干细胞的标记

标记干细胞及示踪：采用氧化铁颗粒标记干细胞在神经系统中应用 最早"]。对干细胞进行广泛的磁共振(MRI)活体示踪研究，用于辨别干 细胞移植后在受体中的迁徙、增殖情况，以解决由于常规MRI不能区 别移植干细胞和受体细胞的问题[8]。Frank等[91用单纯SPIO颗粒和 SPIO与转染剂结合后标记干细胞结果表面，单纯SPIO标记效率低且 浓度高，同时增加了其毒性。为增加标记的效能，Zhu等[”3在场强 4．7T的MR扫描仪上研究体内外PI。I。一SPIO标记的神经干细胞， 结果显示PI。I。一SPIO标记率为i00％，且在TzWl和T。’WI低信号 持续7天，证明了此方法标记神经干细胞的有效性。Daldruplink等 [1¨用脂质体包裹表面带负电荷的P7228(以阴离子右旋糖苷衍生物包 被的USPIOs)标记造血干细胞注射入正常鼠体内后14、24和48 h， 1．5T MR观察到肝脏和脾脏有明显的信号减低，骨髓则在24和48 h 后见信号减低，HoehnLl纠用转染剂包裹SPIO标记了小鼠胚胎神经干 细胞，并且动态的观察到了移植后的磁性标记细胞在脑内迁徙的过程。 因此SPIO在于细胞标记及示踪方面以显示出其独特的优势。
干细胞的标记
【摘要】干细胞是一类具有多向分化潜能的特殊细胞，伴随 着对其研究的深入，干细胞的临床应用前景也越来越广阔。 但干细胞移植后，如何从宿主辨别移植细胞，并观察其在 体内的生存和转归情况，一直是让人困扰的问题。采用有 效的技术来标记和示踪干细胞移植治疗的效果将对其在动 物实验研究和l临床应用上起到促进作用。本实验通过对注 入小鼠体内由SPIO标记的干细胞磁共振成像的研究进展 了以综述。 【关键词】干细胞；细胞示踪；磁共振成像
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实验流程 1.我们先称取了10mg的鱼精蛋白溶于10ml的蒸馏水中； 2.用枪吸取0.3ml的SPIO溶于20ml的无血清的培养基中； 3.取1中已配制的溶液100ul加入2中溶液中，使硫酸鱼精蛋白浓度为5ug/ml； 4.往3中的溶液加入等体积的双倍血清培养基，使最终SPIO的浓度为50ug Fe/ml,即所需溶液。 干细胞买来之后用我们预先配制好的混合液给细胞换液，孵育过夜，接 下第二天，观察磁珠标记的情况，并拍照，大多数细胞均被标记。为了得到 更高的标记效率，第三天我们又进行了富集纯化，富集过程如下： 1.用胰酶消化细胞，加入3ml的培养基，并将细胞转移到15ml的玻璃离心 管中，15000rpm离心5min，弃上清； 2.加入新的培养基打匀细胞，用强力磁石富集，弃上清，重复2次； 3.加入2.5ml新培养基打匀之后转移至小培养皿中，4小时之后细胞贴壁之 后观察，并进行拍照，观察富集情况，对比富集前后的磁珠标记的情况，富 集后几乎每个细胞均被标记。
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1．SPI()特异性靶向作用 所谓磁标记探针是指将顺磁性粒子以某种方因结合转入细胞内， 由顺磁 性物质在细胞内的蓄积与所连接的物质数量成正比，因此， 顺磁性物质引起的MR信号分布代表了受体、抗体或基因的分布，而 通过顺磁性标记的配体，在受体介导下，产生特异性浓集，达到选择 性强化进成像的目的。因此SPIO特异性靶分子或靶细胞结合的关键 技术就是SPIO表面预处理：①与特异性单克隆抗体或受体结合后标 记某种靶细胞；②带正电荷的转染剂(transfectionagent，TA)，如多 聚赖氨酸(PI。I，)、硫酸鱼精蛋白、繁脂质体等转染剂直接或间接连 接在SPIO包衣上，使其能够对某一靶物质具有特异性靶向的、并能 够进行体内或／和体外示踪，对SPIO表面处理不仅可增强其对靶物 质的亲和力，还有助于SPl0进入细胞内，对其进行特异性标记或示踪。