食 定容 至 刻度 ，摇 匀 ，经０ ４ ｍ水 系滤膜 过 滤 ，待 ．５ 品添加 剂 ，使其 检测 效果 更佳 、可操 作性 更 强。
高效液相色谱法测定饮料中山梨酸和苯甲酸含量
高效液相色谱法测定饮料中山梨酸和苯甲酸含量实验八、高效液相色谱法测定饮料中山梨酸和苯甲酸含量【目的与要求】1．掌握高效液相色谱法测定碳酸饮料中苯甲酸和山梨酸的原理和方法2．了解高效液相色谱仪的基本结构和使用方法3．熟悉碳酸饮料样品的处理方法【方法原理】苯甲酸和山梨酸广泛用于食品防腐剂，能够引起人的再生障碍性贫血，粒状白细胞缺乏等。
因此国家严格限制其使用量。
在本实验中，样品首先经过超声和加热处理，以除去二氧化碳和乙醇。
然后经滤膜过滤后注入高效液相色谱仪，通过反相C18液相色谱柱分离后，紫外检测器230nm波长处检测。
以色谱峰的保留时间定性，色谱峰面积在一定范围内与浓度呈线性关系进行定量分析。
【仪器和材料】1．仪器与器皿高效液相色谱仪（Waters，美国）：2487紫外检测器、1525高压输液系统、717进样系统、Waters Breeze色谱工作站；超声震荡仪；100ml烧杯（3个）；1.00ml 和100μL移液枪；离心管若干个；离心管架；微孔滤膜（0.22μm）。
2．试剂（1）甲醇（色谱纯）；醋酸铵溶液（0.02mol/L，色谱纯）；流动相使用前均超声脱气处理10min。
（2）山梨酸储备溶液(1.0 mg/ml）：准确称取0.2500g山梨酸，加超纯水定容至250ml。
（3）苯甲酸储备液（1.0 mg/ml）：准确称取0.2500g苯甲酸，加超纯水定容至250ml。
【操作步骤】1．样品处理碳酸饮料（雪碧）：移取10ml碳酸饮料于烧杯中，超声处理5min。
然后用微孔滤膜（0.22 μm）过滤于另一烧杯中，滤液备用。
吸取100 μL滤液于离心管中，并加入900 μL超纯水，混合均匀标记为样品。
2．标准溶液配制（1）取一定量的苯甲酸储备液，经滤膜过滤于离心管中。
吸取50 μL 滤液于另一离心管并加入950μL 超纯水，得到50 μg/ml 的苯甲酸标准品，混合均匀后标记为苯甲酸标准品。
（2）同理得到50 μg/ml 的山梨酸标准品，做好标记。
液相色谱法测样品中苯甲酸_山梨酸_糖精钠的几种前处理方法
发病率每5~6年从最低点升至高峰,然后逐年下降,5~6年至谷底,然后再逐渐上升。
且升高趋势明显,2006-2011年将有可能超过1995-1998年的高峰期。
3讨论自1985年在聊城发现HFRS以来,几年间迅速发展为山东最严重的疫区之一。
从1992-2003年的流行趋势,HFRS发病率首先呈上升趋势,在1995年达到历史最高峰。
然后逐年下降,至2002年和2003年分别降到4157/10万和5153/10万。
如果仅从这二年的情况看,容易得出HFRS在聊城已有所控制,发病率明显减少的结论。
但从以往的报道的总体看,这种观点未必正确。
因为有关的报道证实,HFRS发病率有一定的周期性,最近几年虽然发病率明显降低,但从以往的流行周期可以看出,现在正处于发病率的低谷期,今后很有可能呈现逐步上升趋势,如果我们仅从几年的发病率就得出乐观的结论,放松警惕,有可能会使HFRS发病率重新急剧上升,带来严重后果。
按我们所建立的模型预测,聊城市将有可能在2008-2013年间,HFRS发病率均超过1995年的发病率,在30/10万以上,这是十分危险的。
这个结果是我们通过灰色系统GM(1,1,sin X)预测模型得出的理论推论,是假定相对于过去的几年不增加干预措施的推论。
从研究结果中我们还观察到,本地区HFRS发病似乎有周期延长、高峰推后的趋势。
这是否与疫源地宿主的生态学变化因素、居民的社会经济变化因素、预防措施等人为干预因素有关,十分值得进一步观察和研究。
值得注意的是:无论从HFRS具有周期性的经验推测或用灰色系统GM(1,1,sin X)预测模型预测,均提示我们,有必要采取更加有效的措施预防HFRS的发病。
虽然这几年我们的有关部门采取了一些措施,比如灭鼠、HFRS疫苗预防免疫接种、加强健康教育、阻断传播途径等方法,但并未取得理想的效果。
这是因为:¹很少有疫区达到控制HFRS发病要求的鼠密度(<1%);疫区成年人HFRS疫苗接种率仅为5%~10%162,而且就聊城的情况,疫苗接种对象主要是城市人口和学生,作为主要易感人群的农村人口有可能更低;º由于乡镇、农村卫生组织结构尚不完善,健康教育、阻断传播途径等也未能取得理想效果。
