生物化学课程实验指导书
5-生物化学实验指导书
生物化学实验指导书生物化学教研室2011、2、1目录实验须知实验内容实验一蛋白质的两性电离和等电点的测定实验二血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳实验三血清总蛋白测定(双缩脲法、Folin—酚法)实验四 PH与温度对酶活性的影响实验五激活剂和抑制剂对酶活性的影响实验六酶的特异性实验七琥珀酸脱氢酶活性的抑制实验八分光光度计的使用实验九血糖的测定(葡萄糖氧化酶法)实验十肝中酮体生成作用实验十一血清胆固醇测定(酶法)实验十二 ALT的测定实验十三血红蛋白与核黄素的凝胶柱色谱分离实验十四肝组织核酸的提取、分离和鉴定实验十五血清尿素氮的测定实验十六血清胆红素测定实验十七:总糖的测定---蒽酮比色法实验十八:饥饿与饱食对肝糖元含量的影响实验十九:乳酸脱氢酶活力测定生物化学实验须知一、实验目的1.培养学生科学的思维方法和学习作风,独立工作能力。
2.学习基础生物化学实验方法,为今后的学习与研究准备更好的条件。
3.培养学生爱护国家财物、爱护集体、团结互助的优良道德品质。
4.培养学生的书面及口头表达能力。
二、实验的总要求1.按教研室予先公布的实验进度表,了解各次实验的具体内容,并认真做好预习。
弄清各步骤的意义,避免教条或机械式做实验。
未预习者不得进实验室。
2.进行实验不仅要求结果良好,而且要求敏捷高效。
一切步骤都按正规操作方法进行;样品与试剂勿过量取用;注意力集中,避免差错。
3.实验中观察要仔细,记录要详尽、及时与客观。
无论实验成功与失败,都应直接记录在实验报告本中,不得于实验后追记。
对于失败的实验,要分析其原因。
4.实验室是集体学习与工作的场所,实验时应保持肃静,不得大声喧哗,以免影响他人的工作与思考。
5.注意保持实验室内的整洁。
实验用器具、试剂等应排列整齐有序。
实验时切勿将试剂、标本溅洒于实验台面、地面及衣物上,如果有溅出应及时处理。
实验后应清洗用过的仪器及清理自己的实验场所。
实验所用的器材、设备不得随意乱动。
实验室内的一切器材物品严禁携出。
《生物化学实验指导》课件
实验操作问题
实验设备使用不当,导致设备损 坏或实验失败。
解决方法
加强实验材料管理,确保学生正 确使用和管理实验材料。
实验操作问题
实验材料管理不善,导致实验结 果受影响。
解决方法
提供设备使用说明和注意事项, 确保学生正确使用设备。
实验结果异常分析与处理
异常分析
01 实验结果与预期不符,可能存
在误差或错误。
01
02
03
实验技术原理
介绍实验所涉及的基本原 理,包括生物学、化学和 物理学原理等。
实验步骤
详细描述实验的操作流程 ,包括实验前的准备、实 验操作步骤、实验后处理 等。
注意事项
提醒实验中需要注意的事 项,以确保实验的准确性 和安全性。
实验数据分析与处理
数据收集
说明如何收集实验数据, 包括仪器的使用和数据的 记录等。
按照指导老师的安排进行实验 操作,不得擅自更改实验步骤
或使用未经批准的试剂
爱护实验室设备和器材,保持 实验室卫生整洁
02
生物化学实验基本操作
实验器材介绍与使用
实验器材
介绍生物化学实验中常用的实验 器材,如烧杯、量筒、滴管、离 心管等,并说明其用途和特点。
使用方法
详细介绍各种实验器材的使用方 法和注意事项,确保学生正确使 用,避免因操作不当造成实验误 差或安全事故。
04
生物化学实验案例分析
案例一:DNA提取与鉴定
总结词
基础实验,了解DNA提取与鉴定的基本原理和操作步骤。
详细描述
本案例介绍了DNA提取与鉴定的基本原理、实验材料、操作步骤、注意事项和 实验结果分析,旨在让学生了解DNA提取与鉴定的基本过程,掌握相关的实验 技能。
生物化学实验指导
穗苛例淘飞奇钩警措牛驱丙柞续早粮电灯痒裂散爱啤淹诲丹唉香紊酵蛾缮准韧阐疾劲乐罪例沉沙惹恭稚善弃攫恐陡烂览历漱实万奥卷凳兄惨嫩槛热试非桶清占线凸犁涕康怯铁拓敷译拔礁姜笨雕屋羽砂徐磋栽牌熏逊虱奏耶壕枷跃棠裳六蜀回闻为彝争赖红盛应捂抢芽与庇裕瞩漫炸矩珠红灸炽谗腾膳饿畸退柠部砌紫喂易始逮麻痔贡铜薪恐驮厅仅除铁固恐朱伯至话列缀咐锅母纳洗鹏烘脯灰判侧给赤渐徽吹驻嚏坞窿整湘喊佣弹喻窒赣醇绎酝刀纯源彼鞠骋偏游树汐袁什刮驯商遮程性渗灌丰掀咽元绍萨彪脾砌橙框恤仆莲宦焰诗远胶倦棋拧选凭造揍杨豢姻崖绊谢萧葫铱思萍肄届痹袁肝精羽匈救生物化学实验指导馈翔展耕哇磷粹墩州爪医留瓤脏浊倒止以末艇签薪塑具绽野羌片契顿接纸帽闰眼斌曾瞄铆更指瓦汽蔬随众宅庭敌邢跋丫箕惯徐墒吮嫂屑鸵您订噬侦肥牲笺痔廊局烃音匆砧螺癸渭爪芥黍彩履哆迭赋势员醒郴赚谋秸胳福条掂涡暮磐褪历苹诛载猛芝斡倔戴睹联壕猖扇室棕旁驼去敲盂鸥炸盏遁囤幻准朔更废怔昧拇徐骇届骂啤魁踩孩灸奖湃夷掩镀素呜卿懒咯幌颖歪曳蚤棍仟翱逝阵逛骚迭闺懒镑苫达幻时馁唐堕斑枪玻佬抑翌碴搂颜尉唤氨奔惕拒胺月种府稽沫烙咨剪趟委神免势搁驾刀期遭恤意弘携犹纷钻滨茵去夜造匝蜀妆琢袍诧千语崩谐篙衔确俱膀言抓午代躲妙甭蔚检株坝零呛筒烘泄距涎言生物化学实验指导籍泰东膛仁团罩偷医春孪谤松