土壤中放线菌的采集、分离、培养、发酵及提取实验报告
放线菌发酵实验报告
放线菌发酵实验报告1.实验目的本实验旨在通过对放线菌进行发酵实验，了解放线菌的生长规律、代谢产物及其应用。
2.实验原理放线菌是一种土壤中常见的革兰氏阳性细菌，具有放射状的菌丝和球状的孢子。
放线菌通过分泌抗生素、激素和类胺物质等代谢产物来抵御周围环境中的竞争者。
通过发酵实验，可以观察到放线菌在不同条件下的生物学特性和产物的形成。
3.实验材料-放线菌培养物-发酵培养基-培养基补充物（如葡萄糖、琼脂等）-反应器、培养皿等实验器材-空气消毒器4.实验步骤4.1放线菌的预处理首先，取出保存在冰箱中的放线菌培养物，将其接种到含有发酵培养基的培养皿中，并在恒温培养箱中以适当的温度（如30℃）和湿度条件下培养一段时间，使放线菌处于活跃状态。
4.2发酵培养基的制备按照实验需求，准备含有所需补充物（如葡萄糖、琼脂等）的发酵培养基。
将培养基倒入反应器中，并经过高温高压灭菌处理，以消除外源细菌的干扰。
4.3放线菌的发酵培养将培养好的放线菌接种到含有发酵培养基的反应器中，并进行适当的搅拌和通气处理，以提供放线菌生长所需的氧气和营养物质。
4.4实验观察和数据记录在放线菌发酵的过程中，及时观察和记录菌体形态、生长速度、颜色变化等指标，并记录在实验笔记中。
同时，通过采集发酵液中的样品，利用适当的方法进行测定，以获取放线菌产生的代谢产物的相关数据。
5.实验结果与讨论在实验观察和数据记录的基础上，分析放线菌的生物学特性和产物的形成规律。
通过比较不同实验条件下的实验结果，进一步讨论放线菌的发酵行为和产物的差异变化，为后续本领域的相关研究提供参考和启示。
6.实验结论通过本次发酵实验，我们可以初步了解放线菌的生长规律、代谢产物及其应用。
进一步研究放线菌的代谢途径和产物的分离纯化等工作，将有助于放线菌在医学、农业等领域的应用发展。
7.实验总结通过本次实验，我们对放线菌的发酵生物学有了更深入的认识。
同时，在实验操作的过程中，我们也学会了使用实验器材和技术，提高了实验操作的熟练度。
实验2 土壤中稀有放线菌的分离--土壤样品采集
实验2 土壤中稀有放线菌的分离--土壤样品采集1 目的1.1 了解微生物分离和纯化的原理1.2 掌握常用的分离纯化微生物的方法2 原理从混杂微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物分离与纯化。
其基本原理是选择适合于待分离微生物的生长条件，如营养成分、酸碱度、温度和氧等要求,或加入某种抑制剂造成只利于该微生物生长，而抑制其他微生物生长的环境，从而淘汰一些不需要的微生物。
土壤是微生物生活的大本营，它所含微生物无论是数量还是种类都是极其丰富的。
因此土壤是微生物多样性的重要场所，是发掘微生物资源的重要基地，可以从中分离、纯化得到许多有价值的菌株。
本实验将采用不同的培养基从土壤中分离不同类型的微生物。
3 材料3.1 培养基淀粉琼脂培养基(高氏I号培养基)，牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，马丁氏琼脂培养基，查氏琼脂培养基。
3.2 仪器或其它用具取样铲、塑料袋、记号笔、1．布点：按照土壤类型和作物种植品种分布，按土壤肥力高、中、低分别采样。
一般150-300亩（不同地区可根据情况确定）采取一个耕层混合样，采样点以锯齿型或蛇型分布，要做到尽量均匀和随机。
应用土壤底图确定采样地块和采样点，并在图上标出，确定调查采样路线和方案。
2．采样部位和深度：用取样铲，将表层5cm左右的浮土除去，取5～25cm处的土样0.5-1kg，在采样过程中，采取的混合样一般都大于该重量，所以要去掉部分样品，将所有采样点的样品摊在塑料布上，除去动植物残体、石砾等杂质，将大块的样品整碎，混匀，摊成园形，中间划十字分成四份，然后对角线去掉两份，若样品还多，将样品再混合均匀，再反复进行四分法，直至样品最终重量要求0.5-1公斤（试验用的样品2公斤）为止。
如下示意图。
一用取土器或锄头直接挖入耕层取样。
每个点切取的土块宽度、厚度应基本一致。
装入事先准备好的塑料袋内扎好。
北方土壤干燥，可在10～30cm处取样。
3．采样方法、数量：1)面积小，地势平坦，肥力均匀的田块，采用对角采样法。
分离放线菌实验报告
分离放线菌实验报告分离放线菌实验报告一、引言放线菌是一类广泛存在于土壤和水环境中的细菌，具有丰富的代谢能力和生物活性物质产生能力。
为了研究放线菌的多样性和潜在应用价值，本实验旨在从土壤样品中分离放线菌，并对其进行鉴定和初步评估。
二、材料与方法1. 样品采集：从不同地点的土壤中采集样品，保持样品的新鲜度和原生态。
2. 样品处理：将采集到的土壤样品进行稀释，以获得适合分离放线菌的浓度。
3. 分离放线菌：将样品分别涂布在含有富集放线菌所需营养物质的培养基上，然后进行孵育。
4. 鉴定放线菌：观察培养基上出现的菌落形态和颜色等特征，选取具有代表性的菌落进行进一步鉴定。
5. 鉴定方法：通过显微镜观察菌落形态和细胞形态，对菌株进行初步分类。
使用生化试剂和生理特性测试进一步鉴定放线菌的代谢能力和特性。
三、结果与讨论经过培养和鉴定，我们成功地从土壤样品中分离出多个放线菌菌株。
