β-葡萄糖苷酶水解银杏黄酮糖苷的研究
银杏悬浮培养细胞中黄酮糖苷提取动力学研究
中 图分 类号 ： ￥ ５ ６ ７ ． １
引 言
银 杏 黄 酮具 有 抗 菌 、 抗 氧化 和 抗 肿瘤 等 诸 多 作
用， 是一 种 应用 广 泛 的 制药 原 料 。 目前 从 药 用 植 物 中提取 黄 酮 类 化 合 物 及 其 他 活 性 成 分 的研 究 非 常 多， 常 用方 法如 水 提法 、 酶法 、 超 声 波 辅 助 提 取 法 等 ， 从实 验室 小试 到 大 规 模 提取 用 作 工 业 原 料 都 已有 成功 的报 道 。鉴于 药用植 物 原料来 源 的数 量 和季节 局 限性 ， 不少 学 者 在 人 工 条件 下 培 养 药 用 植
高浓 度 硝 普 钠 可 以 促 进 黄 酮 类 物 质 的 合 成 ； 在
悬 浮培 养 细 胞 中添 加 内 生 真 菌 能 促 进 细 胞 中 黄 酮
０ ． ０ ５ ｍ ｇ ／ ｍＬ备 用 ； 去离 子水 。
Ｌ Ｓ － Ｂ ５ ０ Ｌ型 高压 灭 菌 锅 ， 上 海华 线 医 用 核 子 仪
Ｖｏ １ ． ４０．Ｎｏ． ２
２ ０１ ３
银 杏 悬 浮 培 养 细 胞 中黄 酮 糖 苷 提 取 动 力 学研 究
邵 菊芳 朱红 威 张 兴 刘炯 天
（ 中 国 矿 业 大 学 化 工 学 院 ，江 苏 徐 州 ２ ２ １ １ １ ６ ）
摘
要 ：利 用 醇 提 法 从 人 工 悬 浮 培 养 银 杏 细 胞 中提 取 黄 酮 糖 苷 。 以扩 散 传 质 定律 为基 础 ， 根据质量平衡方程 ， 建 立
合 成 。Ｄ ａ ｎ ｏ ｖ ａ等发 现 金 丝桃 细胞 悬 浮 培 养 基 中 不添加苄胺 基腺 嘌呤 （ Ｂ Ａ） 会 导 致 总 酚 和 黄 酮 含 量 的增加 。
β-葡萄糖苷酶水解射干苷的研究
第39卷第3期2 0 2 1年3月中华中医药学刊C H I N E S E A R C H I V E S O F T R AD I T I O N A L C H I NE S E M E D I C I N EVol.39 No. 3Mar. 2 0 2 1D01：10. 13193/j. issn. 1673-7717.2021.03.011 P-葡萄糖苷酶水解射干苷的研究邹桂欣，辛旭阳，刘晶，尤献民，王光函，李国信(辽宁省中医药研究院，辽宁沈阳110034)摘要：目的采用P-葡萄糖苷酶水解射干苷，并对其酶水解动力学进行初步研究。
方法以射干苷的水解转化率为指标，考察各反应因素对射干香转化率的影响，并计算酶解反应动力学参数结果射干苷的最佳水解条件为反应时间20 m in;溶液f)H值为5.0,反应温度65 X；,酶浓度100 U. m L'底物初始浓度0. 118 mmo] •L-、在此条件下，射干苷水解转化率达到8〇%以上。
该水解反应过程符合单底物Michaelis M enten方程，其中Vmax(最大反应速率）值为2〇.83 mmol • (L M• m in」），Km(米氏常数）值为0.21 mmol • L — 1:结论采用P-葡萄糖苷酶水解射干普制备鸢尾黄素可行。
关键词：射干苷；鸢尾黄素；P-葡萄糖苷酶；水解;酶动力学中图分类号：R284.丨文献标志码：A 文章编号：丨673-7717(202丨）03^00404)4Study on Hydrolyzing of Tectoridin with (3 -glucosidaseZOU Guixin,XIN Xuyang,LIU Jing,Y0U Xianmin,WANG Guanghan,LI Guoxin(Liaoning Institute of Chinese Medicine, Shenyang 110034 ,Liaoning, China)AbsitSiCX： Objective The p - glucosidase was used to hydrolyze tectoridin and its enzymatic hydrolysis kinetics was studied. Method The effect of various reaction factors on the hydrolysis conversion rate of tectoridin was investigated and the kinetic parameters were calculated. Result The optimal technological parameters of hydrolysis were as the following. The reaction time was 20 min. The pH value was 5. 0 and the hydrolysis temperature was 65 X!. The enzyme concentration was 100 U •mL _l and the initial substrate was 0. 118 mmol • L-1. Under these conditions, the hydrolysis conversion rate of ectoridin reached more than 80%. The hydrolysis process conformed to the single substrate Michaelis Menten equation, where the maximum reaction rate (Vm) was 20. 83 mmol • (L"1•min 1 ) , and the Km value was 0. 21 mmol • L 1. Conclusion It is feasible to prepare tectori- genin by hydrolyzing tectoridin with p - glucosidase. Commercial p - glucosidase may be a specific hydrolytic enzyme of tectoridin.Keywords： tectoridin ； tectorigenin ；p- glucosidase ； hydrolysis ；enzyme kinetics射干苷是中药射干的主要代表成分之-，具有抗炎、镇痛 等多种药理作用n,属于异黄酮苷类成分，水溶性良好，但脂 溶性不良，口服后吸收较差，在体内需要肠道菌群的代谢转化，已有研究资料报道，射干苷口服后，在体内的人肠菌（主要为 双歧杆菌、乳酸杆菌、链球菌和真细菌A-44)作用下被转化成 鸢尾苷元（鸢尾黄素）并被吸收后才会产生药理作用4_61。