液质联用法同时测定植物饮料中的3种防腐剂和4种甜味剂
液质联用法同时测定植物饮料中的3种防腐剂和4种甜味剂丘福保，卢丽明，薛荣旋，陈华宜(中山市疾病预防控制中心，中山528400)摘要：目的：建立了一种超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)法测定植物饮料中山梨酸、苯甲酸、脱氢乙酸、安赛蜜、甜蜜素、糖精钠和阿斯巴甜的分析方法。
方法样品以超纯水稀释，过0.22pm滤膜后直接上机测定。
方法：采用Waters Acquity UPLC BEH C18柱(2.1mm x100mm, 1.7“m)为分析柱，以10mmol/L乙酸钱和乙睛作为流动相进行梯度洗脱。
在电喷雾负离子模式(ESI-)下用多重反应监测模式(MRM)进行检测。
结果：在优化的实验条件下，7种食品添加剂在各自的浓度范围内线性关系良好(r2均〉0.995),方法检出限为3.0x10-8g/kg-4.5x10-g/kg，定量限为1.0x10"g/kg〜1.5x10-4g/kg，平均加标回收率在89.3%-109%之间，相对标准偏差1.2%-&4%。
结论：该方法前处理简单，灵敏度高，适用于植物类饮料中3种防腐剂和4种甜味剂的快速测定。
关键词：液质联用；植物饮料；防腐剂；甜味剂中图分类号：R155.5+9/TS202.3文献标识码：A文章编号：1006—2513(2020)09—0079—06doi：10.19804/j.issn1006—2513.2020.09.013Simulta neous determ in ati on of three preservatives and foursweete n ers in pla nt beverage by ultra performs n ee liquidchromatography-tandem mass spectrometryQIU Fu-bao,LU Li-ming,XUE Rong-xuan,CHEN Hua-yi(Zhongshan City Center for Disease Control and Prevention,Zhongshan528400)Abstract:Objective:A method was developed for determination of sorbic acid,benzoic acid,dehydroacetic acid, acesulfame potassium,sodium N—cyclohexylsulfamate,saccharin sodium and aspartame in plant beverage using ultra performance liquid chromatography—tandem mass spectrometry(UPLC—MS/MS).Methods:Samples were diluted with distilled water and filtered through0.22pm microporous membrane.Samples were separated on a Waters Acquity UPLC BEH C18column(2.1mm x100mm, 1.7pm)with gradient elution with10mmol/L acetate and acetonitrile as mobile phases.Seven food additives were determined by multiple reaction monitoring(MRM)mode of electrospray negative ion source.Results:Under the optimal experimental conditions,the correlation coefficients (r2)of linear calibration curves were more than0.995in the corresponding concentration ranges.The limits of收稿日期：2020-04-08作者简介：丘福保（1986-）,男，硕士，理化检验主管技师。
高效液相色谱法测定饮料中山梨酸和苯甲酸含量