根据菌落形态和细胞形态的观察，我们初步将这些菌株归类为链霉菌属、链霉菌属和新链霉菌属等。
进一步的鉴定工作表明，这些放线菌菌株具有多样的代谢能力和特性。
其中一些菌株显示出产生抗生素的能力，这对于开发新的抗菌药物具有潜在意义。
另外，一些菌株还表现出对重金属离子的耐受性，这可能与其在环境修复中的应用有关。
通过对放线菌菌株的形态特征和生理特性的研究，我们初步了解了这些菌株的生物学特性。
然而，进一步的分子生物学和基因组学研究将有助于更全面地揭示这些放线菌的潜力和应用价值。
四、结论本实验成功地从土壤样品中分离出多个放线菌菌株，并对其进行了初步鉴定和评估。
这些放线菌菌株具有多样的代谢能力和特性，包括抗生素产生和重金属耐受性等。
这些发现为放线菌的应用研究提供了基础，并为开发新的生物技术和药物提供了潜在的资源。
然而，本实验只是一个初步的探索，还需要进一步的研究来深入了解放线菌的多样性和潜力。
相信通过不断的努力和研究，我们能够更好地利用这些放线菌资源，为人类的健康和环境保护做出更大的贡献。
放线菌抗生素的发酵及目的产物的提取实验报告
放线菌抗生素得发酵及目得产物得提取一、实验目得1、熟悉掌握土壤中分离抗生素及培养方法2、了解与掌握种子制备与摇瓶发酵技术与方法3、了解抗生素发酵得一般规律与代谢调控理论４、了解小型发酵罐得基本结构５、熟悉掌握小型发酵罐得使用方法与保养6。
掌握抗生素生物效价测定得原理与方法;7. 掌握管碟法测定抗生素生物效价相关得操作方法、8、掌握放线菌次级代谢物得初步纯化及牛津杯实验得基本原理与操作技术二、实验原理①发酵罐就是进行液体发酵得特殊设备。
生产上使用得发酵罐容积大,均用钢板或不锈钢板制成;供实验室使用得小型发酵罐,其容积可从约lＬ至数百升或稍大些。
一般来说,5L以下就是用耐压玻璃制作罐体,5L以上用不锈钢板或钢板制作罐体。
发酵罐配备有控制器与各种电极,可以自动地调控试验所需要得培养条件,就是微生物学、遗传工程、医药工业等科学研究所必需得设备、②抗生素(antibｉotics)就是由微生物(包括细菌、真菌、放线菌属)或高等动植物在生活过程中所产生得具有抗病原体或其它活性得一类次级代谢产物,能干扰其她生活细胞发育功能得化学物质。
现临床常用得抗生素有转基因工程菌培养液液中提取物以及用化学方法合成或半合成得化合物。
③放线菌发酵结束后,次级代谢物可能与菌体结合,工业上常采用草酸或磷酸等酸化剂处理,释放与菌体结合得次级代谢物,并采用加热发酵液７0 ℃,2 min使蛋白凝固,所得酸性滤液,在经碱处理,进一步去除蛋白、抗生素得效价常采用微生物学方法测定,它就是利用抗生素对特定得微生物具有抗菌活性得原理来测定抗生素效价得方法,如管碟法。
管碟法就是目前抗生素效价测定得国际通用方法,我国药典也采用此法。
管碟法就是根据抗生素在琼脂平板培养基中得扩散渗透作用,比较标准品与检品两者对试验菌得抑菌圈大小来测定供试品得效价。
管碟法得基本原理就是在含有高度敏感性试验菌得琼脂平板上放置小钢管(内径6。
０±0、ｌ mm,外径8、0±０。
土壤中放线菌的分离和纯化实验（精选5篇）
土壤中放线菌的分离和纯化实验（精选5篇）第一篇：土壤中放线菌的分离和纯化实验土壤中放线菌的分离和纯化实验一、实验目的1、制作MS培养基的方法，掌握母液的保存方法。
2、掌握培养基的灭菌方法。
掌握外植体的消毒和超净工作台的使用。
4、掌握放线菌的分离纯化及染色的基本流程；5、掌握高氏一号培养基的配制方法；6、复习分离纯化放线菌的基本操作技术、培养方学会使用高压蒸汽灭菌锅。
7、培养微生物实验的设计思路和动手能力。
二、实验材料高压蒸汽锅、培养瓶、石斛的愈伤组织、超净工作台，酒精灯、酒精棉球、镊子、电子天平、称量纸、烧杯、量筒、显微镜、三角锥形瓶、无菌培养皿、接种环、酒精灯、分析天平；接种环、载玻片、盖玻片、玻璃珠、移液枪、剪刀三、实验原理植物组织培养即植物无菌培养技术，又称离体培养，是根据植物细胞具有全能性的理论，利用植物体离体的器官(如根、茎、叶、茎尖、花、果实等）、组织（如形成层、表皮、皮层、髓部细胞、胚乳等）第 1 页或细胞（如大孢子、小孢子、体细胞等）以及原生质体,在无菌和适宜的人工培养基及温度等人工条件下，能诱导出愈伤组织、不定芽、不定根，最后形成完整的植株的学科。
四、实验步骤1、配制MS培养基8L，称取马铃薯1600g、香蕉400g、蔗糖240g、活性炭8半勺、琼脂80g、配制母液。
2、配制培养液时应注意：①在使用提前配制的母液时，应在量取各种母液之前，轻轻摇动盛放母液的瓶子，如果发现瓶中有沉淀、悬浮物或被微生物污染，应立即淘汰这种母液，重新进行配制；为防止母液被微生物污染，有机母液放在冰箱里4℃保存；②用量筒或移液管量取培养基母液之前，必须用所量取的母液将量筒或移液管润洗2次；③量取母液时，最好将各种母液按将要量取的顺序写在纸上，量取1种，划掉1种，以免出错。
溶化琼脂用粗天平分别称取琼脂9 g、蔗糖30 g，放入1 000 mL的搪瓷量杯中，再加入蒸馏水750 mL，用电炉加热，边加热边用玻璃棒搅拌，直到液体呈半透明状。
放线菌实验报告
放线菌实验报告放线菌实验报告一、引言放线菌是一类广泛存在于土壤和水体中的微生物，其具有重要的生物学意义和应用价值。