利用PB设计筛选芽孢杆菌GUTU06产水解银杏黄酮苷的β-葡萄糖苷酶的主要影响因子
利用PB设计筛选芽孢杆菌GUTU06产水解银杏黄酮苷的β-葡萄糖苷酶的主要影响因子作者：杨运何腊平黄露肖虹来源：《山地农业生物学报》2021年第02期摘要：利用Plackett-Burman（PB）设计对芽孢杆菌GUTU06的固态发酵培养基的主要培养基组分及培养条件进行筛选，旨在提高GUTU06所产β-葡萄糖苷酶的酶活力，并将其应用于水解银杏黄酮苷为苷元。
结果表明蛋白胨和发酵时间为主要影响因子。
在PB设计的基础上，获得了初步优化的培养条件，优化后β-葡萄糖苷酶的酶活力为0.9914 U/g，较初始培养基提高了3.8倍。
本文为β-葡萄糖苷酶实现工业化生产奠定基础，同时也为酶法水解银杏黄酮苷的研究提供一定参考依据。
关键词：Plackett-Burman（PB）设计; 主要因子; 芽孢杆菌; β-葡萄糖苷酶 ;银杏黄酮苷中图分类号：TQ925文献标识码：A文章编号：1008-0457（2021）02-0080-04国际DOI编码：10.15958/ki.sdnyswxb.2021.02.014Abstract：The main medium components and culture conditions of the solid fermentation medium of Bacillus sp.GUTU06 were screened by Plackett-Burman （PB） design to improve the enzyme activity of β-glucosidase，which is produced by GUTU06 and applied to hydrolyze ginkgo flavonoid glycosides into aglycones.The results of the experiment determined that peptone and fermentation time were the main influencing factors.On the basis of PB design，the initial optimized culture conditions were obtained.After optimization，the enzyme activity of β-glucosidase was0.9914 U/g，which was 3.8 times higher than that of the initial medium.This paper lays a foundation for the industrial production of β-glucosidase，and also provides a reference for the study of enzymatic hydrolysis of ginkgo flavonoid glycosides.Keywords：Plackett-Burman （PB） design; ma in factor;Bacillus;β-glucosidase; ginkgo flavonoid銀杏叶（Ginkgo biloba L.）提取物是目前国际上使用较为广泛的中草药之一，主要药效成分是黄酮类化合物[1]。
(完整版)银杏叶黄酮类化合物的提取研究进展
银杏叶黄酮类化合物的提取研究进展银杏树Ginkgo biloba L.又称白果树、公孙树，是我国古老的树种之一，具有“活化石”的美称。
由于其生长规律特殊，抗病能力强而受到国内外的重视。
有关银杏叶的有效成分及疗效的研究日益受到重视，已开发出保健品、化妆品、药品等多达100多种，形成国际市场上销售额20多亿美元的新兴产业。
银杏叶的化学成分有黄酮类、萜类、内酯类、酚酸类以及生物碱、聚异戊二烯等化合物。
黄酮类为银杏叶的主要有效成分之一，含量随品种、产地、树龄、不同的采摘时间而不同。
黄酮类化合物优异的抗氧化、抗病毒、防治心血管疾病、增强免疫力等作用而受世人瞩目。
药学研究表明，有38种银杏黄酮类化合物从银杏叶中分离出来，其中黄酮类化合物主要有3类：黄酮(醇)及其昔28种：如槲皮黄酮等；黄烷醇类：如儿茶素等4种；双黄酮：如白果双黄酮等6种(儿茶素)。
1 银杏叶黄酮的提取分离1.1 溶剂提取法目前国内外掀起了研究开发银杏叶热。
国内银杏叶常用溶剂例如乙醇、丙酮、醋酸乙酯、水以及某些极性较大的混合溶剂浸泡银杏叶进行提取，溶剂提取方法一般有：煎煮、冷浸、回流、渗施等经典方法。
1.1.1 水提取树脂分离法有关水浸提银杏黄酮苷的文献报道不多。
肖顺昌等报道了用l6倍量沸水分3次浸提银杏叶，得到的水溶液，经冷藏、分离杂质得溶液，然后用D101型吸附树脂吸附得到浓度达38％的黄酮苷。
胡敏等研究水浸提银杏叶黄酮苷并用树脂精制的工艺，探讨了影响黄酮苷浸出的主要因素以及最适的精制方法，结果表明：水为提取剂，在90℃水溶回流浸提银杏叶2次，4h／次，经沉淀，过滤，浓缩后，用树脂精制、冷冻干燥后，制得总黄酮苷含量高的提取物、产品得率为银杏叶干重的 1.2％-1.5％。
水提取成本低，没有任何环境污染，产品安全性高，但是水对有效成分的选择性差，提取率低。
1.1.2 有机溶剂浸提法一般的有机溶剂浸提法。
田呈瑞等研究了乙醇浸提银杏叶黄酮的方法。
银杏黄酮醇苷水解条件的正交实验研究
摘要： 目的 ： 察 复 方 银 杏注 射 液 中银 杏 黄 酮 苷 含 量 测 定 的 水 解 条 件 。 方 法 ： 用 正 交 设 计 法 ， 察 水 解 时 间 （ 、 解 温 考 采 考 Ａ） 水 度 （ ） 盐 酸 浓 度 （ ３个 因 素 对 高 效 液 相 色谱 法 含 量 测 定 的 影 响 。 结 果 ： 化 后 的 水 解 条 件 为 ： 解 １ ５ ， Ｏ 恒 温 水 浴 ， Ｂ 、 Ｃ） 优 水 ．ｈ ８ ℃