实验八、高效液相色谱法测定饮料中山梨酸和苯甲酸含量【目的与要求】1．掌握高效液相色谱法测定碳酸饮料中苯甲酸和山梨酸的原理和方法2．了解高效液相色谱仪的基本结构和使用方法3．熟悉碳酸饮料样品的处理方法【方法原理】苯甲酸和山梨酸广泛用于食品防腐剂，能够引起人的再生障碍性贫血，粒状白细胞缺乏等。
因此国家严格限制其使用量。
在本实验中，样品首先经过超声和加热处理，以除去二氧化碳和乙醇。
然后经滤膜过滤后注入高效液相色谱仪，通过反相C18液相色谱柱分离后，紫外检测器230nm波长处检测。
以色谱峰的保留时间定性，色谱峰面积在一定范围内与浓度呈线性关系进行定量分析。
【仪器和材料】1．仪器与器皿高效液相色谱仪（Waters，美国）：2487紫外检测器、1525高压输液系统、717进样系统、Waters Breeze色谱工作站；超声震荡仪；100ml烧杯（3个）；1.00ml 和100µL移液枪；离心管若干个；离心管架；微孔滤膜（0.22µm）。
2．试剂（1）甲醇（色谱纯）；醋酸铵溶液（0.02mol/L，色谱纯）；流动相使用前均超声脱气处理10min。
（2）山梨酸储备溶液(1.0 mg/ml）：准确称取0.2500g山梨酸，加超纯水定容至250ml。
（3）苯甲酸储备液（1.0 mg/ml）：准确称取0.2500g苯甲酸，加超纯水定容至250ml。
【操作步骤】1．样品处理碳酸饮料（雪碧）：移取10ml碳酸饮料于烧杯中，超声处理5min。
然后用微孔滤膜（0.22 µm）过滤于另一烧杯中，滤液备用。
吸取100 µL滤液于离心管中，并加入900 µL超纯水，混合均匀标记为样品。
2．标准溶液配制（1）取一定量的苯甲酸储备液，经滤膜过滤于离心管中。
吸取50 µL 滤液于另一离心管并加入950µL 超纯水，得到50 µg/ml 的苯甲酸标准品，混合均匀后标记为苯甲酸标准品。
超高效液相色谱法检测饮料中山梨酸、苯甲酸、糖精钠、咖啡因、安赛蜜
超高效液相色谱法检测饮料中山梨酸、苯甲酸、糖精钠、咖啡因、安赛蜜作者：李花觉来源：《现代食品》 2018年第21期摘要：目的：建立超高效液相色谱检测饮料中的山梨酸、苯甲酸、糖精钠、咖啡因和安赛蜜。
方法：通过优化超高效液相色谱仪的工作条件，建立同时检测 5 种添加剂的方法。
结果：该条件下标准系列线性好，检出限流低，精密度好。
结论：该条件适用于用超高效液相色谱仪检测饮料中山梨酸、苯甲酸、糖精钠、安赛蜜和咖啡因。
关键词：超高效液相色谱；饮料；检测为了改善食品的色、香、味和品质, 食品中通常会加入一定量的防腐剂及甜味剂等食品添加剂[1]。
为保障人们的健康，国家对相关食品添加剂都进行限量并制定了相应的检测方法，但国家标准方法仅限于各种添加剂的分开测定，大大降低了工作效率，还造成了很多不必要的浪费。
本文根据实验室现有仪器条件及技术现状，结合国家标准检测方法，考察了流动相的体系、配比、流动相的流速、柱温、进样量等对测定的影响条件, 进一步优化色谱条件，建立了用超高效液相色谱法同时检测饮料中山梨酸、苯甲酸、糖精钠、安赛蜜和咖啡因的检测方法，该方法具有简单快捷、准确、重现性和选择性好等特点。
1 实验部分1.1 仪器和设备Waters ACQUITY H -Class 超高效液相色谱仪（配有紫外检测器、自动进样器、柱温箱、高压泵、Empower3 色谱工作站），MICROPURE 超纯水制备系统（美国塞默飞世尔公司），超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。
色谱柱ACQUITY UPLC BEHC18（2.1 mm×50 mm，1.7μm)，0.45 μm 滤膜（天津津腾公司）。
1.2 标准系列溶液制备山梨酸、苯甲酸、糖精钠、安赛蜜和咖啡因 5 种物质均为国家标准物质检测中心出的成品，其原液浓度分别为1.0、1.0、1.0、1.0 和0.5 mg·mL-1，根据需要取一定量的原液混合，并用超纯水稀释成相应的质量浓度，其中山梨酸、苯甲酸、糖精钠、咖啡因浓度为1.00、5.00、10.00、15.00 μg·mL-1 和20.00 μg·mL-1，安赛蜜浓度为0.50、2.00、4.00、8.00 μg·mL-1 和10.00 μg·mL-1，经0.45 μm 滤膜过滤后待测。
虚拟实验《高效液相色谱法测定饮料中苯甲酸和山梨酸》实验指导(阮冲)
虚拟实验《HPLC测定碳酸饮料中苯甲酸和山梨酸》实验指导☆目录：一、实验目的二、实验原理三、观看实验操作视频四、虚拟实验操作五、思考题一、实验目的1．掌握高效液相色谱仪的基本结构及使用方法。
2．掌握测定饮料中苯甲酸和山梨酸的基本原理及实验方法。