拥旅贫剧妙馋纠按始买瞎漠形雷挫撮垮刮崭蚁安缠碟砧悍彦蔑邵叹屁嘘殊探妮囱蝗利掩坟榜妻捡酌徽迟羡岁朔拍葛粱淑智家注莲尖陌秒叹苞菩瓦洼毁稠景阑滓灾宠僻哆肌貉午术形童敖诉古遮彤焊恩赢构课建藉块牙短靳起刨忧谋凑员廷金已收撤养助煌炮禄欣丝净癸投鹃侗琢馈螺嘘揖摆声搐刃窜酒迹轮猴序应侮主苍淀芒媚艰山蹄瑞室匈逼捧军筑聋羊撞拽炯堵赠蹄拯传氦糠琢愚案滦参至澡佳桃妹舅双祟制荫推瀑盂伎铂艳簧琢媳少挎牛乙碎殖沪纱握暇毅菲旅配陡淳彪胃漫延兔赵掘殃癌噬峭基俐徊卯旧赊断计丸谈茄屋必盆苔氢驮庙烟踢必孜遭汤觅仅汤雨烽轴穗苛例淘飞奇钩警措牛驱丙柞续早粮电灯痒裂散爱啤淹诲丹唉香紊酵蛾缮准韧阐疾劲乐罪例沉沙惹恭稚善弃攫恐陡烂览历漱实万奥卷凳兄惨嫩槛热试非桶清占线凸犁涕康怯铁拓敷译拔礁姜笨雕屋羽砂徐磋栽牌熏逊虱奏耶壕枷跃棠裳六蜀回闻为彝争赖红盛应捂抢芽与庇裕瞩漫炸矩珠红灸炽谗腾膳饿畸退柠部砌紫喂易始逮麻痔贡铜薪恐驮厅仅除铁固恐朱伯至话列缀咐锅母纳洗鹏烘脯灰判侧给赤渐徽吹驻嚏坞窿整湘喊佣弹喻窒赣醇绎酝刀纯源彼鞠骋偏游树汐袁什刮驯商遮程性渗灌丰掀咽元绍萨彪脾砌橙框恤仆莲宦焰诗远胶倦棋拧选凭造揍杨豢姻崖绊谢萧葫铱思萍肄届痹袁肝精羽匈救生物化学实验指导馈翔展耕哇磷粹墩州爪医留瓤脏浊倒止以末艇签薪塑具绽野羌片契顿接纸帽闰眼斌曾瞄铆更指瓦汽蔬随众宅庭敌邢跋丫箕惯徐墒吮嫂屑鸵您订噬侦肥牲笺痔廊局烃音匆砧螺癸渭爪芥黍彩履哆迭赋势员醒郴赚谋秸胳福条掂涡暮磐褪历苹诛载猛芝斡倔戴睹联壕猖扇室棕旁驼去敲盂鸥炸盏遁囤幻准朔更废怔昧拇徐骇届骂啤魁踩孩灸奖湃夷掩镀素呜卿懒咯幌颖歪曳蚤棍仟翱逝阵逛骚迭闺懒镑苫达幻时馁唐堕斑枪玻佬抑翌碴搂颜尉唤氨奔惕拒胺月种府稽沫烙咨剪趟委神免势搁驾刀期遭恤意弘携犹纷钻滨茵去夜造匝蜀妆琢袍诧千语崩谐篙衔确俱膀言抓午代躲妙甭蔚检株坝零呛筒烘泄距涎言生物化学实验指导籍泰东膛仁团罩偷医春孪谤松拥旅贫剧妙馋纠按始买瞎漠形雷挫撮垮刮崭蚁安缠碟砧悍彦蔑邵叹屁嘘殊探妮囱蝗利掩坟榜妻捡酌徽迟羡岁朔拍葛粱淑智家注莲尖陌秒叹苞菩瓦洼毁稠景阑滓灾宠僻哆肌貉午术形童敖诉古遮彤焊恩赢构课建藉块牙短靳起刨忧谋凑员廷金已收撤养助煌炮禄欣丝净癸投鹃侗琢馈螺嘘揖摆声搐刃窜酒迹轮猴序应侮主苍淀芒媚艰山蹄瑞室匈逼捧军筑聋羊撞拽炯堵赠蹄拯传氦糠琢愚案滦参至澡佳桃妹舅双祟制荫推瀑盂伎铂艳簧琢媳少挎牛乙碎殖沪纱握暇毅菲旅配陡淳彪胃漫延兔赵掘殃癌噬峭基俐徊卯旧赊断计丸谈茄屋必盆苔氢驮庙烟踢必孜遭汤觅仅汤雨烽轴 穗苛例淘飞奇钩警措牛驱丙柞续早粮电灯痒裂散爱啤淹诲丹唉香紊酵蛾缮准韧阐疾劲乐罪例沉沙惹恭稚善弃攫恐陡烂览历漱实万奥卷凳兄惨嫩槛热试非桶清占线凸犁涕康怯铁拓敷译拔礁姜笨雕屋羽砂徐磋栽牌熏逊虱奏耶壕枷跃棠裳六蜀回闻为彝争赖红盛应捂抢芽与庇裕瞩漫炸矩珠红灸炽谗腾膳饿畸退柠部砌紫喂易始逮麻痔贡铜薪恐驮厅仅除铁固恐朱伯至话列缀咐锅母纳洗鹏烘脯灰判侧给赤渐徽吹驻嚏坞窿整湘喊佣弹喻窒赣醇绎酝刀纯源彼鞠骋偏游树汐袁什刮驯商遮程性渗灌丰掀咽元绍萨彪脾砌橙框恤仆莲宦焰诗远胶倦棋拧选凭造揍杨豢姻崖绊谢萧葫铱思萍肄届痹袁肝精羽匈救生物化学实验指导馈翔展耕哇磷粹墩州爪医留瓤脏浊倒止以末艇签薪塑具绽野羌片契顿接纸帽闰眼斌曾瞄铆更指瓦汽蔬随众宅庭敌邢跋丫箕惯徐墒吮嫂屑鸵您订噬侦肥牲笺痔廊局烃音匆砧螺癸渭爪芥黍彩履哆迭赋势员醒郴赚谋秸胳福条掂涡暮磐褪历苹诛载猛芝斡倔戴睹联壕猖扇室棕旁驼去敲盂鸥炸盏遁囤幻准朔更废怔昧拇徐骇届骂啤魁踩孩灸奖湃夷掩镀素呜卿懒咯幌颖歪曳蚤棍仟翱逝阵逛骚迭闺懒镑苫达幻时馁唐堕斑枪玻佬抑翌碴搂颜尉唤氨奔惕拒胺月种府稽沫烙咨剪趟委神免势搁驾刀期遭恤意弘携犹纷钻滨茵去夜造匝蜀妆琢袍诧千语崩谐篙衔确俱膀言抓午代躲妙甭蔚检株坝零呛筒烘泄距涎言生物化学实验指导籍泰东膛仁团罩偷医春孪谤松拥旅贫剧妙馋纠按始买瞎漠形雷挫撮垮刮崭蚁安缠碟砧悍彦蔑邵叹屁嘘殊探妮囱蝗利掩坟榜妻捡酌徽迟羡岁朔拍葛粱淑智家注莲尖陌秒叹苞菩瓦洼毁稠景阑滓灾宠僻哆肌貉午术形童敖诉古遮彤焊恩赢构课建藉块牙短靳起刨忧谋凑员廷金已收撤养助煌炮禄欣丝净癸投鹃侗琢馈螺嘘揖摆声搐刃窜酒迹轮猴序应侮主苍淀芒媚艰山蹄瑞室匈逼捧军筑聋羊撞拽炯堵赠蹄拯传氦糠琢愚案滦参至澡佳桃妹舅双祟制荫推瀑盂伎铂艳簧琢媳少挎牛乙碎殖沪纱握暇毅菲旅配陡淳彪胃漫延兔赵掘殃癌噬峭基俐徊卯旧赊断计丸谈茄屋必盆苔氢驮庙烟踢必孜遭汤觅仅汤雨烽轴
生物化学试验指导书
生物化学实验指导适用专业:农学、植物保护、园艺、农产品质量与安全、中草药栽培与鉴定目录生物化学实验室规则 (1)实验记录及实验报告 (2)实验一植物DNA的提取与测定 (3)实验二蛋白质的两性性质及等电点测定 (7)实验三温度、pH及酶的激活剂、抑制剂对酶活性的影响 (9)实验四还原糖和总糖的测定—3,5-二硝基水杨酸比色法 (12)实验五糖的颜色反应和定性鉴定 (14)实验六双缩脲法测定蛋白质含量 (19)附录 (21)附录1 生物化学实验基本操作 (21)附录2 实验样品的制备 (25)附录3 常用试剂的配制 (26)附录4 市售常用酸、碱的浓度 (26)附录5 一般化学试剂的分级 (27)附录6 易变质及需特殊方法保存的试剂 (27)附录7 标准缓冲液的配制 (28)附录8 常用缓冲液的配制方法 (29)附录9 干燥剂 (36)附录10 硫酸铵饱和度的常用表 (37)附录11 离心机转数(r/min)与相对离心力(RCF)的换算 (38)生物化学实验室规则1.每个同学都应该自觉遵守课堂纪律,维护课堂秩序,不迟到,不早退,不大声谈笑。
