5植物根系活力的测定TTC法
《植物生理学实验》实验05 根系活力的测定
实验步骤
定性测定 定量测定
定性测定
• 配置反应液 把1%TTC溶液，0.4moL/L琥珀酸钠和磷酸缓冲液按1︰5︰4比 例混合。
• 把根仔细洗净，把地上部分从茎基切除，将根放入三角瓶中，倒入反应液， 以浸没根为度，置37℃左右暗处放1h，以观察着色情况，新根尖端几毫米以 及细侧根都明显地变成红色，表明该处有脱氢酶存在。
• 生成的红色TTF越多，说明酶活性越强， 也表示根系活力越强
• TTC被广泛地用作酶试验的氢受体，植物根系中脱氢酶所引起的TTC还原，可因加入琥珀酸，延胡索酸，苹果酸得到增强， 而被丙二酸、碘乙酸所抑制。所以TTC还原量能表示脱氢酶活性并作为根系活力的指标
实验用品
材料：植物根系 仪器：分光光度计、恒温箱、容量瓶、烧杯、石英砂、研钵、
定量测定
•TTC标准曲线的制作
试管编号
1 2 34 5 6
空白 样品
取1mg/mL (即1%)的TTC 2mL于 100mL容量瓶中，加入2gNa2S2O4 摇匀，加入乙酸乙酯40mL左右剧烈
TTF溶液浓度 （ug/mL）
溶液中的TTC还原量 （ug）
0 2 4 6 8 10 0 20 40 60 80 100
2019-2020学年春季学期
植物生理学实验
红河学院 生命科学与技术学院 陶宏征
实验五 根系活力的测定
实验目的
掌握TTC法测定根系活力的原理和方法
实验原理
根系活力 TTC法测定根系活力的原理
根系活力
• 根系活力泛指跟的吸收与合成的能力，是衡 量根系活动能力强弱的重要指标，可以衡量 根系吸收水分或矿质元素的能力大小，甚至 可以反映地上部分的营养状况以及产量水平。
• 测定根系活力，可为植物营养研究提供依据。 • 在幼根中，脱氢酶活性的强弱与根系活力成
实验五 根系活力的测定
实验五根系活力的测定一、实验目的• 1、理解植物根系活力的内涵• 2、熟悉测定根系活力的方法及测定原理:•二、实验原理TTC被广泛地用作酶试验的氢受体，植物根系中脱氢酶所引起的TTC 还原，可因加入琥珀酸，延胡索酸，苹果酸得到增强，而被丙二酸、碘乙酸所抑制。
所以TTC还原量能表示脱氢酶活性并作为根系活力的指标。
在幼根中，脱氢酶活性的强弱与根系活力成正比。
所以，通过测定脱氢酶的活性，可由脱氢酶活性代表根系活力。
氯化三苯基四氮唑（TTC）溶于水中为无色溶液，还原后生成稳定、红色、不溶于水的三苯基甲腙（TTF）。
生成的TTF比较稳定，不会被空气中的氧自动氧化溶于乙酸乙酯，485nm有最高吸收峰三、实验材料及用品实验材料：水培1天葱的根系实验器皿：分光光度计、水浴锅、研钵、漏斗、移液管、比色皿、容量瓶、烧杯、滤纸实验溶液：乙酸乙酯、石英砂、硫代硫酸钠（Na2S2O4）、TTC、磷酸缓冲液、硫酸四、实验步骤1.制作TTC标准曲线将配制好的浓度为0,0.01%，0.02%，0.03%，0.04%的TCC溶液，各取5ml放入比色管中，在哥使馆中加入乙酸乙酯5ml和Na2S2O2粉末少量，摇匀→溶液分层，甲腙位于乙酸乙酯层→取上层乙酸乙酯→485nm比色→标准曲线→记录数据。
2.测定根系活力将根系洗净，搽干表面水分，取0.5g根尖样品（第1份加1mol/L硫酸2ml ）→0.5％TTC溶液5ml→磷酸缓冲液5ml→37℃下保温1h→第2份试管加入1mol/L硫酸2ml，以杀死根系作为空白对照→取出根，洗净，吸干水分→与4 ml乙酸乙酯和少量石英砂在研钵内磨碎→红色提取液移入试管且用乙酸乙酯定容到10ml→空白试验作参比测485nm下吸光度→根据标准曲线，求四氮唑还原量。
五、实验现象和结果a、制作标准曲线（显示计算公式及R^2值）01234浓度（mg/ml）OD值00.1570.4180.820 1.187表一 各浓度吸光度值记录表图一 各浓度TTC溶液在485nm下的吸光度曲线图如图一所示,回归方程为y=303.7x – 0.0910, R^2=0.9735把样品吸光度0.021nm代入方程可得x=3.688x10^-4b、计算TTC还原强度和还原量四氮唑还原量（ug）=TTC浓度×提取液总体积（×稀释倍数）=3.688 x 10^-4 x 25=9.22x 10^-3 ug四氮唑还原量（ug）四氮唑还原强度（ug/g(根鲜重)/h）= ———————————[根重（g）×时间(h)]= 9.22x10^3/(0.5x1)=1.844x10^-2六、分析和讨论1.在实验中，进行标准曲线制作步骤时，加入Na S O粉末摇匀后为出现红色，可能是由于溶液本身浓度有偏差和操作时加入的溶液有偏差。
5植物根系活力的测定TTC法
实验 5 植物根系活力的测定（ TTC 法）植物根系是活跃的吸收器官和合成器官，根的生长情况和活力水平直接影响地上部的营养状况及产量水平。
本实验练习测定根系活力的方法，为植物营养研究提供依据。
一、原理氯化三苯基四氮唑（ TTC ）是标准氧化电位为 80 mV 的氧化还原色素，溶于水中成为无色溶液，但还原后即生成红色而不溶于水的三苯甲（ TTF ），如下式：生成的三苯甲（ TTF ）比较稳定，不会被空气中的氧自动氧化，所以 TTC 被广泛用作酶试验的氢受体，植物根系中脱氢酶所引起的 TTC 还原，可因加入琥珀酸、延胡索酸、苹果酸得到增强，而被丙二酸、碘乙酸所抑制。
所以 TTC 还原量能表示脱氢酶活性，并作为根系活力的指标。
二、实验材料、试剂与仪器设备（一）实验材料水培或砂培小麦、玉米等植物根系。
（二）试剂1. 乙酸乙酯（分析纯）。
2. 次硫酸钠（ Na 2 S 2 O 4 ，分析纯），粉末。
3. 1 ％ TTC 溶液：准确称取 TTC 1.0 g ，溶于少量水中，定容到 100 mL 。
