分子诊断技术的临床应用ppt课件
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《分子诊断项目》PPT课件
淋巴细胞免疫表型正常或治疗后能恢复正常者预后常 较好；
探索疾病发病机理、进程和预后（炎症、肿瘤）
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33
淋巴细胞亚群双色分析
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34
先天性无 r 球蛋白血症
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35
淋巴细胞亚群双色分析
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36
HLA-B27
☆ HLA-B27是MHC I类抗原，在有核细胞上广泛表达 HLA-B27的表达与强直性脊柱炎高度相关，超过90%的强 直性脊柱炎患者HLA-B27阳性。 其他，如Reiter s综和症阳性率70-90%，银屑病性关节 炎阳性率50-60%，葡萄膜炎阳性率40-50%
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42
染色体模式图
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43
人类23对染色体
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44
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45
反应体系中，从而脱离3’端
荧光淬灭基团的屏蔽，发出
荧光，荧光信号与PCR产物
的数量成比例。因此根据
PCR反应液的荧光强度即可
计算出初始模板的数量。
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15
定量PCR在乙肝检测中意义
1. 判断疾病的严重程度和传染性 2. PCR结果与血清免疫学结果的综合评价 3. 观察抗病毒药物疗效，指导药物用量 4. 献血员窗口期病毒核酸的筛查及早期诊断 5. 预测病情、判断预后 6. 器官移植、母婴垂直传播
指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号 的积累实时监测PCR进程，最后通过标准曲线对
未知模板进行定量分析。
Ct（cycle threshold)值定义：每个反应管的荧 光信号到达设定的阈值时所经历的循环数。
荧光阈值（threshold)的缺省设置是3-15个循 环的荧光信号的标准偏差的10倍，即：
探索疾病发病机理、进程和预后（炎症、肿瘤）
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33
淋巴细胞亚群双色分析
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34
先天性无 r 球蛋白血症
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35
淋巴细胞亚群双色分析
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HLA-B27
☆ HLA-B27是MHC I类抗原，在有核细胞上广泛表达 HLA-B27的表达与强直性脊柱炎高度相关，超过90%的强 直性脊柱炎患者HLA-B27阳性。 其他，如Reiter s综和症阳性率70-90%，银屑病性关节 炎阳性率50-60%，葡萄膜炎阳性率40-50%
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染色体模式图