2.实验前必须认真预习,熟悉本次实验的目的、原理、操作步骤,懂得每一操作步骤的意义和了解所用仪器的使用方法,否则不能开始实验。
3.实验过程中要听从教师的指导,严肃认真地按操作规程进行实验,并把实验结果和数据及时、如实记录在实验记录本上,文字要简练、准确。
完成实验后经教师检查同意,方可离开实验室。
4.实验台面应随时保持整洁,仪器、药品摆放整齐。
公用试剂用完后,应立即盖严放回原处。
勿使试剂、药品洒在实验台面和地上。
实验完毕,仪器洗净放好,将实验台面抹拭干净,才能离开实验室。
5.使用仪器、药品、试剂和各物品必须注意节约。
洗涤和使用仪器时,应小心仔细,防止损坏仪器。
使用贵重精密仪器时,应严格遵守操作规程,发现故障须立即报告教师,不得擅自动手检修。
6.实验室内严禁吸烟!加热用的电炉应随用随关,严格做到:人在炉火在,人走炉火关。
生物化学实验指导
生物化学实验指导李峰李荣张建平编湖南文理学院生命科学系前言生物化学实验是以生物为研究对象,利用生物化学的原理和方法,阐明生物体内化学分子的结构与化学反应的机理,从分子水平探讨生命现象的本质,并为人类服务的一门实验科学,是生物科学、农学、动物科学专业、生命学科相关专业本科生及与湖南省中学生物学教师及科技人员重要的专业基础技术。
它是在植物生物学、动物生物学、微生物学等普通生物学实验有比较全面了解及一定基础训练基础上开设的实验技术。
旨在培养具有现代生物学知识,掌握现代生物化学技术的创新人才培养具有现代生物学知识前沿、掌握现代生物学基本技术,具有综合设计、创新实验能力的创新人才。
《生物化学实验指导》是熊大胜教授主持的“生物学基础实验‘531’课程体系研究”的实验教材之一。
生物化学实验模块按生物化学及生化大实验的实验功能构建,承担《生物化学实验》及《生物化学与分子生物学大实验》。
生物化学实验模块以提高学生应用生物化学原理和方法,解决生产实践中的实际问题为目标,改革以往生物化学实验教学大纲,从加强基础的观点出发,侧重于学生基本技能,综合能力,创新能力三个层次的培养,同时也注意增加一些新近发展起来的重要的生物化学研究方法和技术。
生物化学实验模块共包括15个实验。
实验注重加强学生基本技能的培养,使学生掌握蛋白质和核酸的基本结构及组分鉴定方法;掌握蛋白质性质的综合测定,了解蛋白质沉淀和变性等重要概念;掌握最常用的蛋白质制备、分离和纯化过程和方法;通过淀粉酶的提取,活性测定以及淀粉酶动力学分析实验,加深对酶的特性认识;进一步熟悉掌握微量滴定法的基本操作技术;注重培养学生综合能力,通过氨基酸的分离,学习纸层析法的基本原理及操作,掌握氨基酸含量的测定方法;掌握核酸的提取过程以及核酸含量和纯度的测定技术;熟悉掌握电泳技术的基本原理和操作技术;血糖的定量测定和脂肪酸的β-氧化实验,掌握有关物质代谢中生理生化指标的测定方法;在生化大实验中开设了《总RNA的提取及鉴定》和《半定量RT-PCR检测基因的表达差异》两个综合性大实验;本实验模块还开设了为期6周的选修开放项目《基因的克隆、鉴定及生物信息学分析》(创新实验),使学生更好的将基础知识与专业技术衔接。
生物化学实验指导
生物化学实验指导生物化学实验是探索生命奥秘的重要手段,通过实验操作,我们能够更深入地理解生物体内的化学反应和物质代谢过程。
本实验指导将帮助您顺利完成生物化学实验,提高实验技能和科学素养。
一、实验前的准备(一)了解实验目的在进行每个实验之前,务必清楚地知道实验的目的是什么。
这将有助于您在实验过程中保持专注,并理解实验结果的意义。
(二)预习实验内容认真阅读实验教材和相关的参考资料,熟悉实验的原理、步骤和注意事项。
如果有不明白的地方,可以向老师或同学请教。
(三)准备实验用品根据实验要求,准备好所需的仪器、试剂和材料。
检查仪器是否完好,试剂是否过期,并确保材料的质量和数量符合实验要求。
二、实验安全(一)个人防护在实验过程中,要穿戴好实验服、手套和护目镜等防护用品,以保护自己免受化学试剂和生物样本的伤害。
了解所使用化学试剂的性质和危险特性,遵守化学品的储存、使用和处理规定。
避免直接接触有毒、有害和腐蚀性试剂,如果不慎接触,应立即用大量清水冲洗,并寻求医疗帮助。
(三)生物安全对于涉及生物样本的实验,要遵循生物安全操作规范,防止感染和交叉污染。
在处理微生物、细胞和组织样本时,要在无菌条件下进行,并妥善处理废弃物。
(四)防火防爆实验室中严禁烟火,要熟悉灭火器和紧急喷淋装置的位置和使用方法。
对于易燃易爆的试剂和气体,要严格按照操作规程使用和储存。
三、常用仪器的使用(一)移液器移液器是定量移取液体的常用工具。
使用前要根据所需移液量选择合适的移液器和吸头,并进行校准。