Ａ ｉ ｎ １０高效 液 相 色 谱 系 统 （ ｇｌ ｔ１ ０ ｅ 四元 泵 、 自动 进 样 器 、 柱温 箱、 变波 长扫描紫外检 测器） 可 。ＫＤ一 ９ 一 Ｉ 电热 恒 ８ 型
柏
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图 ｌ 对 照 品 及 供 试 品 色 谱 图
２ １ 色 谱 条 件 与 系统 适 用 性 ．
色 谱 柱 Ｚ ｒａ Ｂ—Ｃｌ （ ４ ６ ｏ ｂ ｘＳ ８ ５ ｍ，．ｍｍ ×１ ０ 柱 ５ｍｍ） 流动 ， 相 为 甲 醇 一 ０ ４ 磷 酸 溶液 （ ５ ５ ） 检 测 波 长 为 ３ ０ ｍ ， 速 ． ４ ：５ ， ６ｎ 流 １Ｏ ・ ｉ＿ ， 温 ３ 进 样 量 １ 。理论 板 数 按 槲 皮 素 峰 ． ｍｌ ｒ ｎ 。柱 ａ ０ Ｃ， Ｏ１ 计 算 不 低 于 ２ ０ ， 鼠李 素 分 离 度 大 于 １ ５ 各 峰 的 确 认 和 分 ５０异 ．， 离见图 １ 。
司 ） 。
现 ， 照 药 典 水 解 方 法处 理 １ 同 批 次 的 供 试 品 含 量差 异大 ， 参 的 所 以有 必 要 对 供 试 品 的 水 解 条 件 进 行 优 化 和 严 格 控 制 ， 其 为 质量标准的制定提供依据 。
固定化β-葡萄糖苷酶转化糖苷型异黄酮的研究
Ａｐ ． ２０ ７ ｒ ０
文章编号：１ ０ ・０５２ ０ ）２０ ０ －６ ０ ３ １ （ ７０ －３４０ ９ ０
固定化ｐ葡萄糖苷酶转 化糖苷型异黄酮的研 究 ．
陈庆庆， 夏黎 明
（ 大学 化学工程 与生物工程 学 系， 浙江 杭州 ３０２） 浙江 １０７
摘 要 ：利用 固定化 Ｂ葡萄糖 苷酶把糖苷型异黄酮水解成苷元型异黄酮 ，可 以提高大豆异黄 酮的生理活性 。用海 藻酸 ．
（ ｅ ａ ｍｅｔ ｆ ｈ ｍ ｃｌｎ ｉ ｈ ｍ ｃ ｎ ｉ ｅｉ ， ｈｊ ｇＵ ｉｅ ｉ ， ｎｇｈ ｕ３ ２ ， ｈｎ） Ｄ ｐｒ ｎ ｏ ｅ ｉ ｄＢｏ ｅ ｉ Ｅ ｇ ｅｒ ｇＺ ｅｉ ｎｖｒ ｔ Ｈａ ｚｏ １０ ７ Ｃ ｉａ ｔ Ｃ ａａ ｃ ｌ ａ ｎ ｎ ｎ ａ ｓｙ ０
ｇｕｏｉｅ ｏ ａｏ ｅｃｎｅｔ ｔ ｎｉ １ ｇｍ ～．ｈ ｏ ｍ ｆｍｍ ｂｌ ｅ －ｌｃｓ ａｅ ｅｄ ｓｄｉ５ ｌｃｓ ｓ ｓｆ ｖ ｎ ｏ ｃｎ ａ ｏ ． ｍ 、Ｌ ｔｅ ｌ ｅ ｉ ｏ ｉｚｄ１ｇ ｏｉｓ ａｓ ｅ ％ ｄ ｉｌ ｒｉ ｓ ２ ｖｕ ｏ ｉ ３ ｕ ｄ ｂ ｕ ｓ
Ａｓ ｒ ｉｌｓ ｎｉｅ ｐ ｒ ｓ ｎｏ ｈ ｃ ｃｕ ｐｅ ｇ ｌｕ ｇ ｒ ｓ ｏ ｅ ｉ ｔ ｔｅ ａ ｉｍ ａｇ ｎ ｔ ．Ｔｈ ｅ ｅ ｔ ｏ ｕ ｓ ａｅ ｏ ｃ ｎ ａｉ ｎ ｌ ｌ ｉ ａｅ ｅ ｆ ｃｓ ｆ ｓ ｂ ｔ ｔ ｃ ｎ ｅ ｔ ｔｏ ，ｐＨ ｖ ｕ ａ ｄ ｒ ｒ ｌ ａ ｅｎ
钙包埋富含１葡萄糖苷酶 的黑 曲霉孢子 ， 以方便有 效地 固定１ 葡萄糖苷 酶。研究考察 了不 同底物浓度 ， Ｈ和温度对 ３ ． 可 ３ － ｐ 固定化１葡 萄糖苷 酶酶解 作用 的影响，以及重复分批酶解条件下固定化酶的稳定性。 当固定化酶珠体积 占反应 总体积 ３ ． 的５ ％，糖苷型异黄酮浓度为 １ ｍ ． Ｌ ，作用 ２ ｈ ｇ ～ ２ ｍ ４ ，酶解 效果 良 。其中，大豆 苷比染料木 苷易于被酶解。固定化 好 酶适宜的 ｐ Ｈ范围为 ３ ５ ～ ，最适 ｐ Ｈ值 为 ４８ ． 。耐热性 比固定化前有所增加 ，在 ７ ℃以下酶较 稳定。重复分批 酶解糖苷 Ｏ 型异黄酮 ，连续 ７ 批的转化率均可保持在 ９ ％以上 。该研究结果在大豆异黄酮的生物转化方面具有潜在 的应用前景 。 ０ 关键词：固定化１葡萄糖苷酶；糖苷型异黄酮：苷元 型异黄酮 ：酶水解 ３ ． 中图分类号：Ｏ５６ ；Ｑ １ ． ５． ８４ ２ ２ 文献标识码 ：Ａ
_葡萄糖苷酶水解银杏黄酮糖苷的研究
β2葡萄糖苷酶水解银杏黄酮糖苷的研究伍毅1,王洪新1,23 (1.食品科学与技术国家重点实验室,江南大学食品学院,江苏无锡214012;2.石河子大学食品学院,新疆石河子832003)摘要 采用β2葡萄糖苷酶水解银杏叶提取物(G BE),使糖苷型黄酮转化为苷元型黄酮。
通过正交试验得出水解的最佳工艺参数,即温度40℃,酶浓度5×10-3m g/m l,pH值5.0下水解6h。
由HP LC图谱可得该条件下水解的苷元得率9.08%,纯度68.24%。
酶解产物中还部分保留了银杏内酯等活性成分,有利于保留银杏叶提取物的综合生物活性。
关键词 银杏叶提取物;黄酮苷元;β2葡萄糖苷酶;水解中图分类号 Q946 文献标识码 A 文章编号 0517-6611(2008)01-00030-03Study on H ydrolyzing G inkgo F lavone G lycoside w ithβ2glycosid aseWU Yi et al (S tate K ey Lab oratory of F ood Science and T echn ology,Sch ool of F ood Science&T echn ology,S outhern Y angtze University,W uxi,Jiangsu 214012)Abstract β2glycosidase was used to hydrolyze the extract from ginkg o leaves to trans form flav one glycoside into flav one aglycone.T he optimum techn o2 logical param eters of hydrolysis were obtained through orth og onal ex perim ent,which were enzym e concentration of5×10-3m g/m l and