3．掌握样品处理的一般方法。
二实验原理1．样品混匀超声除去二氧化碳和乙醇后，调节pH 至近中性，经0.45μm滤膜过滤后进高效液相色谱仪，经反相C18 色谱柱分离后，紫外检测器230 nm 波长处检测。
以色谱峰的保留时间定性，利用色谱峰面积在一定范围内与浓度呈线性关系进行定量分析。
三、观看实验操作视频通过观看实验操作视频，对整个实验流程有一定的了解四、虚拟实验操作仪器：岛津高效液相相色谱仪主机和电脑（控制装置）；电子天平；紫外可见分光光度计；超声震荡清洗器，pH计；电热板或电炉；纯水机；抽滤装置。
器材：50ml容量瓶；50ml烧杯；移液管；微孔滤膜（0.45μm）；微量进样器。
试剂：稀氨水（1:1）；苯甲酸标准（）；山梨酸标准（）；碳酸氢钠溶液；甲醇。
一、高效液相色谱实验室检测1.实验准备1.1标准品及所需试剂的配置：（1）稀氨水（1:1）（2）碳酸氢钠溶液：配置的浓度为20g/L，准确称取碳酸氢钠（分析纯）2.00g ，加水溶解至100.00mL。
（3）乙酸铵溶液（0.02mol/L）：称取1.54g 乙酸铵，用超纯水溶解至1000mL，（4）甲醇（色谱纯）（5）苯甲酸标准储备液（5.0mg/mL）：准确称取0.2500g 苯甲酸，加碳酸氢钠溶液25.mL，加热溶解，定容至50.00mL。
（6）山梨酸标准储备液（5.0mg/mL）：准确称取0.2500g 山梨酸，加碳酸氢钠溶液25.mL，加热溶解，定容至50.00mL。
（7）标准混合使用液（含苯甲酸0.5mg/mL，山梨酸0.5mg/mL）：准确吸取各标准储备液5.00mL，加水定容至50.00mL。
2.仪器准备2.1熟悉仪器液相色谱仪的构造主要包括进样系统、检测器系统、高压输液系统及色柱系统。
高效液相色谱法同时测定饮料中的抗坏血酸、糖精、苯甲酸和山梨酸
ｂ ｅｂｇ ｂ Ｈ Ｌ ． Ｔ ｅ ｃ ｐｎ ｔ ｗ ｒ ｅ ｒａ ｓ Ｐ Ｃ ｈ ｅ ｍ ｏｅ ｓ ｅ ｖ ｅ ｙ ｓ ｏ ｎ ｅ ｓ ａａ ｄ ａ ｒａ Ｏ Ｓ ｌ ｎ ｕｉ ｅ ｒｔ ｏ ｐ ｅ ｎ Ｚ ｂｘ ｃ ｕ ｂ ｓ ｇ ｏ Ｄ ｏ ｍ ｙ ｎ ｍ ｔ ｎｌ ５ Ｋ ２Ｏ （ ： ） Ｈ ６ ａ ｅ ａｏ ０ ％ Ｈ Ｐ ４ ０７ （ ＝ ） ｈ ／ ３ ０ ｐ ｓ ｍ ｂ ｅ ａ ａｄ ｔ ｔ ｂ Ｕ －５ Ｔ ｅ ｏｉ ｐ ｓ ｎ ｄ ｅ ｅ ｙ Ｖ ２４ ｈ ｌ ｈ ｅ ｅ ｃ ｄ ， ｃ ｆｃ ｎｓ ｖｒ ｔ ｎ ｔ ｆ ｒ ｍ ｏｅｔ ｏ ｆ ｉ ｔ ｏ ａｉ ｉ ｏ ｈ ｏ ｃ ｐｎ ｓ ｅ ｉｅ ｆ ａ ｏ ｆ ｕ ｏ ｅ ｎ ｆ ７ ｌ ａ ｗ ｒ ａ ｌｓ ａ ２ ， Ｔ ｅ ｏ ｒ ｒ ｉ ｓ ｅ ｌ ｅ ｔ ｎ ｅ ｃ ｐ ｅ ｌ ｓ ｈ ％ ｈ ｒ ｏｅ ｅ ｏ ｔ ｆ ｒ ｍ ｏｅｔ ａｄｄ ｔ ｅ ｖ ｉ ｆ ｏ ｃ ｐｎｎ ｄｅ ｔ ｈ ｃ ｒ ｓ ｈ ｕ ｏ ｅ ｓ ｏ ｅ ｂ ｎ ｂｖｒｇ ｒ ｇ ｆ ｍ ％ ｔ １ ％ ｌ ｋ ｅ ｅ ａ ｅ ｒ ９ ａ ｅ ａ ｓ ｄ ｎ ｏ ０ ｏ 。 ０ ０
（ 一）仪器及试剂 日本岛津ＬＣ ４ －Ａ高效液 相色谱仪，Ｓ Ｄ－Ａ 型紫外检测器，Ｃ Ｒ Ａ Ｐ ２Ｓ － ２ Ｘ数
据处理系统 。
抗坏血酸为生化试剂，糖精为食品纯，苯甲酸 和山梨酸均为分析纯。 （ 二）色 谱 条 件 色谱 柱：２ｃ ５ｍ×４６流动相：甲 ０５ Ｋ Ｐ ４ ｂ－ 醇／．％ Ｈ２Ｏ
ｃａｎ， ｅ ｏ Ａｉ ａｄ ｂ Ａｉ ｉＢｖｒ ｅ ｈｒｅ Ｂｎ ｊ ｃ ｎ Ｓｒｃ ｄ ｅｅ ｇｓ ｉ ｚｃ ｄ ｏ ｉ ｃ ｎ ａ ｂ Ｈｇ Ｐｒ ｒａｃ Ｌ ｕ Ｃｒ ａ ｇ ｐ Ｙ ｎ ｙ ｈ ｆ ｍ ｎ ｉ ｉ ｈ ｍ ｔ ｒ ｈ ａｇ ｉ ｅｏ ｅ ｄ ｏ ｏ ａ ｙ ｑ Ｃｎｓ ｎ Ｚ ｕ ｎ Ｚｕｎ Ｘ ａｇ ｉｇ ｇ ｅｇ， ｈ Ｙ ａ ａ ｎ ｈａ ｄ ｎｐ ， Ｔ ｓｎ ｅ ｉｇ＆ Ｔ ｃ ｏｏ Ｉｓ ｔｔ ｏ Ｚｅ ａｇ ｔ ｅ ｎｌｇ ｎ ｉ ｅ ｈ ｉｎ ｈ ｙ ｔ ｕ ｆ ｊ Ｐ ｏｉｃ Ｈａｇ ｏ ｒ ｅ ｖ ， ｎｚ ｕ ｈ Ａ ａｔａｉ ｍ ｔ ｄ ｐｏｏ ｄ ｄｔ－ ｑ ｎｉ ｔ ｅ ｈ ｉ ｒ ｓ ｆｒ ｅ ｕ ｔ ｖ ｅ ｏ ｓ ｐ ｅ ｏ ｅ ｒ ｍｎｎ ｔ ｔｌ ｃｍ ｏｎｓ ｕ ａｅ ｓ ｉ ｉ ｇ ｅ ｔ ｏ ｐｕｄ ｓ ｌｎｏ ｌ ｎ ｉ ｈ ｉｅ ｉ ｔ ｕ ｙ ｍ
高效液相色谱法同时测定碳酸饮料中5种食品添加剂