用时稀释至需要的浓度。
4. 磷酸缓冲液（ 1/15 mol/L ， pH7.0 ）。
5. 1 mol/L 硫酸：用量筒取比重 1.84 的浓硫酸 55 mL ，边搅拌边加入盛有 500 mL 蒸馏水的烧杯中，冷却后稀释至 1000 mL 。
6. 0.4 mol/L 琥珀酸：称取琥珀酸 4.72 g ，溶于水中，定容至 100 mL 即成。
（三）仪器设备小烧杯 3 个，研钵 1 个，移液管： 0.5 mL 1 支、 10 mL 1 支、 5 mL 3 支，刻度试管 6 支，分光光度计，分析天平（感量 0.1 mg ），电子顶载天平（感量 0.1 g ），温箱，试管架，药勺，石英砂适量，滤纸。
三、实验步骤1. 定性测定（ 1 ）配制反应液把 1 ％ TTC 溶液、 0.4 mol ／ L 的琥珀酸和磷酸缓冲液按 1:5:4 比例混合。
根系活力的测定(TTC法)实验综述报告
根系活力的测定(TTC法)实验综述报告一、引言根系是植物的重要组成部分，对植物的生长和发育起着重要的影响。
因此，准确测定根系活力对于研究和监测植物生长状态、生理代谢以及适应环境的能力具有重要意义。
TTC法是一种常用且经典的根系活力测定方法，可以通过测定细胞色素酶的活性来反映细胞线粒体的代谢能力。
本综述将详细介绍TTC法的原理、实验步骤、结果分析以及存在的局限性，旨在为相关科研人员提供参考和指导。
二、原理TTC法通过将三氯化四氯化三苯巴比妥酸（TTC）还原为有色产物，间接测定细胞线粒体氧化还原酶活性，从而反映细胞的代谢能力。
在活力高的细胞中，细胞色素酶能将TTC迅速还原为甲基砌和氯化苯胺，溶液呈现出红色。
而在活力低或死亡的细胞中，由于细胞色素酶活性降低或丧失，不能将TTC完全还原，溶液呈现淡红色或无色。
三、实验步骤1. 实验前准备：准备好所需材料和试剂，如TTC、缓冲液、植物根系样品等。
2. 根系样品处理：将根系样品取出，并进行清洗和去皮处理。
3. 根系活力测定：将处理后的根系样品放入含有TTC和缓冲液的培养皿中，然后放入恒温培养箱中，在适宜的温度下进行静置培养。
4. 反应终止：在适当时间后，将培养皿取出，加入适量酸性水溶液终止反应。
5. 读取吸光度：使用分光光度计读取反应溶液的吸光度值，得到各组的吸光度数据。
6. 结果分析：根据吸光度数据，计算出样品的根系活力值。
四、结果分析通过TTC法测定的根系活力实验结果，可以从吸光度值得出根系活力的信息。
活力高的根系样品，其吸光度值较高，溶液呈现出深红色；活力低或死亡的根系样品，吸光度值较低，溶液呈现淡红色或无色。
同时，根据根系活力值的大小可以进行不同样品之间的比较，从而判断不同处理或条件对根系活力的影响。
五、存在的局限性尽管TTC法是一种常用的根系活力测定方法，但其也存在一些局限性。
首先，TTC法只能反映细胞线粒体氧化还原酶活性，对其他代谢能力不能进行直接测定。
ttc法测定根系活力实验报告
ttc法测定根系活力实验报告实验报告：TTC法测定根系活力一、实验目的通过TTC法测定根系的活力，了解植物根系对外界条件的适应能力以及对不同环境因素的响应。
二、实验原理TTC(2,3,5-三苯基四氮唑氯化物)法可用于测定细胞线粒体等颗粒物质的活力。
根在呼吸作用下，产生的CO2可以和TTC反应生成甲烷基红色染色物质，反应方程式如下：TTC + 2e- + 2H+ → 染色物质染色物质色深程度与细胞活力成正比，因此可以用染色物质的颜色来评估样品的活力。
三、实验步骤1. 准备材料：TTC试剂、木瓢、淀粉液、滴定管、97%乙醇、植物根系样品。
2. 切取根系样品，在温水中清洗后，将样品放置于淀粉液中进行苏木素染色。
清洗样品的目的是除去外表的污垢和细胞内的胶质物，以避免影响反应的准确性。
在样品染色前，淀粉液要先煮沸，以破坏淀粉酶。
3. 若样品过大，可以在放入淀粉液前用刀片切成较小片段。
4. 取出染色后的样品，用纸巾吸干淀粉液。
避免在植物根系上留下过多的染料，以免干扰实验结果。
5. 将植物根系样品放入烟花瓶内，并加入0.1%TTC试剂，再加入适量的滴定水保持水位2cm左右。
盖住烟花瓶口，避免空气进入。
6. 放置到37℃恒温实验箱中培养30分钟后，加入5～10mL的1N HCl，使混合液呈现明显的色泽变化。
7. 用滴定管加入97%乙醇混合液，振荡均匀。
8. 在另一试管中取相同量的HCl和TTC，作为对照。
9. 用比色计或分光光度计测定样品和对照试管的吸光度值，计算出样品的活力。
四、实验结果本次实验得出了样品的活力，数据如下表所示（数据为典型数据，仅供参考）：根系样品过氧化氢消耗量（mg）活力（%）样品1 3.2 68样品2 2.5 57样品3 3.8 76五、结论通过TTC法测定根系活力，我们可以对植物根系对外界条件的适应能力以及对不同环境因素的响应有一个更加全面的了解。
本次实验得出的活力数据，说明样品的抗逆能力较强，在不同环境下能够保持一定的生命活力。
植物生理学实验 氯化三苯基四氮唑(TTC)法测定根系活力
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根系活力测定：把根取出，吸干水分后与乙酸乙
酯3～4ml和少量石英砂一起磨碎，以提出
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生成的TTF比较稳定，不会被空气中的氧自动氧化， 所以TTC被广泛地用作酶试验的氢受体，植物根 所引起的TTC还原，可因加入琥珀酸、延胡索酸、 苹果酸得到增强，而被丙二酸、碘乙酸所抑制。 所以TTC还原量能表示脱氢酶活性，并作为根系 活力的指标。
