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研究背景
Research Background
血液透析与动 静 脉 內 瘘
血液透析（hemodialysis，HD）是急慢性肾功能衰竭患者肾脏替代治疗方式之 一，它能建立和维持的一个有足够功能的血管通路(vascular access)，即动静 脉内瘘(AVF)。自体动静脉内瘘是目前终末期肾脏病（ESRD，即尿毒症）​患​者​ 进行透析治疗时应用最​广​泛​的​慢​性​血​管​通​路,是保证透析顺利进行和提高患者生 存质量的关键。
ac
Compare with T0
ac
abc
ac
D O U
Compare with T0 Compare with D
结
果
Result
各组兔肺组织SOD活性和MDA含量的比较
Compare with SOD activity of lung tissue in group
100.00 90.00 MDA assaying of lung tissue 80.00
研究背景
Research Background
FSP-1即成纤维细胞特 异性蛋白-1(Fibreblast specific protein 1)，又 称为 钙结合蛋白A4 FSP-1 （S100A4），为 成纤维细胞特异性蛋白-1 S100家族中的一个重 要成员。是由101个氨 基酸组成的多肽, 分子 量为11. 5 kD ，含 有 2 EF-hand 钙离子 结合结构域 。
谭朝华, 徐军美, 杨昭云, 杨东林, 吕志平. 乌司他丁对急性肺损伤兔炎性细胞因子及氧自由基的影响. 中国医师 杂志, 2004, (10):1360-1362.
材料与方法
Materials and methods
location consensus sites
-1832 -1568 -1460 -1452 -1414 -1357 -1198 -815 -692 -366 -178 -168 -161 to to to to to to to to to to to to to -1826 -1562 -1454 -1446 -1408 -1351 -1192 -709 -686 -360 -172 -162 -155
2
The expression level of lung tissue mtTFA was measured by western blot in different groups.
DL
DR
OL
OR
UL
UR
研究背景
研究目的
材料与方法
结
果
讨
论
结
论
讨
论
Discussion
单肺通气诱发肺损伤模型的制备 单肺通气致肺损伤的机制
abc
left
30.00
20.00
right
10.00
0.00
D
O
U
D
O
U
Group Compare with O Compare with left lung Compare with D
Group Compare with left lung Compare with Dwith O Compare
​但是，内​瘘​的使用过程中会因为血栓形成或内膜增生等导致失败。
研究背景
Research Background
血管内膜增生
4、血管重构, AVF狭窄
1、 内皮细胞(EC)损伤
2、动脉平滑肌细胞（SMC）的 迁移、异常分化
3、血管内膜SMC增生、 细胞外基质沉积
自体动静脉内瘘功能障碍
胞特征性标记，用 种器官纤维化进程 中发生的间质化
Reporter Assay EMSA ChIP
材料与方法
Materials and methods
1、启动子区域的确定
↓ 克隆5 ´ -flanking sequence并连接到报告基因载体上 ↓ 缺失突变 ↓ 荧光素酶活性分析 ↓
确定转录调控区域（启动子区域） 生物信息学预测启动子区域
隆
酶切 连接， 转化
菌液电 泳
提质 粒
3、pGL4-FSP-1系列质粒鉴定 PCR + 酶切
FSP-1启动子区荧光素酶报告载体构建
结
果
Result
结
果
Result
各时间点氧合指数比较
Compare with oxygenation index in groups
600 500 oxygenation index 400 300 200 100 0 T0 T1 Time T2 T3
单肺通气诱发肺损伤模型制备成功
讨
论
Discussion 单肺通气诱发肺损伤机制
单肺通气诱发非通气侧肺损伤比通气侧严重