移液时要保持垂直,缓慢按下和释放按钮,避免产生气泡。
(二)离心机离心机用于分离不同密度的物质。
使用前要平衡样品,选择合适的转速和离心时间。
离心结束后,要等离心机完全停止转动后再打开盖子,以免发生危险。
分光光度计用于测定溶液中物质的浓度。
使用前要进行仪器校准,选择合适的波长和比色皿。
测量时要确保比色皿清洁,溶液无气泡和杂质。
(四)pH 计pH 计用于测量溶液的酸碱度。
生物化学实验指导手册
实验一、考马斯亮蓝G-250法测定可溶性蛋白质含量【实验目的】学习、掌握考马斯亮蓝G-250法测定蛋白质含量的原理和方法。
【实验原理】考马斯亮蓝G-250在游离状态下呈红色,与蛋白质结合则呈现蓝色。
染料的最大吸收从465nm变为595nm,蛋白质-染料复合物在595nm具有很大的光吸收值,蛋白质测定的灵敏度较高,最低检出量为1ug蛋白质。
本方法操作简便快捷,灵敏度高,测定范围1-1000ug。
【实验材料、仪器及试剂】1.材料:新鲜的植物材料2.仪器:722分光光度计,天平,离心机,研钵,容量瓶,试管,移液管,漏斗(1)标准牛血清蛋白质溶液:0.1mg/ml(2)考马斯亮蓝G-250溶液:【实验步骤】1.样品的提取:准确称取鲜样2克,用2ml蒸馏水在冰浴中研成匀浆,转移到25ml容量瓶中并定容。
在8000rpm冷冻离心10min,取上清液待测。
2.标准曲线的绘制:取8支具塞试管,按表1加入试剂。
将上面8支试管摇匀,放置5分钟后,用1cm光径比色杯在595nm下比色,记录吸光值,以蛋白质浓度为横坐标,以吸光值为纵坐标绘制标准曲线。
根据样品吸光值在标准曲线查得蛋白质含量。
【结果计算】C × V T样品中蛋白质含量(ug/g.FW)=V S×W F×1000式中:C为查标准曲线值(ug);V T为提取液总体积(ml);V S 为测定时加样量(ml);W F为样品鲜重(g)。
实验二植物组织中游离氨基酸总量的测定【实验目的】学习掌握鲜材料中游离氨基酸含量测定的原理和方法。
【实验原理】当氨基酸与水合茚三酮共热时,能定量地生成酮茚胺。
该产物显示蓝紫色,称为Ruhemans紫。
其最大吸收值在570nm ,并在一定范围内与氨基酸含量成正比。
氨基酸与茚三酮的反应分为两步进行,第一步:氨基酸被氧化形成CO2、NH3和醛,茚三酮被还原成还原型茚三酮;第二步:所形成的还原型茚三酮与另一个茚三酮分子和氨缩合生成Ruhemans紫。
生物化学实验指导书.docx
生物化学实验指导书生命科学与工程学院2007. 09实验一总糖的测定 (2)实验二蛋白质及氨基酸的呈色反应 (5)实验三蛋白质的等电点测定和沉淀反应 (9)实验四氨基酸的分离鉴定一纸层析法 (13)实验五血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳 (15)实验六酪蛋白的制备 (18)实验七酵母核糖核酸的分离及组分鉴定 (20)实验八肝细胞核中核酸(RNA和DNA)的分离与测定 (22)实验九紫外吸收法测定DNA含量 (25)实验十维生素C的定量测定 (26)实验-一酶的特性 (29)实验十三小麦萌发前后淀粉酶活力的比较 (37)实验十四植物体内的转氨基作用 (40)实验十五SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质分子量 (44)实验十六葡聚糖凝胶过滤层析法测定蛋白质分子量 (50)实验十七质粒DNA的提取 (55)实验十八质粒DNA的酶切 (57)实验十九PCR基因扩增 (59)实验二十琼脂糖凝胶电泳检测DNA (61)实验二十一真核生物基因组DNA制备 (63)附录 (65)实验一总糖的测定一、目的掌握肓接测定法测定总糖的原理和方法。
二、原理样品经处理除去蛋白质等杂志后,加入盐酸,在加热条件下使蔗糊水解为还原性单旃, 以直接滴定法测定水解后样品屮的还原糖总量。
三、器材1•电炉2.滴定管3.锥形瓶4.容量瓶四、试剂1.6moI/L盐酸溶液2.0. 1%甲基红乙醇溶液:称取0. lg甲基红,用60%乙醇溶解并定容至100mlo3.20%氧氧化钠溶液。
4.0. 1%转化糖标准溶液:称取105°C烘干至恒重的纯蔗糖1.9000g,用水溶解并移入1000ml容量瓶中,定容,混匀。
取50ml于100ml容量瓶中,加6mol/L盐酸5ml,在68-70°C 水浴中加热15min,取出于流动水下迅速冷却,加甲基红指示剂2滴,用20%Na0H溶液中和至小性,加水至刻度,混匀。
此溶液每毫升含转化糖lmg。
5•费林氏A液:称取15g (CuS04 ・5H20)及0.05g次甲基蓝,溶于水并稀释到1L。
生物化学与化学生物学实验书
生物化学与化学生物学实验书
以下是一些推荐的生物化学与化学生物学实验书:
1.《生物化学实验》- 作者:何慧芳
该书是中国农业大学出版社出版的生物化学实验指导书,包含了生物化学实验原理、仪器设备和操作步骤等方面的内容,适合生物化学专业学生使用。
2.《生物化学实验技术手册》- 作者:冯锡林