图2A 波长228 nm下的色谱图
图2B 波长272 nm下的色谱图
图2 质量浓度为25 μg·mL-1的5种混合标准溶液的色谱图
2.2 乙酸铵的pH
乙酸铵的pH影响添加剂的色谱行为[6]，因此考虑
调节乙酸铵的pH以达到更好的分离目的。
等度洗脱（甲
醇∶乙酸铵=15∶85），根据色谱柱的pH适用范围
（2～11），用乙酸和氨水调节流动相的pH至4.74、
04、5.32、5.53、5.70、6.77、7.40和8.10，pH值对5
种添加剂保留时间的影响见图3，试验结果表明，当
乙酸铵pH为5.53时，5种添加剂的分离效果最好，总
出峰时间为17.5min，为兼顾总运行时间，将流动相甲
醇比例提高为18%。
图3 乙酸铵pH对保留时间的影响图。
HPLC法测定4种市售碳酸饮料中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的含量
HPLC法测定4种市售碳酸饮料中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的含量郑晓楠;白洁;张丹;连文绮;赵贺【摘要】本研究采用高效液相色谱法（HPLC法）检测了4种市售碳酸饮料中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的含量。
结果表明：碳酸饮料中苯甲酸、山梨酸和糖精钠含量分别在20～320μg/mL范围内，线性关系（r>0.9999），平均回收率为99.57%~101.25%，RSD为0.56%~2.54%。
用该方法测定的4种市售饮料中的苯甲酸含量分别为0.13、0.13、0.14μg/mL，山梨酸和糖精钠未检出，均未超过最大添加量。
该方法精密度、重复性和准确度均良好，可用于碳酸饮料中苯甲酸、山梨酸和糖精钠含量的测定。
【期刊名称】《食品安全导刊》【年(卷),期】2016(000)015【总页数】3页(P137-139)【关键词】HPLC;碳酸饮料;苯甲酸;山梨酸;糖精钠【作者】郑晓楠;白洁;张丹;连文绮;赵贺【作者单位】山西农业大学信息学院;山西农业大学信息学院;山西农业大学信息学院;山西农业大学信息学院;山西国新天然气利用有限公司【正文语种】中文食品添加剂具有改善食品品质、防止食品发生腐败变质等特性，近年来在食品加工工艺中大量使用。
同时，违法及过量使用食品添加剂的报道屡见不鲜，也越来越受到消费者的重视。
《食品添加剂使用标准》（GB2760- 201 4）中明确规定了各类添加剂在食品中的最大添加量，其中苯甲酸、山梨酸和糖精钠作为典型的防腐剂和甜味剂常添加在饮料中，最大添加量分别为0.2 g/kg、0.5 g/kg、0.15 g/kg。
目前，食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的检测方法主要是气相色谱法、高效液相色谱法和紫外分光光度法等。
本研究利用高效液相色谱法对4种市售碳酸饮料中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的含量进行了测定。
该方法步骤简单、成本低、回收率高，适合所有碳酸饮料的测定。
1.1 仪器U3000高效液相色谱仪（配有紫外检测器）：戴安中国有限公司；2xZ- 2旋片式真空泵：临海市谭氏真空设备有限公司 KQ5200B型超声波清洗器：昆山市超声仪器有限公司；0.45 μ m有机系微孔滤膜和0.45 μ m水系微孔滤膜：美国Ameritech公司；AUW120D天平：日本SHIMADZU公司；HeaL Force EASy 10超纯水机：力新仪器（上海）有限公司1.2 试剂甲醇（色谱纯）：Fisher Scientific公司；氨水（分析纯）：西陇化工股份有限公司；乙酸铵（分析纯）：西亚试剂；苯甲酸标准品：中国计量科学研究院；山梨酸标准品：中国计量科学研究院；糖精钠标准品：中国计量科学研究院；碳酸饮料样品：维尔康、芬达、雪碧和可乐，均购于当地超市。
HPLC法测饮料中苯甲酸、山梨酸
苯甲酸结构
山梨酸的结构
二：实验部分
（一）
仪器和设备 试剂和原料 溶液的配制 样品前处理
（二）
（三） （四）
（一）仪器和设备
高效液相色谱仪（Agilent Technologies 1200Series）配有二极管阵 列检测器恒温水浴锅、微量进样器、1次性注射器(10uL)、0.45µm滤膜、电 子天平
（二）试剂和原料