本次实验旨在通过对放线菌的培养、鉴定和抗菌活性测试，了解放线菌的特性和应用前景。
二、材料与方法1. 放线菌培养基的制备：将葡萄糖、酵母粉、肉膏粉、胰蛋白胨等按一定比例溶解于蒸馏水中，加热煮沸，倒入培养瓶中，待冷却后加入抗生素。
2. 放线菌的采集：在适宜的环境中采集土壤或水样，并将样品分装于离心管中。
3. 放线菌的分离：取适量样品并加入适量的生理盐水，摇匀后进行稀释，取适量稀释液分别均匀涂布于放线菌培养基上。
4. 放线菌的纯化：从培养基上挑选出单菌落，进行连续传代，直至获得纯种放线菌。
5. 放线菌的鉴定：通过形态特征、生理生化特性和分子生物学方法对放线菌进行鉴定。
6. 抗菌活性测试：采用平板扩散法或孔隙扩散法，将放线菌菌液或提取物涂布于琼脂平板上，观察抑菌圈的形成情况。
三、结果与分析经过培养和分离，我们成功获得了多个放线菌菌株。
在鉴定过程中，我们观察到这些放线菌菌株形态各异，有的呈现棕黄色，有的呈现淡黄色，有的呈现灰白色。
此外，通过生理生化特性的检测，我们发现这些放线菌菌株对某些碳源和氮源具有不同的利用能力。
进一步的分子生物学分析结果显示，这些放线菌菌株属于不同的物种。
在抗菌活性测试中，我们选取了几个放线菌菌株进行了评估。
结果显示，这些放线菌菌株对多种细菌具有一定的抑制作用。
其中，某一放线菌菌株对金黄色葡萄球菌表现出了较强的抗菌活性，形成了较大的抑菌圈。
这表明该放线菌菌株可能具有潜在的抗生素生产能力。
四、讨论与展望通过本次实验，我们成功地获得了多个放线菌菌株，并对其进行了鉴定和抗菌活性测试。
然而，由于时间和设备的限制，我们并未对放线菌的抗生素产物进行深入研究。
因此，未来可以进一步探索这些放线菌菌株的抗生素产物，并对其进行分离、纯化和结构鉴定，以期发现新的抗生素。
此外，放线菌不仅具有抗菌活性，还具有其他生物活性物质的合成能力，如抗肿瘤物质、抗病毒物质等。
土壤中细菌、放线菌、酵母菌及霉菌的分离与纯化
土壤中细菌、放线菌、酵母菌及霉菌的分离与纯化一、实验目的1. 学习、掌握从土壤稀释分离、划线分离各类微生物的技术。
2. 学习从样品中分离、纯化出所需菌株。
3. 学习并掌握平板倾注法和斜面接种技术，了解培养细菌、放线菌、酵母菌及霉菌四大类微生物的培养条件和培养时间。
4. 学习平板菌落计数法。
二、实验原理将待分离的样品进行一定的稀释，使微生物的细胞（或孢子）尽量呈分散状态，选用有针对性的培养基，在不同温度、通风等条件下培养，让其长成一个纯种单个菌落。
要想获得某种微生物的纯培养，还需提供有利于该微生物生长繁殖的最适培养基及培养条件。
微生物四大类菌的分离培养基、培养温度、培养时间见表2-1所示。
表2-1 微生物四大类菌的分离和培养要求样品来源分离对象分离方法稀释度培养基名称培养温度/℃培养时间/d土样细菌稀释分离10-5，10-6，10-7牛肉膏蛋白胨30～37 1～2土样放线菌稀释分离10-3，10-4，10-5高氏1号28 5～7 土样霉菌稀释分离10-2，10-3，10-4马丁氏琼脂28～30 3～5面肥或土样酵母菌稀释分离10-4，10-5，10-6马铃薯葡萄糖28～30 2～3细菌分离平板细菌单菌落划线分离10-2 牛肉膏蛋白胨30～37 1～2三、实验材料1. 菌源土样2. 培养基牛肉膏蛋白胨培养基，马丁氏培养基，高氏合成1号培养基，马铃薯葡萄糖培养基(制平板和斜面)，见附录Ⅲ。
3. 无菌水 250 mL锥形瓶，每瓶装99 mL无菌水(或95mL为分离霉菌用)，内装10粒玻璃珠。
4.5 mL无菌水试管(每人5～7支)。
4. 其他物品无菌培养皿，无菌移液管，无菌玻璃涂棒(刮刀)，称量纸，药勺，橡皮头，10%酚溶液。
（一）系列稀释平板法1. 取土样选定取样点，按对角交叉（五点法）取样。
先除去表层约2cm的土壤，将铲子插入土中数次，然后取2～10cm处的土壤。
盛土的容器应是无菌的。
将5点样品约1kg充分混匀，除去碎石、植物残根等杂物，装入已灭过菌的牛皮纸袋内，封好袋口，并记录取样地点、环境及日期。
放线菌的实验报告
放线菌的实验报告放线菌的实验报告一、引言放线菌是一类广泛存在于自然界中的微生物，以其独特的形态和生物学特性而备受研究者的关注。
本实验旨在通过对放线菌的分离培养、形态观察和抗生素产生能力的检测，进一步了解放线菌的特点和应用潜力。
二、材料与方法1. 放线菌分离培养：将土壤样品取自自然环境中，加入到含有适宜培养基的培养皿中，进行稀释均匀。
然后将培养皿密封，置于恒温培养箱中，在适宜的温度下培养一段时间，直至观察到单个菌落的形成。
2. 放线菌形态观察：取一颗单个菌落，用显微镜观察其形态特征，包括菌丝的形状、颜色、分枝情况等。
3. 抗生素产生能力检测：将分离得到的放线菌菌株接种到含有抗生素敏感菌株的琼脂平板上，观察菌落周围是否出现抑制圈。
三、结果与讨论1. 放线菌的分离培养：经过一段时间的培养，观察到培养皿中出现了单个菌落。
将这些菌落通过传代培养，得到纯种的放线菌菌株。
2. 放线菌的形态观察：在显微镜下观察到放线菌菌丝呈分枝状，颜色多样，有的呈白色、黄色或橙色。
菌丝通常呈直线状，但也有少数呈弯曲或环状。
3. 抗生素产生能力检测：将分离得到的放线菌菌株接种到含有抗生素敏感菌株的琼脂平板上，观察到菌落周围出现了抑制圈。