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人类23对染色体
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44
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反应体系中，从而脱离3’端
荧光淬灭基团的屏蔽，发出
荧光，荧光信号与PCR产物
的数量成比例。因此根据
PCR反应液的荧光强度即可
计算出初始模板的数量。
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定量PCR在乙肝检测中意义
1. 判断疾病的严重程度和传染性 2. PCR结果与血清免疫学结果的综合评价 3. 观察抗病毒药物疗效，指导药物用量 4. 献血员窗口期病毒核酸的筛查及早期诊断 5. 预测病情、判断预后 6. 器官移植、母婴垂直传播
指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号 的积累实时监测PCR进程，最后通过标准曲线对
未知模板进行定量分析。
Ct（cycle threshold)值定义：每个反应管的荧 光信号到达设定的阈值时所经历的循环数。
荧光阈值（threshold)的缺省设置是3-15个循 环的荧光信号的标准偏差的10倍，即：
分子诊断技术临床应用
分子诊断技术的临床应用
分子诊断技术临床应用
一、分子诊断的概念
狭义的分子诊断是基于核酸的诊断技术， 是通过对DNA或RNA的检测来实现对疾病的检测 和诊断。但是，随着第一张人类基因组测序图 的完成，以及由此而带来的基因组学、蛋白组 学、代谢物组学等新兴学科的发展，分子诊断 的内涵已经从单纯的DNA/RNA拷贝、突变等变化 的检测，拓展到核酸与DNA片段、蛋白与多肽、 抗原与抗体、受体与配体等生物大分子的检测 ，并广泛应用于疾病的筛查、诊断、治疗监测 、预后与预防等生命科学的各个领域。
分子诊断技术临床应用
SAT 检测技术的优势：
检测靶标：RNA 灵敏度高，特异性强，易鉴别死 菌、活菌，适合临床判愈; 扩增产物：RNA 高效扩增，低污染; 核酸提取：磁珠法 提取纯度高 结果准确; 检测方法：实时荧光检测，扩增、检测同时进行全 程监控; 扩增方式：42℃恒温 无需热循环，设备成本低。
不同的技术平台有各自的优缺点，我们要针对不同的实验标本对象及需
求,选择适合的技术方法，力求在“高效,高质量,低成本”这三者间找到合适
的平衡点。
分子诊断技术临床应用
总结
分子诊断学的快速发展，得益与分子诊断技术 的日新月异。1990年启动的人类基因组计划的完 成经历了十三年的时间，而2007启动的1000人基 因组计划的完成却只用了3年，人类了解自然密 码的速度正在跨上快速列车。检验医学以提供精 密准确的数据服务于临床，而分子诊断技术正逐 渐成为临床实验室的常规应用技术，这将为检验 医学的发展提供巨大的机遇与挑战。
PCR＋临床诊断
PCR＋肿瘤研究
38%
分子诊断技术临床应用
二、PCR概述
（二）原理
双链DNA 变性
退火 延伸
分子诊断技术临床应用
一、分子诊断的概念
狭义的分子诊断是基于核酸的诊断技术， 是通过对DNA或RNA的检测来实现对疾病的检测 和诊断。但是，随着第一张人类基因组测序图 的完成，以及由此而带来的基因组学、蛋白组 学、代谢物组学等新兴学科的发展，分子诊断 的内涵已经从单纯的DNA/RNA拷贝、突变等变化 的检测，拓展到核酸与DNA片段、蛋白与多肽、 抗原与抗体、受体与配体等生物大分子的检测 ，并广泛应用于疾病的筛查、诊断、治疗监测 、预后与预防等生命科学的各个领域。
分子诊断技术临床应用
SAT 检测技术的优势：
检测靶标：RNA 灵敏度高，特异性强，易鉴别死 菌、活菌，适合临床判愈; 扩增产物：RNA 高效扩增，低污染; 核酸提取：磁珠法 提取纯度高 结果准确; 检测方法：实时荧光检测，扩增、检测同时进行全 程监控; 扩增方式：42℃恒温 无需热循环，设备成本低。