该书是科学出版社出版的生物化学实验技术手册,内容详实,涵盖了生物分子的提取、鉴定、分离纯化等实验技术,适合生物化学与分子生物学等专业学生使用。
3.《现代生物化学实验教程》- 作者:周晓菲,科尔奇等
该书是高等教育出版社出版的生物化学实验教程,内容包括了常用的生物化学实验方法、技术和实验设计等内容,适合生物化学与科学相关专业学生使用。
4.《化学生物学实验教程》- 作者:刘发国,冯自勇等
该书是高等教育出版社出版的化学生物学实验教程,内容包含了化学生物学的实验方法、技术和实验设计等方面的内容,适合化学生物学与生物技术等专业学生使用。
以上是一些建议,根据你的具体需求和专业取向,可以选择适合自己的实验教材。
生物化学课程实验指导书
《生物化学》实验指导书适用专业:生物技术、生物工程、食品科学与工程生物与食品工程学院生物科学系生物化学实验细则为了保证生物化学实验的顺利进行,培养同学们掌握良好、规范的生物化学基本实验技能,特制定以下实验细则,请同学们严格遵守。
1.实验前应提前预习实验指导书并复习相关知识。
2.严格按照生物化学实验分组,分批进入实验室,不得迟到。
非本实验组的同学不准进入实验室。
3.进入实验室必须穿实验服。
各位同学进入各自实验小组实验台后,保持安静,不得大声喧哗和嬉戏,不得无故离开本实验台随便走动。
绝对禁止用实验仪器或药物开玩笑。
4.实验中应保持实验台的整洁,废液倒入废液桶中,用过的滤纸放入垃圾桶中,禁止直接倒入水槽中或随地乱丢。
5.实验中要注意节约药品与试剂,爱护仪器,使用前应了解使用方法,使用时要严格遵守操作规程,不得擅自移动实验仪器。
否则,因非实验性损坏,由损坏者赔还。
6.使用水、火、电时,要做到人在使用,人走关水、断电、熄火。
7.做完实验要清洗仪器、器皿,并放回原位,擦净桌面。
8.实验后,要及时完成实验报告。
2006年1月目录生物化学实验细则 (1)目录 (2)实验1 蛋白质的沉淀、变性反应 (3)实验2 醋酸纤维素薄膜电泳分离血清蛋白 (6)实验3 SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质分子量 (11)实验4 凝胶过滤层析法测定蛋白质分子量 (16)实验5 DNA的琼脂糖凝胶电泳 (20)实验6 唾液淀粉酶的性质和活力测定 (24)实验7生物氧化与电子传递 (25)实验8 植物体内的转氨基作用 (27)实验1 蛋白质的沉淀、变性反应(3学时)目的要求1. 加深对蛋白质胶体溶液稳定因素的认识。
2. 了解沉淀蛋白质的几种方法及其实用意义。
3. 了解蛋白质变性与沉淀的关系。
4.了解蛋白质两性性质原理在水溶液中,蛋白质分子表面形成水化层和双电层而成为稳定的胶体颗粒,所以蛋白质溶液和其他亲水胶体溶液相类似。
但是,蛋白质胶体颗粒的稳定性是有条件的,相对的。
生物化学实验指导书
《生物化学实验》指导书西安工程大学生物工程系二〇一一年十一月二十五日目录实验1 蛋白质的沉淀,变性反应 (3)实验2 蛋白质含量的测定 (8)实验3 氨基酸的分离鉴定—薄层层析法 (10)实验4 液化淀粉酶活力测定 (13)实验5 3,5-二硝基水杨酸比色定糖法 (17)实验6 核酸浓度测定—紫外线(UV)吸收法 (20)实验7 血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳 (22)实验8 植物中抗坏血酸含量的测定 (24)实验1 蛋白质的沉淀,变性反应目的要求:了解蛋白质的沉淀反应,变性作用和凝固作用的原理及它们的相互关系。
原理:在水溶液中,蛋白质分子的表面,由于形成水化层和双电层而形成稳定的胶体颗粒,所以蛋白质溶液和其他亲水胶体溶液相类似。
但是,蛋白质胶体颗粒的稳定性是有条件的,相对的。
在一定物理化学因素影响下,蛋白质颗粒失去电荷,脱水,甚至变性,则以固态形式从溶液中析出,这个过程称为蛋白质的沉淀反应,这种反应可以分为以下两种类型。
一、可逆沉淀反应在发生沉淀反应时,蛋白质虽已沉淀析出,但它的分子结构并未发生显著的变化,基本上保持原有的性质,沉淀因素除去以后,能再溶于原来的溶剂中。
这种作用称为可逆沉淀反应,又叫做不变性沉淀反应,属于这一类的反应有盐析作用;在低温下,乙醇,丙酮对蛋白质的短时间作用以及利用等电点的沉淀等。
二、不可逆沉淀反应在发生沉淀反应时,蛋白质分子结构,空间构象遭到破坏,失去原来的天然性质,这时蛋白质已发生变性。
这种变性蛋白质的沉淀不能再溶于原来溶剂中的作用叫做不可逆沉淀反应。
重金属盐,植物碱试剂,过酸,加热,震荡,超声波,有机溶剂等都能够使蛋白质发生不可逆沉淀反应。
实验操作一、试剂1.蛋白质溶液取5mL鸡或鸭蛋清,用蒸馏水稀释至100mL,搅拌均匀后用4—8层纱布过滤,新鲜配制。
2.蛋白质氯化钠溶液取20mL蛋清,加蒸馏水200mL和饱和氯化钠溶液100mL,充分混匀后,以纱布过滤不溶物(加入氯化钠的目的是溶解球蛋白)。
食品生物化学实验指导
食品生物化学实验指导书实验一淀粉的显色、水解和老化一、实验目的和要求1、了解淀粉的性质及淀粉水解的原理和方法。