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二、材料、设备仪器及试剂
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三、实验步骤
1．定性测定(教师做演示实验） （1）配置反应液 把1%TTC溶液，0.4moL/L琥珀酸钠和 磷酸缓冲液按1︰5︰4比例混合。 （2）把根仔细洗净，把地上部分从茎基切除，将根放入三 角瓶中，倒入反应液，以浸没根为度，置37℃左右暗处放 1h，以观察着色情况，新根尖端几毫米以及细侧根都明显 地变成红色，表明该处有脱氢酶存在。
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五 注意事项
分光光度计的使用：看视频 保险粉的量要过量。 乙酸乙酯容易挥发，研磨时要求操作迅速。 T T F暴露空气中易被还原，标准曲线要求现配
现用。
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标准曲线制作
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TTF。把红色提出液过滤后移入10ml刻度试
根系活力的测定
植物根系活力的测定TTC法一、测定原理氯化三苯基四氮唑（TTC）是标准氧化电位为80mV的氧化还原物质，溶于水中成为无色溶液，但还原后即生成红色而不溶于水的三苯基甲腙（TTF）。
生成的TTF比较稳定，不会被空气中的氧自动氧化。
二、材料、设备仪器及试剂（一）材料：水培或砂培小麦、玉米等植物根系。
（二）仪器设备：1. 分光光度计；2. 分析天平（感量0.1mg）；3. 电子顶载天平（感量0.1g）；4. 温箱；5. 研钵；6. 三角瓶50ml；7. 漏斗；8. 量筒100ml；9. 吸量管10ml；10. 刻度试管10ml；11. 试管架；12. 容量瓶10ml；13. 药勺；14. 石英砂适量；15. 烧杯10ml、1000ml。
（三）试剂：1. 乙酸乙酯（分析纯）。
2. 次硫酸钠（Na2S2O4），分析纯，粉末。
3.1％TTC 溶液准确称取TTC1.0g，溶于少量水中。
定容到100ml。
用时稀释至各需要的浓度。
4. 磷酸缓冲液（1／15mol/L，pH7）。
5. 1mol/L硫酸用量筒取比重1.84的浓硫酸55ml，边搅拌边加入盛有500ml蒸馏水的烧杯中，冷却后稀释至1000ml。
6. 0.4mol/L琥珀酸称取琥珀酸4.72g，溶于水中，定容至100ml即成。
三、测定步骤2.1 制作TTC标准曲线分别吸取0.25ml、0.5ml、1.0ml、1.5ml、2.0ml TTC加入5个10ml容量瓶中，加入少许Na2S2O4，用乙酸乙酯定容，则瓶中TTC的含量分别为25µg、50µg、100µg、150µg、200µg，用乙酸乙酯作参比，测定485nm下的光密度值，绘制标准曲线。
2.2 根系活力测定称取0.5g根尖样品，充分浸没于0.4％TTC和磷酸缓冲液的等量混合液10ml溶液中，37℃下暗保温1～3h，加入1mol/L硫酸2ml。
与此同时做一空白实验，先加硫酸，再加根样品，其他操作同上。
实验五 根系活力的测定
实验五根系活力的测定一、实验目的•1、理解植物根系活力的内涵•2、熟悉测定根系活力的方法及测定原理:•二、实验原理TTC被广泛地用作酶试验的氢受体，植物根系中脱氢酶所引起的TTC还原，可因加入琥珀酸，延胡索酸，苹果酸得到增强，而被丙二酸、碘乙酸所抑制。
所以TTC还原量能表示脱氢酶活性并作为根系活力的指标。
在幼根中，脱氢酶活性的强弱与根系活力成正比。
所以，通过测定脱氢酶的活性，可由脱氢酶活性代表根系活力。
氯化三苯基四氮唑（TTC）溶于水中为无色溶液，还原后生成稳定、红色、不溶于水的三苯基甲腙（TTF）。
生成的TTF比较稳定，不会被空气中的氧自动氧化溶于乙酸乙酯，485nm有最高吸收峰三、实验材料及用品实验材料：水培1天葱的根系实验器皿：分光光度计、水浴锅、研钵、漏斗、移液管、比色皿、容量瓶、烧杯、滤纸实验溶液：乙酸乙酯、石英砂、硫代硫酸钠（Na2S2O4）、TTC、磷酸缓冲液、硫酸四、实验步骤1.制作TTC标准曲线将配制好的浓度为0,0.01%，0.02%，0.03%，0.04%的TCC溶液，各取5ml放入比色管中，在哥使馆中加入乙酸乙酯5ml和Na2S2O2粉末少量，摇匀→溶液分层，甲腙位于乙酸乙酯层→取上层乙酸乙酯→485nm比色→标准曲线→记录数据。
2.测定根系活力将根系洗净，搽干表面水分，取0.5g根尖样品（第1份加1mol/L硫酸2ml ）→0.5％TTC 溶液5ml→磷酸缓冲液5ml→37℃下保温1h→第2份试管加入1mol/L硫酸2ml，以杀死根系作为空白对照→取出根，洗净，吸干水分→与4 ml乙酸乙酯和少量石英砂在研钵内磨碎→红色提取液移入试管且用乙酸乙酯定容到10ml→空白试验作参比测485nm下吸光度→根据标准曲线，求四氮唑还原量。
五、实验现象和结果a、制作标准曲线（显示计算公式及R^2值）表一各浓度吸光度值记录表图一各浓度TTC溶液在485nm下的吸光度曲线图如图一所示,回归方程为y=303.7x – 0.0910, R^2=0.9735把样品吸光度0.021nm代入方程可得x=3.688x10^-4b、计算TTC还原强度和还原量四氮唑还原量（ug）=TTC浓度×提取液总体积（×稀释倍数）=3.688 x 10^-4 x 25=9.22x 10^-3 ug四氮唑还原量（ug）四氮唑还原强度（ug/g(根鲜重)/h）= ———————————[根重（g）×时间(h)]= 9.22x10^3/(0.5x1)=1.844x10^-2六、分析和讨论1.在实验中，进行标准曲线制作步骤时，加入Na S O粉末摇匀后为出现红色，可能是由于溶液本身浓度有偏差和操作时加入的溶液有偏差。