不同的技术平台有各自的优缺点，我们要针对不同的实验标本对象及需
求,选择适合的技术方法，力求在“高效,高质量,低成本”这三者间找到合适
的平衡点。
分子诊断技术临床应用
总结
分子诊断学的快速发展，得益与分子诊断技术 的日新月异。1990年启动的人类基因组计划的完 成经历了十三年的时间，而2007启动的1000人基 因组计划的完成却只用了3年，人类了解自然密 码的速度正在跨上快速列车。检验医学以提供精 密准确的数据服务于临床，而分子诊断技术正逐 渐成为临床实验室的常规应用技术，这将为检验 医学的发展提供巨大的机遇与挑战。
PCR＋临床诊断
PCR＋肿瘤研究
38%
分子诊断技术临床应用
二、PCR概述
（二）原理
双链DNA 变性
退火 延伸
PCR分子诊断技术PPT课件
PCR临床意义：
快速确诊是否有病毒、细菌等致病性微生物感染；
了解体内感染的数量、复制程度，是否具有传染性；
对临床治疗的用药监测，有无好转或耐药情况，如 产生耐药，如何指导用药种类及计量等。
PCR的发展趋势
随着临床分子生物学的不断发展，DNA测序技术已 逐渐成熟，可为临床疾病的分子诊断提供更精确的判 定依据，现由一代测序技术已发展至三代测序技术， 为医疗领域带来更方便、快捷的检测手段。
1
脱氧核甘三磷酸（dNTP） 标准PCR反应体系中包含4种等物质的量浓度的脱氧核甘三磷
酸，即dATP、dTTP、dCTP和dGTP。 二价阳离子
所有的热稳定DNA聚合酶都要求有游离的二价阳离子，常用 的是Mg2＋，Mn2+ 缓冲液
维持PCR反应体系中的PH，使用Tris－Cl缓冲液。 一价阳离子
4.仪器使用的注意事项：放置水平、有稳定的电压并 连接地线（配备UPS不间断电源）、保证正常运行的 室温温度不超过15-25，仪器要放置在通风、散热较好 的区域，远离水源、火源、有腐蚀性物质及磁场感染 等环境影响。
5.仪器的维护与保养：在日常实验结束，仪器冷却后 对仪器表面进行正常维护及保养工作；使用中应小心 热盖与反应槽的污染，并定期使用95%的乙醇进行擦 拭，如被污染严重应先使用中性消毒液进行处理；每
PCR实验室质量管理体系的建立
依据 国内《临床基因扩增检验实验室管理暂行办法》和ISO15189认可： CNAS CL02《医学实验室质量和能力认可》的准则和美国CAP认证 的PCR分子实验室要求等相关规定，建立标准、规范化的实验室 质量管理体系内容。
体系结构 质量手册：阐明实验室的质量方针、并描述质量体系的文件， 包括实验室的质量方针、目标、组织结构及质量体系要求等。 程序文件：对实验室工作流程的文件化描述，包括目的、范围、 职责及具体工作流程等。
《分子诊断与临床》PPT课件
自动化测序---常规应用
精品医学
22
链末端终止法测序原理 精品医学
化学降解法测序原理23
自动化测序
充分体现DNA序列自动化分析技术的简单、
安全、精确、并行和高效等特点
目前，自动化测序已成为DNA序列分析的
主流，几乎完全取代了手工测序
类型：
➢ 基于单一荧光染料标记的自动化测序系统 ➢ 基于多种荧光染料标记的自动化测序系统
精品医学
40
中国生物信息数据库
中国国家生物医学数据库 中国核酸序列数据库
➢ 中国核酸序列数据库 ➢ 中国人核酸序列统计数据库
精品医学
41
三、分子诊断在临床的应用
1. 单基因疾病的分子诊断 2. 多基因疾病的分子诊断 3. 肿瘤的分子诊断与预测 4. 感染性疾病的分子诊断 5. 在耐药性研究中的价值 6. 在个体化治疗中的应用 7. 分子诊断在临床的其他应用
➢ 随机测序法 （鸟枪法、人工转座子法 ） ➢ 定向测序法 （引物测序法、互套缺失法 ） ➢ 全基因组测序策略
精品医学
21
DNA测序常用技术
链末端终止法（ Sanger法） 化学降解法 测序新技术
➢ MALDI-TOF MS ➢ 杂交测序法 ➢ 焦磷酸测序技术 ➢ 原子探针显微镜法 ➢ 单分子测序技术
精品医学
42
1、单基因疾病的分子诊断
血红蛋白病的分子诊断 肌营养不良症的分子诊断 血友病的分子诊断
α1抗胰蛋白酶缺乏症的分子诊断