pH value of5.0, hydrolysis tem perature of40℃and tim e of6h.It was kn own from HP LC spectrogram that the aglycone yield of hydrolysis under this condition was9.08%w ith purity of68.24%.In the enzym olysis products,the active ingredients such as ginkg o lactone were als o reserved partly,which was in fav orof reserving the synthesized bioactivity of ginkg o leaves extract.K ey w ords G inkg o leaves extract;Flav one aglycone;β2glycosidase;H ydrolysis 银杏(G inkgo biloba L.)属银杏科银杏属多年生落叶乔木,是冰川时期存活的孑遗植物之一,属我国特产植物,主产于河南、湖北等地,其种子、根、叶均可药用。
固定化_葡萄糖苷酶转化糖苷型异黄酮的研究_陈庆庆
的 5％，糖苷型异黄酮浓度为 1.2 mg⋅mL−1，作用 24 h，酶解效果良好。其中，大豆苷比染料木苷易于被酶解。固定化
酶适宜的 pH 范围为 3~5，最适 pH 值为 4.8。耐热性比固定化前有所增加，在 70℃以下酶较稳定。重复分批酶解糖苷
型异黄酮，连续 7 批的转化率均可保持在 90％以上。该研究结果在大豆异黄酮的生物转化方面具有潜在的应用前景。
陈庆庆, 夏黎明 (浙江大学 化学工程与生物工程学系, 浙江 杭州 310027)
摘 要：利用固定化β-葡萄糖苷酶把糖苷型异黄酮水解成苷元型异黄酮，可以提高大豆异黄酮的生理活性。用海藻酸
钙包埋富含β-葡萄糖苷酶的黑曲霉孢子，可以方便有效地固定β-葡萄糖苷酶。研究考察了不同底物浓度，pH 和温度对
固定化β-葡萄糖苷酶酶解作用的影响，以及重复分批酶解条件下固定化酶的稳定性。当固定化酶珠体积占反应总体积
在反应器中分别加入糖苷型大豆异黄酮母液适量，并用蒸馏水稀释至 100 mL，使浓度分别为 0.3 mg⋅mL−1，0.6 mg⋅mL−1，1.2 mg⋅mL−1，1.8 mg⋅mL−1 和 2.4 mg⋅mL−1，调 pH 为 4.8，各加入占总反应体积 5％固定化凝胶珠，在 50℃条件下反应。于 6 h，12 h，24 h，36 h 和 48 h 分别取样，用无水乙醇稀释至 适当浓度，离心 15 min(12000 r⋅min−1)，取上清液，进行 HPLC(高性能液相色谱法)测定。 2.4.2 重复分批酶解工艺
在反应器中加入 100 mL 糖苷型异黄酮和占总反应体积 5％固定化凝胶珠，在 pH 4.8、50℃条件下反
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高校化学工程学报
2007 年 4 月
应一定时间后，倒出反应液，加入新鲜底物继续进行下一批酶解反应，重复多批。每批反应液取出后，
银杏叶黄酮苷元的研究进展
银杏叶黄酮苷元的研究进展作者：芦增增王慧张秀雨裴珊珊郭广娅赵桂云来源：《现代食品·上》2019年第03期摘要：本文对银杏叶黄酮苷元的成分、活性、制备、检测等的研究现状进行了概述，并对其发展前景进行了展望。
关键词：银杏叶;黄酮苷元;功能活性中图分类号：S792银杏叶的药用历史悠久，银杏叶中的黄酮类化合物为主要活性成分。
银杏叶中95%的黄酮类化合物是以黄酮糖苷的形式存在，仅有极少数以游离苷元的形式存在。
黄酮苷元清除人体自由基的效价为黄酮糖苷效价的7倍2。
开发具有高附加值的银杏叶黄酮苷元将是今后的研究热点之一。
本文概述了国内外对银杏叶黄酮苷元的成分、活性、制备及检测等的研究现状，欲为研究开发高产值的银杏叶黄酮苷元产品提供一定的方向。
1银杏叶黄酮苷元的成分目前发现的银杏叶黄酮苷元有7种，分别为槲皮素（Quercetin）、山萘酚（Kaempferol）、异鼠李素（Isorhamnetin）、木樨草素（Luteolin）、三粒小麦黄酮（Tricetin）、杨梅素（Myricetin）和洋芹素（Apigenin）。
其中槲皮素、山萘酚和异鼠李素为银杏叶黄酮苷元的主要成分，通常被用来计算总黄酮苷的含量和检测银杏叶及其提取物的质量。
2黄酮苷元的生物活性2.1抗癌、抗肿瘤作用黄酮苷元能够调节多种癌细胞的基因表达，促使癌细胞凋亡。
槲皮素能够抑制鼻咽癌肿瘤细胞的增殖，诱导癌细胞分化和凋亡B）;还可以诱导人胃腺癌SGC7901细胞和结肠癌SW480细胞用、骨肉瘤MG-63细胞凋亡间。
山萘酚能诱导人类肝癌细胞系HepG2细胞凋亡回;对人非小细胞肺癌细胞系A549的生长具有一定的抑制作用;能够抑制肺癌细胞的增殖，诱导其凋亡8。
异鼠李素能使体外培养的C6脑胶质瘤细胞凋亡和坏死，抑制脑胶质瘤细胞的生长9;也能使胃癌MKN28的增殖受抑制。
木樨草素可以抑制结肠癌HCT-15恶性腺瘤细胞的增殖，并诱导其凋亡。
木樨草素和肌醇均可选择性抑制人肺腺癌A549的活性，合用效果更明显。
β-葡萄糖苷酶的研究(中文)
β-葡萄糖苷酶的研究1837年，Liebig和Wohler首次在苦杏仁汁中发现了β-葡萄糖苷酶。
β-葡萄糖苷酶(EC 3.2.1.21)的英文名是β-glucosidase，属于水解酶类，又称β-D-葡萄糖苷水解酶，别名龙胆二糖酶、纤维二糖酶和苦杏仁苷酶。
它可催化水解结合于末端非还原性的β-D-糖苷键，同时释放出配基与葡萄糖体。
β-葡萄糖苷酶广泛存在于自然界中，它可以来源于植物、微生物，也可来源于动物。
β-葡萄糖苷酶的研究1837年，Liebig和Wohler首次在苦杏仁汁中发现了β-葡萄糖苷酶。
β-葡萄糖苷酶(EC 3.2.1.21)的英文名是β-glucosidase，属于水解酶类，又称β-D-葡萄糖苷水解酶，别名龙胆二糖酶、纤维二糖酶和苦杏仁苷酶。
它可催化水解结合于末端非还原性的β-D-糖苷键，同时释放出配基与葡萄糖体。