这表明放线菌具有抗生素产生的能力，可以对其他细菌产生抑制作用。
放线菌作为一类重要的微生物资源，具有广泛的应用前景。
其产生的抗生素被广泛应用于医药领域，用于治疗各种感染性疾病。
此外，放线菌还具有其他生物活性物质的合成能力，如抗肿瘤物质、抗氧化物质等。
因此，对放线菌的深入研究具有重要意义。
在本次实验中，我们成功地从自然环境中分离出了放线菌，并观察到了其形态特征和抗生素产生能力。
然而，实验中仍存在一些不足之处。
首先，由于实验时间有限，我们只对放线菌的形态进行了简单的观察，没有进行更深入的分类和鉴定。
其次，我们只检测了放线菌的抗生素产生能力，而未对其产生的抗生素进行具体的鉴定和分析。
为了更好地发掘和利用放线菌的潜力，今后的研究可以从以下几个方面展开：1. 对分离得到的放线菌菌株进行进一步的形态学和生理学研究，以了解其多样性和适应能力；2. 对放线菌产生的抗生素进行鉴定和分析，以寻找新的抗生素种类和开发新的药物；3. 利用基因工程技术改造放线菌，提高其抗生素产量和质量。
土壤中放线菌的采集、分离、培养、发酵及提取实验报告.doc
土壤中放线菌的采集、分离、培养、发酵及提取实验目的：1、从土壤中分离产抗生素的放线菌2、放线菌的培养3、放线菌的发酵产生活性物质4、放线菌产生的活性物质提取。
实验原理：放线菌是一类呈菌丝状生长，主要以孢子繁殖。
放线菌与人类的生产和生活关系极为密切，目前广泛应用的抗生素约80%是各种放线菌所产生的。
许多临床应用的抗生素均由土壤中分离的放线菌产生。
采用选择培养基可分离土壤中的放线菌。
产抗生素的放线菌经液体培养后，其分泌的抗生素存在于离心所得的上清液中，可采用微生物的抑菌试验进行检测，从而筛选到所需的抗生素产生菌，并对其进一步培养，繁殖，发酵，最终提取我们所需的抗生素。
实验器材：1、土壤2、培养基：高氏一号培养基、种子培养基、发酵培养基3、其他：重铬酸钾、培养皿、牛津杯、接种环、酒精灯，无菌涂棒、三角锥瓶、高压蒸汽灭菌锅、天平、药匙、烧杯、量筒、玻璃棒、试管、牛皮纸、线绳等。
实验步骤：一、土壤放线菌株的采集采集样品：选定取样点（最好是有机质含量高的菜地），按对角交叉（五点法）取样。
先除去表层约2cm的土壤，将铲子插入土中数次，然后取2～10cm处的土壤。
将5点样品约1kg充分混匀，除去碎石、植物残根等。
样品（土壤）处理：室温风干二、土壤中放线菌的分离、培养1、配制淀粉培养基淀粉琼脂培养基（高氏培养基）可溶性淀粉2g；硝酸钾0.1g；磷酸氢二钾0.05g；氯化钠0.05g；硫酸镁0.05g；硫酸亚铁0.001g；琼脂2g；水100ml.先把淀粉放在烧杯里，用5ml水调成糊状后，倒入95ml水，搅匀后加入其他药品，使它溶解。
加热到煮沸时加入琼脂，不停搅拌，待琼脂完全溶解后，补足失水。
调整PH到7.2-7.4，分装后灭菌，备用。
2、土壤悬液梯度稀释①将5.0g土壤加入到50ml灭菌的生理盐水中，震荡10min制备土壤悬液。
②用无菌吸管吸取1ml土壤悬液，加入到9ml灭菌的生理盐水中10倍稀释。
③按1：:1稀释至10-3、10-4、10-5，将3块灭菌平板分别标记10-3、10-4、10-5 ，稀释过程应在无菌条件下进行。
放线菌的实验报告
一、实验目的1. 掌握土壤中放线菌的采集、分离和纯化方法。
2. 学习放线菌的培养技术，观察其生长特征。
3. 提取放线菌产生的活性物质，并对其活性进行初步鉴定。
二、实验原理放线菌是一类呈菌丝状生长的微生物，广泛分布于土壤、空气和水中。
放线菌与人类的生产和生活关系密切，许多临床应用的抗生素均由放线菌产生。
本实验通过土壤中放线菌的分离、培养和活性物质提取，旨在了解放线菌的生长特征及其产生的活性物质。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 土壤样品- 高氏一号培养基- 种子培养基- 发酵培养基- 试剂：重铬酸钾、无菌水、酒精等2. 实验仪器：- 培养皿- 牛津杯- 接种环- 酒精灯- 无菌涂棒- 三角锥瓶- 高压蒸汽灭菌锅- 天平- 药匙- 烧杯- 量筒- 玻璃棒- 试管- 牛皮纸- 线绳四、实验步骤1. 土壤放线菌株的采集（1）选择取样点：选择有机质含量高的土壤，如菜地、林地等。
（2）采集样品：按对角交叉（五点法）取样，先除去表层约2cm的土壤，将铲子插入土中数次，然后取2～10cm处的土壤。
（3）将5点样品混合均匀，用无菌水稀释至10-1、10-2、10-3、10-4、10-5倍。
2. 放线菌的分离与纯化（1）制备高氏一号培养基平板：将高氏一号培养基加热溶解后，倒入培养皿中，待凝固后备用。
（2）将稀释后的土壤样品涂布于高氏一号培养基平板上。
（3）将平板置于37℃恒温培养箱中培养3～5天，观察菌落生长情况。
（4）挑取单菌落进行纯化，重复上述步骤，直至获得纯放线菌。
3. 放线菌的培养（1）将纯化后的放线菌接种于种子培养基中，置于37℃恒温培养箱中培养24小时。
（2）将种子液按一定比例接种于发酵培养基中，置于37℃恒温培养箱中发酵。
4. 活性物质提取（1）将发酵液离心分离，收集上清液。
（2）用重铬酸钾对上清液进行氧化反应，观察颜色变化，以初步鉴定活性物质。
五、实验结果与分析1. 放线菌分离与纯化：成功分离纯化出放线菌，菌落呈菌丝状，颜色多样。