肺快速复张时，可造 成膨胀和不张肺组织 的交界处产生:
界面切力
本研究结果表明，与O组左侧比较，O组右 侧肺组织肺损伤评分升高、SOD活性降 低、MDA含量升高、mtTFA表达下调。提 肺水滞留 单肺通气转为双肺通气时，产生的 示非通气侧肺组织损伤严重，其机制可能 界面切力和肺水滞留，是引起非通气侧 为非通气侧肺组织长时间萎陷，肺泡Ⅱ型 肺组织受到牵张而损伤严重的重要原 细胞膜上 Na+-K+-ATP酶活性较肺通气侧明 因。 显下降，阻碍肺泡间质内的肺水重吸收， 因此肺泡内渗出液增多。
O组
U组
结
果
Result
免疫组化法测定各组肺组织mtTFA表达
400 350
300
250 200 150
左肺 右肺
结果表明：与D组 相比，O组肺组织 mtTFA表达降 低；
与O组肺组织 相比较，U组肺组 织mtTFA表达升 高
100
50 0D组ຫໍສະໝຸດ O组U组结
果
Result
结果表明：与D 组相比，O组肺组 mtTFA表达 织mtTFA表达降 低； 1.5 GAPDH 与O组左侧肺 组织相比，O组右 左肺 侧肺组织mtTFA 右肺 1 表达降低； Western blot结果以密度扫描分析：采用美国 Bandscan 5.0 与 O软件对 组肺组织 Westernblot结果进行定量分析，灰度值以累积光密度值（ IOD ）表示， 相比较， U 组肺组 0.5 织mtTFA表达升 结果通过以下公式计算： 高。 与免疫组化法 mtTFA蛋白累积光密度值 mtTFA蛋白半定量 = GAPDH的累积光密度值 测定mtTFA结果 0 一致。 D组 O组 U组
Compare with MDA assaying of lung tissue in groups.
14.00
SOD activity of lung tissue
a ac
ab
12.00
ac a ab
left right
abc
70.00 60.00 50.00 40.00
10.00 8.00 6.00 4.00 2.00 0.00
缺失突变
材料与方法
凝胶迁移阻滞实验(EMSA)

Materials and methods
EMSA是一种在体外研究蛋白质与核酸相互作用的技术，可用于定性和定 量分析
。
仅以DNA与蛋白质相互作用为 例介绍EMSA
材料与方法
凝胶迁移阻滞实验(EMSA)
Materials and methods
材料与方法
RBP-jk consensus sequence in FSP-1 promoter
ctcccac atgggaa tttccac gcGggaa gagggaa gtgggga gtgggag ttcccac tccccac ctcccac tacccac tgcccac ctgggaa
生物信息学预测启动子区域
FSP-1通过notch信号参与慢性肾病AVF的机制 研究
汇报人：曾惜
目 录
Contents
研究背景
研究目的
材料与方法
结
果
讨
论
结
论
研究背景
Research Background
慢性肾脏病(Chronic Kidney Dielace ， CKD),即各种原因引起的慢性肾脏结构 和功能障碍的疾病。近20年来，由于患 病率高、防治率低、病因谱发生显著变 化（糖尿病、高血压等人数迅速上升）， 已成为继心脑血管病、肿瘤、糖尿病之 后的一个威胁人类健康重要疾病。
小鼠实验研究发现，Notch信号通路是调节血管内皮细胞功能和血管 新生的关键。 激活的Notch/RBP-Jk信号可以增强由CDK引起的血管内膜增生。 同时， Notch信号通路可以调控血管重塑，抑制了Notch信号或者敲 除RBP-Jk，都可以下调FSP-1的表达，阻止平滑肌细胞的迁移，从 而抑制血管内膜增生
讨
论
Discussion
单肺通气诱发肺损伤机制
本研究结果表明，与D组比较，O组肺组织SOD 活性下降，MDA含量增加，提示单肺通气致肺损伤 时兔肺组织发生氧化应激反应。 其机制可能为：炎性起始的中性粒细胞募集，释放 MPO
TNF-α
MPO
IL-1
中性粒细胞募集
髓过氧化物酶
细胞超微结构模拟示意图
线粒体超微结构模拟示意图 线粒体环状DNA （mtDNA）
ChIP（染色质免疫共沉淀）
Materials and methods
ChIP是研究细胞内基因组DNA的某一区域与特定蛋白质[包括组蛋白 和非组蛋白（如转录因子）]相互作用的有效方法。
研究背景
研究目的
材料与方法
结
果
讨
论
结
论
结
果
Result