Leber`s遗传性视神经病变的分子诊断 其他单基因疾病的分子诊断
精品医学
43
谷氨酸(GAN) HbA
缬氨酸(GUN) HbS
镰状红细胞贫血患者基因组的限制性酶切分析
精品医学
22
链末端终止法测序原理 精品医学
化学降解法测序原理23
自动化测序
充分体现DNA序列自动化分析技术的简单、
安全、精确、并行和高效等特点
目前，自动化测序已成为DNA序列分析的
主流，几乎完全取代了手工测序
类型：
➢ 基于单一荧光染料标记的自动化测序系统 ➢ 基于多种荧光染料标记的自动化测序系统
精品医学
40
中国生物信息数据库
中国国家生物医学数据库 中国核酸序列数据库
➢ 中国核酸序列数据库 ➢ 中国人核酸序列统计数据库
精品医学
41
三、分子诊断在临床的应用
1. 单基因疾病的分子诊断 2. 多基因疾病的分子诊断 3. 肿瘤的分子诊断与预测 4. 感染性疾病的分子诊断 5. 在耐药性研究中的价值 6. 在个体化治疗中的应用 7. 分子诊断在临床的其他应用
➢ 随机测序法 （鸟枪法、人工转座子法 ） ➢ 定向测序法 （引物测序法、互套缺失法 ） ➢ 全基因组测序策略
精品医学
21
DNA测序常用技术
链末端终止法（ Sanger法） 化学降解法 测序新技术
➢ MALDI-TOF MS ➢ 杂交测序法 ➢ 焦磷酸测序技术 ➢ 原子探针显微镜法 ➢ 单分子测序技术
精品医学
42
1、单基因疾病的分子诊断
血红蛋白病的分子诊断 肌营养不良症的分子诊断 血友病的分子诊断
α1抗胰蛋白酶缺乏症的分子诊断
Leber`s遗传性视神经病变的分子诊断 其他单基因疾病的分子诊断
精品医学
43
谷氨酸(GAN) HbA
缬氨酸(GUN) HbS
镰状红细胞贫血患者基因组的限制性酶切分析
分子生物学技术的临床应用PPT精品课程课件讲义
DNA
RNA
核酸的一般理化性质
多元酸，具较强的酸性。 DNA是线状高分子，粘度很大，碱性条件下稳定；RNA分子较 小，粘度也小，对酸稳定。 核酸分子在机械力的作用下易发生断裂。
碱基有共轭双键，具紫外吸收特性，最大吸收峰在260nm。
可对核酸进行检测和定量，也可分析纯度。 核酸变性 ——加热、极端的pH、有机溶剂如甲醇、乙醇、尿素及甲 酰胺等。
核苷酸链（一级结构）
5末端 (游离磷酸基)
3'，5'–磷 酸二酯键 3末端 (游离羟基)
DNA的双螺旋结构
特征：
①两条链以反向平行的方式围绕同一中心轴向右盘绕
②主链处于螺旋的外侧（核糖+磷酸） 亲水核糖平面与螺旋轴平行
碱基处于螺旋的内侧，与中轴垂直
③螺距：10bp—3.4nm—3600 đ=2nm ④大沟与小沟：
蛋白质与蛋白质相互作用
酵母双杂交；蛋白质免疫共沉淀；
The Nobel Prize in Physiology or Medicine：
1978年 Arber等
限制性核酸内切酶的发现
2006年 Fire，Mello 2007年 Smith等
RNA干扰 基因打靶
The Nobel Prize in Chemistry ：
基因病
病因学诊断
分子诊断-第四代实验室诊断技术
诊断指标的选择； 诊断结果的判定；
限制性酶谱分析
分子生物学技术的临床应用
原位杂交技术 －筛选21三体 （间期）
13号染色体（绿）和21号染色体（红）探针与羊水间期细胞 杂交，可见两个绿色信号和三个红色信号，说明是21三体。
《分子诊断技术》课件
2010年代至今
随着生物信息学和人工智能技 术的发展，分子诊断技术不断 优化和升级，应用领域也不断
拓展。
02
分子诊断技术的基本原理
核酸的提取与纯化
核酸提取
核酸提取与纯化的重要性
是指从生物样本中分离和纯化核酸的 过程，是分子诊断技术中的基础步骤 。
是确保后续分子诊断实验结果准确性 和可靠性的关键。
案例三
总结词
SNP分型技术有助于个体化医疗的实现，为 患者提供更加精准的治疗方案。
详细描述
SNP分型技术可以对个体的基因变异进行精 细分析，预测个体对不同药物的反应和代谢 情况，为医生制定个体化的治疗方案提供科
学依据，提高治疗效果并减少副作用。
THANKS
感谢观看