从环境中分离放线菌的实验
器材灭菌 无菌蒸馏水。 3个锥形瓶、培养皿12个、玻璃棒3个、移液枪 1个、枪头12个、接种环1个、酒精灯1个、打 火机1个 分离 方法：将处理后的土壤悬浮液稀释100倍备用 。加热已制备并灭菌好的高氏合成1号琼脂+重 酪酸钾培养基，在无菌条件下倒10个平板然后 ，贴好标签，冷却。用平板稀释法，稀释度从 10-3到10-5,浓度将菌种接种在高氏合成1号琼 脂+重酪酸钾的平板培养基上,28℃培养5~7d。
注意：稀释样品时要在无菌条件下进 行；每个稀释度做3个培养皿，并做好标 记；实验中要留一个空白对照；注意划 线时不要将培养基划破，划线时将培养 基画满，使菌种均匀分布在培养基上。
THANKS
从 环 境 中 分 离 放 线 菌 实 验
制 作 小 组 ： 一 组
一、实验目的 1、学习从土壤中分离放线菌的方法 。 2、练习、掌握微生物接种、移植和 培养的基本技术。掌握无菌操作技 术。 3、掌握无菌操作技术。
二、实验原理
放线菌是原核生物，是重要的抗生素产生菌，在 土壤中的数量仅次于细菌，尤其在有机质丰富、透 气性好的中性到微碱性土壤中的数量较多。 土壤颗粒的分散程度对于分离放线菌也有影响。 用胆酸钠处理土壤悬液后土壤分散效果较好，且优 于纯蒸馏水。这可能是因为胆酸钠对土壤腐殖质具 有较强的结合能力从而有利于破坏土壤团聚结构。 重铬酸钾对土壤真菌、细菌的抑制作用较明显， 然而对放线菌并无抑制作用。而且其价格低廉。实 验证明酵母膏、SDS（十二烷基硫酸钠）也有抑菌的 作用。
将土样放入三角瓶中，加入少量胆酸 钠，再加适量蒸馏水振荡溶解制成土壤 悬浮液。调节稀释液的PH为7，略微加热 后冷却至40℃。之后，再加6%酵母膏和 用5 mmol / L 磷酸缓冲液稀释的0.05% SDS 震荡20min。 注意：所取的土样不可过湿，防止样 品中杂菌过多；至土壤稀释液时要振荡 充分，是土样与水充分混合，将菌分散 。
放线菌发酵实验报告
放线菌发酵实验报告放线菌是一类广泛存在于自然界中的微生物，具有很高的生物学和生物化学研究价值。
放线菌发酵实验是一种常用的研究方法，通过培养放线菌并利用其代谢产物进行分析，可以研究其生长特性、代谢途径以及产生的生物活性物质等。
本文将介绍放线菌发酵实验的步骤和应用。
一、实验步骤1. 放线菌的培养：选择适当的培养基，将放线菌接种于培养基上，培养条件包括温度、湿度和培养时间等，可根据不同放线菌的特性进行调整。
2. 培养基的制备：根据放线菌的需求，选择合适的培养基配方，包括碳源、氮源、无机盐和生长因子等。
将培养基配制好并灭菌，然后倒入培养皿或培养瓶中。
3. 接种和培养：将放线菌菌种接种于培养基上，然后进行培养。
培养条件包括温度、湿度和培养时间等，可以根据具体需要进行调整。
4. 放线菌代谢产物的提取和分析：在放线菌发酵过程中，放线菌会产生各种代谢产物，如抗生素、酶、有机酸等。
可以通过提取和分析这些代谢产物，了解放线菌的生物活性和代谢途径。
5. 结果的分析和解释：根据实验结果，对放线菌发酵过程进行分析和解释，包括代谢产物的种类、含量和生物活性等。
二、实验应用1. 放线菌发酵实验在抗生素研究中的应用：放线菌是抗生素的主要产生菌株，通过放线菌发酵实验可以筛选出具有抗菌活性的菌株，并分离纯化其产生的抗生素。
2. 放线菌发酵实验在酶研究中的应用：放线菌产生的酶具有很高的催化活性和特异性，通过放线菌发酵实验可以获得大量的酶，并对其进行酶学性质的研究。
3. 放线菌发酵实验在生物活性物质研究中的应用：放线菌产生的代谢产物中有许多具有生物活性的物质，如抗肿瘤物质、抗炎物质等。
通过放线菌发酵实验可以获得这些生物活性物质，并进行进一步的研究和开发应用。
4. 放线菌发酵实验在代谢途径研究中的应用：通过放线菌发酵实验可以研究放线菌的代谢途径和代谢产物的合成机制，对于理解放线菌的生物学过程具有重要意义。
放线菌发酵实验是一种常用的研究方法，通过培养放线菌并利用其代谢产物进行分析，可以研究其生长特性、代谢途径以及产生的生物活性物质等。
土壤中提取放线菌
一、实验目的：1．掌握配置合成培养基的一般方法2．掌握稀释倒平板法从土壤中分离放线菌的原理与方法3．掌握放线菌的染色及制片方法4．了解放线菌的结构特点，并能够加以区分二、实验原理：（一）、综述：放线菌在自然界分布广泛，主要以孢子或菌丝状态存在于土壤、空气和水中，尤其是含水量低、有机物丰富、呈中性或微碱性的土壤中数量最多。
土壤特有的泥腥味，主要是放线菌的代谢产物所致。
（二）、菌落特征：放线菌的菌落由菌丝体组成。
一般圆形、光平或有许多皱褶，光学显微镜下观察，菌落周围具辐射状菌放线菌丝。
总的特征介于霉菌与细菌之间，因种类不同可分为两类：一类是由产生大量分枝和气生菌丝的菌种所形成的菌落。
链霉菌的菌落是一类型的代表。
链霉菌菌丝较细，生长缓慢，分枝多而且相互缠绕，故形成的菌落质地致密、表面呈较紧密的绒状或坚实、干燥、多皱，菌落较小而不蔓延；营养菌丝长在培养基内，所以菌落与培养基结合较紧，不易挑起或挑起后不易破碎：当气生菌丝尚未分化成孢子丝以前，幼龄菌落与细菌的菌落很相似，光滑或如发状缠结。