β-葡萄糖苷酶广泛存在于自然界中，它可以来源于植物、微生物，也可来源于动物。
β-葡萄糖苷酶的植物来源有人参、大豆等；微生物来源的报道较多，如原核微生物来源的有脑膜脓毒性黄杆菌(Flavobacterium meningosepticum)、约氏黄杆菌(Flavobacterium johnsonae)等，真核生物来源的有清酒酵母(Candida peltata)、黄孢原毛平革菌（Phanerochaete chrysosporium）等；β-葡萄糖苷酶的动物来源有蜜蜂、猪肝和猪小肠等。
鉴于β-葡萄糖苷酶的研究广泛，本文对其一些研究进展进行讨论。
1 β-葡萄糖苷酶的分类β-葡萄糖苷酶按其底物特异性可以分为3类：第一类是能水解烃基-β-葡萄糖苷或芳香基-β-葡萄糖苷的酶，此类β-葡萄糖苷酶能水解的底物有纤维二糖、对硝基苯-β-D-葡萄糖苷等；第二类是只能水解烃基-β-葡萄糖苷的酶，这类β-葡萄糖苷酶能水解纤维二糖等；第三类是只能水解芳香基-β-葡萄糖苷的酶，这类酶能水解对硝基苯-β-D-葡萄糖苷等类似物。
一种高效水解大豆异黄酮糖苷的β-葡萄糖苷酶基因与应用[发明专利]
![一种高效水解大豆异黄酮糖苷的β-葡萄糖苷酶基因与应用[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/ea07e8accf84b9d529ea7a03.png)
专利名称：一种高效水解大豆异黄酮糖苷的β-葡萄糖苷酶基因与应用
专利类型：发明专利
发明人：刘玉焕,童铃,曹立创,李良,郭耿珊,汪思迪
申请号：CN201310149771.2
申请日：20130426
公开号：CN103789331A
公开日：
20140514
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种新型β-葡萄糖苷酶，它的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示。
它的氨基酸序列如SEQIDNO.3所示。
本发明还公开了含上述新型β-葡萄糖苷酶的表达载体，及重组β-葡萄糖苷酶及其在高效水解大豆异黄酮糖苷中的应用。
该新型重组β-葡萄糖苷酶在大肠杆菌表达体系中具有高效的可溶性表达，该酶的最适反应温度和最适pH分别为45℃和pH6.0，具有良好的热稳定性和较宽的pH酶解范围。
同时该酶对大豆苷、染料木苷具有高效的水解作用，水解效率为100%。
申请人：中山大学
地址：510275 广东省广州市新港西路135号
国籍：CN
代理机构：广州粤高专利商标代理有限公司
代理人：谢敏楠
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β-葡萄糖苷酶水解银杏黄酮糖苷的研究
９ ０ ％ ｗ ｔ ｕ ｉ ｆ ８ ２ ％ ．Ｉ ｅｅ ｚｍ ｌｓ ｒｄ ｃｓ ｔｅａ ｔ ｅ ｉ ｒｄｅ ｔ ｓｃ ｉｋ ｏｌ ｔ ｅｗ ｒ ａｓ ｓｒ ｄ ｖ ． ｙ ｗ ｉ ａ ｖ ｒ ．８ ｉ ｐ ｒ ｏ ６ ．４ ｈ ｙ ｔ Ｉ ｔ ｎｙ ｏ ｉ ｐｏｕ ｔ， ｃ ｖ ｎ ｅ ｉ ｓ ｕｈ ａ ｇ ｇ ｏ ｅｅ ｌ ｒ ｅ ｅ ａ １， ｈｃ Ｗ ｉ ｆ ｏ １ ｈ ｙｓ ｈ ｉ ｇ ｎ ｓ ｎ ｃ ａ ｎ ｏｅ ｖ ｈ ｓ ｎａ ｏ ｓｒｉｇｔｅｓｎ ｅｉ ｄｂｏ ｔ ｉ ｆｇ ｋ ｏ ｌ ｖ ｓｅｔ ｃ ． ｆ ｅｅｖ ｙ ｔ ｓ ｅ ｉａ ｉ ｔ ｏ ｉ ｇ ａ ｅ ｘ ａｔ ｒ ｎ ｈ ｈ ｚ ｃ ｖｙ ｎ ｅ ｒ
用， 是极好 的天然抗氧剂 。现代研究 表明 ， 银杏 黄酮被水解 成
曲线进行定量分 析 。计算 公式如下 ：
Ｉ，
Ｃ ％） （ ｌ ２ ３ × （ ＝［ ＋ ＋ ） Ｋ＋曰 × × ０ ％ （） ］ １ １ ０ 式 中， 为 槲 皮 素 峰 面 积 （ Ａ ） Ａ 为 异 鼠李 素 峰 面 积 ． ｍ ｕ； ２
wuchaosuhonglizhangxiaoming银杏叶提取物制取黄酮苷元的酶解工艺研究期刊论文食品与机械2005216yiwanghongxinzhusong葡萄糖苷酶法与盐酸法水解银杏黄酮制备黄酮苷元的比较期刊论文食品科学2008297weiwanghongxunzhangxiaoyu高产葡萄糖苷酶药用真菌菌株的筛选期刊论文食品科技2008337jingsunyanmeizhangyongzhong里氏木霉葡萄糖苷酶水解大豆异黄酮糖苷的工艺研究期刊论文中国粮油学报2009243yingliujingmeiwangjiaruimayongqiang传统发酵豆酱高葡萄糖苷酶活力制曲工艺研究期刊论文食品与机械2009256潘利华
生物制药综合实验讲义
实验一银杏叶总黄酮的提取及测定1 实验目的（1）掌握银杏叶中黄酮的提取方法；（2）掌握银杏叶中黄酮的含量测定。
2 实验原理近几年来，随着对黄酮类化合物研究的日益深入与重视，黄酮类化合物提取技术的发展也得到了促进。
目前提取黄酮类化合物的方法主要包括有机溶剂浸提法、超声波提取法、超临界流体萃取法、微波提取法和酶提取法等。
本实验采用有机溶剂浸提法提取银杏叶总黄酮，运用芦丁法测定银杏叶总黄酮含量。
3 实验材料、试剂和主要仪器3.1 实验材料与试剂银杏叶，芦丁标准品，无水乙醇，NaNO2，Al(NO3)3，NaOH。
3.2主要仪器移液枪，圆底烧瓶，水浴锅，旋转蒸发仪，布氏漏斗，容量瓶，10 ml刻度管，酶标仪。
4 实验步骤4.1银杏叶黄酮的提取称量2 g银杏叶放入圆底烧瓶中，加入100 ml 80%乙醇于圆底烧瓶中，于80℃下热回流提取2h，用漏斗过滤，弃渣留滤液，滤液用旋转蒸发仪浓缩并转入100 ml容量瓶中，用30%的乙醇定容，摇匀，供检测使用。
4.2芦丁标准曲线的绘制用80%乙醇配制0.03%（0.3 mg/ml）的芦丁标准储备液。
分别吸取刚配制好的芦丁标液0.0，15.6，31.3，62.5，125，250，500 μl置于7个1.5 ml EP管中，用80%的乙醇补足至0.5 ml，依次编号0~6，加入30 μl NaNO2（5%），摇匀静置6 min后加入30 μl A1(NO3)3 （10%），摇匀静置6 min后再加入400 μl NaOH （4%），混匀，用80%乙醇补至1 ml，静置l5~20 min，以0号试管为空白，用酶标仪在510 nm波长处测定吸光度，以吸光度(A)为横坐标，芦丁浓度(μg/ml)为纵坐标，绘制标准曲线。