特点
高灵敏度、高特异性、早期诊断、个性化治疗指导等。
分子诊断技术的应用领域
遗传性疾病诊断
通过对基因突变进行检测，对遗传性 疾病进行早期发现和干预。
肿瘤诊断与监测
通过对肿瘤相关基因和蛋白质的检测 ，对肿瘤进行早期发现、诊断、分期 、预后评估和复发监测。
感染性疾病诊断
通过对病原体基因和蛋白质的检测， 对感染性疾病进行快速诊断和用药指 导。
01
02
03
个性化医疗
结合基因组学、蛋白质组 学等技术，实现个体化、 精准化的诊断和治疗。
无创检测
研究无创或微创的分子诊 断技术，减少对患者的创 伤和痛苦。
实时监测
实现实时、动态的分子诊 断监测，及时发现病情变 化，为治疗提供及时反馈 。
05
案例分析
案例一：基因突变检测在肺癌诊断中的应用
总结词
基因突变检测在肺癌诊断中具有重要意义，有助于早期发现和个性化治疗。
随着生物信息学和人工智能技 术的发展，分子诊断技术不断 优化和升级，应用领域也不断
拓展。
02
分子诊断技术的基本原理
核酸的提取与纯化
核酸提取
核酸提取与纯化的重要性
是指从生物样本中分离和纯化核酸的 过程，是分子诊断技术中的基础步骤 。
是确保后续分子诊断实验结果准确性 和可靠性的关键。
案例三
总结词
SNP分型技术有助于个体化医疗的实现，为 患者提供更加精准的治疗方案。
详细描述
SNP分型技术可以对个体的基因变异进行精 细分析，预测个体对不同药物的反应和代谢 情况，为医生制定个体化的治疗方案提供科
学依据，提高治疗效果并减少副作用。
THANKS
感谢观看
特点
高灵敏度、高特异性、早期诊断、个性化治疗指导等。
分子诊断技术的应用领域
遗传性疾病诊断
通过对基因突变进行检测，对遗传性 疾病进行早期发现和干预。
肿瘤诊断与监测
通过对肿瘤相关基因和蛋白质的检测 ，对肿瘤进行早期发现、诊断、分期 、预后评估和复发监测。
感染性疾病诊断
通过对病原体基因和蛋白质的检测， 对感染性疾病进行快速诊断和用药指 导。
01
02
03
个性化医疗
结合基因组学、蛋白质组 学等技术，实现个体化、 精准化的诊断和治疗。
无创检测
研究无创或微创的分子诊 断技术，减少对患者的创 伤和痛苦。
实时监测
实现实时、动态的分子诊 断监测，及时发现病情变 化，为治疗提供及时反馈 。
05
案例分析
案例一：基因突变检测在肺癌诊断中的应用
总结词
基因突变检测在肺癌诊断中具有重要意义，有助于早期发现和个性化治疗。
分子诊断技术的应用进展-张健_PPT幻灯片
在血液肿瘤的诊断方面，FISH用于染色体异位的融合基因检测、基因缺失检测、 微小残留病灶监测、骨髓移植监测等。
在感染性疾病检测方面，FISH检测痰液标本中铜绿假单饱菌、流感嗜血杆菌等常 见菌的敏感性可以达到90％，特异性100％［9］。对于军团菌、幽门螺旋杆菌和结 核杆菌等较难培养鉴定的细菌，FISH在快速诊断上也显示了很好的应用前景。
• RT-PCR：病原体的多重PCR（Multiplex PCR），提高敏感性和 特异性的巢式PCR（nested PCR），研究基因表达的原位PCR （in situ PCR），分析RNA的逆转录PCR（RT-PCR）以及锚定 PCR、不对称PCR、膜结合PCR等等。
不同方式的PCR技术
名称 简并引物扩增法
• 温度循环式的扩增技术，以常规（conventional PCR）和实时 PCR（real time PCR，RT-PCR）为主，
• 等温方式的扩增技术，以核酸序列扩增法（nucleic acid sequence-based amplification，NASBA）、转录介导的扩增 （Transcription-mediated amplification，TMA），环介导等温 扩增（Loop-mediated isothermal amplification，LAMP）等技术 为主。
微流控芯片：是在几平方厘米的单晶硅片、石英、玻璃或有机聚合物 等材料上刻制微通道，实现样本预处理、反应、分离和检测的微型检 测平台，可快速高效、高通量的完成基因、蛋白及各种小分子分析和 鉴定