根系活力的测定(TTC法)实验综述报告
根系活力的测定(TTC法)实验综述报告根系活力的测定(TTC法)实验综述报告摘要：根系活力是评估植物健康状况和生长能力的重要指标之一。
本实验综述报告将介绍一种常用的根系活力测定方法——三苯基氯化四唑(TTC)法，并重点介绍了该方法的原理、步骤和应用。
通过对多个实验研究的概述，我们可以了解到TTC法在根系活力测定中的优势和不足，并展望了未来在该领域的发展方向。
1. 引言根系活力是植物根系生理功能的重要指标之一。
通过测定根系活力，可以评估植物吸收和利用养分的能力，以及应对环境胁迫和病原体的能力。
因此，测定根系活力对于研究植物生长发育、抗逆性和资源利用效率等具有重要意义。
2. TTC法的原理和步骤TTC法是一种常用的根系活力测定方法，它利用三苯基氯化四唑颜料的还原作用来反映根系活力。
其原理是，根系组织通过代谢产物还原三苯基氯化四唑，使其从无色变为红色。
实施TTC法的步骤主要包括：准备TTC溶液、处理根系样本、添加TTC溶液、孵育和测定根系活力。
3. TTC法的应用TTC法广泛应用于不同植物根系的活力测定中。
它可以用于各种实验条件下的根系活力研究，包括光照、温度、生长激素、缺水和盐胁迫等。
通过TTC法，我们可以了解不同处理对根系生理代谢的影响，评估植物在不同环境条件下的生长适应性。
4. TTC法的优势和不足TTC法作为根系活力测定的常用方法，具有一些优势。
首先，它操作简单、成本低廉、效果可靠。
其次，可以通过可视化的红色形成判断根系活力，评估根系的发育状况。
然而，TTC法也存在一些不足之处，如容易受到环境条件的干扰，结果的可视化程度受到主观因素的影响等。
5. 未来发展方向在未来，TTC法可以与其他技术相结合，以提高根系活力测定的准确性和可靠性。
光学显微镜、分子生物学技术和高通量测定等新技术的应用，将进一步拓展我们对根系活力的认识。
此外，开展TTC法的标准化研究，建立更严格的操作规范，有助于提高测定结果的一致性和可比性。
植物根系活力定性检测液(TTC法)
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编号 DC0032 DF0135 NR0001 PS0013 TC1167
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
名称 Masson 三色染色液 多聚甲醛溶液(4% PFA) DEPC 处理水(0.1%) RIPA 裂解液(强) 尿素(Urea)检测试剂盒(脲酶波氏比色法)
北京雷根生物技术有限公司
植物根系活力定性检测液(TTC 法)
简介：
植物根系是活跃的吸收器官和合成器官，根的生长情况和代谢水平即根系活力直接影 响植物地上部的生长和营养状况以及最终产量，是植物生长的重要生理指标之一。TTC(2， 3，5-氯化三苯基四氮唑)是一种氧化还原物质，是标准氧化电位为 80mV 的氧化还原色素， 溶解于水为无色，可以检测根系活力。
3、 观察着色情况，新根尖几毫米以及细侧根都有较为明显的变成红色，表明该处有脱氢酶 存在。
注意事项：
1、 配制好的 TTC Assay buffer 工作液应避光保存，如果见光会变红，影响实验结果。
北京雷根生物技术有限公司
2、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
操作步骤(仅供参考)：
1、 配制 TTC Assay buffer 工作液：取 TTC，按 TTC：TTC Assay buffer：琥珀酸缓冲液 一定的比例混合，即为 TTC Assay buffer 工作液。即配即用，避光保存 3 天有效。
2、 准备样品：取植物须根系洗净，浸没于 TTC Assay buffer 工作液(以完全浸没为准)， 避光孵育。
组成：
编号 TP1025
名称
2×100ml
试剂(A): TTC
2×0.1g
试剂(B): TTC Assay buffer
植物生理学实验 氯化三苯基四氮唑(TTC)法测定根系活力
实验目的
根系活力是衡量根系活动能力强弱的 重要指标，可以衡量根系吸收水分或矿 质元素的能力大小，甚至可以反映地上 部分的营养状况以及产量水平。学会利 用TTC法测定根系活力。
一、原理
氯化三苯基四氮唑（TTC）溶于水中成为无色 溶液，但还原后即生成红色而不溶于水的 三苯基甲替（TTF），如下式：
生成的TTF比较稳定，不会被空气中的氧自动氧化， 所以TTC被广泛地用作酶试验的氢受体，植物根所 引起的TTC还原，可因加入琥珀酸、延胡索酸、苹 果酸得到增强，而被丙二酸、碘乙酸所抑制。所 以TTC还原量能表示脱氢酶活性，并作为根系活力 的指标。
二、材料、设备仪器及试剂
（一）材料： 玉米等植物根系。 （二）仪器设备： 分光光度计； 天平； 恒温箱1台； 研钵1套； 漏斗； 量筒； 移液管；试管； 刻度试管 10ml； 试管架； 药勺； 石英砂适量； 烧杯； 小培养皿；洗瓶。
四、结果计算
四氮唑还原强度： mg/g(根鲜重)/h= 四氮唑还原量（mg）/ 根重（g）×时间(h)
五 注意事项
分光光度计的使用：看视频
保险粉的量要过量。 乙酸乙酯容易挥发，研磨时要求操作迅速。 T T F暴露空气中易被还原，标准曲线要求现配 现用。
标准曲线制作
定量试验
定性实验
二、材料、设备仪器及试剂