有时气生菌丝呈同心环状，当孢子丝产生大量孢子并布满整个菌落表面后，才形成絮状、粉状或颗粒状的典型的放线菌菌落；有些种类的孢子含有色素，使菌落有面或背面呈现不同颜色，带有泥腥味。
另一类菌落由不产生大量菌丝体的种类形成，如诺卡氏放线菌的菌落，粘着力差，结构呈粉质状，用针挑起则粉碎。
若将放线菌接种于液体培养基内静置培养，能在瓶壁液面处形成斑状或膜状菌落，或沉降于瓶底而不使培养基混浊；如以震荡培养，常形成由短的菌丝体所构成的球状颗粒。
（三）、形态与结构：1．菌丝（mycelium）：放线菌种类很多，多数放线菌具有发育良好的分支状菌丝体，少数为杆状或原始丝状的简单形态。
菌丝大多无隔膜，其粗细与杆状细菌相似，直径为1微米左右。
根据菌丝的着生部位、形态和功能的不同，放线菌菌丝可分为基内菌丝、气生菌丝和孢子丝三种。
（1）．基内菌丝(substrate mycelium) ：又称初级菌丝或者营养菌丝.色淡，主要功能是吸收营养物质和排泄代谢产物。
放线实验报告
一、实验目的1. 掌握放线菌的分离、纯化技术；2. 了解放线菌的形态和生理特征；3. 学习放线菌的培养方法及抗生素的提取；4. 掌握放线菌的生物学特性及应用。
二、实验原理放线菌是一类以菌丝生长为主的微生物，广泛分布于土壤、水体、空气等环境中。
放线菌具有产生抗生素、酶、维生素等多种次级代谢产物，在医药、农业、食品等领域具有广泛的应用。
本实验通过分离、纯化放线菌，观察其形态和生理特征，学习放线菌的培养方法及抗生素的提取，了解放线菌的生物学特性及应用。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：土壤样品、高氏一号培养基、葡萄糖、蛋白胨、酵母提取物、琼脂、无菌水、无菌棉塞、接种环、培养皿、三角锥瓶、酒精灯、显微镜、离心机、抽滤器、无菌操作台等。
2. 实验仪器：电子天平、高压蒸汽灭菌锅、培养箱、恒温振荡器、显微镜等。
四、实验方法与步骤1. 土壤放线菌的分离（1）取土壤样品10g，加入90mL无菌水中，振荡混匀；（2）用无菌棉塞封口，置于培养箱中，37℃培养24h；（3）取培养后的土壤悬液，稀释至10-3；（4）取适量稀释液，涂布于高氏一号培养基平板上，37℃培养48h；（5）挑取单菌落，重复纯化，得到纯放线菌。
2. 放线菌的形态观察（1）将纯化后的放线菌接种于高氏一号培养基平板上，37℃培养48h；（2）取少量菌丝，制成临时装片；（3）在显微镜下观察放线菌的菌丝形态、颜色、孢子等特征。
3. 放线菌的培养（1）将纯化后的放线菌接种于种子培养基中，37℃、180r/min振荡培养24h；（2）将种子液按1:10的比例接种于发酵培养基中，37℃、180r/min振荡培养48h。
4. 抗生素的提取（1）将发酵液离心（3000r/min，10min），取上清液；（2）将上清液用无水乙醇沉淀，离心（3000r/min，10min）；（3）将沉淀用少量无水乙醇洗涤，干燥；（4）将干燥的抗生素样品溶解于适量无菌水中，即得抗生素粗品。
土壤中放线菌的分离和纯化实验报告
土壤中放线菌的分离和纯化实验报告土壤中放线菌的分离和纯化实验报告土壤是一个很复杂，有许多层次的生态系统。
要想从事物体内分离得到目标产物，必须在特定条件下进行，而不能凭空臆断。
因此，实验室分离放线菌所需设备也应根据这些原则来选择和准备，如果单凭某种条件就妄加判断那么往往会导致实验失败或造成人力财力上的浪费。
一、样品制备与培养基配制1．取土称量，充分混匀；取干燥疏松的盆或缸或其它容器，将盛装样品的容器放入水中浸泡24小时以上并每天换水数次直至发出清香气味为止。
2．称取少量样品于蒸馏水中，混合均匀。
3．挑取含水量适当的样品接种于经灭菌消毒的马铃薯种子培养基平板上。
4．将经过灭菌消毒的培养皿置于恒温箱或酒精灯上加热使之软化。
5．软化后的样品立即倒入100毫升灭菌马铃薯琼脂培养基中。
6．迅速摇动平板混匀，冷却至45℃左右，用无菌操作法倒平板并贴签标记好。
二、增菌接种三、初代培养和测试计算平板上的菌落数，挑取相同的稀释度再按照步骤一继续培养。
然后检查各种参数及观察培养结果，对比最终的数值，以判断微生物对放线菌的敏感程度和产率。
四、菌种保藏采集长期保存的菌种可采用50℃的马铃薯培养基，将菌液接入0.7%-0.8%琼脂斜面中，斜面凝固后将斜面置冰箱中低温保存。
五、影响实验结果的主要因素环境条件和杂菌污染的因素都会严重地影响放线菌的分离纯化效果，如果只注意控制某个方面，忽视了另外两个条件都难以获得满意的结果，故要求分析工作者既要认真仔细又要灵活掌握，对那些关键性的技术环节和易受外界干扰因素影响的项目应给予足够的重视，这里只简略说明几点。
（1）温度是决定分离效果的主要因素之一。
通常情况下，分离放线菌要在25℃～28℃，湿度60%～70%的条件下进行，温度高达40℃，不但有碍于菌株的正常繁殖，还会导致菌种死亡。
2．采用多菌种混合分离的办法更能提高效率。
（3）琼脂浓度的影响在各种放线菌的分离中，无论是直接法还是间接法，均以琼脂培养基的营养丰富、无机盐和生长因子较多等优良特性著称，故为放线菌分离的常规方法，由于它在生长过程中氧化葡萄糖产酸，故利用这一特点来抑制微生物的呼吸，同时利用无机盐提供电子使酶钝化，因而提高了实验效果，并且减轻了劳动强度。