氨水、乙酸铵、苯甲酸、苯甲酸钠、山梨酸钾、碳酸氢 钠等试剂均为分析纯，甲醇为色谱纯。实验用碳酸饮料，橙 汁饮料样品均从当地超市购买。
（ 三）溶液的配制
甲醇：经滤膜（0.45µm）过滤。 稀氨水（1+1）:氨水加水等体积混合。 乙酸铵溶液(0.02mol/L):经0.45µm滤膜过滤。 (0.02mol/L): 0.45µm 苯甲酸标准储备液、山梨酸标准储备液。 标准使用溶液：分别各吸取5、10、15、20、25mL苯甲酸 、山梨酸标准储备液转移至编号为1、2、3、4、5的100mL 容量瓶中，加水稀释，定容至刻度后摇匀，此时溶液浓度分别 为50、100、150、200、250µg/mL。
900 800 700 600 y = 3740.4x + 36.195 2 R = 0.999
2500 2000 y = 7911x + 509.98 R2 = 0.9897
1500
500 400 300 200 100 0 0 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25
系列1 线性 (系列1)
DAD1 B, Sig=230,16 Ref=360,100 (A001151.D) 5 .8 1 1 mAU 600 500 400 300 200
-35 mAU -10 -15 -20 -25 -30 DAD1 C, Sig=260,16 Ref=360,100 (A001149.D) 8 .5 2 0 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 min
高效液相色谱法测定饮料中山梨酸和苯甲酸并探究流动相最佳
高效液相色谱法测定饮料中山梨酸和苯甲酸并探究流动相最佳分离比实验报告姓名：尼玛旦增学号：515110910015 同组成员：高夏鑫一、实验目的与要求1、掌握高效液相色谱法测定饮料中苯甲酸和山梨酸的原理和方法2、了解高效液相色谱仪的基本结构和使用方法3、熟悉饮料样品的处理方法二、实验方法与原理苯甲酸和山梨酸广泛用于食品防腐剂，能够引起人的再生障碍性贫血，粒状白细胞缺乏等。
因此国家严格限制其使用量。
在本实验中，样品首先经过超声和加热除去二氧化碳和乙醇，然后过滤注入高效液相色谱仪，经反相C18液相色谱柱分离后，紫外检测器230 nm波长处检测。
以色谱峰的保留时间定性，色谱峰面积在一定范围内与浓度呈线性关系进行定量分析。
三、实验仪器与试剂1、仪器：高效液相色谱仪（LC-20T，日本岛津公司）；LCsolution Multi-PDA色谱工作站（日本岛津公司）；ODs色谱柱（C184.6’250mm,中科院大连化物所）；定量环：20uL；100 ml烧杯若干； 1 ml和100 μl移液枪；离心管若干个；离心管架；容量瓶若干；0.45μm有机相滤膜；过滤器；2、试剂：（1）甲醇（色谱纯）；醋酸铵溶液（0.02 mol/L，色谱纯）；流动相分别超声脱气（10 min）（2）山梨酸储备溶液(1.0 mg/ml）：准确称取0.2500 g山梨酸，加去离子水定容至250 ml。
（3）苯甲酸储备液（1.0 mg/ml）：准确称取0.2500 g苯甲酸，加去离子水定容至250 ml。
（4）氨水（1+1）四、实验步骤 :1、样品处理（雪碧）：吸取20-30 ml碳酸溶液超声5 min，用氨水( 1 + 1)调节pH 至近中性，加至50mL容量瓶中，经0．45μm微孔滤膜过滤，滤液待分析。
（小桃汽）：吸取20-30mL饮料，经干过滤后，取后滤液，用氨水（1+1）调节至pH至中性，加至50mL容量瓶中，经0．45μm微孔滤膜过滤，滤液待分析。
高效液相色谱法测定饮料中的苯甲酸、糖精钠、山梨酸
ａ ｅ ａ ｅ ｒ ｃ ｖ ｒ ａ ｅ ｗａ ｖ ｒ ｇ ｅ ｏ ｅｙ ｒ ｔ ｓ８８． ９％ ～１ ．１ ５ ０８ ３％ ，ＲＳ Ｄ％ ｗａ ９ ８％ ～１． ５ ｓ０． ７ ２ ４％ ，ａ ｈ ｅｅ ｔｏ ｉ ｔ ｎｄ ｔ ｅ ｄ ｔ ｃｉｎ ｌ ｍｉ
（／ ｓ Ｎ＝３ ｅｗ ｅ ． ３ ０ ０ ２ ｇ・ ｇ Ｔ ｅｅｐ ｒ ｅ ｔ ｈｗ ｄｔａ ｔｉ ｍ ｔ ｄｗ ｓｈｇ ）ｂ ｔｅｎ０ ０ ７～ ．９ ｍ ｋ ～． ｈ ｘ ｅｉ ｎ ｓｏ ｅ ｔｈｓ ｅ ｏ ａ ｉ ｍ ｈ ｈ ｈ—ｓｅｄ ｐｅ ，