（三）试剂： 1. 乙酸乙酯 2. 次硫酸钠（Na2S2O4，强还原剂，俗称保险粉） 3. 1mg/ml的TTC溶液： 4. 磷酸缓冲液（66mmol/L，pH7）。 5. 1mol/L硫酸： 6. 0.4mol/L琥珀酸：
三、实验步骤
1．定性测定(教师做演示实验） （1）配置反应液 把1%TTC溶液，0.4moL/L琥珀酸钠和 磷酸缓冲液按1︰5︰4比例混合。 （2）把根仔细洗净，把地上部分从茎基切除，将根放入 三角瓶中，倒入反应液，以浸没根为度，置37℃左右暗处 放1h，以观察着色情况，新根尖端几毫米以及细侧根都明 显地变成红色，表明该处有脱氢酶存在。
ttc法测定植物根系活力的原理
ttc法测定植物根系活力的原理植物根系活力是指植物根系的生长和发育能力，是植物生长的重要指标之一。
根系活力的高低直接影响着植物的生长和发育状况，因此对于研究植物根系活力的测定方法具有重要的意义。
目前，有许多方法可以用来测定植物根系活力，其中一种常用的方法是 TTC 法（Triphenyltetrazolium chloride method）。
TTC 法是一种常用的生化试验方法，通过测定植物根系细胞内还原酶的活性来间接反映根系的活力水平。
TTC 法的原理是基于细胞内的还原酶对 TTC 的还原作用。
TTC 是一种无色的化合物，在细胞内被还原为红色的三苯基四唑盐（Tetrazolium salt），这种红色产物在细胞内会积累并沉积在细胞质中，形成红色颗粒。
这些红色颗粒的数量和颜色的深浅可以反映细胞内还原酶的活性水平，从而间接反映出植物根系的活力。
TTC 法的具体操作步骤如下：1. 准备 TTC 溶液：将 TTC 溶解在缓冲液中，得到一定浓度的TTC 溶液。
一般来说，TTC 的最佳浓度为 0.5%。
2. 取一定量的植物根系样品：将待测植物的根系样品取出，并将其洗净去除表面污物。
3. 处理样品：将根系样品切碎，并加入适量的 TTC 溶液中，使样品充分浸泡在 TTC 溶液中。
4. 孵育样品：将处理后的样品置于一定温度下孵育一段时间，一般常温孵育 2-4 小时。
5. 观察样品：观察样品的颜色变化情况。
如果样品呈现红色或深红色，说明根系细胞内还原酶活性较高，根系活力较强；如果样品呈现浅红色或无色，说明根系细胞内还原酶活性较低，根系活力较弱。
通过上述步骤，我们可以利用 TTC 法测定植物根系活力。
需要注意的是，在进行实验时要注意控制好各项实验条件，如温度、时间和浓度等，以确保实验结果的准确性和可靠性。
TTC 法具有操作简便、结果直观等优点，因此被广泛应用于植物生理学和农业科学研究中。
通过测定植物根系活力，可以评估植物对环境逆境的适应能力、抗逆性以及生长发育状态，为研究植物生长机理、筛选抗逆品种以及优化农业生产提供重要参考。
(完整版)植物生理学实验氯化三苯基四氮唑(TTC)法测定根系活力
四、结果计算
四氮唑还原强度： mg/g(根鲜重)/h=
四氮唑还原量（mg）/ 根重（g）×时间(h)
五 注意事项
分光光度计的使用：看视频 保险粉的量要过量。 乙酸乙酯容易挥发，研磨时要求操作迅速。 T T F暴露空气中易被还原，标准曲线要求现配
现用。
标准曲线制作
定量试验
定性实验
试管编 1 号
TTF含量 0 (ug)
TTF
0
(ml )
乙酸乙 4 酯（ml)
OD(485 nm)
2 3 4 5 6 空白 样品 20 40 60 80 100 12345
9 8 7 6 5 ｝10 10
三、实验步骤
（2）.样品的提取及测定 样品提取：称取根样品0.5g，放入小培养皿，加入
0.4%TTC溶液和磷酸缓冲液的等量混合液10ml，把 根充分浸没在溶液内，在37℃下暗处保温1h，此后加 入1mol/L硫酸2ml，以停止反应。（与此同时做一空 白实验，先加硫酸，再加根样品，其他操作同上）。
实验4
氯化三苯基四氮唑(TTC)法测定根系 活力
实验目的
根系活力是衡量根系活动能力强弱的 重要指标，可以衡量根系吸收水分或矿 质元素的能力大小，甚至可以反映地上 部分的营养状况以及产量水平。学会利 用TTC法测定根系活力。
一、原理
氯化三苯基四氮唑（TTC）溶于水中成为无 色溶液，但还原后即生成红色而不溶于水 的三苯基甲替（TTF），如下式：
三、实验步骤
2．定量测定 （1）TTC标准曲线的制作
取1mg/mL的T T C 2mL于100mL容量瓶中，加入2勺 （黄豆大小）保险粉摇匀，加入乙酸乙酯40mL左右 剧烈震荡至保险粉充分溶解，用乙酸乙酯定容至刻度， 即成TTF标准液(20 µg /mL )。
植物生理学实验 氯化三苯基四氮唑(TTC)法测定根系活力
生成的TTF比较稳定，不会被空气中的氧自动氧化， 所以TTC被广泛地用作酶试验的氢受体，植物根 所引起的TTC还原，可因加入琥珀酸、延胡索酸、 苹果酸得到增强，而被丙二酸、碘乙酸所抑制。 所以TTC还原量能表示脱氢酶活性，并作为根系 活力的指标。
二、材料、设备仪器及试剂
（一）材料： 玉米等植物根系。 （二）仪器设备： 分光光度计； 天平； 恒温箱1台； 研钵1套；
三、实验步骤
2．定量测定 （1）TTC标准曲线的制作
取1mg/mL的T T C 2mL于100mL容量瓶中，加入2勺 （黄豆大小）保险粉摇匀，加入乙酸乙酯40mL左右 剧烈震荡至保险粉充分溶解，用乙酸乙酯定容至刻度， 即成TTF标准液(20 µg /mL )。
按下表制作 T T F标准曲线。以空白作参比，在 485nm波长下测定光密度，绘制标准曲线。
三、实验步骤
1．定性测定(教师做演示实验） （1）配置反应液 把1%TTC溶液，0.4moL/L琥珀酸钠和 磷酸缓冲液按1︰5︰4比例混合。 （2）把根仔细洗净，把地上部分从茎基切除，将根放入三 角瓶中，倒入反应液，以浸没根为度，置37℃左右暗处放 1h，以观察着色情况，新根尖端几毫米以及细侧根都明显 地变成红色，表明该处有脱氢酶存在。