芯片实验室：是在微流控芯片基础上发展了更为复杂的分析系统，将 微机电技术于微流体技术相结合，将所需的反应均集中在一块芯片上， 建立微型分析系统（Micro total analytical system，u-TAS）
在感染性疾病检测方面，FISH检测痰液标本中铜绿假单饱菌、流感嗜血杆菌等常 见菌的敏感性可以达到90％，特异性100％［9］。对于军团菌、幽门螺旋杆菌和结 核杆菌等较难培养鉴定的细菌，FISH在快速诊断上也显示了很好的应用前景。
• RT-PCR：病原体的多重PCR（Multiplex PCR），提高敏感性和 特异性的巢式PCR（nested PCR），研究基因表达的原位PCR （in situ PCR），分析RNA的逆转录PCR（RT-PCR）以及锚定 PCR、不对称PCR、膜结合PCR等等。
不同方式的PCR技术
名称 简并引物扩增法
• 温度循环式的扩增技术，以常规（conventional PCR）和实时 PCR（real time PCR，RT-PCR）为主，
• 等温方式的扩增技术，以核酸序列扩增法（nucleic acid sequence-based amplification，NASBA）、转录介导的扩增 （Transcription-mediated amplification，TMA），环介导等温 扩增（Loop-mediated isothermal amplification，LAMP）等技术 为主。
微流控芯片：是在几平方厘米的单晶硅片、石英、玻璃或有机聚合物 等材料上刻制微通道，实现样本预处理、反应、分离和检测的微型检 测平台，可快速高效、高通量的完成基因、蛋白及各种小分子分析和 鉴定
芯片实验室：是在微流控芯片基础上发展了更为复杂的分析系统，将 微机电技术于微流体技术相结合，将所需的反应均集中在一块芯片上， 建立微型分析系统（Micro total analytical system，u-TAS）
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分子诊断技术的临床应用
6
二、PCR概述
PCR技术能在一个试管内将所要研究的 目的基因或某一DNA片段于数小时内扩增至 十万乃至百万倍，使肉眼能直接观察和判 断；可从一根毛发、一滴血、甚至一个细 胞中扩增出足量的DNA供分析研究和检测鉴 定。
分子诊断技术的临床应用
7
PCR 发展简史
1983 Mullis于12月16日成功发明了PCR 1985 关于PCR 的文章首次由 Mullis及其同事等人 在
伤寒杆菌、幽门螺旋杆菌等
分子诊断技术的临床应用
13
常规结核病实验室诊断方法及不足
1. 痰涂片作抗酸染色：阳性率低 、费时 2. 细胞培养“金标准”：周期太长(4-8W) 3. 血清学诊断：
a. 接种BCG可出现阳性 b. 不能区分活动性结核病和治愈后留下 损伤灶的病人 c. 交叉反应，假阳性 不能早期诊断！容易漏诊、误诊！
• 高效扩增、忠实复制！
分子诊断技术的临床应用
12
三、荧光定量PCR技术的临床应用
一 病原体检测
病毒性肝炎（HBV、HBV-YMDD、HCV）的基因检测 性病相关病原体（CT、NG、UU、HPV、HIV）的基因检
测 优生优育项目诊断：人巨细胞病毒（HCMV）、单纯疱
疹病毒（HSV）、弓形虫（TOX）、风疹病毒（RUB） 其它病原体检测：结核杆菌、肺炎支原体、EB病毒、
分子诊断技术的临床应用
15
荧光定量PCR检测TB-DNA的意义
3. 荧光定量PCR检出结核杆菌阳性率显著高于痰涂片 抗酸染色和改良罗氏培养法。
4. TB-DNA浓度可用于判断疗效： 痰标本中结核杆菌的数量呈逐渐下降趋势 ，
TB-DNA拷贝数下降。根据病原体DNA浓度，对 药物治疗及疗效观察提供参考依据
18
三、荧光定量PCR技术的临床应用
四 其它应用 1. 法医学鉴定 2. 抗病毒药物疗效的观察、指导 3. 缩短诊断的窗口期
分子诊断技术的临床应用
19
窗口期：
所谓“窗口期”,是指从感染病原体开始 ,直至用某种检测方法能够检测到该病原 体存在为止的这一段时间。