4.3总黄酮含量的测定做2个样，取适量提取液置于1.5 ml EP管中，用80%乙醇补充至0.5 ml，加入30 μl NaNO2（5%），摇匀静置6 min后加入30 μl A1(NO3)3（10%），摇匀静置6 min后再加入400 μl NaOH（4%），混匀，用80%乙醇补至1 ml，静置l5~20 min，以0号试管为空白，用酶标仪在510 nm波长处测定吸光度。
黄酮类化合物生物改性及活性的研究进展
黄酮类化合物生物改性及活性的研究进展肖咏梅;李明;毛璞;袁金伟【摘要】Flavonoids are secondary metabolites of plants. In general, most flavonoids are combined with glucosides and have extremely complex molecular structures. In the nature, these flavonoids have a variety of biological activities, such as anti-oxidation, anti-virus, anti-tumor, scavenging free radicals and so on, however, due to poor solubility and stability of flavonoids, their bioavailability is limited. It has become a hot spot to modify the structure of flavonoids by biocatalytic methods to improve their water solubility or lipid solubility. In this paper, several methods for the modification of the biological structures of flavonoids at home and abroad and the biological activities of modified flavonoids were reviewed in recent years.%黄酮类化合物是一种植物生长的次级代谢产物,一般大多数黄酮类化合物与糖苷相结合,使其具有较复杂的分子结构.在自然界中,黄酮类化合物具有抗氧化性、抗病毒、抗肿瘤、清除自由基等多种生物活性,但是由于黄酮类化合物溶解性差,稳定性不好等导致其生物利用率低.利用生物催化的方法对黄酮类化合物结构进行修饰改变它们的水溶性或脂溶性、赋予黄酮类化合物特殊功能已经成为研究热点.综述了近年来国内外对黄酮类化合物进行生物改性的几种方法以及结构修饰对黄酮类化合物生物活性的影响.【期刊名称】《河南工业大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2019(040)002【总页数】10页(P123-131,139)【关键词】黄酮类化合物;生物改性;生物活性【作者】肖咏梅;李明;毛璞;袁金伟【作者单位】河南工业大学化学化工与环境学院, 河南郑州 450001;河南工业大学化学化工与环境学院, 河南郑州 450001;河南工业大学化学化工与环境学院,河南郑州 450001;河南工业大学化学化工与环境学院, 河南郑州 450001【正文语种】中文【中图分类】TS201.20 引言黄酮类化合物是一种广泛存在于植物体内的次级代谢的多酚类化合物[1]，主要是由2 个苯环（A环和B 环）与3 个碳原子桥连所形成的C6-C3-C6化合物（图1）。
银杏黄酮醇苷水解条件的正交实验研究
银杏黄酮醇苷水解条件的正交实验研究
钟尉方;王岳鸿;于莲
【期刊名称】《黑龙江医药科学》
【年(卷),期】2006(29)5
【摘要】目的:考察复方银杏注射液中银杏黄酮苷含量测定的水解条件.方法:采用正交设计法,考察水解时间(A)、水解温度(B)、盐酸浓度(C)3个因素对高效液相色谱法含量测定的影响.结果:优化后的水解条件为:水解1.5h,80℃恒温水浴,10mol·L-1盐酸.结论:该水解条件稳定,为准确测定复方银杏注射液中银杏黄酮醇苷提供保证.【总页数】2页(P34-35)
【作者】钟尉方;王岳鸿;于莲
【作者单位】佳木斯大学,黑龙江,佳木斯,154007;佳木斯大学化学与药学院,黑龙江,佳木斯,154007;佳木斯大学化学与药学院,黑龙江,佳木斯,154007
【正文语种】中文
【中图分类】R284
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银杏黄酮苷元制备的研究的开题报告
银杏黄酮苷元制备的研究的开题报告一、选题背景银杏是我国特有的珍贵防护树种，具有悠久的历史和广泛的应用价值。
银杏黄酮苷元是一种重要的次级代谢产物，具有抗氧化、抗菌、抗肿瘤和保护心脑血管等多种生理活性。
银杏黄酮苷元在药物、保健品和化妆品等领域有着广泛的应用前景。
目前，银杏黄酮苷元制备的方法主要分为化学合成和天然提取两种。
化学合成方法操作简单，但存在化学副产品的产生和环境污染问题。
而天然提取方法则是目前较为流行的制备方式，但其制备成本较高且提取率不高，增加了生产成本，阻碍了其在大规模生产应用中的推广。
因此，本研究旨在开发一种高效、环保的银杏黄酮苷元制备方法，以提高制备效率和降低制备成本，推进其应用产业化发展。
二、研究内容和目标本研究主要包括以下内容：1. 研究银杏黄酮苷元的化学结构、生理活性及其与生产质量的相关性。
2. 研究银杏黄酮苷元的天然来源和生物合成途径。
3. 基于药用植物组织培养技术，建立高效的银杏黄酮苷元生产模型，探究生长激素、光周期、培养基成分、温度等因素对黄酮苷元合成的影响。
4. 优化工艺流程，寻求最佳提取和分离条件，确定黄酮苷元含量的QC 标准，确立银杏黄酮苷元提纯过程的工艺参数和设备选择等。
5. 试制银杏黄酮苷元产品，进行质量评价、功能评估和安全性评估，为其大规模工业生产奠定基础。