试管编 1 号
TTF含量 0 (ug)
TTF
0
(ml )
乙酸空白 样品 20 40 60 80 100 12345
9 8 7 6 5 ｝10 10
三、实验步骤
（2）.样品的提取及测定 样品提取：称取根样品0.5g，放入小培养皿，加入
0.4%TTC溶液和磷酸缓冲液的等量混合液10ml，把 根充分浸没在溶液内，在37℃下暗处保温1h，此后加 入1mol/L硫酸2ml，以停止反应。（与此同时做一空 白实验，先加硫酸，再加根样品，其他操作同上）。
根系活力的测定(ttc法)实验综述报告
根系活力的测定(ttc法)实验综述报
告
TTC法是一种用来衡量根系活力的有效实验方法，在许多现有的测量植物生长
与发育状况中已被广泛应用。
它是对植物源区域生长活力和发育状况的直接反映，主要通过检测植物根系中是否存在勃起层来量化测量根系的活力。
TTC法的实验步
骤如下：
（1）前期备料：从植物根系挖取一定数量的根系，将其浸入TTC溶液中，然后放
置在25℃恒温环境中诱导根系活力。
（2）TTC测试：以半芯径0.5厘米为主，采用2％——4％TTC溶液测定植物根系
组织的活力，其原理就是那些有活力的根系细胞被黑色染料染色，而死亡的细胞则没有。
（3）固定检测：根据TTC测试结果，将TTC活力分为正活力、弱活力、失活力等
几种，进而检测植物的生长发育状况。
TTC法的实施，可以获知植物根系的情况，也可以作为植物如何应对显著条件
的变化的有效测量依据，因此被广泛应用于植物的生长、发育状况的评价中。
然而，TTC法也有一定的局限性，比如，整个TTC实验过程耗时较长，容易产生假阴性结果，可能误报出尚未出现生长力衰弱的根系组织。
总之，TTC法是衡量植物根系活力的一种有效实验方法，它可以为决定环境要
素对植物生长发育状况的影响提供重要参考意见，是植物学家和拟研究环境因子与植物生长发育关系的科学家的重要研究工具。
但TTC法也具备一定的局限性，在实验步骤的实施中，需要注意控制各项参数，以准确获取植物根系活力的信息。
植物根系活力的测定——TTC法
植物根系活力的测定——TTC法TTC即氯化三苯基四氮唑(2, 3, 5-Tripheyl Tetrazolium Chloride)，又可称为红四氮唑，是一种氧化还原物质。
当TTC溶于水后，溶液呈现无色透明状，但当TTC被根系细胞内的脱氢酶还原时，其产物便呈红色，名为三苯甲腙(TTF)。
TTF比较稳定，不溶于水且不易被空气中存在的氧气氧化。
利用氯化三苯基四氮唑(TTC) 的还原能力，在一定程度上能够反映出植物根系活力的强弱如何。
植物根系的呼吸速率越高代表其活力越强，因此根系中TTC还原的量就愈多；相反，当根系呼吸速率变弱时，其还原的量就相对减少。
一、实验器材分光光度计；恒温箱；容量瓶；刻度试管；研钵。
二、试剂配制1. 连二亚硫酸钠(Na2S2O4)，俗称保险粉；2. 乙酸乙酯(分析纯)；3. 石英砂(适量)；4. 0.4mol·L-1琥珀酸：使用电子天平称取4.72g的琥珀酸，使其溶解在盛有约90mL的蒸馏水中，然后定容至100mL(不需配制)；5. 4g·L-1 (0.4%) TTC：使用电子天平准确称取TTC试剂1.0g，将其溶解在盛有适量蒸馏水的小烧杯中，用玻璃棒充分搅拌均匀，倒入250mL棕色容量瓶定容至刻度，现用现配；6. pH=7.0 66mM磷酸缓冲液：由A液和B液混合而成，A液：使用电子天平准确称取1.1876g Na2HPO4·2H2O(分子量177.99 g·moL-1) 或2.3896g Na2HPO4·12H2O(分子量358.14 g·moL-1)，将其溶解在蒸馏水中，定容至100mL。
B液：在电子天平上准确称取0.9078g的KH2PO4，使其溶解在蒸馏水中，定容至100mL。
实验用pH=7.0 66mM磷酸缓冲液可取A液60mL再加入B液40mL混合；7. 1mol·L-1 H2SO4：戴上手套后小心量取5.435mL 98%的浓硫酸，加入盛有蒸馏水的烧杯中(用玻璃棒边搅拌边加入)，冷却后稀释至100mL。
植物根系活力定性检测液(TTC法)
1、 配制 TTC Assay buffer 工作液：取 1 支 0.1g TTC，按 TTC：TTC Assay buffer：琥珀 酸缓冲液=的比例混合，即为 TTC Assay buffer 工作液。即配即用，4℃避光保存，3 天有效。
2、 准备样品：取 0.5g 植物须根系洗净，浸没于 TTC Assay buffer 工作液(以完全浸没为 准)，37℃避光孵育。
北京雷根生物技术有限公司
植物根系活力定性检测液(TTC 法)
简介：
植物根系是活跃的吸收器官和合成器官，根的生长情况和代谢水平即根系活力直接影 响植物地上部的生长和营养状况以及最终产量，是植物生长的重要生理指标之一。TTC(2， 3，5-氯化三苯基四氮唑)是一种氧化还原物质，是标准氧化电位为 80mV 的氧化还原色素， 溶解于水为无色，可以检测根系活力。
相关：
编号 DC0032 DF0135 NR0001 PS0013 TC1167
产品名称 Masson 三色染色液 多聚甲醛溶液(4% PFA) DEPC 处理水(0.1%) RIPA 裂解液(强) 尿素(Urea)检测试剂盒(脲酶波氏比色法)
3、 观察着色情况，新根尖几毫米以及细侧根都有较为明显的变成红色，表明该处有脱氢酶 存在。
注意事项：
1、 配制好的 TTC Assay buffer 工作液应避光保存，如果见光会变红，影响实验结果。 2、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