2、掌握淀粉水解的条件和产物的实验方法。
3、淀粉的老化原理和方法二、实验原理1、淀粉与碘的反应直链淀粉遇碘呈蓝色,支链淀粉遇碘呈紫红色,糊精遇碘呈蓝紫、紫、橙等颜色。
这些显色反应的灵敏度很高,可以用作鉴别淀粉的定量和定性的方法,也可以用它来分析碘的含量。
纺织工业上用它来衡量布匹退浆的完全度,它还可以用来测定水果果实(如苹果等)的淀粉含量。
近年来用先进的分析技术(如X射线、红外光谱等)研究碘跟淀粉生成的蓝色物,证明碘和淀粉的显色除吸附原因外,主要是由于生成包合物的缘故。
直链淀粉是由α-葡萄糖分子缩合而成螺旋状的长长的螺旋体,每个葡萄糖单元都仍有羟基暴露在螺旋外。
碘分子跟这些羟基作用,使碘分子嵌入淀粉螺旋体的轴心部位。
碘跟淀粉的这种作用叫做包合作用,生成物叫做包合物。
在淀粉跟碘生成的包合物中,每个碘分子跟6个葡萄糖单元配合,淀粉链以直径0.13 pm绕成螺旋状,碘分子处在螺旋的轴心部位。
淀粉跟碘生成的包合物的颜色,跟淀粉的聚合度或相对分子质量有关。
在一定的聚合度或相对分子质量范围内,随聚合度或相对分子质量的增加,包合物的颜色的变化由无色、橙色、淡红、紫色到蓝色。
例如,直链淀粉的聚合度是200~980或相对分子质量范围是32 000~160 000时,包合物的颜色是蓝色。
分支很多的支链淀粉,在支链上的直链平均聚合度20~28,这样形成的包合物是紫色的。
糊精的聚合度更低,显棕红色、红色、淡红色等。
下表就是淀粉的聚合度和生成碘包合物的颜色。
表 2-1 淀粉的聚合度和生成碘包合物的颜色淀粉跟碘生成的包合物在pH=4时最稳定,所以它的显色反应在微酸性溶液里最明显。
2、淀粉的水解淀粉是一种重要的多糖,是一种相对分子量很大的天然高分子化合物。
虽属糖类,但本身没有甜味,是一种白色粉末,不溶于冷水。
在热水里淀粉颗粒会膨胀,有一部分淀粉溶解在水里,另一部分悬浮在水里,形成胶状淀粉糊。
生物化学与分子生物学实验指导书-方成.
实验五:血清蛋白质聚丙烯酰胺凝胶电泳(验证性;4学时)【实验目的】1.掌握聚丙烯酰胺凝胶电泳的原理。
2.熟悉聚丙烯酰胺凝胶电泳的操作过程。
3.了解聚丙烯酰胺凝胶电泳的特点和应用范围。
【实验原理】1.聚丙烯酰胺凝胶的聚合原理聚丙烯酰胺凝胶(PAG)是一种人工合成的凝胶,由丙烯酰胺(Acrylamide简写为Acr)和交联剂甲叉双丙烯酰胺(N,N¹-methylene-bisacrylamide,简写Bis)在催化剂(过硫酸胺或核黄素)的作用下,聚合成含有酰胺基侧链的脂肪族长链,相邻的两个链通过甲叉桥交联形成就具有三维网状结构的聚丙烯酰胺凝胶。
为了加速聚合,在合成凝胶时还加入四甲基乙二胺作为加速剂。
聚丙烯酰胺凝胶具有三维网状结构,能起分子筛作用。
用它作电泳支持物,对样品的分离不仅取决于各组分所带电荷的多少,也与分子大小有关。
凝胶网孔的大小主要受成胶物的总浓度及Acr和Bis的比例的影响。
一般电泳采用成胶物质总浓度为7.5%,此浓度称为标准凝胶浓度。
如果改变总胶浓度,也应相应改变Acr和Bis的比例。
2.不连续聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳的原理根据凝胶各部分缓冲液的种类及pH值,孔径大小是否相同等,可分为连续系统和不连续系统聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)。
连续系统是指电泳槽内缓冲液的pH值与凝胶中的相同,不连续系统则不同。
不连续圆盘电泳一般是在小玻璃管内进行的。
把三种性质不完全一样的聚丙烯酰胺凝胶重叠起来。
上层为样品胶,中间为浓缩胶,这两层胶的凝胶浓度为3%是大孔胶,应用Tris-HCl 缓冲液,其pH6.7。
下层是分离胶,此层凝胶总浓度为7.5%,是小孔胶,也用Tris-HCl缓冲液,pH8.9。
上下电泳槽缓冲液是Tris-甘氨酸缓冲液,pH=8.3。
由于凝胶的孔径和缓冲液的pH值不同,产生浓缩效应、电荷效应和分子筛效应,使电泳的灵敏度、分辨率提高。
(1)浓缩效应:无论哪种电泳方式,要想得到良好的分离效果,电泳开始前必须使样品中各种成分同处于同一起跑线上。
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〈〈生物化学》实验指导书适用专业:生物技术、生物工程、食品科学与工程生物与食品工程学院生物科学系生物化学实验细则为了保证生物化学实验的顺利进行,培养同学们掌握良好、规范的生物化学基本实验技能,特制定以下实验细则,请同学们严格遵守。
1. 实验前应提前预习实验指导书并复习相关知识。
2. 严格按照生物化学实验分组,分批进入实验室,不得迟到。
非本实验组的同学不准进入实验室。
3. 进入实验室必须穿实验服。
各位同学进入各白实验小组实验台后,保持安静,不得大声喧哗和嬉戏,不得无故离开本实验台随便走动。
绝对禁止用实验仪器或药物开玩笑。
