实验七 细菌鞭毛染色和运动性观察(半固体穿刺法)

实验七、细菌的鞭毛染色和运动性观察
问题与建议
对实验内容不明确
多进行基本技能的训练及实验指导
启发式教学（荚膜/芽孢染色为例）
鼓励交流与分享（成功/失败） 按要求准确操作是实验成功的关键
实验七、细菌的鞭毛染色和运动性观察
实验七、细菌鞭毛染色和运 动性观察（半固体 穿刺法）
实验七、细菌的鞭毛染色和运动性观察
实验七、细菌的鞭毛染色和运动性观察
四、实验方法
（一）半固体穿刺法观察运动性（无菌操作） 1、试管壁上标明BS及学号，用直的接种针 火焰灼烧柄及针挑取一点枯草芽孢杆菌 沿轴心穿刺接种于半固体培养基中，深 34厘米37℃培养2448小时（1周）后观 察生长情况（下次课补Байду номын сангаас结果）。 2、每排找一个人按同样的方式穿刺接种金黄 色葡萄球菌，并标明SA。
了解细菌鞭毛染色的应用
鞭毛的有无和着生方式具有十分重要的分类学意义
单端鞭毛
两端生鞭毛
端生丛毛
周生鞭毛
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三、实验材料
1、菌种：枯草杆菌（Bacillus subtilis）（连续活化34代，每10-12小时接种一次），金黄色葡萄球菌 （Staphyloccocus aureus） 2、材料与试剂：载玻片（非常洁净）等 清洗酸泡水洗蒸溜水泡酒精泡 染液A（单宁酸，FeCl3，福尔马林， NaOH） 染液B（AgNO3） 3、培养基：半固体培养基（0.5%琼脂）
实验材料（包括菌种、试剂、仪器设备）
方法与步骤 可能的结果 可能存在的问题 4. 两星期后交实验设计报告，并讨论实验可能性。该实验设计内容将计算 为一次平时成绩。
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设计性实验的格式
实验题目
成员的姓名，学号，组长及联系方式
实验目的 实验原理 实验材料（应当是小组成员自己能够采集或制备的） 实验设备 试剂的配制 操作步骤（步骤要详细） 讨论（包括可能的结果和可能存在的问题） 参考文献
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实验前准备工作
1.菌株的连续活化 2.染色液当天配制 3.无菌液（试管或三角瓶中） 的准备
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部分同学的实验结果实例
钾细菌的荚膜 水洗 不水洗
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部分同学的实验结果实例
枯草杆菌的芽孢 番红染色 孔雀绿+番红染色
观察和判断细菌鞭毛的方法
电子显微镜直接观察 根据培养特征判断：半固体穿刺、菌落（菌苔）形态 （在半固体培养基中呈扩散性生长）
光学显微镜下观察：特殊的鞭毛染色 在染色前先用媒染剂处理，使它沉积在鞭毛上，使鞭毛直径 变粗，然后再进行染色。 暗视野显微镜或相差显微镜观察
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（二）银染法
1、菌悬液的制备。沿试管壁流入直至快接近培养基 斜面的顶部，静置10min，同时可双手搓动试管。 2、制片：用移液枪取约100ul菌液于载玻片的一端， 顺着倾斜的玻片流下，自然干燥。 3、染色：滴加过滤的染液Ａ覆盖8分钟，用Ｂ液冲 洗去Ａ液，再用Ｂ液覆盖染色，缓缓加热至冒气， 维持约0．5秒(加热时注意勿使出现干涸面) 在菌体 多的部位可见深褐色至黑色(共约2分钟) ，停止加热， 用水冲净，干后镜检。 4、镜检，菌体及鞭毛为深褐色到黑色。
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开放设计性实验的准备
1. 分组 （每一排为一组，5-6人，推选1人为组长，负责本组协调，每个 人都要参与，在完成的实验设计报告中列出所有组员的学号，姓名） 2. 选题 （选感兴趣的小实验，查资料，讨论可行性）
3. 写实验设计（要求详细具体）
实验目的（可简单） 实验原理
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五、注意事项
1、穿刺接种时针及穿刺过程要直。 2、用于鞭毛染色的菌活力要强，操作时 动作要柔和，因为鞭毛易脱落。
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六、视频
细菌鞭毛染色法
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七、作业与讨论
1、绘图表示所观察到的细菌菌体及鞭毛形 态。 2、简述鞭毛染色的基本原理，鞭毛染色应 掌握哪些环节？注意些什么问题？ 3、记录观察到的细菌运动性结果（下次补 记）。 4、讨论实验成败的原因。
一、实验目的 学习并掌握细菌的鞭毛染色法
观察细菌鞭毛的形态特征和着生方式 观察细菌是否运动来间接证明是否有鞭毛
了解细菌鞭毛染色的应用
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二、实验原理
细菌的鞭毛极细，直径一般为 10～20nm；长度为15～20μm。 长度15～20μm。
直径10～20nm
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