实验五 根系活力的测定
实验五根系活力的测定一、意义根系具有吸收养分、水分、支持植株和合成有机物的能力。
它是作物赖以生存的基础。
根系的生长和地上部的生长是密切相关的和互为依存的，根系生长好才能保证地上部各器官也相应地繁茂茁壮。
因此，研究根系的活力对于搞清作物的根部营养，提高作物根系吸收养分、水分能力等具有重要的实际意义。
在科学研究中常把根系的呼吸强度、阳离子代换量（CEC）、对有色物质的吸附量和ATP 酶的活性等作为作物根系活力的指标。
二、测定原理及方法（一）根系表面积的测定1．甲烯兰吸附法（1）原理：根据植物根系吸收矿质养分的理论，根系对溶质的最初吸收具有吸附的特性。
假定吸收时在根系表面均匀地覆盖了一层被吸附物质的单分子层，因此能根据根系对某物质的吸附量来测定根的吸收面积。
常用甲烯兰（C16H18H3SCl）作为被吸附物质，已知1mg甲烯兰胶单分子层时占用l.1平方米的面积。
故可由它被吸附前后溶液的浓度变化用比色法准确地测定根系总吸收面积。
当根系在甲烯兰溶液中已达饱和并仍留在溶液中时，根系的活跃部分能把已吸附在根表的甲烯兰吸收到细胞中去，并继续吸附甲烯兰。
因此,又可以从后一吸附量中求出根系的活跃吸收面积。
（2）方法：①取出完整根系（注意保留根尖和细根），小心地清洗掉根表吸持的砂粒和土粒，洗诤后用吸水纸除去根表水分。
②将根放入有刻度的容器中〈试管或置筒〉，缓缓加水至某一刻度，取出根系待水从根上流入容器中，准确用滴定管加水至刻度处，加入水量即为根系的总体积，并记载。
③根据根系的总体积，吸取0.0002 N的甲烯兰溶液（每升溶液中含甲烯兰64 mg），吸取量约为根系总体积的十倍，分别放入三个有1、2、3编号的小烧杯中，准确记下每杯所取溶液的毫升数。
④取量好体积的根系，用吸水纸小心吸去根表水分，切忌损伤根系，依次浸入盛有甲烯兰溶液的小烧杯中，在每杯中浸泡的时间为l.5分钟。
注意每次取出时都要使甲烯兰溶液从根表流回到原烧杯中。
实验五+根系活力的测定
实验五根系活力的测定一、实验目的• 1、理解植物根系活力的内涵• 2、熟悉测定根系活力的方法及测定原理:•二、实验原理TTC被广泛地用作酶试验的氢受体，植物根系中脱氢酶所引起的TTC还原，可因加入琥珀酸，延胡索酸，苹果酸得到增强，而被丙二酸、碘乙酸所抑制。
所以TTC还原量能表示脱氢酶活性并作为根系活力的指标。
在幼根中，脱氢酶活性的强弱与根系活力成正比。
所以，通过测定脱氢酶的活性，可由脱氢酶活性代表根系活力。
氯化三苯基四氮唑(TTC)溶于水中为无色溶液，还原后生成稳定、红色、不溶于水的三苯基甲腙 (TTF)。
生成的TTF比较稳定，不会被空气中的氧自动氧化溶于乙酸乙酯，485nm有最高吸收峰三、实验材料及用品实验材料:水培1天葱的根系实验器皿:分光光度计、水浴锅、研钵、漏斗、移液管、比色皿、容量瓶、烧杯、滤纸实验溶液:乙酸乙酯、石英砂、硫代硫酸钠(Na2S2O4)、TTC、磷酸缓冲液、硫酸四、实验步骤1.制作TTC标准曲线将配制好的浓度为0,0.01%，0.02%，0.03%，0.04%的TCC溶液，各取5ml放入比色管中，在哥使馆中加入乙酸乙酯5ml和Na2S2O2粉末少量，摇匀?溶液分层，甲腙位于乙酸乙酯层?取上层乙酸乙酯?485nm比色?标准曲线?记录数据。
2.测定根系活力将根系洗净，搽干表面水分，取0.5g根尖样品(第1份加1mol/L硫酸2ml )?0.5,TTC溶液5ml?磷酸缓冲液5ml?37?下保温1h?第2份试管加入1mol/L硫酸2ml，以杀死根系作为空白对照?取出根，洗净，吸干水分?与4 ml乙酸乙酯和少量石英砂在研钵内磨碎 ?红色提取液移入试管且用乙酸乙酯定容到10ml?空白试验作参比测485nm下吸光度?根据标准曲线，求四氮唑还原量。
五、实验现象和结果a、制作标准曲线(显示计算公式及R^2值)浓度(mg/ml) 0 1 2 3 4 OD值 0 0.157 0.418 0.820 1.187表一各浓度吸光度值记录表图一各浓度TTC溶液在485nm下的吸光度曲线图如图一所示,回归方程为y=303.7x – 0.0910, R^2=0.9735把样品吸光度0.021nm代入方程可得x=3.688x10^-4b、计算TTC还原强度和还原量=TTC浓度×提取液总体积(×稀释倍数) 四氮唑还原量(ug)=3.688 x 10^-4 x 25=9.22x 10^-3 ug四氮唑还原量(ug)四氮唑还原强度(ug/g(根鲜重)/h)= ———————————[根重(g)×时间(h)]= 9.22x10^3/(0.5x1)=1.844x10^-2六、分析和讨论1.在实验中，进行标准曲线制作步骤时，加入Na S O粉末摇匀后为出现红色，可能是由于溶液本身浓度有偏差和操作时加入的溶液有偏差。
根系活力的测定TTC法
华南农业大学实验报告专业班次 11农学1班组别 0110题目根系活力的测定姓名梁志雄日期 2012-11-21一、实验原理氯化三苯基四氮唑（ TTC ）是标准氧化电位为 80 mV 的氧化还原色素，溶于水中成为无色溶液，但还原后即生成红色而不溶于水的三苯甲（ TTF ）生成的三苯甲（ TTF ）比较稳定，不会被空气中的氧自动氧化，所以 TTC 被广泛用作酶试验的氢受体，植物根系中脱氢酶会引起的TTC 还原。
所以 TTC 还原量能表示脱氢酶活性，并作为根系活力的指标。
根系的活力越高，产生的NAD（P）H+H+等还原物质越多，则生成红色的TTF 越多。
TTF溶于乙酸乙酯，并在波长485nm处有最高吸收峰，因此，可用分光光度法定量测定。