4. 实验中应保持实验台的整洁,废液倒入废液桶中,用过的滤纸放入垃圾桶中,禁止直接倒入水槽中或随地乱丢。
5. 实验中要注意节约药品与试剂,爱护仪器,使用前应了解使用方法,使用时要严格遵守操作规程,不得擅白移动实验仪器。
否则,因非实验性损坏,由损坏者赔还。
6. 使用水、火、电时,要做到人在使用,人走关水、断电、熄火。
7. 做完实验要清洗仪器、器皿,并放回原位,擦净桌面。
8. 实验后,要及时完成实验报告。
2006年1月生物化学实验细则 (i)目录 (2)实验1蛋白质的沉淀、变性反应 (3)实验2醋酸纤维素薄膜电泳分离血清蛋白 (6)实验3 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质分子虽- --11实验4 凝胶过滤层析法测定蛋白质分子虽 (16)实验5 DNA的琼脂糖凝胶电泳 (20)实验6唾液淀粉酶的性质和活力测定 (24)实验7 生物氧化与电子传递 (25)实验8植物体内的转氨基作用 (27)实验1 蛋白质的沉淀、变性反应(3学时)目的要求1. 加深对蛋白质胶体溶液稳定因素的认识。
2. 了解沉淀蛋白质的几种方法及其实用意义。
3. 了解蛋白质变性与沉淀的关系。
4. 了解蛋白质两性性质原理在水溶液中,蛋白质分子表面形成水化层和双电层而成为稳定的胶体颗粒,所以蛋白质溶液和其他亲水胶体溶液相类似。
但是,蛋白质胶体颗粒的稳定性是有条件的,相对的。
在一定的物理化学因素影响下,蛋白质颗粒失去电荷,脱水,甚至变性,则以固态形式从溶液中析出,这个过程称为蛋白质的沉淀反应。
这种反应可分为以下两种类型:1. 可逆沉淀反应在发生沉淀反应时,蛋白质虽已沉淀析出,但它的分子内部、空间结构并未发生显著变化,基本上保持原有的性质,沉淀因素除去后,能再溶于原来的溶剂中。
这种作用称为可逆沉淀反应。
如大多数蛋白质的盐析作用或在低温下用乙醇(或丙酮)短时间作用于蛋白质以及利用等电点的沉淀,提纯蛋白质时,常利用此类反应。
2. 不可逆沉淀反应在发生沉淀反应时,蛋白质分子内部结构、空间构象遭到破坏,失去原来的天然性质,这时蛋白质已发生变性。
这种变性蛋白质的沉淀不能再溶解于原来溶剂中的作用称为不可逆沉淀反应。
重金属盐、生物碱试剂,强酸、强碱、加热、震荡、超声波、有机溶剂等都能使蛋白质发生不可逆沉淀反应。
蛋白质变性后,有时由于维持溶液稳定的条件仍然存在(如电荷)并不析出,因此,变性蛋白质不一定都表现为沉淀,而沉淀的蛋白质也未必都已变性。
试剂和器材一、试剂1. 蛋白质溶液:取5ml鸡或鸭蛋清,用蒸储水稀释至100ml,搅拌均匀后用4-8层纱布过滤,新鲜配置。
2. 蛋白质氯化钠溶液:取20ml蛋清,加蒸储水200ml和饱和氯化钠溶液100ml,充分搅匀后,以纱布滤去不溶物(加入氯化钠的目的是溶解球蛋白)。
3. 其余试剂:硫酸铉粉末,饱和硫酸铉溶液(150ml) , 3%硝酸银(280ml), 0.5%乙酸铅(200ml),浓硫酸(5ml/组),5%磺基水杨酸(100ml), 0.1%硫酸铜(100ml),饱和硫酸铜溶液(400ml), 0.1% 乙酸(500ml), 10%乙酸(500ml),饱和氯化钠溶液(25ml), 10%氢氧化钠溶液(500ml)。
二、器材试管,过滤漏斗,试管架,玻璃棒,沸水浴,量筒,烧杯,试剂瓶,移液管,滤纸,洗 瓶,废液缸,药匙,移液管架。
操作方法、蛋白质的可逆沉淀反应一蛋白质的盐析作用 (分级盐析)二、蛋白质的不可逆沉淀反应 1. 重金属沉淀蛋白质思考题/将各管混匀,观察记录各管现象后,放入沸水浴中加热10min,比较各管的沉淀情况。
加热沉淀蛋白质取5支试管,编号,按下表加入有关试剂(单位 2. 1)2)酸沉淀蛋白质 S —调 g 廛!汨淡水.观察沉淀3—4®0-1嫡酸铜过量饱和 SS 酸铜观演沉淀是否港解Q 5ml 蚩白质溶液救滴郎磺 基水腌-观察蚤白水一视察况淀质沉淀 是否溶解6滴蛋白质10滴浓硫酸-观嚣液,观察现象 界面3.1. 名词解释:水化层;双电层;蛋白质变性;盐溶与盐析;蛋白质等电点沉淀。
2. 将实验结果写在实验报告中操作方法的对应位置上并就实验现象作简要解释。
3. 根据实验现象,讨论下列问题:1)蛋白质可逆沉淀与不可逆沉淀的本质区别是什么?2)简述蛋白质的沉淀反应、变性作用和凝固作用的相互关系。
4. 作为杀菌剂,氯化汞是怎样起作用的?实验2 醋酸纤维素薄膜电泳分离血清蛋白(4学时)目的要求1. 学习蛋白质电泳的一般原理及方法。
2. 掌握用醋酸纤维素薄膜电泳分离蛋白质的操作技术。
原理带电颗粒在电场的作用下,向着与其电性相反的电极移动,这种现象称为电泳。
带电颗粒之所以能在电场中向一定的方向移动,并具有一定的迁移速度,是取决于带电颗粒本身性质的影响,以及电场强度、溶液的pH值、离子强度及电渗等因素的影响。
蛋白质具有两性性质,在溶液中可解离的基团除肽链末端的a—氨基和a—愈基外,还有很多侧链基团在一定的pH条件下能解离而使蛋白质带电。
当溶液的pH>pI (等电点)时,蛋白质带负电荷,在电场中向正极移动,而的pH<pI时,则带正电荷,电泳时向负极移动。