30%
32%
PCR＋遗传分析
PCR＋临床诊断
PCR＋肿瘤研究
38%
分子诊断技术的临床应用
10
二、PCR概述
（二）原理
双链DNA 变性
退火
（膜板） （双链分成单链） （膜板与引物杂交）
延伸
（DNA合成）
不断重复
PCR循环次数与DNA产量关系
分子诊断技术的临床应用
11
PCR反应的特点
• 高灵敏度 • 高特异性 • 简便快捷
《Science》杂志上发表 1989 12月《Science》杂志将PCR和它所使用的Taq
DNA聚合酶命名为第一个“年度分子”。 1993 10月13日 Mullis获诺贝尔化学奖
1995 荧光定量PCR技术出现
九十年代中期PCR临床应用在国内全面展开
1998年 荧光定量PCR技术开始在中国应用
分子诊断技术的临床应用
分子诊断技术的临床应用
1
一、分子诊断的概念
狭义的分子诊断是基于核酸的诊断技术， 是通过对DNA或RNA的检测来实现对疾病的检测 和诊断。但是，随着第一张人类基因组测序图 的完成，以及由此而带来的基因组学、蛋白组 学、代谢物组学等新兴学科的发展，分子诊断 的内涵已经从单纯的DNA/RNA拷贝、突变等变化 的检测，拓展到核酸与DNA片段、蛋白与多肽、 抗原与抗体、受体与配体等生物大分子的检测， 并广泛应用于疾病的筛查、诊断、治疗监测、 预后与预防等生命科学的各个领域。
分子诊断技术的临床应用
3
二、基于测序技术为基础的分子诊断技术 DNA的序列分析是分子诊断学的金标准，
各种遗传疾病，病毒或细菌的感染与变异，在 基因表达水平上的个性化用药，多基因疾病的 诊断与预测，最终都可以借助基因测序平台的 应用。
分子诊断技术的临床应用
4
三、基于扩增技术为基础的分子诊断技术 1983年Mullis发明了聚合酶链反应
分子诊断技术的临床应用
14
荧光定量PCR检测TB-DNA的意义
1. 能稳定检测10copy的TB-DNA ，灵敏度高 ，特异性强
2. 早期、快速、准确地诊断结核病。 痰液、肺及支气管灌洗液——肺结核 血液——播散性结核和各脏器的结核病 脑脊液——中枢神经系统结核病 宫颈拭子、尿道拭子——泌尿生殖道结核病
于临床检测
分子诊断技术的临床应用
8
PCR技术
PCR核心技术是从水栖高温菌中
分离到能耐高温的Taq酶，使扩增反
应不需要每一个循环加一次DNA聚合
酶，从而实现了自动化破性技术。
分子诊断技术的临床应用
9
PCR概述——2000至2013年发表论文篇
分子诊断技术的临床应用
2
根据分子诊断技术特征划分为三类：
一、基于分子杂交为基础的分子诊断技术 两条同源核酸分子（DNA或RNA）可以在
碱基互补的原则下形成异质双链是遗传物质 最重要的化学特征，这一过程亦被称为分子 杂交。分子杂交是所有分子生物学技术的基 础，从最初的印迹杂交到聚合酶链反应 （PCR），从基因芯片再到高通量的DNA测序 技术，都离不开碱基互补的分子杂交反应。
（Polymerase chain reaction，PCR），使 体外扩增DNA成为可能，开启了体外扩增和操 作DNA或RNA技术的发展。到现在，扩增DNA的 技术已经成为分子诊断应用最广的技术之一， 并发展变化了数十种核酸扩增检测技术。
分子诊断技术的临床应用
5
二、PCR概述
（一）PCR概念
PCR（Polymerase Chain Reaction）即聚 合酶链反应，是指在DNA聚合酶催化下，以母链 DNA为模板，以特定引物为延伸起点，通过变性、 退火、延伸等步骤，体外复制出与母链模板DNA 互补的子链DNA的过程。是一项体外核酸扩增技 术，能快速特异地在体外扩增任何目的DNA。
分子诊断技术的临床应用
16
三、荧光定量PCR技术的临床应用
二 肿瘤相关基因表达的检测： 1、包括癌基因、抗癌基因 2、肿瘤转移基因 3、转移抑制基因
分子诊断技术的临床应用
17
三、荧光定量PCR技术的临床应用
三 遗传病 1、等位基因检测 2、多基因遗传病的突变检测 3、基因表达异常所致遗传病检测
分子诊断技术的临床应用