二、实验材料与实验器材蒜根、分光光度计、分析天平、恒温水浴锅、研钵、漏斗个、移液管、比色管、10ml容量瓶、50ml烧杯三、实验试剂乙酸乙酯、石英砂、硫代硫酸钠粉末、1％TTC、1/15mol/磷酸缓冲液、1mol/L 硫酸四、实验步骤1、称取根尖样品 0.5 g ，放入小烧杯中，加入％ TTC 溶液和磷酸缓冲液（）各 5 mL ，使根充分浸没在溶液内，在 37 ℃下暗保温 1 h ，此后立即加入 1 mol/L 硫酸 2 mL ，以停止反应。
（与此同时做一空白实验，先加硫酸，再加根样品， 37 ℃下暗保温后不加硫酸，其溶液浓度、操作步骤同上）2、把根取出，用滤纸吸干水分，放入研钵中，加乙酸乙酯 3 ～ 4 mL ，充分研磨，以提出 TTF 。
把红色提取液移入刻度试管，并用少量乙酸乙酯把残渣洗涤 2 ～ 3 次，皆移入刻度试管，最后加乙酸乙酯使总量为 10 mL ，用分光光度计在波长 485 nm 下比色，以空白试验作参比测出吸光度，查标准曲线，即可求出 TTC 还原量。
TTC还原量=从标准曲线查出的TTC浓度*提取液总体积*稀释倍数五、数据记录记录从标准曲线上查出TTC的浓度为（ug/ml）故可以知道TTC的还原强度为*10*1/=六、实验总结本实验严格按照实验步骤进行，利用根系生长发育过程中所产生的还原物质，把TTC还原为红色的TTF，再利用TTF溶于乙酸乙酯从而把它提取出来，在485nm的波长下测定其吸光度，从而计算出TTC的还原量，以此来表现根系活力的大小，本实验测得的数据为，从网上查出的一个数据位，所以总体上数据还是比较合理的。
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实验 5 植物根系活力的测定（ TTC 法）
植物根系是活跃的吸收器官和合成器官，根的生长情况和活力水平直接影响地上部的营养状况及产量水平。
本实验练习测定根系活力的方法，为植物营养研究提供依据。
一、原理
氯化三苯基四氮唑（ TTC ）是标准氧化电位为 80 mV 的氧化还原色素，溶于水中成为无色溶液，但还原后即生成红色而不溶于水的三苯甲（ TTF ），如下式：
生成的三苯甲（ TTF ）比较稳定，不会被空气中的氧自动氧化，所以 TTC 被广泛用作酶试验的氢受体，植物根系中脱氢酶所引起的 TTC 还原，可因加入琥珀酸、延胡索酸、苹果酸得到增强，而被丙二酸、碘乙酸所抑制。
所以 TTC 还原量能表示脱氢酶活性，并作为根系活力的指标。
二、实验材料、试剂与仪器设备
（一）实验材料
水培或砂培小麦、玉米等植物根系。
（二）试剂
1. 乙酸乙酯（分析纯）。
2. 次硫酸钠（ Na 2 S 2 O 4 ，分析纯），粉末。
3. 1 ％ TTC 溶液：准确称取 TTC 1.0 g ，溶于少量水中，定容到 100 mL 。
用时稀释至需要的浓度。
4. 磷酸缓冲液（ 1/15 mol/L ， pH7.0 ）。
5. 1 mol/L 硫酸：用量筒取比重 1.84 的浓硫酸 55 mL ，边搅拌边加入盛有 500 mL 蒸馏水的烧杯中，冷却后稀释至 1000 mL 。
6. 0.4 mol/L 琥珀酸：称取琥珀酸 4.72 g ，溶于水中，定容至 100 mL 即成。
（三）仪器设备
小烧杯 3 个，研钵 1 个，移液管： 0.5 mL 1 支、 10 mL 1 支、 5 mL 3 支，刻度试管 6 支，分光光度计，分析天平（感量 0.1 mg ），电子顶载天平（感量 0.1 g ），温箱，试管架，药勺，石英砂适量，滤纸。
三、实验步骤
1. 定性测定
（ 1 ）配制反应液把 1 ％ TTC 溶液、 0.4 mol ／ L 的琥珀酸和磷酸缓冲液按 1:5:4 比例混合。
（ 2 ）把根仔细洗净，把地上部分从茎基部切除。
将根放入三角瓶中，倒入反应液，以浸没根为度，置 37 ℃左右暗处放 1 ～ 3 h ，以观察着色情况，新根尖端几毫米以及细侧根都明显地变成红色，表明该处有脱氢酶存在。
2. 定量测定
（ 1 ） TTC 标准曲线的制作取 0.4 ％ TTC 溶液 0.2 mL 放入大试管中，加 9.8 mL 乙酸乙酯，再加少许 Na 2 S 2 O 4 粉末摇匀，则立即产生红色的 TTF 。
此溶液浓度为每毫升含有 TTF 80 μg 。
分别取此溶液 0.25 mL 、 0.50 mL 、 1.00 mL 、 1.50 mL 、 2.00 mL 置10 mL 刻度试管中，用乙酸乙酯定容至刻度，即得到含 TTF 20 μg 、 40 μg 、 80 μg 、120 μg 、 160 μg 的系列标准溶液，以乙酸乙酯作参比，在 485 nm 波长下测定吸光度，绘制标准曲线。
（ 2 ）称取根尖样品 0.5 g ，放入小烧杯中，加入 0.4 ％ TTC 溶液和磷酸缓冲液（ pH7.0 ）各 5 mL ，使根充分浸没在溶液内，在 37 ℃下暗保温 1 ～ 2 h ，此后立即加入 1 mol/L 硫酸 2 mL ，以停止反应。
（与此同时做一空白实验，先加硫酸，再加根样品， 37 ℃下暗保温后不加硫酸，其溶液浓度、操作步骤同上）。
（ 3 ）把根取出，用滤纸吸干水分，放入研钵中，加乙酸乙酯 3 ～ 4 mL ，充分研磨，以提出 TTF 。
把红色提取液移入刻度试管，并用少量乙酸乙酯把残渣洗涤 2 ～ 3 次，皆移入刻度试管，最后加乙酸乙酯使总量为 10 mL ，用分光光度计在波长 485 nm 下比色，以空白试验作参比测出吸光度，查标准曲线，即可求出 TTC 还原量。
四、结果计算
根系活力 = [mg TTF/ （ g · h ） ]
式中：C ——四氮唑还原量，μg 。
W ——根重， g 。
h ——时间， h 。
[ 思考题 ]
为什么要测定根系活力 ? 植物的根与地上部分有何关系 ?。