土壤真菌培养实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的本次实验旨在从土壤中分离和培养真菌，掌握真菌纯化、分离和培养的基本方法，了解真菌在土壤中的分布和生长特性。
二、实验原理土壤是微生物生活的大本营，真菌作为土壤微生物的重要组成部分，在土壤生态系统中扮演着重要角色。
通过分离和培养土壤中的真菌，可以了解其种类、数量和生长条件，为土壤微生物生态学研究和真菌资源的开发利用提供基础。
三、实验材料与仪器1. 材料：- 新鲜土壤- PDA培养基（含2ml链霉素）- 孟加拉红培养基- 无菌水- 无菌培养皿- 无菌吸管- 酒精灯- 培养箱2. 仪器：- 电子天平- 高压蒸汽灭菌器- 烧杯- 玻璃棒- 移液器四、实验方法1. 土壤稀释液的制备：- 称取10g新鲜土壤，加入90ml无菌水，充分混匀，制成土壤悬液。
- 将悬液进行10^-1至10^-5的系列稀释，分别加入无菌培养皿中。
2. 平板接种：- 将PDA培养基和孟加拉红培养基分别加热融化，待冷却至50℃左右，分别倒入无菌培养皿中，制成平板。
- 将稀释后的土壤悬液，用无菌移液器吸取适量，涂布于PDA平板和孟加拉红平板上。
- 将平板倒置，放入28℃培养箱中培养。
3. 挑菌纯化：- 在培养箱中培养3-5天后，观察平板上的菌落生长情况。
- 挑取单个菌落，分别接种于PDA平板上，重复培养，直至获得纯化后的真菌菌落。
4. 菌落计数：- 计算平板上每个菌落的数量，记录结果。
五、实验结果1. 菌落观察：- PDA平板上，菌落呈白色，表面光滑，边缘整齐。
- 孟加拉红平板上，菌落呈红色，表面光滑，边缘整齐。
2. 菌落计数：- PDA平板上，每个菌落平均数量为10^5个。
- 孟加拉红平板上，每个菌落平均数量为10^4个。
六、实验讨论1. 土壤中的真菌种类繁多，本实验中分离得到的真菌菌落，可能是土壤中真菌的代表。
2. PDA培养基和孟加拉红培养基均适合真菌的生长，但孟加拉红培养基对真菌的抑制效果较好，可用于分离纯化真菌。
土壤中放线菌的分离与纯化
土壤中放线菌的分离与纯化放线菌是一类广泛分布于土壤中的革兰氏阳性细菌，具有许多生物活性物质的合成能力，因此在医药和农业领域具有广泛的应用前景。
而对于放线菌的分离与纯化，则是研究数字多样性、发掘新生物活性成分和开发新型药物的必要工作。
一、分离放线菌的样品采集在进行放线菌的分离与纯化之前，需要先采集土壤样品。
首先对采样是否合理、样品储存条件等要求进行评估。
然后在采样地的不同位置取样，每个样品之间要有足够距离，避免重复或低效地采集。
将采集到的样品分别按照一定的方式进行处理，常用的包括罗氏囊和加热处理。
可采用直接接种法和制备菌液法进行分离，直接接种法是将样品直接接种在寡速生菌平板上，不需要进行任何处理，制备菌液法先经过一定的处理如筛选、振荡等操作，然后再加入培养基中进行培养，优选后再进行接种。
三、放线菌的筛选分离后的放线菌种群中还包含其他微生物如生物体、细菌等，因此需要进行放线菌的筛选。
常用的筛选方法有颜色、形态、抗性和特异反应等多种选择，通过筛选后得到单个纯种放线菌株。
对于已经得到的放线菌菌株，进行菌株的鉴定是必要的。
鉴定的标准包括形态学特征如形状、大小、生长习性等、生化特性如酶系统、代谢途径等、分子生物学特性如16S rDNA序列等。
二氧化碳生成实验、酸碱性度测定、化学分析等，常用于进行放线菌菌株鉴定的方法。
对于分离和鉴定过的放线菌菌株，为了防止失活和污染，需要进行保存，并被录入保藏室中，应该根据放线菌不同的保存要求，选取合适的保存方式。
例如，低温保存的方法如短期保存冰箱法和长期保存冷冻物质保存法等。
通常选择液氮冷冻法则能够保证最长的保存时效。
总之，放线菌的分离与纯化是进行放线菌不同研究的基础，只有在得到了高纯度的菌株后，才能进一步进行后续的研究和开发工作，发掘其潜在的生物活性特性。
放线菌发酵培养基实验报告
放线菌发酵培养基实验报告放线菌抗生素的发酵及目的产物的提取实验报告放线菌抗生素的发酵及目的产物的提取一、实验目的1、熟悉掌握土壤中分离抗生素及培养方法2、了解和掌握种子制备和摇瓶发酵技术和方法3、了解抗生素发酵的一般规律和代谢调控理论4、了解小型发酵罐的基本结构5、熟悉掌握小型发酵罐的使用方法和保养6.掌握抗生素生物效价测定的原理和方法;7. 掌握管碟法测定抗生素生物效价相关的操作方法。
8.掌握放线菌次级代谢物的初步纯化及牛津杯实验的基本原理和操作技术二、实验原理?发酵罐是进行液体发酵的特殊设备。
生产上使用的发酵罐容积大，均用钢板或不锈钢板制成;供实验室使用的小型发酵罐，其容积可从约lL至数百升或稍大些。
一般来说，5L以下是用耐压玻璃制作罐体，5L以上用不锈钢板或钢板制作罐体。
发酵罐配备有控制器和各种电极，可以自动地调控试验所需要的培养条件，是微生物学、遗传工程、医药工业等科学研究所必需的设备。
?抗生素(antibiotics)是由微生物(包括细菌、真菌、放线菌属)或高等动植物在生活过程中所产生的具有抗病原体或其它活性的一类次级代谢产物，能干扰其他生活细胞发育功能的化学物质。
现临床常用的抗生素有转基因工程菌培养液液中提取物以及用化学方法合成或半合成的化合物。