本研究的目标是，在了解银杏黄酮苷元的生产情况、QC 标准和质量控制等前提下，建立高效、环保、经济的银杏黄酮苷元生产技术，实现从选材、栽培、提取到产品制备的完整流程，开发出稳定的银杏黄酮苷元产品，为其推广应用提供有力的技术支持。
三、研究意义本研究的意义在于，能够提高银杏黄酮苷元的生产效率和质量，降低生产成本，为其规模化生产提供技术支持和解决方案。
同时，该研究的成果能够促进植物组织培养技术的应用与推广，推进生态环境保护和可持续发展，为提高生态经济效益和人类健康做出贡献。
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β-葡萄糖苷酶水解银杏黄酮糖苷的研究伍毅1,王洪新1,2*(1.食品科学与技术国家重点实验室,江南大学食品学院,江苏无锡214012;2.石河子大学食品学院,新疆石河子832003)摘要采用β-葡萄糖苷酶水解银杏叶提取物(G BE),使糖苷型黄酮转化为苷元型黄酮。
通过正交试验得出水解的最佳工艺参数,即温度40℃,酶浓度5×10-3m g/m l,pH值5.0下水解6h。
由H P L C图谱可得该条件下水解的苷元得率9.08%,纯度68.24%。
酶解产物中还部分保留了银杏内酯等活性成分,有利于保留银杏叶提取物的综合生物活性。
关键词银杏叶提取物;黄酮苷元;β-葡萄糖苷酶;水解中图分类号Q946文献标识码 A 文章编号0517-6611(2008)01-00030-03S tud y on H y dro ly z in g G in k go F la v on e G ly c o s id e w ithβ-g ly c o s ida seW U Y i e t a l(S ta te K ey L abo ra to ry o f F o od S cien ce an d T e chn o lo gy,S ch oo l o f F o od S cien ce&T ech n o log y,S ou th e rn Y an g tze U n ive rsity,W u x i,J ian gsu 214012)A b s tra c tβ-g lyco sidase w a s u sed to h yd ro ly ze th e ex tract fro mg in k go lea ves to tran s fo rmflavon e g lyco side in to flavon e a g lycon e.T h e op ti m umtech n o-log ica l pa ram e te rs o f h yd ro lys is w e re obta i n ed th rou gh o rth o gon a l expe r i m en t,w h ich w e re en zym e con cen tra tion o f5×10-3m g/m l an d pH v a lu e o f5.0,h ydro ly sis tem pe ra tu re o f40℃an d ti m e o f6h.It w as k n ow n from H P L C spectrog ramth a t th e ag ly con e y ie ld o f h ydro ly sis u nde r th is con d ition w a s9.08%w ith pu r ity o f68.24%.In th e en zym o lys is p rodu cts,th e a ctive in g redien ts su ch a s g i n k go la cton e w e re a lso rese rved pa r tly,w h ich w as i nfa vo ro f re se rv in g th e syn th e sized b io activ ity o f g in k go lea ves ex tract.K e y w o rd s G in k go lea ve s ex tract;F la von e ag ly con e;β-g ly cos idase;H yd ro ly sis银杏(G inkgo b iloba L.)属银杏科银杏属多年生落叶乔木,是冰川时期存活的孑遗植物之一,属我国特产植物,主产于河南、湖北等地,其种子、根、叶均可药用。
银杏叶中含有丰富的黄酮类物质,,主要是由山奈酚、槲皮素以及异鼠李素等黄酮苷元与葡萄糖等单糖以O-糖苷键联接而成,具有广泛的药理作用,是极好的天然抗氧剂。
现代研究表明,银杏黄酮被水解成苷元后清除人体氧自由基的生物活性要明显高于黄酮糖苷,黄酮苷元的效价是黄酮糖苷效价的7倍[1-2]。
因此,改善黄酮的构型是提高银杏黄酮在人体内吸收率的重要途径。
笔者采用生物酶法水解银杏黄酮,生成了具有更高生物活性的苷元型黄酮,而且具有环保、反应条件温和等优点。
1材料与方法1.1材料银杏叶提取物(G BE),黄酮含量≥24%,由上海宝丰生物有限公司提供。
β-葡萄糖苷酶由西格玛奥德里奇(上海)贸易有限公司提供。
槲皮素标准品,纯度≥99.0%,由上海康九化工有限公司提供。
1.2 GBE的酶解工艺[3]称取5m gβ-葡萄糖苷酶,用柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲溶液(pH值5.0)定容至100m l。
然后,称取一定量的银杏叶提取物,适量甲醇溶解,加入缓冲溶液和酶,置于水浴锅中恒温水解,将水解液高速离心、过滤后,沉淀用无水甲醇溶解,再上旋转蒸发器以除去多余的溶剂,恒重后用10m l无水甲醇充分溶解得样液,0.45μm滤膜过滤后待测定。
1.3 总黄酮苷元的测定方法1.3.1分析条件[4]。
色谱柱:十八烷基硅烷键合硅胶柱(15 m m×6.0m m,5μm);柱温:30℃;流动相:甲醇∶水(0.5%磷酸)梯度洗脱;流速:1m l/m in;检测波长:368nm;进样量:10μl。
1.3.2 计算方法。
由文献可知,对照品溶液、换算因子的选用不同对测定结果的影响较小。