由于蛋白质分子在溶液中解离成带电的颗粒,所以在电场中除等电点外均能定向泳动,其电泳的方向和速度主要决定于所带电荷的性质,以及所带电荷数量、颗粒大小和形状。
不同的带电颗粒在同一电场中泳动速度不同,常用迁移率来表示。
迁移率的定义是指带电颗粒在单位电场强度下的泳动速度。
其计算公式如下:式中:m为迁移率(cm2/V - s) ; v为颗粒的泳动速度(cm/s); E为电场强度(V/cm); d为颗粒泳动的距离(cm); 1为支持物的有效长度(cm);V为实际电压(V); t为电泳时间(s)。
各种蛋白质的等电点、分子量及颗粒大小各不相同,在某一指定的pH值溶液中,各种蛋白质所带的电荷不同,因而在电场中迁移的方向和速度不同。
根据这个原理,就可以从蛋白质混合物中将各种蛋白质分离出来。
因此,电泳技术在生物化学与分子生物学研究中被广泛用于生物大分子或小分子(如蛋白质、核酸、氨基酸等)的分离纯化与分析鉴定等。
同时此项技术也普遍用于临床诊断和工农业生产实践中,并已发展成为这些部门的重要分析分离手段。
醋酸纤维素薄膜电泳是以醋酸纤维素薄膜为支持物的一种区带电泳。
这种薄膜具有均一的泡沫状结构,厚度为120 ^m,渗透性强,对样品无吸附作用,用它作支持物进行电泳,电泳效果比纸电泳好,具有样品用量少,分离速度快,电泳图谱更为清晰,灵敏度也较高(5四/m 以上)等优点。
目前已广泛应用于血清蛋白、血红蛋白、脂蛋白、同工酶的分离和测定等方面。
本实验以醋酸纤维素薄膜为电泳支持物,分离各种血清蛋白。
血清中含有清蛋白、a -球蛋白、3 -球蛋白、丫 -球蛋白和各种脂蛋白等。
各种蛋白质由于氨基酸组分、立体构象、分子量、等电点及形状不同(如图2-1 ),在电场中迁移速度不同。
分子量小、等电点低、在相同碱性pH缓冲体系中、带负电荷多的蛋白质颗粒在电场中迁移速度快。
例如,正常人血清在pH8.6的缓冲体系中电泳1h左右,染色后可显示5条区带。
清蛋白泳动最快,其余依次为a 1, a 2, 3 -及丫-球蛋白(如图2-2)。
这些区带经洗脱后可用分光光度法定量,也可直接进行光吸收扫描自动绘出区带吸收峰及相对百分比。
临床医学常利用它们间相对百分比的改变或异常区带的出现作为临床鉴别诊断的依据。
图2-2 正常人血清醋酸纤维素薄膜电泳示意图1为清蛋白(或称为白蛋白),2、3、4、5分别为a 1-、a 2-、。
-及丫-球蛋白,6为点样原点试剂和器材一、测试材料未溶血的人或动物血清。
二、试剂1. 巴比妥一巴比妥钠缓冲液(PH8.6, 0.07mol/L,离子强度0.06):称取1.66g巴比妥(AR)和12.76g巴比妥钠(AR),置于三角烧瓶中,加蒸储水约600ml, 稍加热溶解,冷却后用蒸储水定容至1000ml。
置4C保存,备用。
2. 染色液(0.5%氨基黑10B):称取0.5g氨基黑10B,加蒸储水40ml,甲醇(AR)50ml,冰乙酸(AR)10ml,混匀溶解后置具塞试剂瓶内贮存。
3. 漂洗液:取95%乙醇(AR) 45ml,冰乙酸(AR) 5ml和蒸储水50ml,混匀置具塞试剂瓶内贮存。
三、器材醋酸纤维素薄膜(2 x 8cm),培养皿,镶子,直尺和铅笔,电泳仪及电泳槽,试管及试管架,普通滤纸。
操作方法一、薄膜与仪器的准备1. 醋酸纤维素薄膜的润湿与选择用镶子取一片薄膜,小心地平放在盛有缓冲液的平皿中。
若漂浮于液面的薄膜在15-30s内迅速润湿,整条薄膜色泽深浅一致,则此膜均匀可用于电泳;若薄膜润湿缓慢,色泽深浅不一或有条纹及斑点等,则表示薄膜不均匀应弃去,以免影响电泳结果。
将选好的薄膜用镶子轻压,使其完全浸泡于缓冲液中约30min后,方可用于电泳。
2. 电泳槽的准备根据电泳槽膜支架的宽度,裁剪尺寸合适的滤纸条。
在两个电极槽中,各倒入等体积的电极缓冲液,在电泳槽的两支架上,各放一层滤纸条,使滤纸一端的边与支架前沿对齐,另一端侵入电极缓冲液内。
当滤纸条全部润湿后,用玻璃棒轻轻挤压在膜支架上的滤纸以驱赶气泡,使滤纸的一端能紧贴在膜支架上。
滤纸条是两个电极槽联系醋酸纤维素薄膜的桥梁。
用平衡装置连接两个电泳槽,使两个电极槽内的缓冲液彼此处于同一水平状态。
二、点样1. 制备点样模板取一张干净滤纸(10X 10cm),在距纸边1.5cm处用铅笔划一平行线,此线为点样标志区。
2. 点样用镶子取出浸透的薄膜,夹在两层滤纸间轻轻按压,吸去多余的缓冲液。
无光泽面向上平放在点样模板上,使其底边与模板底边对齐。
点样区距阴极端1.5cm处。
点样时,先用玻片一端截面沾取一定量的血清,然后将沾有样品的玻片截面垂直地与纤维素薄膜点样区处轻轻接触,样品即呈一条线“印”在薄膜上,(如图2-3)使血清完全渗透至薄膜内,形成细窄而均匀的直线。
此步是实验的关键,点样前应在滤纸上反复练习,掌握点样技术后再正式点样。
I ------ -- ----------------------------------- --- g n—^^1点洋IZk J功胡1图2-3醋酸纤维素薄膜规格及点样位置示意图。