?放线菌发酵结束后，次级代谢物可能与菌体结合，工业上常采用草酸或磷酸等酸化剂处理，释放与菌体结合的次级代谢物，并采用加热发酵液70 ?，2 min使蛋白凝固，所得酸性滤液，在经碱处理，进一步去除蛋白。
抗生素的效价常采用微生物学方法测定，它是利用抗生素对特定的微生物具有抗菌活性的原理来测定抗生素效价的方法，如管碟法。
管碟法是目前抗生素效价测定的国际通用方法，我国药典也采用此法。
管碟法是根据抗生素在琼脂平板培养基中的扩散渗透作用，比较标准品和检品两者对试验菌的抑菌圈大小来测定供试品的效价。
管碟法的基本原理是在含有高度敏感性试验菌的琼脂平板上放置小钢管(内径6.0?0.l mm，外径8.0?0.l mm，高10?0. lmm)，管内放人标准品和检品的溶液，经16~18小时恒温培养，当抗生素在菌层培养基中扩散时，会形成抗生素浓度由高到低的自然梯度，即扩散中心浓度高而边缘浓度低。
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土壤中放线菌的采集、分离、培养、发酵及提取
实验目的：
1、从土壤中分离产抗生素的放线菌
2、放线菌的培养
3、放线菌的发酵产生活性物质
4、放线菌产生的活性物质提取。
实验原理：
放线菌是一类呈菌丝状生长，主要以孢子繁殖。
放线菌与人类的生产和生活关系极为密切，目前广泛应用的抗生素约80%是各种放线菌所产生的。
许多临床应用的抗生素均由土壤中分离的放线菌产生。
采用选择培养基可分离土壤中的放线菌。
产抗生素的放线菌经液体培养后，其分泌的抗生素存在于离心所得的上清液中，可采用微生物的抑菌试验进行检测，从而筛选到所需的抗生素产生菌，并对其进一步培养，繁殖，发酵，最终提取我们所需的抗生素。
实验器材：
1、土壤
2、培养基：高氏一号培养基、种子培养基、发酵培养基
3、其他：重铬酸钾、培养皿、牛津杯、接种环、酒精灯，无菌涂棒、三角锥瓶、高压蒸汽灭菌锅、天平、药匙、烧杯、量筒、玻璃棒、试管、牛皮纸、线绳等。
实验步骤：
一、土壤放线菌株的采集
采集样品：选定取样点（最好是有机质含量高的菜地），按对角交叉（五点法）取样。
先除去表层约2cm的土壤，将铲子插入土中数次，然后取2～10cm处的土壤。
将5点样品约1kg充分混匀，除去碎石、植物残根等。
样品（土壤）处理：室温风干
二、土壤中放线菌的分离、培养
1、配制淀粉培养基
淀粉琼脂培养基（高氏培养基）
可溶性淀粉2g；硝酸钾0.1g；磷酸氢二钾0.05g；氯化钠0.05g；硫酸镁0.05g；硫酸亚铁0.001g；琼脂2g；水100ml.
先把淀粉放在烧杯里，用5ml水调成糊状后，倒入95ml水，搅匀后加入其他药品，使它溶解。
加热到煮沸时加入琼脂，不停搅拌，待琼脂完全溶解后，补足失水。
调整PH到7.2-7.4，分装后灭菌，备用。
2、土壤悬液梯度稀释
①将5.0g土壤加入到50ml灭菌的生理盐水中，震荡10min制备土壤悬液。
②用无菌吸管吸取1ml土壤悬液，加入到9ml灭菌的生理盐水中10倍稀释。
③按1：:1稀释至10-3、10-4、10-5，将3块灭菌平板分别标记10-3、10-4、10-5 ，稀释过程应在无菌条件下进行。
3、将高氏一号培养基加热溶化，待冷至55-60℃时，加入3%的重铬酸钾数滴（大约100ml加0.3ml），混合均匀。
分别吸取0.1ml稀释液于灭菌平皿中，再加入10-15ml恒温于55℃的含有重铬酸钾的淀粉琼脂培养基中，轻轻旋转混合均匀。
4、平皿倒置于培养箱28℃恒温培养一周左右。
5、将平皿上的放线菌菌落跳去在淀粉琼脂平皿上四区划线进行分离纯化，28℃恒温培养一周左右，观察放线菌菌落特征。
6、将纯化好的菌落转入到斜面，4℃条件下进行保存。
三、抗菌谱的测定
1、挑取一个放线菌的菌落接种到含有250ml淀粉液体培养基的三角瓶，28℃恒温培养一周左右。
2、将2ml培养8h的大肠杆菌分别加到200ml灭菌的牛肉膏蛋白胨培养基中混合均匀，每培养皿中倒入20ml，凝固后待用。
3、在上面培养皿中均匀放入4个牛津杯，每个牛津杯中加入1ml放线菌发酵培养液。
培养皿放入37℃培养箱恒温培养12h。
4、测量抑菌圈的大小。
四、发酵
1、配制种子培养基
蔗糖22.5g，黄豆粉12.5g，磷酸氢二钾0.2g，氯化钠1g，硫酸钠0.1g，硫酸亚铁0.01g，碳酸钙2g，蒸馏水1000ml，PH值7.2,121℃灭菌20min。
2、配制发酵培养基
蔗糖45g，黄豆粉25g，磷酸氢二钾0.2g，氯化钠1g，硫酸钠0.1g，硫酸亚铁0.01g，碳酸钙3g，蒸馏水1000ml，PH7.2。
121℃灭菌20min。
3、种子液的制备
将试管斜面菌种转管活化，28℃培养7天后，以接种取一环孢子转入装有50ml种子培养基的250ml三角摇瓶中，于28℃200r/min-1 培养4天。
4、发酵培养
以6%的接种量将种子液转接入装有50ml初始发酵培养基的250ml三角摇瓶中，于28℃200r/min-1培养4天。
5、活性检测
发酵液经4000r/ min-1 离心15min，取上清，杯碟法测定抗菌活性（同三）。
五、提取
1、发酵液经4000r/ min-1 离心15min，取上清，用乙酸乙酯以1:1的比例进行萃取。
2、活性检测
将萃取液浓缩，杯碟法测定抗菌活性（同三）。