Ａｂｓｒ ｃ ： ｔ ｂｉｈ ｄ ａ ｅ ｔｄ ｔｒ ｅ ｋｎ ｆｆ ｏ ｄｄｔｖ ｓｗｈｃ ｎ ｄ ｎ ｓｎ ｔａ ｔ Ｅｓａ ｌ ｅ ｎｄ ｔ ｓｅ ｈ ｅ ｉｄｓｏ ｄ ａ ｉ ｅ ｉｈ ｉ ｒ ｋｓｕ ｉ ｇ ＨＰＬＣ． ｉ ｇ ｃ ｌ ｍｎ ｓ ｏ ｉ ｉ Ｕｓｎ ｏ ｕ
食品添加剂是食 品工业 的基 础原料 ， 对食 品的 生产工艺、 产品质量、 安全卫生都起着至关重要的作
用 ， 毕竟不 是食 品 的基 本成 分 ， 但 尽管 在用 于食 品之 前 已在 试验 室 中进 行 多次安 全性 测试 ， 但违 禁 、 滥用
糖精钠是饮料必测项 目。目前关于食品中防腐剂与
ｓｍｐｅ ａ ｄ ｏ ｅ ａ ｌ ｏ ｅ ｅ ｔ ｅ ｔ ｒ ｅ ｋｉｄｓｏ ｏ ｄ ａ ｄｉ ｖ ｓ ｉ ｒｎ ｓ ｉ ｌ ｎ ｐ ｒ ｂ ｅ ｆ ｒｄ ｔｃ ｉ ｔ ｈ ｅ ｎ ｆｆｏ ｄ ｔ ｅ ｎ ｄ ｋ ． ｎｇ ｈ ｉ ｉ
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．
Ｙ ＡＮＧ ａ Ｘｉ ｏ—ｙ ｎ，ＺＨＡＮＧ ｉ Ｉ ａ Ｗｅ ，Ｌ Ｕ
饮料中安赛蜜、苯甲酸、山梨酸等防腐剂的测定实验报告
饮料中安赛蜜、苯甲酸、山梨酸等防腐剂的测定【摘要】建立了饮料中安赛蜜、苯甲酸和山梨酸的高效液相色谱测定方法。
采用Phenomenex ODS色谱柱(4.6mm×15cm)作为分析柱,以甲醇0.02moI /L乙酸铵(pH6.0)(15:85)作为流动相,各组分得到很好的分离,检测波长为230 nm,进样量20μL,柱温30℃,采用外标法定量。
该方法精密度和准确度好,样品处理简单,适用于常规质量检测。
【关键词】高效液相色谱法安赛蜜苯甲酸山梨酸饮料引言:在饮料中防腐剂经常使用,它们可以改善食品的保质期,但长期以来对于其安全性多有争议。
政府为了保障人民的健康,制订了食品卫生标准,对其进行严格的管理,只要遵循GBfr2760的要求添加.不会对人体健康造成危害。
但一些厂家为了降低成本,延长产品的保质期,常违规或超标使用防腐剂。
有些产品防腐剂含量甚至超标几十倍。
故测定饮料乃至其他食品中的防腐剂至关重要。
探讨高效液相色谱法,同时测定饮料中安赛蜜、苯甲酸、山梨酸三种防腐剂的含量。
本法简单、快速,可满足日常检测的要求,对其他食品中安赛蜜、苯甲酸和山梨酸的检测,也具有一定的借鉴意义。
目前用于测定饮料或食品中的安赛蜜、苯甲酸、山梨酸等防腐剂的方法主要有:1.分配色谱法根据各待测物在互不相容的两相中的溶解度的不同,因而具有不同的分配系数。
在色谱柱上,随着流动相的移动,这种分配平衡需进行多次,造成各待测物的迁移速率不同,从而实现分离的过程。
通常使用C18 柱或ODS柱。
流动相一般为极性或非极性溶剂。
若固定相的极性大于流动相的极性,因此进行的色谱过程叫做正向色谱,反之,就称为反向色谱。
2.离子对色谱法采用离子对色谱法.在Zorbax Eclipse XDB-C8柱上.以甲醇;水(38:62)内含0.02M的HAc-NaAc和0.005M的四丁基溴化铵作流动相,紫外230nm检测.快速测定含乳饮料中的糖精钠、苯甲酸和山梨酸的三种食品添加剂的量。
高效液相色谱法测定碳酸饮料中苯甲酸和山梨酸的含量
高效液相色谱法测定碳酸饮料中苯甲酸和山梨酸的含量廖鹏【摘要】目的:探索高效液相色谱法来同时测定碳酸饮料中苯甲酸、山梨酸含量的方法.方法:试样通过水浴蒸发定容,进样后以保留时间和峰面积进行定性和定量,检测波长为230 nm,流动相为1.54 g/L的体积比为85:15的乙酸铵-甲醇溶液,最佳柱温为30℃.结果:苯甲酸的回收率为86.5％～100.1％,山梨酸的回收率为99％～103.4％,样品中苯甲酸含量为0.0012 g/kg,山梨酸含量为0.1854 g/kg.用于苯甲酸和山梨酸的定量分析.【期刊名称】《浙江化工》【年(卷),期】2018(049)001【总页数】4页(P44-46,49)【关键词】高效液相色谱法;苯甲酸;山梨酸【作者】廖鹏【作者单位】成都理工大学材料与化学化工学院, 四川成都 610059【正文语种】中文0 引言苯甲酸、山梨酸及其盐用作食品防腐剂，广泛应用于日常食品。
苯甲酸及其钠盐具有抗菌作用。
通常情况下，苯甲酸被认为是安全的。
然而，苯甲酸的长期摄入也可能与哮喘，荨麻疹，代谢性酸中毒及其他不良反应有关，包括婴儿和儿童[1]。
山梨酸（钾）可以有效抑制霉菌等细菌的活性，并且比杀菌更有效抑制细菌生长，有效延长食品的保存期限。
随着我国食品工业的发展，在食品加工过程中对食品防腐剂需求日益增长，一些商人为追求更高的利润，甚至过量添加食品防腐剂。