同时,受对照品来源的限制,3种苷元的定量分析都可以用槲皮素标准物的标准工作作者简介伍毅(1983-),女,四川通江人,硕士研究生,研究方向:食品功能性成分。
*通讯作者。
收稿日期2007-08-21曲线进行定量分析[5]。
计算公式如下:C(%)=[(A1+A2+A3)×K+B]×VW×100%(1)式中,A1为槲皮素峰面积(m A u);A2为异鼠李素峰面积(m A u);A3为山奈酚峰面积(m A u);K为槲皮素标准曲线斜率(m g/m l);B为槲皮素标准曲线截距;V为样品溶液体积(m l);W为样品重量(m g)。
1.3.3 槲皮素标准曲线的制作[6]。
准确称取对照品槲皮素0.02g,置于100m l容量瓶中,用甲醇定容至刻度,得槲皮素标准储备液(0.20m g/m l)。
用移液管分别取槲皮素标准储备液2.5、5、10、20、40m l,用无水甲醇定容至50m l容量瓶,得0.01、0.02、0.04、0.08、0.16m g/m l的标准溶液。
分别取标准溶液和储备液进样10μl,测定峰面积。
根据标准品的浓度和峰面积可得回归方程:y=7×10-5x-0.0058(2)r=0.99(n=5),线性范围为0.01～0.10m g/m l。
1.4 单因素试验影响酶解工艺效果的因素主要有时间、温度、酶浓度及pH值等[7]。
该试验分别研究了不同因素对GB E酶解效率的影响。
1.5 最佳工艺参数的确定在单因素试验的基础上,为了进一步确定反应的最优条件以及影响因素的主次,采用正交试验设计方法进行优化[8]。
表1为酶解试验正交试验因素水平表。
表1 酶解正交试验因素与水平T a b le1 F a c to rs a n dle v e ls o f o rth o g on a l te s t fo r e n zym o ly s is 水平L ev e lA(温度)T em pe ra tu re℃B(时间)T i m e∥hC(pH值)pHv a lu eD(酶浓度)E n zym e co n ce n tra t ionm g/m l 130540.025240650.005350760.0102结果与分析2.1 酶解单因素试验结果2.1.1 酶解时间的选择。
图1是固定酶解温度40℃,pH值安徽农业科学,J ou rn a l o f A n h u i A g r i.S c i.2008,36(1):30-32责任编辑刘月娟责任校对马君叶5.0,酶液用量为1m l 即酶浓度为0.005m g/m l 时,水解3、4、5、6、7、8h 对酶解效率的影响。
从图1可以看出,当水解时间达到6h 时,水解效率最高;当水解时间超过6h ,水解基本趋于平衡,苷元含量不再增加。
所以,选择水解时间为6h 。
图1 酶解时间对酶解效率的影响F ig.1 E ffe c ts o f e n zym o ly s ist i m e o nth e e ffic ie n c y o f e n z ym a t ic h y -d ro ly s is2.1.2 酶解温度的选择。
图2是固定酶解时间6h ,pH 值5,酶液用量为1m l 时,温度对酶解效率的影响。
如果温度低于酶的最适温度,则酶的活力大为降低;而如果温度高于酶的最适温度,则酶可能变性失活,降低甚至失去催化能力。
从图2可以看出,随着酶解温度的升高,酶解效率逐渐增加,在40℃时达到最大值;之后,随着温度的升高,酶解效率明显下降。
这可能是由于随着温度的升高,β-葡萄糖苷酶的活力下降所致。
所以,选择酶解温度为40℃。
图2 酶解温度对酶解效率的影响F ig.2 E ffe c ts o f tem p e ra tu re o n e n zym o ly s is e ffic ie n c y2.1.3 pH 值的选择。
图3是固定酶解时间6h ,温度为40℃,酶液用量为1m l 时,pH 值对酶解效率的影响。
从图3可以看出,苷元含量随着pH 值的增加而不断提高,并且在pH 值为5时达到最大值,此后苷元含量急剧下降,说明β-葡萄糖苷酶在pH 值5左右酶解活力最高。
所以,选择水解液的pH 值为5。
2.1.4 酶浓度的选择。
图4是固定酶解时间6h ,温度为40℃,pH 值5时,不同酶浓度对酶解效率的影响。
从图4可以看出,苷元含量随着酶浓度的增大而增加,但是酶浓度达到5×10-3m g/m l 时,黄酮苷元基本不再增加。
这可能是由于在该酶浓度下酶与底物的结合已趋饱和。
所以,采用酶浓度为5×10-3m g/m l 。
2.2 酶解条件的优化 从表2可以看出,影响酶解效率因素的主次顺序为B>C>A>D 。
所以,优化后的酶解条件为A 2B 2C 2D 2,即当温度40℃,酶浓度5×10-3m g/m l ,在pH 值5的水解液中水解6h ,生成的苷元含量可达到18.35%。
图3 pH值对酶解效率的影响F ig.3 E ffe c ts o f pH v a lu e on e n zym o ly s is e ffic ie n c y图4 酶浓度对酶解效率的影响F ig.4 E ffe c ts o f e n zym e c o n c e n tra t io n o n e n zym o ly s is e ffic ie n c y表2 酶解正交试验结果T a b le 2 R e s u lts o f o r th o g o n a l te s t fo r e n zym o ly s is序号N o.水平L e ve lA B C D 苷元含量A g ly co n e con ten t ∥%11 1 1 1 9.342122216.523133311.714212313.455223114.59623129.58731329.728321310.64933219.83k 112.5210.839.8511.25k 212.5413.9213.3011.94k 310.0610.3712.0011.93R2.483.553.450.692.3 酶解前后银杏叶提取物及其产物的H PLC 图谱分析 从图5、6可以看出,GB E 经β-葡萄糖苷酶水解后产生了一系列新物质。