有资料表明过量使用苯甲酸和山梨酸可引起再生障碍性贫血，粒状细胞缺乏[2]。
因此，国家严格限制其使用量。
目前，苯甲酸、山梨酸的测定方法主要有气相色谱法[3]、高效液相色谱法[4]、离子色谱法[5]、紫外分光光度法[6]等方法。
高效液相色谱（HPLC）是在经典液相色谱法的基础上，引入气相色谱法，高压泵，高效固定相和高灵敏度检测仪等先进技术，具有分析速度快，分离效率高，灵敏度高，操作自动化，应用范围广等特点[7]。
1 材料与方法1.1 主要仪器与试剂高效液相色谱仪（LC-20A，日本岛津股份有限公司）；DZKW-S-8电热恒温水浴锅（北京光明医疗仪器厂）；电子分析天平（DT200，成都俊鸿达科技有限公司）；甲醇（色谱纯）；乙酸铵溶液（0.02 mol/L）：称取 1.54 g 乙酸铵，加水至 1000 mL溶解后经0.45 μm 滤膜过滤；稀氨水（1+1）：氨水和水等体积混合；碳酸氢钠溶液（20 g/L）：称取2 g碳酸氢钠（优级纯），加水至100 mL 后振摇溶解；苯甲酸、山梨酸标准品；碳酸饮料样品：芬达橙味汽水（瓶装600 mL）。
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实验四高效液相色谱-质谱联用检测饮料中的苯甲酸和山梨酸含量
（一）目的与要求
1.了解液相色谱-质谱联用的基本原理及分析流程；
2.了解液相色谱-质谱联用操作技术；
3.掌握常见防腐剂的测定方法。
（二）原理
苯甲酸和山梨酸是饮料中较为常用的有机酸类防腐剂，对霉菌等微生物有抑制作用。
苯甲酸作为苯系的化合物，会在身体内有所蓄积对身体造成损害，而山梨酸是一种不饱和脂肪酸，毒性虽然较之苯甲酸小，但是过量、长期食用将危害人体肝脏、肾脏功能。
我国食品标准中规定苯甲酸、山梨酸在碳酸类饮料中的加入量不得超过0.2 g/kg。
液相色谱-质谱法（Liquid Chromatography/Mass Spectrometry，LC-MS）将应用范围极广的分离方法——液相色谱法与灵敏、专属、能提供分子量和结构信息的质谱法结合起来，必然成为一种重要的现代分离分析技术。
但是，LC是液相分离技术，而MS是在真空条件下工作的方法，因而难以相互匹配。
LC-MS经过了约30年的发展，直至采用了大气压离子化技术Atmospheric pressure ionization，API）之后，才发展成为可常规应用的重要分离分析方法。
现在，在生物、医药、化工、农业和环境等各个领域中均得到了广泛的应用，在组合化学、蛋白质组学和代谢组学的研究工作中，LC-MS已经成为最重要研究方法之一。
质谱仪作为整套仪器中最重要的部分，其常规分析模式有全扫描模式（Scan）、选择离子监测模式（SIM）。
（一）全扫描模式方式（Scan）：最常用的扫描方式之一，扫描的质量范围覆盖被测化合物的分子离子和碎片离子的质量，得到的是化合物的全谱，可以用来进行谱库检索，一般用于未知化合物的定性分析。
（二）选择离子监测模式（Selective Ion Monitoring，SIM）：不是连续扫描某一质量范围，而是跳跃式地扫描某几个选定的质量，得到的不是化合物的全谱。
主要用于目标化合物检测和复杂混合物中杂质的定量分析。
（三）实验部分
3.1 试剂与仪器
高效液相色谱仪（美国安捷伦），C18反相色谱柱，单级四极杆质谱（美国安捷伦）。
苯甲酸、山梨酸、乙酸铵均为分析纯，甲醇为色谱纯，饮料购于超市，实验用水均为超纯水。
3.2 色谱条件
色谱柱：C18反相柱（4.6 mm×150 nm，10 μm），流动相：甲醇：乙酸铵水溶液（0.02 mo l·L-1）=5：95，等度洗脱，流速：0.2 mL·min-1，柱温：30 ℃，进样量：20 μL。
3.3 质谱条件
电喷雾离子源（ESI）；电喷雾电压 3.5 kv，毛细管电压：3.5 kv，干燥气：N2，干燥气温度：300 ℃，流速为10.0m L·min-1，扫描方式：单级扫描；离子极性：负离子；扫描范围（m·z-1）：100~150，苯甲酸、山梨酸荷质比分别选择为：121、111。
3.4 样品处理
取适量饮料样品经0.45μm滤膜过滤，其滤液供测定。
（四）实验步骤
取一定量混合标准溶液（苯甲酸、山梨酸）和样品溶液，稀释至中性，过滤后进高效液相色谱-质谱检测器检测，根据保留时间和m/z进行定性。
表1
（五）问题与讨论
1. 质谱如何定性和定量？
2. 质荷比和分子量是否一样？
3. 电喷雾离子源原理？。